中国仓鼠肺细胞胞质分裂阻滞法微核试验灵敏性初探

作者测试了断裂剂与非整倍剂对细胞松弛素Ｂ诱发中国仓鼠肺细胞（ＣＨＬ）双核细胞率的影响；对诱变剂诱发常规法单核细胞，胞质分裂阻滞法单、双核细胞微核率进行比较研究。结果显示：丝裂霉素Ｃ对细胞松弛素Ｂ诱发双核细胞率有降低作用，而秋水仙素有增加作用；诱变剂诱发的双核细胞微核率并不显著高于常规法单核细胞微核率。该结果提示胞质分裂阻滞法微核试验不能显著提高微核试验的灵敏性。作者并分析了其影响因素。     

体外双核淋巴细胞微核试验方法的改进

胞质分裂阻断微核法是一种新的致突变检测方法。首先在 1985年Ｆｅｎｅｃｈ和Ｍｏｒｌｃｙ提出细胞松弛素Ｂ(简称ＣＢ)阻断胞质分裂 ,经过 1次分裂的细胞就能形成双核细胞 ,经过 2次分裂时可形成 3个或 4个核的细胞。所以检测微核时只要统计双核细胞的微核率 ,就可剔除未经分裂和分裂 1次以上的细胞[1] 。现将此方法要点和本人的初步经验介绍如下。1　 实验部分1 1　人淋巴细胞微量全血培养方法　肝素抗凝外周血 0 6ｍｌ加 5ｍｌＲＰＭＩ 16 40完全培养液 (含 2 0 %小牛血清、青霉素10 0ＫＵ/Ｌ)用ＰＨＡ植物血凝素刺激淋巴细胞有丝分裂。…     

γ—射线诱发人淋巴细胞微核形成与细胞周期关系的初步研究

本研究用γ－射线诱发人外周血淋巴细胞微核，使用细胞周期控制、ＢｒｄＵ免疫荧光染色、松胞素阻滞胞质分裂等技术，研究淋巴细胞微核形成与细胞周期的定量关系。     

全血培养胞质分裂阻断微核(CBMN)实验方法的改进

 目的  改良全血培养胞质分裂阻断微核(cytokinesis-block micronucleus,CBMN)实验制片法及探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,cyt-B)的最佳浓度。方法  依据常规微核试验制片法,在低渗液的温度、固定液比例和操作手法等方面改进实验方法;设置不同浓度cyt B组(4、5、6、7 μg/mL),常规外周血淋巴培养至44 h加入cyt-B,继续培养至68 h或72 h,收获细胞。按人类微核计划(HUMN Project)中的识别标准识别双核、多核细胞和微核(micronuclei,MN),确定cyt B最适浓度,并分析cyt-B对自发微核率的影响。结果  改良法所获的双核淋巴细胞的胞膜完整,边界清晰,微核易于辨认。培养72 h后,cyt B浓度≥5 μg /mL时,双核细胞比例较4 μg /mL 组显著增加(P=0.001);cyt-B浓度≥6 μg/mL时,三核以上细胞比例显著增加(P=0.01)。培养68 h后,cyt-B浓度为6 μg/mL时,双核细胞比例较高(58.4%)。各浓度组淋巴细胞自发微核率的差异无统计学意义(P=0.32)。结论  改良法选用cyt-B浓度为5 μg/mL、培养72 h或cyt-B浓度为6 μg/mL、培养68 h时收获的细胞,可获得大量双核细胞,且胞膜完整,染色清晰;cyt-B对淋巴细胞自发微核率无显著影响。     

γ－射线诱发人淋巴细胞微核形成与细胞周期关系的初步研究

本研究用γ－射线诱发人外周血淋巴细胞微核（ＭＮ），使用细胞周期控制、ＢｒｄＵ免疫荧光染色、松胞素Ｂ（ＣＢ）阻滞胞质分裂等技术，研究人淋巴细胞微核形成与细胞周期间的定量关系。结果：①Ｇ０期和Ｇ１期淋巴细胞照射组和对照组相比，微核率（ＭＮＦ）和微核细胞率（ＭＮＣＦ）均无明显变化（Ｐ＞０．０５）。②Ｓ期和Ｇ２期淋巴细胞照射组和对照组相比，ＭＮＣＦ均明显增加（Ｐ＜０．０１）。（３）Ｍ期淋巴细胞照射组与对照组相比，ＭＮＦ与ＭＮＣＦ分别增加９０多倍和７０多倍。结论：在人淋巴细胞周期中Ｓ期和Ｇ２期可形成ＭＮ，但Ｍ期是形成ＭＮ的主要阶段。     

甲状腺素对甲亢女性患者淋巴细胞的遗传毒性研究

目的：研究甲状腺素对甲亢女性患者的遗传学毒性作用。方法：利用细胞松弛素－B抑制细胞的胞质分裂的实验方法,促使体外培养的血细胞产生双核淋巴细胞微核。结果：甲亢缓解患者的培养淋巴细胞经激素诱导和未经激素诱导两组的双核淋巴细胞的微核率相比较具有显著性的差异（P＜001）且激素诱导组有异常微核的为25例。结论：甲状腺素可诱导患者淋巴细胞的微核率升高,全血培养的双核淋巴细胞微核率能反映出甲状腺素对细胞内DNA的毒性作用。     

放射治疗对鼻咽癌患者遗传细胞学损伤的初步研究

目的　评价放射治疗对鼻咽癌患者遗传细胞学的损伤。方法　对 15例病例在累积照射剂量为 0、4、10、2 8、48、68Gy时采取口腔粘膜上皮脱落细胞和外周血 ,分别用微核试验检测方法及染色体畸变方法检测鼻咽癌放疗患者口腔粘膜上皮脱落细胞、外周血淋巴细胞微核率和染色体畸变率。结果　鼻咽癌患者接受放射治疗后 ,双核淋巴细胞微核细胞数在累积照射剂量为 4Gy时就表现为明显上升 (P <0 .0 1) ,口腔粘膜上皮脱落细胞微核细胞数在累积照射剂量达到 2 8Gy时才表现出明显上升趋势 (P <0 .0 5 ) ,而未分化淋巴细胞微核数与未照射前相比没有明显差异 (P >0 .0 5 )。外周血淋巴细胞染色体畸变率在 10Gy时明显上升 (P <0 .0 1)。结论　放射治疗对鼻咽癌患者细胞有显著性遗传损伤作用。胞质分裂阻滞微核检测法和染色体畸变法是评价鼻咽癌患者遗传学损伤较为敏感的指标 ,而口腔粘膜上皮脱落细胞微核试验方法最简单 ,具有较大的应用潜力     

猕猴桃果汁抗环磷酰胺致突变作用及其机制

目的；研究猕猴桃果汁抗环磷酰胺（ＣＰ）的致为作用及其可能的作用机制。方法：测定大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率及肝中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性，还原型谷光甘肽（ＧＳＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）含量。结果；猕猴桃果汁对ＣＰ诱发的大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率有显抑制作用，能明显诱导大鼠肝ＳＯＤ活性增强，以及ＧＳＨ的含量增加，降低ＭＤＡ含量。大鼠外周血双核淋巴细胞微核细胞率与ＳＯＤ活性及ＧＳＨ含量呈明     

桑椹对环磷酰胺诱发小鼠骨髓细胞微核的抑制作用

用小鼠骨髓细胞微核试验方法，观察新鲜桑椹汁对环磷酰胺诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的抑制作用。结果发现新鲜桑椹汁具有抑制ＣＰ诱发骨髓微核率升高的作用，各实验组与阳性对照组间差异有显著性，且有明显的剂量反应关系。     

氟化钠的遗传毒性研究

采用紫露草花粉母细胞微核试验、小鼠骨髓多染红细胞微核试验和Ames试验检测氟化钠诱变性。结果显示,氟化钠可使紫露草花粉母细胞微核率和小鼠骨髓多染红细胞微核率显著增高;但Ames试验结果为阴性,表明氟化钠具有条件诱变性,是诱变剂。     

丝裂霉素C与C2-神经酰胺协同抑制人膀胱癌细胞生长及其机制的研究

目的评价丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺联合应用对人膀胱癌细胞的作用效果, 并探讨其机制。方法不同浓度丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合作用于人膀胱癌 BIU- 87 细胞后, 应用噻唑蓝( MTT) 法检测药物细胞毒性, 通过计算合用指数( CI) 分析协同作用, 流式细胞术( FCM) 检测 BIU- 87 细胞凋亡率, 吖啶橙( AO) 荧光染色观察凋亡形态学变化, Western blot 检测细胞色素 C 在细胞内分布变化, 并检测半胱天冬氨酸蛋白酶 3 ( Caspase- 3) 活性改变。结果单独应用时丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺的中效浓度分别是 159μmol/L 和 28 μmol/L, 联合用药时下降为 55 μmol/L 和 11 μmol/L, CI=0.74。丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用均可导致 BIU- 87 细胞出现凋亡的形态学变化。两种药物联合应用时的凋亡率高于各自单用( P <0.05) 。线粒体细胞色素 C 含量在丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用时均较对照组减少, 联合用药时减少最为明显, 细胞浆内细胞色素 C 含量在联合用药时增加也最为明显( P <0.05) 。Caspase- 3 活性在丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用时均较对照组升高, 联合用药时升高最为明显( P <0.05) 。结论丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡, 协同抑制膀胱癌细胞生长。线粒体细胞色素 C释放和 Caspase- 3 活性变化可能发挥重要作用。     

Effects of cortisone, cytochalasin B and cycloheximide on strains of Chlamydia psittaci in cell cultures

Vero and McCoy cell cultures were tested for their susceptibility to Chlamydia psittaci in the presence of several antimetabolites, such as cortisone acetate, cytochalasin B and cycloheximide. Vero cells were more susceptible than the McCoy cell cultures as demonstrated by cytopathic changes, fluorescent antibody activity, and titer of C. psittaci. Although all of the antimetabolites increased these parameters, a mixture of cortisone and cytochalasin B was the most effective.     

细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察

目的：观察细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响。方法：以人红白血病K562细胞为细胞模型，经不同浓度的CB作用不同时间（4-48h），通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变。细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线。结果：细胞形态发生显著变化，处理组细胞出现不同程度的脱核，细胞生长受到显著抑制。结论：CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关，随作用时间延长而增强；秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用；CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用。     

L5178Y和WTK1细胞微核试验在抗诱变测试中的应用

为了研究 Ｌ５１７８ Ｙ 和 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞应用于抗诱变测试系统的可靠性和有效性,按维生素 Ｃ（ Ｖｃ）和叶绿酸铜钠（ Ｃｈｌ）与丝裂霉素 Ｃ（ Ｍ Ｍ Ｃ）的加入顺序,分为同时处理、预处理和后处理三种处理方式,观察 Ｖｃ 和 Ｃｈｌ对 Ｍ Ｍ Ｃ诱导两种细胞微核的抑制作用。结果表明：① Ｖｃ 和 Ｃｈｌ本身无诱导两种细胞微核的作用;② Ｖｃ 与 Ｍ Ｍ Ｃ同时处理和预处理,能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的两种细胞微核率;③０．１２ｍ ｇ／ｍ ｌ Ｃｈｌ与 Ｍ Ｍ Ｃ同时处理和预处理,能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的两种细胞微核率,但０．０６ｍ ｇ／ｍ ｌ同时处理和预处理仅能显著降低 Ｍ Ｍ Ｃ诱导的 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞微核率。后处理方式对微核反应无抑制作用。该研究结果与 Ｖｃ 和 Ｃｈｌ在其它抗诱变试验中的结果基本一致,表明 Ｌ５１７８ Ｙ 和 Ｗ Ｔ Ｋ１ 细胞微核试验在抗诱变作用检测方面有较好的应用价值。     

人参茎叶总皂甙对实验性小鼠生殖细胞遗传物质损伤的影响

本文采用小鼠精原细胞姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）实验方法，研究了人参茎叶总皂甙（ＧＮＳ）对丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）引起的小鼠精原细胞遗传物质损伤的影响。结果表明，ＧＮＳ不能诱发小鼠精原细胞ＳＣＥ，而且在腹腔注射ＭＭＣ的同时给予ＧＮＳ，可使ＭＭＣ诱发的小鼠精原细胞ＳＣＥ频率明显降低。为此，我们认为ＧＮＳ对小鼠生殖细胞遗传物质具有保护作用。     

Smac/DIABLO Promotes Mitomycin C-induced Apoptosis of Bladder Cancer T24 Cells

Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspase(Smac)ordirectIAPbindingproteinwithlowpl(DIABLO),amitochondrialproteinthatisreleasedtogetherwithcytochromeCfromthemi tochondriainresponsetoapoptoticstimuli,wasrecentlyfoundtopromotecaspaseactivationbybindingandneutralizingtheinhibitorofapoptosisproteins(IAPs)[1-3].Inthisstudy,inordertoex plorethepossibilityofSmac/DIABLOasanoveltargetofgenetherapyforbladdercancer,theeffectoftheSmacexpressiononthemitomycinC(MMC)inducedapoptosisofthebladder…     

快速筛选食管致癌物的体内试验

甲基苄基亚硝胺为强致癌物，具有明显的组织亲合性。在大鼠可诱发食管鳞癌，在小鼠可诱发前胃鳞癌。本实验为小鼠经甲基苄基亚硝胺处理，在其前胃粘膜基底细胞和副基底细胞微核和凋谢出现率增高。此种诱变试验除具有体内短期试验的优点外，还具有器官特异性。可作为快速筛选食管致癌物体内试验。