骨髓增生异常综合征CD34^＋细胞对不同生长因子的反应性研究

目的：更准确地研究造血生长因子对骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）造血干、祖细胞的影响及临床治疗效果。方法：利用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化ＭＤＳ患者ＣＤ３４＋细胞，在体外半固体培养体系中，研究ＭＤＳＣＤ３４＋细胞对粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ－３）、红细胞生成素（Ｅｐｏ）、干细胞因子（ＳＣＦ）单独及联合应用的反应。结果：ＭＤＳＣＤ３４＋细胞在增殖分化过程中存在一定程度缺陷，单独应用生长因子不能有效地改善其缺陷，ＳＣＦ与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、Ｅｐｏ等生长因子的联合应用可提高一部分患者造血祖细胞的集落形成能力，但在ＭＤＳ高危组，部分患者在正常集落形成能力改善的同时，白血病细胞集落也有不同程度的增长。结论：治疗ＭＤＳ患者须合理地联合应用造血生长因子。     

儿童特发性血小板减少性紫癜骨髓巨核细胞的研究

本研究观察特发性血小板减少性紫癫(ITP)患儿骨髓巨核细胞形态与造血功能的改变，初步分析其血小板减少的发生机制。采用巨核细胞CI41α单克隆抗体免疫酶标染色观察骨髓涂片中小巨核细胞的计数与分类，采用血浆凝块法体外培养骨髓单个核细胞，用免疫酶标法进行巨核细胞集落检测，计数巨核细胞集落形成单位(CFU—MK)和爆式巨核细胞集落形成单位(BFU—MK)。结果表明：ITP患儿骨髓小巨核细胞检出率与对照组无显著差异，而Ⅰ型淋巴样小巨核细胞很少见；小巨核细胞总数及CFU—MK和BFU—MK集落形成率明显高于对照组；在培养体系中可以观察到正在释放血小板的成熟的巨核细胞。发现1例慢性ITP患儿骨髓巨核细胞集落形成率降低。结论：Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型小巨核细胞增多是ITP的病理特征，这些小巨核细胞在体外培养条件下可发育成熟为正常的巨核细胞，并释放血小板；免疫损伤导致血小板减少及巨核细胞成熟障碍可能并不是ITP发病的唯一机制，部分病例尤其是慢性ITP，其发病可能与患者巨核细胞本身质的异常有关。     

中药对骨髓造血功能重建作用机理的研究现状

骨髓是出生后的主要造血器官。骨髓造血既需要一定数量和功能正常的适血干细胞(HSC)，又需要有利于其生长发育的造血微环境。HSC具有分化和增殖成粒-单系集落形成单位(CFu—GM)、红系爆式集落形成单位(BFU—E)、红系集落形成单位(CFU-E)、混合集落形成单位(CFU—GEMM)等多系祖细胞的功能，并与所处的微环境有密切的关系。骨髓造血微环境由基质细胞、细胞     

Thl细胞在再生障碍性贫血发病机制中的作用

目的：探讨再生障碍性贫血（再障）患者Th1、Th2细胞的数量、比例、产生细胞因子的功能状态及其与造血衰竭的关系，判断Th1细胞在重再障（SAA）发病机制中的作用。方法：（1）采用甲基纤维素培养法扩增11例SAA患者骨髓单个核细胞（BMMNC）去除CD4^ 细胞前、后红系集落形成单位（CFU－E）、红系爆式集落形成单位（BFU－E）、粒－巨噬系集落形成单位（CFU－GM）；（2）用流式细胞术检测经体外刺激后的21例SAA患者及17名正常人外周血单个核细胞（PBMNC）中Th1、Th2细胞；（3）RT－PCR检测27例再障、26例非再障患者及11名正常人未经体外刺激的BMMNC中Th1细胞的代表性细胞因子IFN－γ和Th2细胞的代表性细胞因子IL－4的基因表达。结果：（1）去除CD4^ 细胞后，SAA患者BMMNC中的CFU－GM、CFU－E和BFU－E产率都有显著提高；（2）SAA患者外周血Th1与Th2细胞比例明显失衡，Th1细胞显著增多；（3）SAA和慢性再障患者骨髓中Th1细胞产生IFN-γ的功能异常增高，而Th2细胞产生IL－4的功能未发现明显异常。结论：再障患者的CD4^ T淋巴细胞亚群失衡、Th1细胞数量增多及功能亢进可能是导致SAA骨髓衰竭的重要环节，也是再障区别于其它全血细胞减少症的标志之一。     

重型再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗后骨髓造血祖细胞水平的变化及其意义

为更好地评价重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)后骨髓造血功能恢复程度,采用造血祖细胞体外培养技术,动态观察了48例接受IBT的SAA患者及20例正常对照者骨髓晚期红系爆式集落形成单位(mBFU-E)及粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的水平变化。结果表明,IST前所有SAA患者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平均显著低于正常对照组(P<0.001);IST后1年,29例有效者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平显著增高,增高程度与其临床疗效相关;12例mBFU-E及10例CFU-GM水平恢复正常,其中8例患者mBFU-E及CFU-GM水平同时恢复正常。这表明SAA确是一组异质性疾病,其造血功能衰竭与异常免疫关系密切,若去除这种异常,造血功能可获得部分甚至完全重建。     

脐血造血干／祖细胞集落产率的研究

对３１例脐血及３１例正常成人骨髓细胞进行体外培养，分别检测其ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ，巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ），粒、红、巨噬细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭ），粒、红、巨噬、巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）及初始造血祖细胞——粘附于基质的原始细胞集落形成单位（ｓＣＦＵ－Ｂｌ），对比分析其造血细胞的层次结构。发现脐血晚期祖细胞含量接近骨髓，早期祖细胞含量则高于骨髓。经推算２１天时ｓＣＦＵ－Ｂｌ含量可达骨髓的１０倍左右。提示脐血长期重建造血的能力优于骨髓，一份脐血重建成人造血理论上是可能的。     

血小板生成素的研究进展

生成血小板的巨核细胞是从骨髓造血干细胞分化发育来的。造血干细胞首先分化生成巨核系祖细胞,即巨核系集落形成单位。祖细胞阶段的细胞核内的DNA一般是2—8倍体,当祖细胞是2倍体或4倍体时具有增殖能力,这也是巨核细胞系可以增加细胞数量的唯一阶段。巨核系祖细胞继续向前分化成为具有8-32倍体的巨核细胞,并进一步成熟后分裂     

20例再生障碍性贫血的细胞因子和粘附分子的表达分析

目的 评价造血微环境中细胞因子对再生障碍性贫血（AA）发病的影响及其临床意义。方法 对20例AA患者及8名正常人用酶联免疫法检测骨髓和外周血中粒细胞集落刺激因子（G－CSF）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）水平；用免疫荧光法检测骨髓和外周血单个核细胞血小板内皮细胞粘附分子（CD31）、淋巴细胞归巢受体（CD44）抗原表达水平。结果 AA组骨髓及外周血G－CSF、TNF－α水平均明显高于正常对照组（P＜0.01)；而CD31、CD44抗原水平却明显低于正常对照组（P＜0.01)。相关分析发现：AA组骨髓及外周血中，G－CSF与外周血白细胞数有髓中粒系比例呈负相关；TNF－α与外周血白细胞数、血小板、血红蛋白及骨髓中粒系比例、红系比例、巨核细胞数均呈负相关；CD31^ 、CD44^ 细胞数与外周血白细胞数、血小板、血红蛋白以及骨髓中粒系比例、红系比例和巨核细胞数呈正相关。结论 造血微环境异常及细胞因子网络失调可能在AA发病中起一定作用。     

黄芪注射液影响贫血小鼠粒单系、红系造血及作用机制的探讨

目的：研究黄芪注射液对贫血小鼠粒单系和红系血发生的影响,并探讨其作用机制。方法：制备贫血小鼠模型,随机分为给药组和对照组,采用造血祖细胞体外培养等实验血液学技术。结果：一定浓度的黄芪注射液体内作用可使贫血小鼠血清集落刺激因子（CSF）水平明显升高,刺激贫血小鼠粒单系、红系造血祖细胞增殖和分化以及骨髓基质细胞增殖,使降低的骨髓有核细胞（BMC）数以及外周血象明显回升,黄芪注射液和造血细胞直接一起孵育对粒单系祖细胞（CFU－GM）和红系祖细胞（CFU－E、BFU－E）的产率无明显影响。结论：一定浓度的黄芪注射液体内作用可促进贫血小鼠粒单系和红系造血功能恢复。     

多西环素诱导表达下IL-3基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血

本研究探讨用多西环素调控IL-3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL-3基因逆转录病毒载体系统，转染小鼠骨髓基质细胞系，获得QXMSClTet-on-IL-3；体外加入多西环素诱导IL-3基因表达并检测IL-3表达活性；观察细胞培养条件上清液对造血祖细胞集落形成单位的作用及QXMSClTet-on-IL-3与骨髓细胞共培养对造血干细胞增殖分化的影响。结果表明：多西环素提高了QXMSClTet-on-IL-3细胞系IL-3的表达，促进骨髓造血祖细胞克隆形成数；与骨髓细胞共培养可促进造血干细胞的增殖分化。结论：应用多西环素诱导外源基因转染的骨髓基质细胞IL-3的表达，可促进造血。     

重组血小板生成素对再生障碍性贫血患者巨核祖细胞的作用

应用重组血小板生成素(rTpo)对17例再生障碍性贫血(AA)患者进行CFU-MK和CFU-GM培养。研究结果表明:①Tpo 10ng/ml为CFU-MK培养的最佳浓度;②AA患者CFU-GM和CFU-MK增殖均明显低于正常人,P<0.001;③AA患者CFU-MK增殖较CFU-GM更低(CFU-MKx 3.2,CFU-GMx 17.5);④Tpo对骨髓小剂量照射后CFU-MK的增殖有促进恢复,对血小板的减少起到积极预防作用。     

严重型再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞集落形成与免疫抑…

OBJECTIVE: To explore the defect of hematopoietic stem cell and analyze the relationship between the colony formation capacity of bone marrow hematopoietic progenitor cells and the results of immunosuppressive therapy (IST) in severe aplastic anemia (SAA) patients. METHODS: Methylcellulose semisolid culture was used. RESULTS: Thirty patients with SAA at diagnosis were studied. In 90% of the patients, the CFU-E and CFU-GM yields were strikingly decreased and in 56.7% of the patients there was no colony formation at all. Nevertheless, there was still 10% of the patients having normal CFU-E, BFU-E or/ and CFU-GM yields. After IST, 59.1% of the patients showed colony formation improvement. The difference between the results obtained pre- and post-IST(for CFU-E and BFU-E, P < 0.01, for CFU-GM, P < 0.05) was significant. In the majority of the patients, the colony formation capacities were still under the normal post-IST. Moreover, 22.7% of the patients remained no colony formation post-IST. The IST response rates between the patients with or without colony formation had no statistically difference (80% versus 50%, P < 0.05). The increment of colony formation appeared later than the therapeutic effect did, but frequently concurred with the appearance of magkaryocytes in the bone marrow smear. CONCLUSION: In the majority of SAA patients, the hematopoietic stem cells or progenitors were defective perhaps caused by immune damage; IST can improve the hematopoiesis in vitro and in vivo of SAA patients.     

丹参素对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的:探讨丹参素对小鼠外周血造血干细胞的动员作用及其对小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞黏附分子的影响。方法:30只BALB/c小鼠随机分为三组:丹参素组、G-CSF组、生理盐水组,腹腔注射d1～d7,每日1次,第2～8天,采用外周血WBC和MNC计数、流式细胞术、造血祖细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组给药后对外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及小鼠骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率的影响。结果:丹参素组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3倍和3.5倍;丹参素组外周血CD34+、CD49d阳性细胞及骨髓基质细胞VCAM-1阳性细胞百分率分别为(1.03±0.24)%、(12.59±2.64)%和(50.86±8.77)%,均明显高于生理盐水组(P<0.05);其CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(14.90±2.88)%、(12.50±4.06)%和(16.10±6.36)%,均明显高于生理盐水组(P<0.01)。结论:丹参素对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,且这一作用可能与其上调小鼠外周血细胞和骨髓基质细胞黏附分子的表达有关。     

rhIL-11联合rhG-CSF动员小鼠外周血造血干/祖细胞的研究

目的　研究rhIL 11对小鼠巨核系造血干 /祖细胞的动员作用。方法　rhIL 112 5 0μg·kg-1·d-1或联合rhG CSF 2 5 0 μg·kg-1·d-1给C5 7BL/ 6小鼠皮下注射 1～ 7d ,观察用药前和用药第 3,5 ,7,9天小鼠外周血白细胞、血小板计数 ,CD34 +细胞比例 ,CFU GM、CFU MK、CFU E的数量变化。结果　单用rhIL 11或与rhG CSF联合使用时 ,外周血白细胞、血小板、CD34 +细胞比例及各种造血细胞集落数明显高于对照组 (P <0 .0 1)。在含有IL 11的实验组中 ,CFU MK明显高于rhG CSF组 (P <0 .0 1)。结论　rhIL 11可升高外周血白细胞、血小板 ,同时增加外周血CD34 +细胞的比例 ,提高粒、红、巨核系造血细胞集落形成单位的数量 ,特别是对CFU MK作用较强 ;与rhG CSF联合使用对动员骨髓造血干 /祖细胞进入外周血有明显的协同作用。     

Three-lineage hemopoietic precursor cells and effectiveness of recombinant human erythropoietin in patients with myelodysplastic syndromes.

Four-stem-cell assays, which evaluate megakaryocytic (CFU-Meg), immature and mature erythropoietic (BFU-E, CFU-E), and granulocyte-macrophage (CFU-GM) colony formation, were performed in nine patients with myelodysplastic syndromes (MDS). The CFU-Meg, BFU-E, and CFU-E colony growths were disturbed more often than the CFU-GM colony formation. A CFU-E increase was not recognized in most MDS patients, but a dose-dependent increase of bone marrow CFU-Es in response to erythropoietin (EPO) was recognized only in two refractory anemia (RA) patients whose CFU-Es were more than one tenth of normal controls. One patient with RA and the other with chronic myelomonocytic leukemia (CMML), both of whose bone marrow CFU-Es did not increase at the higher dose of EPO in vitro, were treated with recombinant human EPO (rHuEPO), resulting in no effects. The responsiveness of patients with MDS to various recombinant hemopoietic factors might be predicted by both the residual degree of bone marrow hematopoietic precursor cells and the response of stem cells to the higher doses of each hemopoietic factor.     

获得性单纯无巨核细胞性血小板减少性紫癜发病机制的研究

目的研究获得性单纯无巨核细胞性血小板减少性紫癜（ＡＰＡＴＰ）的发病机制。方法患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）以甲基纤维素培养法测定其ＣＦＵＧＭ,ＣＦＵＥ和ＣＦＵＭＫ。观察去除骨髓中Ｔ细胞和粘附细胞对ＣＦＵＭＫ的影响。患者血清或ＩｇＧ在培养前与正常或自身ＭＮＣ孵育,检测对ＣＦＵＭＫ的体液抑制作用。结果１５例（５３．６％）的发病由于ＣＦＵＭＫ的内在缺陷。３例去Ｔ细胞,２例去单核巨噬细胞后,骨髓巨核细胞集落形成明显增加。６例（２１．４％）血清抑制ＣＦＵＭＫ,此种抑制物来自ＩｇＧ,选择性地针对巨核细胞。２例发病机制未定。结论巨核祖细胞的内在缺陷是ＡＰＡＴＰ的主要发病机制。部分患者可因异常免疫引起。ＭＫＣＳＡ生成的失代偿可能也是一个重要病因。     

新的人趋化素样因子对骨髓造血干/祖细胞的体外刺激作用

目的　探讨新克隆的人趋化素样因子 (chemokine likefactor 1,CKLF1)对人造血干 /祖细胞的体外刺激作用。方法　分离正常人骨髓单个核细胞 ,进行液体和半固体集落培养 ,研究CKLF1对CFU GM和CFU Mix的作用。结果　加入转染CKLF1质粒上清组的CFU GM集落数明显增多 ,平均值为每 10 5细胞 2 34.81± 98.71,为对照组的 2 .4 2倍 (P <0 .0 5 ) ;CFU Mix平均集落数在正常对照、CKLF1、PHA和GM CSF组分别为每 10 5细胞 82 .0 0± 2 0 .2 5 ,10 5 .76± 36 .70 ,14 6 .6 3± 2 7.0 9和 14 3.33± 6 0 2 3,CKLF1的集落数多且较大 ,但统计学上差异无显著性 ;流式细胞术检测CD3 4 + 细胞百分率 ,正常对照、CKLF1、PHA、GM CSF组分别为 (0 .75± 0 .6 2 ) % ,(1.32± 0 .87) % ,(0 .15± 0 .0 2 ) % ,(0 .2 9± 0 .2 3) % ,与对照组相比 ,各组间差异无显著性。结论　新发现的具有CC家族结构的人趋化素样因子CKLF1对骨髓CFU GM集落的形成具有促增殖作用 ,提示CKLF1对人骨髓造血祖细胞的增殖和集落形成具有促进作用     

免疫相关全血细胞减少患者骨髓造血祖细胞增殖功能及辅助性T淋巴细胞功能观察

目的　了解与免疫相关全血细胞减少患者骨髓造血祖细胞增殖分化功能以及辅助性T(Th)淋巴细胞在此类患者发病中的作用。方法　采用甲基纤维素法培养 2 5例初诊、15例治疗后血常规恢复的免疫相关全血细胞减少患者和 10名正常人的CFU GM、CFU E、BFU E ;采用RT PCR方法 ,检测 2 5例初诊、15例治疗后血常规恢复的免疫相关全血细胞减少患者、19例其他全血细胞减少症患者和 10名正常人未经体外刺激的骨髓单个核细胞 (BMMNC)中Th1细胞的代表因子IFN γ、IL 2和Th2细胞的代表因子IL 4、IL 10的基因表达。结果　初诊组、治疗后血常规恢复正常的免疫相关全血细胞减少患者组、正常对照组BMMNC培养CFU E、CFU GM、BFU E产率 ,三组差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ,Th2型细胞因子IL 4、IL 10mRNA的表达在初诊组明显增高 ,与正常对照组比较 ,P均 <0 .0 1;经治疗血常规恢复正常后趋于正常 ,与正常对照组比较 ,P均 >0 .0 5。Th1型细胞因子IFN γ、IL 2mRNA的表达在所有免疫相关全血细胞减少患者均无增高 ,与正常对照组比较 ,P均 >0 .0 5。结论　引起免疫相关全血细胞减少患者全血细胞减少的原因可能并非骨髓造血祖细胞本身质的异常 ,而是造血祖细胞以外的因素 ;Th细胞亚群功能失衡、Th2细胞功能亢进可能是此类患者B淋巴细     

小鼠胎盘间充质干细胞移植对造血系统自然衰老的影响

背景:造血系统作为人体重要组成部分,随着年龄的增长会出现功能不断衰退。目的:观察小鼠胎盘间充质干细胞对小鼠造血系统自然衰老的延缓作用。方法:取孕13.5dBalb/c小鼠胎盘,制备胎盘间充质干细胞。6月龄Balb/c小鼠48只随机分均为细胞移植组和对照组。细胞移植组尾静脉输注胎盘间充质干细胞,每月1次,共6次;对照组输注生理盐水。第3个月进行外周血象、骨髓有核细胞计数、成纤维细胞集落培养、造血祖细胞集落培养和外源性脾集落形成单位计数检测;第6个月时增加骨髓切片观察、骨髓细胞重建造血能力测定。结果与结论:细胞移植组小鼠一般情况优于对照组;干预第3个月,细胞移植组的骨髓有核细胞计数、巨噬系祖细胞、巨核系祖细胞多于对照组,其他指标无明显差别;干预第6个月,除外周血象仍无差别外,其他的上述指标均明显高于对照组;观察期内两组的上述指标均随时间延长呈下降趋势,但细胞移植组下降速度明显慢于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。组织学观察发现,细胞移植组骨髓造血组织较对照组丰富,而对照组骨髓脂肪化显著增加;实验还发现细胞移植组骨髓细胞的造血重建能力明显优于对照组。结果提示,小鼠胎盘间充质干细胞能够延缓小鼠造血系统的衰退。