全反式维甲酸诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导食管癌EC9706细胞凋亡的作用及其机制。方法用不同浓度的ATRA处理EC9706细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对EC9706细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞周期的变化和凋亡率;采用免疫组化S-P法,检测凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果ATRA对EC9706细胞有增殖抑制和诱导凋亡的作用;流式细胞仪检测显示,在G1期之前可出现Sub-G1峰,凋亡率最高为(32.6±0.4)%,并有浓度和时间依赖性;TUNEL法显示凋亡小体形成;EC9706细胞在凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达增强,bcl-2的蛋白表达减弱。结论ATRA作用于食管癌EC9706细胞后将引起细胞凋亡的增加,这主要与ATRA能促进caspase-3的活化,并下调bcl-2的蛋白表达有关。     

全反式维甲酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的初步研究

[目的]研究全反式维甲酸（ATRA）体外诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡及其作用机制。[方法]ATRA处理HepG2细胞。MTT法分析细胞增殖反应;Hoechst染色法检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中caspase-9、caspase-3和NF-κB蛋白表达情况。[结果]A-TRA可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,可上调细胞中caspase-9、caspase-3表达水平（P〈0.05）。[结论]ATRA可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与cas-pase-9、caspase-3表达上调有关。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞诱导凋亡的作用

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对肺癌细胞生长的影响及其凋亡作用.方法:应用MTT法检测ATRA对体外培养人肺癌细胞株细胞A549的抑制率,光镜及透射电镜、流式细胞仪等检测ATRA对A549细胞诱导凋亡的作用.结果: 不同浓度的ATRA对A549细胞的增殖均有抑制作用,且量效关系明显.但大剂量主要导致细胞死亡,以10-5mol*L-1的ATRA作用效果最好,经10-5mol*L-1 ATRA作用7d后,A549细胞增殖抑制率达到60%.光镜及透射电镜下可见细胞恶性表型向正常表型发生逆转,并可观察到凋亡小体.流式细胞仪分析结果显示,ATRA处理组细胞周期延迟,G1期比例明显升高,S、G2期比例下降.结论:ATRA可抑制肺癌细胞的增殖,并诱导癌细胞凋亡.     

全反式维甲酸对阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的影响

目的：探讨ＨＬ－６０细胞经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）作用后对化疗药物阿糖胞苷（ＡＲＡ－ｃ）诱导凋亡敏感性的变化。方法：应用光镜检查凋亡细胞形态,ＤＮＡ电泳检查梯状条带及流式细胞周期分布、凋亡细胞率和ｂｃｌ－２蛋白表达的阳性细胞率和相对荧光强度（ＭＦＩ）。结果：ＡＴＲＡ０．３ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞７２ｈ后,Ｓ期细胞显著减少至３２．９％（Ｐ〈０．０５）,Ｇ０／Ｇ１期细胞明显增加到５８．５％（Ｐ〈０．０５）,ｂｃｌ－２阳性细胞率和ＭＦＩ分别下降至１８％和０．６３（Ｐ〈０．０５）;Ａｒａ－Ｃ１．５ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞４ｈ,凋亡细胞率为５５．１％,ＤＮＡ电泳风明显的梯状条带。当ＨＬ－６０细胞经ＡＴＲＡ０．３ｍｇ／Ｌ作用７２ｈ手中Ａｒａ－Ｃ１．５ｍｇ／Ｌ继续培养４ｈ,细胞凋亡率明显减少至３４．４％（Ｐ〈０．０５）,     

磷酸化JNK介导全反式维甲酸诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)细胞生长并诱导其凋亡的作用及信号转导机制。方法 应用^3H—胸腺嘧啶掺人分析法观察ATRA对细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪分析ATRA对Y79细胞周期的影响;以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡;用Western blot分析c—jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化。结果 ATRA可明显抑制Y79细胞的生长,1μmol/L处理36h时,^3H—胸腺嘧啶掺人率下降达40％,Y79细胞被阻滞于G0／G1期,并出现Sub—G1峰。ATRA可诱导Y79细胞凋亡,此凋亡过程可被JNK的阻断剂Curcumin阻断;在此过程中,JNK被激活并磷酸化。结论 ATRA可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡,其过程是由磷酸化的JNK介导,提示ATRA可能是一种潜在的抗Rb化疗药物。     

全反式维甲酸诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的: 探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖抑制及其分子机制。 方法: MTT法检测全反式维甲酸作用于大鼠C6脑胶质瘤细胞后,观察其对细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪观察肿瘤细胞周期及凋亡率的变化。电镜观察C6细胞超微结构变化。Western blot法在不同时间点对凋亡相关基因caspase-3活性蛋白产物的表达进行了检测。 结果: MTT结果表明ATRA对C6细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测证明与对照组相比,处理组C6细胞发生G₁期阻滞;S、G₂期细胞比例下降;细胞出现亚二倍峰,凋亡比例明显增加。电镜下全反式维甲酸作用72h后处理组C6细胞呈凋亡改变:如核固缩、染色质趋边凝聚。Western blot检测发现,处理组出现了caspase-3蛋白活性裂解片段。 结论: 全反式维甲酸抑制C6脑胶质瘤细胞生长,全反式维甲酸抑制脑胶质瘤的作用机理可能至少通过改变细胞周期分布、诱导凋亡来实现。     

全反式维甲酸诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的机制

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的作用机制.方法 将食管癌EC9706细胞接种于裸鼠,成瘤后将裸鼠分为ATRA作用组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用组、联合用药组和空白对照组,每组10只,腹腔内连续给药10 d后处死裸鼠.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测各组裸鼠移植瘤组织中的细胞凋亡情况.采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达水平.结果 ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组的细胞凋亡率分别为44.3%、39.7%和91.0%,均明显高于空白对照组(0.7%,均P＜0.01).空白对照组caspase-3蛋白表达水平为46.12±0.33,caspase-3 mRNA的相对表达量为0.14±0.03,均显著低于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(P＜0.05).空白对照组survivin蛋白表达水平为96.07±0.13,survivin mRNA的相对表达量为0.84±0.04,均显著高于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(均P＜0.05).ATRA作用组与5-Fu作用组的细胞凋亡率、caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义(均P＞0.05),但单药组与联合用药组的差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ATRA可诱导荷瘤裸鼠EC9706细胞产生凋亡,其作用机制与下调survivin蛋白和mRNA的表达以及上调caspase-3蛋白和mRNA的表达有关.     

全反式维甲酸对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨 HL- 6 0细胞经全反式维甲酸 (ATRA)作用后对化疗药物阿糖胞苷 (Ara- C)诱导凋亡敏感性的变化。方法 :应用光镜检查凋亡细胞形态 ,DNA电泳检查梯状条带及流式细胞仪检测细胞周期分布、凋亡细胞率和 bcl- 2蛋白表达的阳性细胞率和相对荧光强度 (MFI)。结果 :ATRA0 .3mg/ L 作用 HL- 6 0细胞 72 h后 ,S期细胞显著减少至 32 .9% (P<0 .0 5 ) ,G0 / G1 期细胞明显增加达 5 8.5 % (P<0 .0 5 ) ,bcl- 2阳性细胞率和 MFI分别下降至 18%和 0 .6 3(P<0 .0 5 ) ;Ara- C1.5 m g/ L 作用 HL- 6 0细胞 4h,凋亡细胞率为 5 5 .1% ,DNA电泳见明显的梯状条带。当 HL- 6 0细胞经 ATRA0 .3m g/ L 作用 72 h后再加 Ara- C1.5 m g/ L 继续培养 4h,细胞凋亡率明显减少至 34 .4% (P<0 .0 5 ) ,DNA电泳见梯状条带亮度减弱。结论 :ATRA降低 HL- 6 0细胞对 Ara- C诱导凋亡敏感性 ,其机制可能与 ATRA阻滞 G0 / G1 期细胞进入 S期有关     

全反式维甲酸联合顺铂在诱导人头颈癌 TCA8113细胞凋亡中的作用

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）与顺铂对人头颈癌 TCA8113细胞凋亡的影响。方法 ATRA 和顺铂单独及联合作用于 TCA8113细胞,采用 MTT 法检测细胞生长,并观察细胞形态变化;使用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;通过 western blot 实验检测 caspase-3表达情况。结果 ATRA 作用于 TCA8113细胞后,细胞生长明显受到抑制,细胞形态发生改变,细胞凋亡比例明显增加,caspase-3蛋白表达下调,ATRA 与顺铂联合作用于肿瘤细胞后,其抑癌作用加强。结论 ATRA 联合顺铂对人头颈癌 TCA8113细胞具有协同抑癌作用。     

全反式维甲酸对CNE—2Z细胞增殖的影响及凋亡诱导

目的：了解全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖生长及凋亡有无影响。方法：采用ＭＴＴ法、细胞核染色、ＤＮＡ裂解率及电泳分析。结果：（１）用ＡＴＲＡ诱导细胞至７２ｈ，细胞增殖抑制率随浓度升高而增加。（２）在终浓度为５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞５天，可见部分细胞体积变小，核浓缩及核碎裂；ＤＮＡ裂解率（４４．２０±６．３２）明显高于对照组（１５．４１±５．５０），差别有显著性，Ｐ＜０．０１；ＤＮＡ琼脂糖电泳，出现不连续的典型梯状ＤＮＡ条带。片段大小为２００ｂｐ或其倍数。（３）在浓度为５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ诱导５天和５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导４天时，均无明显细胞凋亡出现。结论：ＡＴＲＡ对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖有抑制作用，且随浓度增加而增强；ＡＴＲＡ可诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞发生凋亡，但表现出明显的剂量和时间依赖性。     

丁酸钠诱导卵巢癌3AO细胞凋亡的研究

 目的　探讨丁酸钠 (NaB)诱导卵巢癌细胞株 3AO凋亡的机制。方法　以不同浓度的NaB对体外培养的 3AO细胞进行作用 ,通过光镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡发生与药物剂量和作用时间的关系 ,进而选取 4mmol/LNaB作用 72h的 3AO细胞为实验组 ,应用流式细胞技术分析Fas/FasL、bcl 2 /Bax表达和线粒体跨膜电位的变化 ,透射电镜观察内质网形态的变化。结果　 4mmol/LNaB作用72h ,光镜下可见 3AO细胞出现凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳中出现典型的DNAladder,线粒体跨膜电位降低 ,内质网肿胀 ,bcl 2表达降低 ,Bax表达升高 ,而Fas/FasL无明显改变。结论　NaB可能通过线粒体通路和内质网通路诱导 3AO细胞凋亡 ,bcl 2 /Bax起着重要的调控作用。     

不同用药方式对小儿急性早幼粒细胞白血病的临床效果对比研究

目的 探讨全反式维甲酸联合三氧化二砷治疗小儿急性早幼粒细胞白血痛的临床疗效.方法 84例12岁以下小儿APL患者,观察组44例,采用全反式维甲酸和三氧化二砷联合治疗.维甲酸口服,每天20 mg/m2,三氧化二砷静脉注射,每天10 mg;对照组40例,单纯使用维甲酸治疗,剂量为每天40 mg/m2.观察比较2组的临床疗效和长期生存率.结果 观察组完全缓解率为82.6％,对照组为75.0％,2组比较,P=0.0148.达到CR时间治疗组为(25.2±3.3)天,对照组为(36.5±5.6)天,2组比较,P=0.0096.2组患儿的白细胞峰值、早期死亡率和感染率等指标也存在统计学差异,P＜0.05.观察组的PML-RAR转阴率为(90.3±5.4)％,较观察组的(82.4±6.8)％高,但是P=0.2539,没有统计学差异.观察组患儿在治疗后2年死亡4例,死亡率为9.09％;对照组死亡15例,死亡率为37.5％,P=0.0071.结论 全反式维甲酸联合三氧化二砷治疗小儿急性早幼粒细胞白血病和单纯采用全反式维甲酸相比,能够获得更好的疗效,且不良反应较轻,值得临床推广使用.     

5-氟尿嘧啶诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

 用不同剂量的5-氟尿嘧啶（5—Fu）处理人卵巢癌AO10／17细胞株，观察药物作用后细胞形态学，DNA片段化和细胞内钙离子浓度的变化。结果表明受药物影响的人卵巢癌细胞内ca⁺⁺升高，出现了细胞凋亡的形态改变。最后探讨了5—Fu抑制卵巢肿瘤细胞的作用机理。     

常规化疗药物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡特点的分析

目的：观察抗卵巢癌药物顺铂、紫杉醇和阿霉素对卵巢癌细胞系ＯＶＣＡＲ－３体外生长和生存的影响并分析由它们所致的细胞死亡性质。方法：采用细胞形态学观察、细胞动力学检测及ＤＮＡ片段化分析等细胞和分子生物学方法,研究化疗药物对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用。结果：上述药物在抑制ＯＶＣＡＲ－３细胞生长的同时可不同程度地诱导细胞凋亡。其中,紫杉醇诱导细胞凋亡的能力最强;较低剂量紫杉醇（１０＾－８Ｍ）和顺铂（２μｇ／     

LPA经PI3K/Akt信号转导通路抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡

 目的 研究PI3K/AKT信号转导通路对LPA保护顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用的影响。 方法 MTT法检测LPA和LY294002对DDP作用后的SKOV3细胞增殖活性的影响;Hoechst33258荧光染色 观察凋亡细胞;FCM分析细胞凋 亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA“梯状”条带;Western blot检测LPA、LY294002对磷酸 化Akt蛋白表达的影响。 结果 LPA+LY294002+DDP组对SKOV3细胞增殖的抑制作用、凋亡小体的产生及细胞凋亡率高于 LPA+DDP组(P<0.05),而与 LY294002+DDP组差异无统计学意义, DNA片段凝胶电泳示LPA作用后不产生明显的凋亡片段, LPA和LY294002同时作用可出现DNA断裂梯形条带。Western blot结果示LPA作用后磷酸化Akt 蛋白表达升高,而LY294002作用后,磷酸化Akt蛋白表达明显下降。 结论 LPA通过激活PI3K/Akt信号转导通路抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡。     

Retinoic Acid Syndrome: Pulmonary Computed Tomography (CT) Findings

We report the pulmonary computed tomography (CT) findings in three patients with acute promyelocyte leukaemia who developed the retinoic acid syndrome following all-trans retinoic acid (ATRA) therapy. The most consistent CT findings were small, irregular peripheral nodules in the lung fields and pleural effusions. Two of the patients also showed evidence of reticular and ground glass shadowing as well as abnormal anterior mediastinal soft tissue. We report for the first time an association between ATRA and pneumothorax. We conclude that routine CT scanning may provide a sensitive means of early detection or monitoring of the syndrome and thereby may facilitate its management.     

Clinical Relevance of all-trans Retinoic Acid Pharmacokinetics and Its Modulation in Acute Promyelocytic Leukemia

Acute promyelocytic leukemia (APL) is uniquely sensitive to treatment with all-trans retinoic acid (ATRA) which exerts its action via a well-documented cytodifferentiating mechanism. The combination of this retinoid with anthracyclines gives high percentages of complete remission and is now considered the optimal induction treatment for APL patients. Continuous treatment with ATRA, however, induces accelerated drug catabolism, with progressive decline in plasma drug concentrations potentially to below the levels required to maintain differentiation of leukemic cells. This process, which occurs rapidly and consistently has led to the hypothesis that the development of acquired clinical resistance to ATRA in APL has a pharmacologic basis. The rapid autoinduction of the hypercatabolic state precludes maintenance with continuous ATRA oral dosing, and is a limitation of better use of the drug both in APL and in other disorders in which it could be beneficial. Here we briefly review the pharmacologic alterations of ATRA metabolism induced by continuous oral administration, the clinical implications of this phenomenon, and the strategies currently under investigation to prevent or overcome the induced catabolism of this retinoid.