壳聚糖固定谷氨酸脱羧酶的研究

以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂。制备固定化谷氨酸脱羧酶(GDC)，研究固定化反应中pH值、戊二醛浓度、给酶量以及交联反应搅拌时间对固定化GDC活力的影响以及GDC固定化酶和自由酶的酶学特性。实验结果表明：壳聚糖固定化GDC的最适pH4．4．最适温度55℃。与自由酶相比。具有较好的热稳定性、贮存稳定性及可操作性；在米胚芽生产制备γ-氮基丁酸中具有实用价值。     

可溶性固定化木瓜蛋白酶的制备及性质研究

目的 制备一种可溶性固定化木瓜蛋白酶(PP)并研究其部分酶学性质.方法 将PP偶联在羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(AS-L)上,制备得到水溶性固定化PP,并测定游离和水溶性固定化PP最适作用pH、最适作用温度、Km值、热稳定性、酸碱稳定性、低温稳定性和回收稳定性.结果 最适作用pH分别为6.0、5.0,最适作用温度分别为60℃、70℃,Km值分别为2.53、3.07 mg·ml-1;可溶性固定化PP在60℃条件下,保温12 h,仍有62%的活性;在4℃条件下,30 d后活性保留达90%以上;在pH6时稳定性最好,pH4～7范围内也较稳定(相对活性＞80%).结论 可溶性固定化PP能够在大于pH5.5的溶液中完全溶解,最适作用pH范围变窄,最适作用温度和Km值升高;热和酸碱的稳定性均明显增强.     

固定化胰蛋白酶的性质研究

目的　测定固定化胰蛋白酶的催化特性和部分稳定性。方法　在相同的条件下,测定固定化和可溶性胰蛋白酶的活力,得其最适作用pH值和最适作用温度,再测定活力,得到各自的米氏常数(Km)值;测得两种状态酶的热稳定性和酸碱稳定性。同时测定了固定化胰蛋白酶的低温稳定性。结果　固定化和可溶性胰蛋白酶的最适作用pH值分别为8 .0～9. 0和7. 0～9.0 ,最适作用温度分别为6 0℃和5 5℃,Km值分别为2 . 32 6、1 42. 9mg·ml-1 ;固定化胰蛋白酶在5 5℃条件下,保温5h ,仍有78 92 %的活性;在4℃条件下,8d后,活性才略微下降,两周活性保留达90 %以上;在pH 9.0的活性未下降,在pH 7.0～1 0 .0范围内也比较稳定(相对活性>80 %)。结论　胰蛋白酶经固定化后,最适作用pH值范围变窄,最适作用温度和Km值升高;热稳定性和酸碱稳定性均有所增强     

CM-纤维素固定化脂肪酶的研究

目的 　研究 CM-纤维素为载体的固定化脂肪酶的制备方法及比较固定化脂肪酶与游离酶在酶学特性上的变化。方法 　制备固定化脂肪酶的最适条件是 p H5 .5 ,离子浓度为 0 .0 1mol· L- 1 的柠檬酸缓冲液 ,加酶量为 10 0μ· g- 1 载体 ,固定化反应时间为 8h。结果 　所得的固定化酶酶活力为 49.6μ·g- 1载体 ,回收率为 45 % ,最适作用 p H值为 10 .6,最适作用温度为 46℃ ,其催化油脂水解操作半衰期为 2 2 5 h。结论 　本固定化酶制备简便 ,可重复使用 ,稳定性较高。     

以聚丙烯腈纤维为载体制备工业用固定化PGA的基本条件

以聚丙烯腈纤维为载体 ,共价结合制备工业生产应用的固定化青霉素酰化酶。经过测定 ,获得了制备固定化酶的基本条件 :对部分酸水解聚丙烯腈纤维进行霍夫曼重排反应溶液中的次氯酸钠浓度为 4%～ 16 % (v/v) ;用含戊二醛的溶液对经过霍夫曼重排反应的水解纤维进行活化反应溶液的pH为 6 5～ 8 5 ,最适 pH7 0 ;活化反应时间为 10min ;活化纤维中醛基含量为 12 5 0 μmol/g以上 ;酶与活化纤维连接反应溶液的最适pH值为 6 5～ 7 0 ;反应时间为 10min。在酶与活化纤维的连接反应溶液中加入竞争性抑制剂 苯乙酸 ,对酶活力具有保护作用 ,能提高酶活力的固定化效率。在酶与活化纤维的连接反应溶液中剩余的游离酶经吸附、洗涤和浓缩后 ,可以再用于制备固定化酶。变性固定化酶经再生活化后作为载体固定化新的酶液 ,也能制备出较好的固定化酶。     

壳聚糖珠固定化乳糖酶的条件及特性研究

目的研究乳糖酶的固定化。方法以壳聚糖珠(2.0 g)为载体,0.02%戊二醛为交联剂,考察固定化乳糖酶的条件及其特性。结果固定化条件:室温状态下,在pH 6.0、酶量0.2 mg/mL的酶液中固定12 h,固定化乳糖酶活力回收率为31.5%。乳糖酶、固定化乳糖酶的最适pH值分别为5.0~5.5,5.5~6.5;最适温度分别为40℃,50℃。结论固定化乳糖酶最适温度和pH值比溶乳糖高。     

抑肽酶的亲和层析——Tosy1（对甲苯磺酰氯）在固定化酶上的应用

以4%琼脂糖为载体，对甲苯磺酰氯为活化剂，对胰蛋白酶的固定化条件及固定化酶的性质进行了研究。其固定化条件为pH7.4，温度15℃，时间8hr，酶量20mg/g(wet-gel）。同时研究了温度、pH值、时间以及载体与酶的比例等因素对胰蛋白酶固定化的影响。最后报道了该固定化酶的最适pH，热稳定性，pH贮存稳定性和操作稳定性。用这种固定化胰蛋白酶纯化抑肽酶，抑肽酶纯度提高50倍，回收率在85%-95%。     

肝素黄杆菌的明胶固定化

研究以明胶为载体、戊二醛作为交联剂制备固定化肝素黄杆菌的方法,并考察其固定化条件和酶学性质。论文对肝素黄杆菌细胞进行了缺壁处理,通过对明胶浓度、戊二醛浓度等条件的筛选和研究,确定了制备固定化肝素黄杆菌的最佳条件。此外,还对固定化细胞的酶学性质进行了初步研究,考察了温度、pH等因子对固定化细胞的影响。结果表明:明胶浓度15%、戊二醛浓度1.0%、1 mL明胶溶液固定0.3 g细胞,是最佳固定化条件;固定化细胞的最适温度37℃,最适pH 7.0,其酸碱稳定性与温度稳定性均得到了提高。综上所述,肝素黄杆菌在最佳条件下固定化后,具有较好的温度、酸碱、操作和贮藏稳定性。     

基于乳液体系下荧光假单胞菌脂肪酶固定化的研究

构建油包水型乳液体系下假单胞菌脂肪酶固定化,并研究其酶学性质。采用单因素实验,以固定化脂肪酶的水解活力为指标,确定其固定的条件。利用橄榄油乳化法对固定化脂肪酶的催化最适温度,热稳定性、最适p H、p H稳定性、操作稳定性,酶促动力学参数等进行测定。获得了固定化脂肪酶条件:脂肪酶浓度为25.0 mg/m L,固定化温度为5℃,时间为2.0 h,以大豆油作为乳化体系油相,以80.0μL Triton X-100作为乳液体系的乳化剂,保护剂三丁酸甘油酯添加量为100.0μL,交联剂戊二醛25%水溶液的添加量为40.0μL,并测得在该条件下制备的固定化脂肪酶水解活力为9 220.0 U/g。固定化酶的粒径约10~25μm,固定化酶经过11次重复使用之后仍然有约78%的相对酶活力。基于乳液体系下制备固定化脂肪酶具有工艺简单、条件温和及操作方便的特点。而且,固定化后的脂肪酶稳定性有明显的提高。     

CM—葡聚糖凝胶固定化脂肪酶的研究

研究以ＣＭ－葡聚糖凝胶为载体的固定化脂肪酶的制备方法及比较固定化脂肪酶与游高酶在酶学特性上的变化。制备固定化脂肪酶的最适条件是ｐＨ７．０,离子浓度为０．０１ｍｏｌ／Ｌ的ＫＨ２ＰＯ４０－ＮａＯＨ缓冲液,加酶量为１２５Ｕ／ｇ载体,固定化反应时间为８ｈ,所得的固定化酶酶活力为１２２．５Ｕ／ｇ载体,回收率为９８％。固定化酶的稳定性较高,最适作用ｐＨ值为１０．０,最适作用温度为４８℃,其催化油脂水解操作半衰     

固定化β-葡萄糖苷酶制备人参皂苷F_1的研究

本文探讨了β-葡萄糖苷酶的固定化方法,及利用固定化β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rg1为人参皂苷F1的转化工艺。确定交联-包埋法为最佳固定化方法,应用正交实验得出最佳制备条件为:交联时间3h,戊二醛浓度0.1%,海藻酸钠浓度1%,CaCl2浓度2%。固定化酶与游离酶在热稳定性和pH值稳定性方面显示出不同的性质,其中固定化β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH值为5.5。固定化β-葡萄糖苷酶在15℃环境中保存30d后,酶活回收率为68.82%。固定化β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rg1为人参皂苷F1的转化条件为:固定化酶承载量为3.76U/g固定化酶载体,底物浓度为0.2mg/mL,转化温度为40℃,转化周期为2d,转化次数为4次,平均转化率为80.49%。     

用多孔玻璃载体制备固定化青霉素酶的研究

本文就多孔玻璃固定化方法进行了研究。摸索了硅烷化回流时间、γ-氨基丙基三乙氧基硅烷浓度、以及酶与玻璃N羟基琥珀酰亚胺酯共价结合时,pH对固定化青霉素酶活力的影响等。用比活10.2u/mg的青霉素酶粗酶,与150～200目、孔径300～500×10~(-10)m的多孔玻璃所制得的固定化酶活力为248.8u/g,回收率为13.5％。 该固定化酶反应的最适温度为52℃,最适pH为7;其热稳定性较差,pH7条件下65℃及85℃保温30分钟活力分别损失3％及1.2％;其对酸的稳定性优于对碱的稳定性;使用和贮藏稳定性均好。该酶的性能宜用于组装热敏电阻电极。     

纳米级磁性微粒的制备及固定化纤维素酶的研究

研究了明胶改性新途径,制备了核壳式纳米级磁性明胶微粒.以此为载体对纤维素酶进行固定化,确定了固定化工艺条件,研究了磁性固定化酶的最适温度、最适pH,使磁性固定化酶的热稳定性、贮存稳定性及操作稳定性均显著提高.     

纳米级磁性微粒的制备及固定化纤维毒酶的研究

研究了明胶改性新途径,制备了核壳式纳米级磁性明胶微粒。以此为载体对纤维素酶进行固定化,确定了固定化工艺条件,研究了磁性固定化酶的最适温度,最适pH,使磁性固定化酶的热稳定性、贮存稳定性及操作稳定性均显著提高。     

青霉素酰化酶提取及其与固定化酶的动力学参数测定和比较

采用冻融-溶媒法从大肠杆菌中提取青霉素酰化酶(经硫酸铵沉淀、透析、冷冻干燥),制得酶粉,活力为1100.37u/g,经六批提取试验,平均提取收率47.93％。分别测定游离酶及其固定化酶米氏常数Km值。游离酶的Km值为2.39mM,固定化酶按其颗粒大小不同,Km值分别为5.62、8.46、8.42mM。 在对pH稳定性测定中,游离酶最适pH为7～8,而固定化后在pH5～9之间都较稳定。对温度的稳定性测定中,游离酶与固定化酶在40℃以下都较稳定,但在45℃保温一小时后,游离酶只存留活力39.51％,而固定化酶却存留活力86.92％,二者有显著差异、温度再高相差更大。因此酶经固定化后,对pH和温度的稳定性都有明显提高。金属离子对青霉素酰化酶的活力有所影响。特别是铁离子和铜离子影响较大,故酶反应容器不能采用铁和铜的材料。     

环氧化磁性羟基微球的制备及在固定化青霉素G酰化酶中的应用

采用悬浮聚合法合成了一系列磁性羟基微球,以环氧氯丙烷活化后用于固定化青霉素G酰化酶.交联度为30%的微球固定化酶效果最优,并得到最适固定化条件为:给酶量2000u/g,反应时间24h,反应温度35℃,pH 8.0.制得固定化酶酶活力为782.2u/g.水解青霉素G钾盐的最适pH 8.5,最适温度45℃.     

用CHITOSAN固定化青霉素酰化酶

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰氯双活化后,再与青霉素酰化酶偶联。所得固定化酶的活力达20.8u/g。固定化青霉素酰化酶的反应最适温度略高于游离酶,最适pH略低于游离酶;其Km值基本接近游离酶。固定化酶经反复使用,活力基本不变。     

海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶的研究

目的研究海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶的最适条件。方法以海藻酸钠为载体,分别研究了海藻酸钠浓度、CaCl2浓度、固定化时间和固定化酶的最适pH、最适温度、最适底物浓度及反复利用的稳定性。结果最适固定化条件为3%海藻酸钠、0.1 mol/L CaCl2、固定化时间6 h。固定化酶的最适pH为5.0、最适温度为42℃、最适底物浓度1%,反应进行4次后一半的酶活损失,底物转化率在90%以上。结论海藻酸钠法固定化谷氨酸脱羧酶可以很好的转化谷氨酸钠生成γ-氨基丁酸,具有实用的潜力。     

色氨酸酶基因工程菌固定化及其培养条件的研究

对色氨酸酶基因工程菌 ＷＷ－ １１进行固定化及培养条件研究,为工业化生产 Ｌ－色氨酸奠定基础。方法;通过色氨酸酶活力测定,考察三种固定化材料及温度、 ｐＨ、单价阳离子和乙醇对固定化 ＷＷ－ １１色氨酸酶活力的影响。结果：以聚乙烯醇作为ＷＷ－１１的固定化载体,其活力回收为６０．９％。固定化ＷＷ－１１色氨酸酶降解反应最适ｐＨ为９．０、最适温度为５０℃;固定化ＷＷ－１１色氨酸酶合成反应最适ｐＨ为７．５、最适温度为４５℃。Ｋ＋、ＮＨ＋对固定化工程菌色氨酸酶有明显激活作用,而Ｎａ＋则有一定的抑制作用。结论：固定化工程菌色氨酸酶对温度、乙醇等的稳定性比游离菌有显著提高。     

固定化α-淀粉酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,将α-淀粉酶固定。结果表明固定化酶与原酶均有两个最适pH值(5.0,6.5);固定化酶在70℃仍有较高热稳定性,而原酶活力明显下降;固定化酶的K’m=0.62×10-2m g.mL-1,原酶Km=1.12×10-2m g.mL-1。