曲普瑞林对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的作用及对P21 WAF1/CIP1基因表达的影响

目的研究曲普瑞林对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的抑制作用及其分子作用机制。方法以不同浓度曲普瑞林(10-9~10-5mol/L)体外作用于子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率,免疫组织化学检测细胞中P21WAF1/CIP1(简写为P21)蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测P21mRNA的表达。结果①当曲普瑞林浓度为10-9mol/L时,癌细胞即受到抑制,抑制率为36.8%;随着曲普瑞林浓度的增大,抑制率渐高。到浓度为10-5mol/L时抑制率上升至57.4%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②浓度从10-9mol/L~10-5mol/L的曲普瑞林作用72 h后,P21的表达有不同程度的上升,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论①曲普瑞林在体外对HEC-1-B细胞可能有直接的抑制作用,且呈剂量依赖关系。②曲普瑞林抑制HEC-1-B细胞增殖,其分子作用机制可能与上调P21蛋白表达有关。     

槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与Bcl-2、C-myc表达的影响

目的:研究槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、癌基因C-myc表达的影响。方法:5、10、20、40、80、160μmol/L槲皮素处理SW480细胞后,采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;实时荧光定量反相聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测Bcl-2、C-myc mRNA和蛋白表达水平。结果:槲皮素对SW480细胞有明显抑制作用,能够诱导SW480细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关;40μmol/L槲皮素可明显抑制Bcl-2、C-myc mRNA的表达;处理48、72 h时40μmol/L槲皮素明显抑制Bcl-2、C-myc蛋白的表达(P<0.05)。结论:槲皮素能够抑制SW480细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性,槲皮素可能通过下调Bcl-2、C-myc的表达水平而发挥抗结直肠癌作用。     

芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

奥曲肽对人肝癌细胞Huh-7增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的探讨奥曲肽对人肝癌细胞Huh-7增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 Huh-7细胞用不同浓度奥曲肽(0、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L,分别为A、B、C、D、E、F组)处理,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果与A组相比,其余各组Huh-7细胞的生长抑制率、G1期细胞的比例、凋亡率及Caspase-3蛋白表达均以浓度依赖性的方式明显增加。结论奥曲肽可显著抑制Huh-7细胞的生长,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡;且奥曲肽可能通过启动Caspases途径诱导人肝癌细胞Huh-7凋亡。     

塞来昔布联合PDTC对人胃癌细胞株SGC-7901生长的抑制作用

目的:研究塞来昔布及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制作用及其相关机制。方法:分别应用塞来昔布50、100μmol/L,PDTC50、100μmol/L及2药联合25/25、50/50μmol/L处理SGC-7901胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率。TUNEL法检测细胞的原位凋亡。RT-PCR检测环氧合酶-2(COX-2)、核因子(NF)-κB、caspase-3mRNA的表达。结果:塞来昔布、PDTC及2药联合作用于胃癌细胞72h细胞的生长均受到抑制(P<0.05),72h时25/25μmol/L的2药联合组与50μmol/L塞来昔布组相比,细胞的生长抑制率无明显差异(P>0.05),50/50μmol/L的2药联合组细胞生长抑制率高于100μmol/L的单独用药组(P<0.01)。100μmol/L的单独用药组和50/50μmol/L的2药联合组在作用于细胞24h后,细胞凋亡指数均高于阴性对照组,且2药联合组凋亡指数高于单独用药组(P<0.01)。100μmol/L的塞来昔布及PDTC单独作用于细胞12h后均可见COX-2、NF-κB表达降低(P<0.05),100μmol/L的塞来昔布和PDTC及2种浓度的2药联合caspase-3表达升高(P<0.05)。结论:塞来昔布与PDTC联合应用具有显著抗胃癌细胞增殖,促进其凋亡的作用,其机制可能与抑制COX-2、NF-κB的表达,促进caspase-3表达有关。     

醋酸曲普瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其对PCNA表达的影响

目的探讨促性腺激素释放激素类似物醋酸曲谱瑞林对子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤细胞株HEC-1-B生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法将HEC-1-B细胞注入裸鼠右下肢近腹股沟处皮下,建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。模型建立后将24只荷瘤裸鼠随机分为4组,即高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,6只/组,造模3 d后,开始应用醋酸曲普瑞林进行干预,给药途径为皮下注射,1次/d,连续4周。干预期间定期观察肿瘤的生长抑制情况。第31天后处死动物,称取瘤重,比较干预后各组移植瘤抑瘤率,免疫组化检测PCNA的活性变化。结果病理学观察对照组细胞密集,呈片状,有局灶性坏死,细胞有明显异型性,核大深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团块状。GnRHa对裸鼠移植瘤有明显抑制作用,各组的抑瘤率分别为高剂量组51%,中剂量组28.3%,低剂量组19.4%,与对照组相比,醋酸曲普瑞林治疗各组肿瘤生长缓慢,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测结果显示随着药物浓度的增加,PCNA的表达降低,且各组两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论醋酸曲普瑞林能抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,且呈剂量依赖关系,其作用机制可能与下调PCNA的表达有关系。     

芍药苷对肺腺癌细胞A549凋亡的诱导作用

目的:研究芍药苷对肺腺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法:以0(阴性对照)、5、10、20、40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,以MTT法检测A549细胞活力。上述浓度芍药苷培养A549细胞24 h后,酶标法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法检测Bcl-xl、Bax、核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子κB p65(NF-κB pp65)蛋白表达。结果:与阴性对照比较,5~40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,细胞活力减弱;5~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Caspase-3活性、Bax蛋白表达增强;10~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Bcl-xl蛋白表达减弱,NF-κB pp65蛋白表达减弱;以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:芍药苷可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与激活NF-κB信号通路、调节相关基因表达有关。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯通过PTEN/PI3K/Akt抑制YAC-1细胞增殖和诱导其分化

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对鼠淋巴瘤YAC-1细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用鼠淋巴瘤YAC-1细胞后,MTT检测细胞生长抑制率;LDH法检测细胞毒性;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态;NBT检测细胞分化阳性率;RT-PCR和Western blot法检测维甲酸受体mRNA和蛋白表达变化;Western blot法检测PTEN/PI3K/Akt和cyclinD的蛋白表达。结果 ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol·L-1)用药后72 h明显抑制YAC-1细胞增殖,其抑制作用随浓度和时间增加而逐渐增强;随着药物浓度升高,ATPR对YAC-1细胞毒性增强;ATPR(10-5¹0-9mol·L-1)作用72 h后可诱导YAC-1细胞形态呈现高分化趋势,且NBT阳性率升高;ATPR(10-5mol·L-1)体外用药72 h可诱导RARα的mRNA和蛋白表达升高,但RARβ和RARγ表达无明显变化;而且可诱导PTEN表达升高并下调p-Akt和cyclinD的蛋白表达。结论 ATPR可明显抑制YAC-1细胞增殖并诱导其分化,其机制可能是与RARα结合后参与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路,从而抑制cyclinD的过表达。     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.     

香菇多糖对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的影响

目的观察香菇多糖对HEC-1B细胞增殖的影响,并对其机制进行初步探讨。方法HEC-1B细胞分为对照组和香菇多糖（高、中、低剂量）组,加香菇多糖高、中、低剂量于培养液中,使其终浓度分别为0.25g/L、0.5g/L、1.0g/L。采用MTT法观测香菇多糖对HEC-1B细胞增值的影响;分别采用realtime PCR、免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Bax、Bcl-2、PCNA mRNA蛋白含量。结果香菇多糖能抑制HEC-1B细胞的增殖,其低、中、高剂量对HEC-1B细胞的增殖抑制率分别为20.46%、35.69%和40.18%。香菇多糖能明显升高HEC-1B细胞中Bax mRNA蛋白含量（P〈0.05或P〈0.01）,明显降低HEC-1B细胞中Bcl-2、PCNA mRNA蛋白含量（P〈0.05）。结论香菇多糖能抑制HEC-1B细胞的增值,其机制可能与升高Bax表达,降低Bcl-2、PCNA表达有关。     

补骨脂定破坏LIF自分泌增强子宫内膜癌细胞对顺铂敏感

目的探讨补骨脂定对耐顺铂子宫内膜癌细胞LIF自分泌的影响,判断补骨脂定与顺铂联用的效应。方法利用梯度顺铂诱导,在子宫内膜癌细胞(HEC-1B和RL95-2)中,建立耐顺铂细胞(HEC-1B-CisR和RL95-2-CisR),用逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验验证LIF的表达。在耐顺铂细胞中沉默LIF,利用Annexin V-FITC/PI法观察顺铂对细胞的杀伤作用。利用RT-qPCR检测,54种香豆素化合物处理耐顺铂细胞后,LIF的表达情况,筛选出对LIF表达抑制最为显著的化合物(补骨脂定)。利用CCK-8法结合CompuSyn软件计算并评价,补骨脂定与顺铂对两耐药细胞联合用药的效应。结果耐顺铂细胞(HEC-1B-CisR和RL95-2-CisR)对顺铂的耐药指数(RI)分别是6.30和5.76,相对于亲代细胞(HEC-1B和RL95-2),耐顺铂细胞表达并分泌更多LIF;沉默LIF能显著增强顺铂对两耐顺铂细胞的杀伤作用。在54种香豆素化合物中,10μmol·L^-1补骨脂定能显著抑制两耐顺铂细胞中LIF的表达与分泌,但并不显著抑制两耐顺铂细胞的活性。补骨脂定与顺铂联用,对耐顺铂细胞的两药联合用药指数(CI)分别为0.53和0.39。结论在体外环境中,补骨脂定破坏LIF自分泌增强子宫内膜癌细胞对顺铂敏感。     

1，25二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞Skp2mRNA的影响

目的检测1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3）对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞作用后S期激酶相关蛋白（skp2）表达情况．以探讨其抗癌机制;方法选用人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A进行体外培养,采用RToPCR在mRNA水平检测Skp2基因表达的变化;结果（10^-8-10^-6）mol·L^-1浓度的1,25（OH）2D3作用于HEC-1-A细胞随着作用浓度增加、作用时间延长。细胞增殖能力逐渐下降。Skp2mRNA逐渐减少;结论1,25（OH）2Db对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A有抑制作用．可能通过转录水平下调Skp2基因表达．从而产生抑癌作用。     

微小 RNA-338-3p靶向调控高迁移率族蛋白 B1增强子宫内膜癌对紫杉醇敏感性的研究

目的 探讨miR-338-3p靶向调控高迁移率族蛋白B1(HMGB1)影响子宫内膜癌对紫杉醇(Paclitaxel,PTX)敏感性的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blottingting)检测miR-338-3p和HMGB1在子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B中的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-338-3p和HMGB1之间的靶向关系;将Ishikawa和HEC-1B细胞分为如下5组:miR-338-3p组(转染miR-338-3p mimics组)、miR-NC组(转染miRNA阴性对照组)、si-HMGB1组(转染干扰RNA)、si-NC组(转染siRNA阴性对照)、miR-338-3p+HMGB1组(共转染miR-338-3pmimics和pcDNA3.0 HMGB1组).将各组用转染试剂转染至细胞,用不同浓度的PTX处理上述转染组细胞,CCK-8法检测Ishikawa和HEC-1B细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,Western blotting检测HMGBI蛋白表达.结果 与人正常子宫内膜上皮细胞ESC相比,miR-338-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B中表达下调[(1.00±0.10)比(0.51±0.04)、(0.46±0.04)],而HMGB1则相反;miR-338-3p靶向并负性调节HMGB1表达;过表达miR-338-3p抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B增殖,促进凋亡,增加其对PTX敏感,与敲低HMGB1结果一致;HMGB1可部分逆转miR-338-3p对子宫内膜癌细胞增殖,凋亡以及对PTX敏感性的影响.结论 miR-338-3p通过负性调控HMGB1抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1B增殖,促进凋亡和增强其对PTX敏感性.     

姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对人子宫内膜癌细胞(HEC-1B)增殖和凋亡的影响。方法:应用6.67~66.67μmol/L的姜黄素分别处理HEC-1B 48h后,采用MTT法检测姜黄素对HEC-1B的增殖程度的影响;流式细胞仪进行细胞周期时相分析;荧光显微镜观察细胞核形态的变化。结果:①MTT法显示培养48h后,姜黄素组的吸光度值A490nm低于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性;②流式细胞仪检测显示培养48h后,姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P<0.05),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性;③荧光显微镜下给药组部分细胞发生凋亡形态学改变,凋亡率为10.22%~34.72%。结论:姜黄素可抑制HEC-1B的增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡的机制可能是通过将细胞阻滞在G2/M期来实现的。     

雌激素及拮抗剂三苯氧胺对子宫内膜癌细胞生长的影响

目的 研究雌激素及拮抗剂三苯氧胺对子宫内膜癌细胞HEC-1B生长的影响.方法 体外培养中分化子宫内膜癌细胞HEC-1B,按实验目的分别加入17β-雌二醇（E2,10-8M）、三苯氧胺（TAM,10-7 M）刺激24、48、72、96 h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色方法比较各个条件下的细胞数目.用流式细胞术方法检测加入E2、TAM后的细胞周期变化,比较各个条件下的S期细胞比率（SPF）.结果 MTT结果：E2、TAM在作用72 h和96 h后,可显著刺激HEC-1B细胞生长（P〈0.05）.HEC-1B细胞加入E2刺激后,SPF在加药72 h和96 h均增高.TAM作用细胞后,SPF值在药物作用48 h起均高于对照组.结论 雌激素、三苯氧胺均对子宫内膜癌HEC-1B细胞有促生长作用.