黄连细胞二步法悬浮培养生产黄连生物碱类成分的探索

为提高用植物细胞培养生产次生代谢产物的单位产量，作者对黄连细胞采用二步法悬浮培养生产黄连生物碱进行了探索。结果显示：黄连细胞采用一步法悬浮培养６周，细胞干、鲜重产率分别为２０．９６ｇ／Ｌ和１７４．９２ｇ／Ｌ，增重约７００％；细胞中总生物碱含量为１４．７９ｍｇ／ｇ．ｃｅｌｄｗ，培养基中生物碱量为１２．９６ｍｇ／Ｌ，每升培养液共可收获生物碱３２３ｍｇ。采用先在生长培养基中培养３周，然后在合成培养基中培养３周的二步法培养，６周后收获细胞干、鲜重分别为１６．７２ｇ／Ｌ和１２７．４４ｇ／Ｌ，其生物量低于一步法，但总碱含量达３１．７６ｍｇ／ｇ．ｃｅｌｄｗ，培养基中生物碱量为２５．３１ｍｇ／Ｌ，每升培养液共可获生物碱５５６ｍｇ。二步法培养生物碱产率为一步法培养的１．７２倍。以上结果表明：二步培养法能够较好地解决黄连培养物生物量增长与次生代谢产物积累之间的矛盾，大大提高目的产物的产率，具有一定的实用价值。     

白花曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱活性成分合成

目的 研究白花曼陀罗细胞悬浮培养合成生物碱。方法 在MS液体培养基上悬浮培养细胞生产生物碱，以碳源、pH值、接种量等为影响因子进行研究。结果 蔗糖为最佳碳源，细胞接种量以鲜重1.5～2.0g／L、培养液初始pH值5．5～6．0对曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱合成最有利，加入苯丙氨酸能促进生物碱的合成。结论 白花曼陀罗细胞悬浮培养能有效地合成生物碱。     

长春花细胞大规模培养生产生物碱的研究现状

本文主要从通气状况，剪切力，流变学特征，培养方式，反应器的设计和放大等方面概述了近年来国外长春花细胞大规模培养生产生物碱的研究成果及存在的问题，试图为我国药用植物细胞大规模培养研究提供借鉴。     

芸香科植物飞龙掌血愈伤组织细胞培养物生物碱成分的研究

目的：为研究芸香料各亚科及属之间的亲缘关系及化学分类。方法：对药用植物飞龙掌血（Ｔｏｄｄａｌｉａａｓｉａｔｉｃａ）愈伤组织进行诱导生长和继代培养，收获培养７周的组织块，甲醇和乙酯提取物通过多次硅胶柱层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶柱层析等方法进行生物碱等化学成分的分离与结构鉴定。结果：为采用药用植物飞龙掌血愈伤组织细胞培养的方法制备喹啉呋喃类药用生物碱提供依据。     

在长春花细胞悬浮培养中细胞分裂素和乙烯通过甲基赤藓醇磷酸盐或萜类途径调控吲哚生物碱的产生

长春花Catharanthus roseus（L）G．Don中的萜吲哚生物碱（TIAs）共同的母体化合物是异胡豆苷（strictosidine），而异胡豆苷由色胺和断马钱子苷（secologanin）立体定向缩合而成。由色氨酸脱羧酶（TDC）形成的1-色氨酸经过脱羧形成色胺；而断马钱子苷通过萜类途径由异戊烯基二磷酸（IPP）衍生而来。在IPP存在情况下，TIA主要是通过（选择的）甲基赤藓醇磷酸盐（MEP）途径，在质体中合成，而不是通过经典的甲羟戊酸途径在胞液中合成。作者研究了在长春花细胞悬浮培养中MEP和乙烯对TIA合成的调节作用。     

黄连中生物碱类成分抗溃疡性结肠炎的作用机制研究进展

黄连是一味常用中药,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其中的主要活性成分为小檗碱、药根碱、黄连碱、表小檗碱等生物碱。现代药理学研究表明,黄连具有抗菌、抗氧化、免疫调节等药理作用,广泛用于治疗细菌性痢疾、胃炎、溃疡性结肠炎等胃肠道疾病。近年来,含黄连的复方、黄连及其中的生物碱类成分在溃疡性结肠炎的治疗中取得一定进展。基于此,主要从抑制炎症反应、调节免疫失衡、肠道菌群-宿主互作调控以及维持肠黏膜屏障功能角度,系统分析和归纳黄连及其生物碱类成分的抗溃疡性结肠炎机制,从而为黄连及溃疡性结肠炎治疗药物的开发提供参考。     

三七悬浮细胞高密度培养生产人参皂甙和多糖

研究了在摇瓶培养中接种量和各种营养成分对三七悬浮细胞高密度培养的影响，结果表明，磷起始浓度为３．７５ｍｍｏｌ／Ｌ对其细胞培养较佳，接种量对细胞量和产物形成量有一定程度影响，而对细胞倍增数影响更大，在摇瓶培养中采用１２层纱布较棉花塞有利于氧代应，进一步考察了培养过程中糖和其它营养成分的补料策略，发现仅添加合适浓度的糖可使干细胞达到３５ｇ／Ｌ，人参皂甙和多糖分别可高达１．５７ｇ／Ｌ和５．２２ｇ／Ｌ；其     

黄花蒿悬浮培养细胞对二氢青蒿酸的生物转化研究

目的 采用黄花蒿悬浮培养细胞研究二氢青蒿酸(Ⅰ)的生物转化。方法 向预培养 14 d 的黄花蒿细胞悬浮培养体系中加入底物二氢青蒿酸,培养 2 d 后终止转化。通过 TLC 和 HPLC 检测转化产物,利用硅胶、Sephadex LH-20 以及 ODS 柱色谱分离纯化转化产物,并根据理化数据和波谱技术鉴定转化产物的化学结构,最后利用 HPLC 考察共培养时间对转化率的影响。结果 二氢青蒿酸在黄花蒿培养体系中成功地进行了转化并分离得到两个转化产物：3-α-羟基二氢青蒿酸(Ⅱa)和3-β-羟基二氢青蒿酸(Ⅱb)。两个转化产物的最佳共培养时间均为 1 d,总的摩尔转化率分别为 2.6% (Ⅱa) 和 15.7% (Ⅱb)。结论 本研究首次利用黄花蒿培养细胞生物转化二氢青蒿酸,且得到一对区域特异性的羟基化转化产物。     

脐血单个核细胞的搅拌悬浮培养

研究了悬浮培养中接种密度、换液和优化培养中所用细胞因子组合对造血细胞扩增的影响。结果表明,较高的接种密度(1.0×106cells/mL)比低接种密度(0.5×106cells/mL)更有利于总细胞、粒巨噬集落形成单位(CFU-GM)和巨核细胞集落形成单位(CFU-Mk)的扩增。换液能及时补充葡萄糖和移出培养中产生的乳酸,从而不对细胞生长造成影响,而且可以成功地控制pH不超出造血细胞正常生长所需pH范围。在SCF、IL-3和IL-6组合基础上添加Flt-3配体(FL)和促血小板生成素(TPO)能比原来的SCF、IL-3和IL-6组合更能促进总细胞、CFU-GM和CFU-Mk的扩增。     

岩黄连的抗乙肝病毒活性成分研究

目的 研究岩黄连Corydalis saxicola 生物碱中具有抗乙肝病毒活性的化学成分。方法 利用柱色谱法分离纯化岩黄连总生物碱中的化学成分,根据化合物的理化性质与波谱数据进行结构鉴定;利用HepG 2.2.15细胞株对质量分数较高的化学成分进行抗乙肝病毒活性试验。结果 从岩黄连总生物碱中分离鉴定了16个生物碱,分别为二氢血根碱（1）、d-紫堇碱（2）、旋卡文定碱（3）、stylopine（4）、6-丙酮基-5, 6-二氢血根碱（5）、二氢白屈菜红碱（6）、四氢巴马汀（7）、adlumidine（8）、(?)-salutaridine（9）、巴马汀（10）、原阿片碱（11）、小檗碱（12）、coptisine（13）、thalifaurine（14）、dehydroapocavidine（15）和木兰花碱（16）。对质量分数较高的化合物5、6、8～11、13、16进行抗乙肝病毒活性试验,结果表明化合物5、8活性一般,化合物11、16活性较弱,化合物6对HBV具有较强的抑制作用,化合物9次之。结论 化合物1、4～6、8、9、13、14和16均为首次从该药用植物分离得到,化合物10的质量分数较高,是该植物的主要成分,化合物6对HBV抑制活性较强,可能是该植物主要的活性成分。     

TGFβ1反义寡核苷酸对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的 …

为探讨ＴＧＦβ１反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＡＳＯＮ）对大鼠肝脏星状细胞活化及其胶原生成的作用,作者合成了特异笥的ＴＧＦβ１硫代磷酸ＡＳＯＮ及其对照（正义,错义寡核苷酸）,并将其加入至培养的肝脏星状细胞中。通过细胞免疫化学方法分析α－ＳＭＡ的表达来观察肝脏星状细胞的活化,肝脏星状细胞产生ＴＧＦβ的水平用生物学方法测定,以＾３Ｈ－脯氨酸掺入抑制率的测定观察胶原     

睾酮对血管平滑肌细胞中雄激素受体mRNA表达的调控

目的观察睾酮对雄性大鼠血管平滑肌细胞中雄激素受体mRNA表达的自身调控作用.方法贴块法培养雄性 SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),Northern印迹分析法检测细胞中雄激素受体mRNA水平;采用细胞计3H]-胸腺嘧啶掺入法观察调控过程中细胞数量和DNA合成变化情况.结果0～4 μmol/L睾酮与静止的VSMCs作用24 h,细胞内ARmRNA表达水平呈剂量相关性增加;生理水平睾酮(40nmol/L)与静止的VSMCs作用不同时间(0～24 h),细胞内ARmRNA表达水平在24 h时方有显著增加;实验过程中细胞数量及DNA合成速率均无明显改变.结论血管平滑肌细胞中存在睾酮对雄激素受体mRNA表达的自身上调作用,调控过程中细胞活力保持稳定.提示 VSMCs中睾酮对AR表达的调控作用部分需要转录水平的参与.     

Inhibition of the activation and collagen production of cultured rat hepatic stellate cells by antisense oligonucleotides against transforming growth factor-beta 1 is enhanced by cationic liposome delivery]

In order to investigate the inhibition of the activation and collagen production of cultured rat hepatic stellate cells (HSC) by antisense oligonucleotides (ASON) against TGF beta 1 after cationic liposome (lipofectin) delivery, the authors synthesized a 20-mer phosphorothioate antisense oligonucleotide of TGF beta 1 mRNA, and its sense of missense oligonucleotides, and then treated the HSC with cationic liposome/oligonucleotide complexes respectively. The cellular uptake of 32P-labelled oligonucleotides was determined by liquid scintillation counting, and HSC activation was assessed by the expression of alpha-smooth muscle actin(alpha-SMA). The cellular uptake of lipofectin/32P-ASON complex was approximately five-fold higher than that of 32P-ASON alone. Cationic liposome (lipofectin) delivery significantly increased the inhibition of HSCs activation by ASON, while compared with the use of naked TGF beta 1 ASON at the same concentration (at a final concentration of 1 mumol/L, P < 0.05). However, these effects were not observed in lipofectin alone, liposome/sense or missense oligos complexes at the same concentration. The oligonucleotide or lipofectin/oligos complexes had no cytotoxicity to rat HSCs in culture. These findings suggest that cationic liposome is an effective vehicle to improve the delivery of ASON to rat HSCs in culture, and the cationic liposome/TGF beta 1 ASON complex may be useful for the treatment of hepatic fibrosis.     

间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的形态学观察

目的：探讨以间质干细胞（MSC）与同种异体脱钙骨复合培养法构建组织工程化生物衍生骨的可行性。方法：预先制备同种异体脱钙骨，取健康成人骨髓，用单核细胞分离液分离MSC，间充质干细胞基础培养基原代和传代培养。倒置显微镜下观察细胞生物学特性，用FITC标记的抗CD105对第3例细胞进行流式细胞鉴定，并与同种异体脱钙骨复合培养1周后行扫描电镜观察。结果：原代及传代培养的MSC增殖迅速，第3代CD105阳性细胞占64．1％，复合同种异体脱钙骨培养1周后细胞生长状态良好，增殖迅速，在材料表面形成细胞层。结论：未诱导的MSC是骨组织工程适宜的种子细胞，与同种异体脱钙骨复合可作为骨组织工程的载体。     

天麻注射液对主动脉平滑肌细胞增殖的影响

在家兔主动脉血管平滑肌细胞离体培养基础上，应用细胞计数，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入及测定培养液中前列环素产物含量的方法。探讨天麻注射液及其有效成分天麻素对ＶＳＭＣ增殖的影响及作用机理。结果表明：天麻注射液能明显抑制ＶＳＭＣ数目的增长和细胞对＾３Ｈ－ＴｄＲ的摄取，并可增加ＰＧＩ２水解产物６－Ｋ－ＰＧＦ１α的释放，但天麻素却未发现上述抑制ＶＳＭＣ增殖作用，提示天麻注射液的抗ＶＳＭＣ增殖作用与天麻素无关，而ＰＧ     

温血停搏液对培养心肌细胞的保护

INTRODUCTION Myocardial protection remains a problem in clinical practice despite that medium cold extracorporeal circulation and myocardial protection by hypothermic cardioplegia have widely been adopted in open heart surgery under direct vision. In our study, in order to investigate the mechanism of myocardial protection by warm blood cardioplegia and to lay a theoretical foundation for this new technique, we established a model of warm blood cardioplegia in cultured myocardial cells of newbron rats and carried out an experiment at cellular and molecular levels.     

Interleukin 6 production and interleukin 6 mRNA gene expression by mouse glomerular mesangial cells]

To investigate the relationship between Interleukin 6(IL 6) and glomerular mesangial cells (MC), the MC of BALB/c mouse were cultured and verified subsequently by anti-keratin and antidesmin antibodies. The cultured MC were divided into two parts those with Mac-1 marker and those without by flow cytometry. The IL 6 activity of cultured supernatants of MC was measured using the IL 6-dependent cell line subclone (MH 60). The results show that the mouse MC can produce IL6 and the level of IL 6 produced by MC with Mac-1 marker was higher than that without Mac-1. The RNA from the mouse glomerular mesangial cells was hybridized in dot blots with a-32pdCTP labeled IL6 cDNA probe, the dot blot autoradiograph showed the expression of IL6 mRNA gene in mouse mesangial cells.     

Effect of homocysteine on NF-kappaB activity in cultured rat vascular smooth muscle cells]

OBJECTIVE: To investigate the effect of homocysteine (Hcy) on nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) activity in cultured rat vascular smooth muscle cells (VSMCs). METHODS: Rat VSMCs were stimulated with 0.25 mmol/L Hcy. Cells were collected and nuclear protein was extracted at 30 min, 1 h and 2 h following stimulation. NF-kappaB activity was examined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). RESULT: Baseline NF-kappaB nuclear binding in VSMCs increased more than 1.76-fold at 30 min (P<0.01), 1.91-fold at 1h (P<0.01) and 1.84-fold at 2 h (P<0.01) following stimulation of Hcy. CONCLUSION: Hcy can enhance transient mobilization of N-kappaB in VSMCs, which suggests that some regulating effect of Hcy on VSMCs might be exerted through NF-kappaB activation pathway.     

Modulation of endothelin-1 on pulmonary surfactant synthesis of cultured alveolar type II cells]

The effects of endothelin-1(ET-1) on pulmonary surfactant(PS) synthesis of cultured AT II cells were observed. The results showed that: 1. ET-1(10(-11)-10(-8) mol.L-1) enhanced PS synthesis of cultured AT II cells in a dose-dependent manner. 2. The minimum effective concentration of ET-1 enhanced PS synthesis of cultured AT II cells was higher than that of lung explants. 3. ETA antagonist BQ123 decreased the effect of ET-1 on PS synthesis, but ETB antagonist BQ788 did not change the effect. 4. ET-1 (10(-12) and 10(-10) mol.L-1) had no effect on the proliferation of AT II cells. These results confirmed that ET-1 can enhance directly and indirectly on the PS synthesis of AT II cells mediated via ETA receptor. The effect of ET-1 on PS synthesis was not induced by changing the number of AT II cells.     

肝素对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞分泌物影响

为了解肝素对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞增殖和细胞因子分泌的影响。作者采用四甲基偶氮唑蓝比色分析法及生物活性法,分别测定了人肾小球ＭＣ增殖和细胞因子的分泌情况。结果显示;在正常培养条件下,人肾上球ＭＣ分泌一定理的白细胞介素６（ＩＬ－６０和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）。脂多糖诱导ＭＣ增殖及分泌ＩＬ－６,ＴＮＦ－α。高浓度的肝素（５００Ｕ／ｍｌ）促进ＭＣ增殖及分泌细胞因子,低浓度的肝素（５Ｕ／ｍｌ）抑制