El-Tor生物型霍乱弧菌可溶性血凝素的纯化

用改进的Finkelstein的方法从Wg2(El-Tor 生物型)弧菌菌株中提纯的可溶性血凝素有下列特点:(1)纯化的血凝素(SHA)具有凝集红细胞的作用,且对不同来源的红细胞的敏感性不同。(2)纯化的SHA具有蛋白酶的水解活性。(3)经免疫双扩散、免疫电泳检测,纯化的SHA,粗制SHA与纯SHA抗血清反应均呈单一沉淀线。与霍乱肠毒素无反应。(4)聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS-凝胶电泳的结果与文献报道基本一致。     

霍乱弧菌可溶性血凝素免疫保护作用的初步探讨

用本室分离纯化的霍乱弧菌可溶性血凝素及吸附霍乱菌苗免疫小鼠,用Wg_2(E1-Tor生物型)弧菌灌胃攻击,运用霍乱弧菌小鼠小肠粘附免疫抑制试验对可溶性血凝素的免疫保护作用进行了初步探讨。结果表明,可溶性血凝素对霍乱弧菌粘附小鼠肠粘膜细胞具有一定的抑制作用。     

霍乱弧菌甘露糖敏感血凝素研究进展

霍乱是一种烈性肠道传染病,是我国传染病防治法规定的甲类传染病。国内外不少学者发现,菌毛与霍乱弧菌的黏附定居有关,其中甘露糖敏感血凝素(MSHA)属于Ⅳ型菌毛,决定Ⅳ型菌毛的血凝活性。MSHA为一免疫原,同时在霍乱弧菌在环境中存活方面起着特殊作用。主要由霍乱弧菌ElTor生物型和O139产生,古典生物型存在其结构基因mshA,但仅以极低水平表达并不产生MSHA。MSHA在霍乱弧菌疫苗及相关诊断试剂盒的研制方面有一定的实用价值。     

El-Tor霍乱弧菌在不同水体存活时间的实验研究

目的 :观察 El- Tor霍乱弧菌在不同类型自然水体中的存活时间。方法 :将已知量的菌种投入到定量的水样中 ,定期增菌、分离、培养 ,观察其存活情况。结果 :小川型 El- Tor霍乱弧菌的溶源、复愈、抗性株在自然水体中的存活时间分别为 5～ 2 0天、6～ 19天、5～ 2 5天。结论自然水体的 p H值对 El- Tor霍乱弧菌的存活时间没有明显影响 ,在氯化物较高的水体中存活时间有延长的趋势 ,水温较高时存活时间明显缩短     

霍乱弧菌L型的致病性探究

本文对霍乱弧菌埃尔托生物型流行株，以人胆汁诱发为细菌胞壁缺陷之L型后，与其原产肠毒素之细菌型菌株进行致病性比较，结果发现两者家兔肠扎测毒显示无显著毒力差异，以LT－DNA基因探针侦检，103株诱发L型灼仍具有产肠毒素结构基因；在蔗糖吸引剂半固体平皿上，L型在趋化性上与其原始细菌型菌株亦无显著差异，因而认为霍乱弧菌L型仍具有与原细菌类似之致病力，在流行病学上对此类变异菌株应予重视，并列入监察内容。     

霍乱弧菌蛋白酶PrtV对霍乱弧菌溶细胞毒素引起人肠上皮细胞炎性反应的修饰

目的研究霍乱弧菌分泌的蛋白酶PrtV（Vibrio cholerae protease,PrtV）对霍乱弧菌溶细胞毒素（Vibrio cholera crtolysin。VCC）引起人肠上皮细胞炎性反应的修饰作用。方法用VCC或PrtV处理后的VCC刺激人单层肠上皮T84细胞体外模型上层腔面,分析细胞受刺激后通透性和细胞活性改变以及细胞因子白细胞介素-8（interlukine-8．IL-8）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor—α,TNF-α）基因表达。结果VCC可引起极性的肠道T84细胞的炎性反应,表现为通透性增加和IL-8以及TNF—α基因表达增加。纯VCC蛋白在浓度为160ng／ml时引起肠上皮细胞炎性反应。而高浓度的VCC则导致肠上皮细胞损伤。VCC经PrtV处理后对肠上皮细胞炎性作用明显消失。螭论结果表明VCC在低浓度时引起肠道上皮的局部免疫防御反应,而高浓度的VCC则直接导致肠道上皮细胞损伤。此外,PrtV可以介导由VCC引起的肠上皮细胞炎性反应的修饰作用。     

霍乱弧菌散发菌株的耐药遗传分析

目的 研究霍乱散发菌株的耐药性与耐药携带基因之间的关系。方法 运用药敏实验及分子生物学方法，分析40株霍乱散发菌株的耐药性分布情况，提取菌株质粒，检测I类整合子基因片段，分析其在不同血清群的分布及耐药性的遗传机制。结果 霍乱散发菌株在不同程度上表现对链霉素、卡那霉素、磺胺嘧啶、甲氧苄胺嘧啶／磺胺嘧啶、庆大霉素、副粘菌素、氯霉素、甲氧苄胺嘧啶和四环素等多种抗生素的耐药性，在耐药菌株中检测到不同大小的质粒，其分布在01和0139群无差异，I类整合子在0139群霍乱弧菌中分布多于01群。结论 霍乱散发菌株耐药性与耐药质粒和／或I类整合子的作用密切相关。     

霍乱弧菌脂多糖的提取与其生物学活性的测定

采用Ｗｅｓｔｐｈａｌ的热酚－水法及高速离心法从霍乱弧菌５６９Ｂ等菌株中提取脂多糖，用血凝法测其效价。并以提取的脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞诱生肿瘤坏死因子的能力测其生物学活性。实验表明霍乱弧菌５６９Ｂ菌株的脂多糖有较强的诱生肿瘤因子的能力，而且其血凝效价也较高。     

SDS－PAGE鉴定霍乱弧菌不同菌株外膜蛋白成分

霍乱弧菌５６９Ｂ等菌株用ＥＤＴＡ－溶菌酶法提取其外膜蛋白，以高速离心法纯化并以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离其主要蛋白区带。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫电泳等方法鉴定，表明不同菌株的外膜蛋白均显示一主要区带，其分子量为２５ＫＤａ，免疫双扩试验表明不同霍乱弧菌菌株的外膜上都有一个共同的蛋白抗原。     

1994年新疆霍乱疫区水候鸟携带非○1群霍乱弧菌的血清型分布

报道了1994年4—5月南疆喀什霍乱疫区从8种水禽候鸟肠道及其栖息地水源中分离鉴定61株非O1群霍乱弧菌的血清型分布。49.2％菌株可鉴定出12个血清型。其中5个水源菌株3株2个血清型与水鸟分离株同型,10个血清型与1993年调查结果不同型,6个血清型为新疆首次发现。再次证实水禽候鸟能携带非O1群VC,并经生态活动传播非O1群VC。     

人群中非O1群霍乱弧菌检测及其耐药性

目的 了解宁波市食品、公共场所等行业从业人员和腹泻病人等人群中非O1群霍乱弧菌携带、感染情况及其菌株的耐药性。方法 用过筛法检测非O1群霍乱弧菌；用国产VBO诊断血清作血清分型，用K—B法作药敏试验。结果 从人群中筛检出非O1群霍乱弧菌236株，检出率为1．28％。能被VBO诊断血清分型的188株，总分型率79．7％，分属于25个VBO血清型。236株非O1群霍乱弧菌对头孢他啶、氯霉素、阿米卡星等抗生素全部敏感，对氨苄西林等青霉素耐药性较高。非O1群霍乱弧菌对弧菌抑制剂O／129纸片(100μg)抗性的36株，占15．3％，涉及到11个血清型。结论 用筛检方法检测非O1群霍乱弧菌，能提高检测速度，减轻工作量。O2为腹泻病人的优势血清型，从业人员中则元优势血清型存在。非O1群霍乱弧菌对常用抗生素大多敏感，腹泻病人株的耐药性高于从业人员株，未发现多重耐药菌株。非O1群霍乱弧菌对弧菌抑制剂O／129抗性在增高，提示在鉴定非O1群霍乱弧菌时应考虑对弧菌抑制剂O／129抗性的特殊情况。     

大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)基因探针检测霍乱弧菌(Vc)的实验研究

本文报告了大肠杆菌不耐热肠毒素(ETEC-LT)基因探针检测霍乱弧菌肠毒素(Vc-ET)基因的分子杂交条件(Vc-ET杂交法),证实LT探针在实验条件下可以检测Vc-ET,最低检测菌量为4个活菌,比国内其它检菌法敏感十几倍至几千倍。探针的有效期为45～60天,待检标本经简单处理(DNA变性)后冰箱存放1～2个月仍不影响检测结果。对1986年某边境地区病人和环境中搜集分离到的50株O-Ⅰ群EI-Tor菌株作初步研究,证实全部为有毒性的0-Ⅰ群霍乱弧菌,未发现在自然条件下因基因突变而产生的无毒性O-Ⅰ群霍乱弧菌存在。     

产肠毒素霍乱弧菌的快速鉴定及基因分型

目的：为适应临床诊断和食品检测的需要,探讨快速检测霍乱弧菌及其分型的方法。方法：用聚合酶链反应（PCR）检测霍乱弧菌肠毒素（CTX）A2-B亚单位靶序列基因,结合随机扩增多态性DNA（PAPD）,对霍乱弧菌进行基因分型。结果：检测的3株O139群霍乱弧菌、3株E1 Tor生物型和4株古典生物型均含有(CTX）A2-B亚单位基因,核苷酸序列分析证实其同源(97.1%～98.9%）。RAPD中用普通引物将不同弧菌分成2种基因谱;即①O139群和El Tor型;②古典型。用重复序列引物进一步将霍乱弧菌分成3型,即①O139群;②El Tor型;③古典型。重复实验结果稳定。结论：用PCR结合PAPD检测霍乱弧菌并对其进行分型,操作简便、快速、敏感而且准确,对临床诊断、食品检测和流行病学调查具有一定的实用性。     

Isolation and Identification of Ectromelia Virus from Suspected Mice

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＥｃｔｒｏｍｅｌｉａＶｉｒｕｓｆｒｏｍＳｕｓｐｅｃｔｅｄＭｉｃｅ￥ＺｈａｎｇＷｅｉｋｕ；ＺｈａｏＸｉａｏｗｅｉ；ＴａｎｇＺｈｕｐｉｎｇ；ｅｔａｌ．（ＡＣＴＡＡＣＡＤＥＭＩＡＥＭＥＤＩＣＩＮＡＥＮ...     

The inherent characteristics and DNA polymorphism of Vibrio cholerae and other vibrios

Objective To investigate the inherent characteristics of Vibrio cholerae (V.cholerae) and other vibrios and their relationship.Methods Polymerase chain reaction (PCR), DNA sequence analysis, randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis and average linkage cluster analysis were used to study 3 isolates of V.cholerae strains O139, three isolates O1 biot ype El Tor, four isolates O1 biotype classical and 3 other vibrios.Results V.cholerae O139 contained the genomic sequences of ctx A2- B as well as V.cholerae O1.V.cholerae and others vibrios were divided into 4 groups by fingerprint patterns of RAPD, that is ① V.cholerae O139 and V.cholerae O1 El Tor; ② V.cholerae O1 classical; ③ V.para heamolyticus and V.vulnificus and ④ V.flluvialis.V.cholerae O139 DNA fingerprint of RAPD was consistent with the El Tor biotype: average linkage cluster distance was 0, and slightly different from the classical b iotype, with a distance of 2.07.It was much more different from vibrio par aheamolyticus and others, with a distance of 6.76-8.54Conclusion V.cholerae and other vibrios are polymorphic in inherent characteristics. The inherent characteristics of V.cholerae O139 are the same as El Tor b iotype.O139 may have evolved from the El Tor biotype.The inherent char acteristics of vibrio paraheamolyticus are the same as vibrio vulnificus.