肾上腺素能受体激动剂与阻断剂对血管平滑肌细胞增殖和c—fos,c—my…

研究肾上腺素能受体激动剂与阻断剂对血管平滑肌细胞增殖、ＤＮＡ合成和ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的影响。应用细胞培养、＾３Ｈ一胸腺嘧啶核苷掺入和斑点杂交的方法。肾上腺素能体激动剂可促进离全培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖、ＤＮＡ合成和原癌基因的表达，该效应可被其相应的阻断剂所抑制。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。     

胚鼠大脑皮质神经元原代培养中NMDA诱导c－fosmRNA表达

为了进一步研究对神经元的早期保护，本实验观察了Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）在胚鼠大脑皮层神经元原代培养诱导ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。结果显示：ＮＭＤＡ可诱导快速、短暂的ｃ－ｆｏｓ基因表达，并呈剂量、时间依赖关系；ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达可被ＮＭＤＡ竞争性或非竞争性受体拮抗剂Ａｐ－５（５０μｍｏｌ／Ｌ）ＭＫ－８０１（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断，Ｍｇ２＋（２ｍｍｏｌ／Ｌ）可部分阻滞，异搏定、尼凡地平与安定则无阻断作用。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c—fos,c—myc异…

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达，结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成，胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均在着剂量－效应关系，这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生，发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ     

内源性阿片肽对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：观察内源性阿片肽Ｌ－Ｅｎｋ、吗啡对兔肺动脉平滑肌细胞增殖作用的影响并分析其作用机制．方法：离体培养新西兰兔肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ），采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）和３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＰＡＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成量的变化．结果：Ｌ－Ｅｎｋ对ＰＡＳＭＣ增殖及ＤＮＡ合成有抑制作用且呈剂量依赖效应．Ｌ－Ｅｎｋ（１×１０－３～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成有显著的抑制作用，该作用可被阿片受体阻断剂纳络酮阻断．吗啡对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成无显著影响．结论：内源性阿片肽可能主要是通过δ亚型阿片受体对ＰＡＳＭＣ的生长、增殖起抑制作用的，而与μ亚型阿片受体无明显关系．阿片肽类递质抑制ＰＡＳＭＣ增殖作用的可能机制是通过抑制原癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ的表达从而抑制细胞从Ｇ１进入Ｓ期．     

Cmyc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制 …

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＮＤＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

胚鼠大脑皮质神经元原代培养中NMDA诱导c—fos mRNA表达

为了进一步研究对神经元的早期保护，本实验观察Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）在胚鼠大脑皮层神经元原代培养诱导ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。结果显示：ＮＭＤＡ可诱导快速、短暂的ｃ－ｆｏｓ基因表达，并呈剂量、时间依赖关系；ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达可被ＮＭＤＡ竞争性或非竞争性受体拮抗剂Ａｐ－５（５０μｍｏｌ／Ｌ）ＭＫ－８０１（１０μｍｏｌ／Ｌ）完全阻断，Ｍｇ＾２＋（２ｍｍｏｌ／Ｌ）可部分阻滞，异搏定、尼凡     

钙激动剂对心肌肥大有关信号转导的作用

目的 探讨钙激动剂对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性,ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白核转位表达,及蛋白核酸合成的影响。方法 应用血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ,１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激原代培养的心肌细胞钙内流,雷尼丁（ＲＹ,１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激胞内钙释放;刺激５ｍｉｎ时测ＭＡＰＫ活性,免疫组化方法检测刺激５、１０、２０、３０ｍｉｎ时ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白定位表达;＾３Ｈ－Ｌｅｕ和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测刺激２４ｈ心肌细胞蛋白核酸合成。结果 ＡｎｇⅡ和ＲＹ刺激心肌细胞５ｍｉｎ时ＭＡＰＫ活性均明显增高,与对照心肌细胞相比差异显著（Ｐ〈０．０１）。免疫组化结果显示,ＲＹ刺激心肌细胞ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ蛋白核转位表达早于ＡｎｇⅡ。ＡｎｇⅡ和ＲＹ刺激２４ｈ,心肌细胞蛋白核酸合成显著增高,与对照组心肌细胞相比差     

原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

8-Br-cAMP对Hela细胞wtp53，mtp53，c-myc和iNOS基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对Hela细胞癌基因和抑癌基因等表达的影响.方法将培养的Hela细胞分为3组①8-Br-cAMP组(Br组) 加至8-Br-cAMP终浓度为2×10-5mol/L;②阳性对照组(60Co组)给予60Co 照射量4 Gy,720 s;③阴性对照组(C组)仅加含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液.各组细胞均培养48 h后,将1×107 ml-1细胞悬液滴加至预先处理过的硝酸纤维素膜和载玻片上.应用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术分别检测3组Hela细胞中野生型p53(wtp53)、突变型p53(mtp53)、c-myc和iNOS基因的表达.结果8-Br-cAMP组与阳性对照组相比,差异无统计学意义,P>0.05;与阴性对照组相比,上调wtp53和iNOS基因的表达,同时下调mtp53和c-myc基因的表达,P<0.01.结论结果提示8-Br-cAMP可能通过调控Hela细胞癌基因和抑癌基因的表达对Hela细胞起到生长抑制和促分化作用.     

前列腺癌原癌基因

前列腺癌是欧美发达国家男性最主要的恶性肿瘤之一,近年来在我国发病率和死亡率均明显增加。前列腺癌和乳腺癌有着极其密切的联系,进一步的研究有可能证明,前列腺癌和乳腺癌有着共同的发病机制。在前列腺癌原癌基因的研究中,目前比较肯定的有以下几类:Bcl2等细胞凋亡调节基因,met等受体蛋白酪氨酸激酶类癌基因,ras等膜G结合蛋白类癌基因以及fos、myc、LRP16、ERG和ETV1等核转录因子类癌基因。基因诊断和基因治疗代表了前列腺癌诊断和治疗的发展方向。     

ras 和 erbB-2 癌基因在胃癌、癌旁和正常组织的表达

应用ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１蛋白一段氨基酸序列的合成肽的单克隆抗体ＥＢ２４１１和ｅｒｂＢ２癌基因产物Ｐ１８５抗体，对人胃癌、癌旁和正常组织中ｒａｓ和ｅｒｂＢ２的表达进行免疫组化研究，结果：Ｐ２１在正常、癌旁和癌组织的阳性率分别为１３３％、７９３％和６８９％；阳性细胞数分别为（４０±１５），（２１９±１０４）和（１４７２±４００）ｍｍ－２，三者之间呈显著性差异（Ｐ＜００１）。Ｐ２１的表达与肿瘤的分化类型无显著性差异。早期胃癌（病变局限于粘膜层和粘膜下层）Ｐ２１表达高于进展期胃癌。高分化腺癌中Ｐ１８５ＩＲ阳性细胞数明显多于中、低分化癌。Ⅰ、Ⅱ期胃癌Ｐ１８５阳性细胞数较少，而Ⅲ、Ⅳ期显著增多。提示：Ｐ２１参与胃癌的早期发生，而Ｐ１８５与胃癌的晚期发展有关，并参与胃癌细胞的分化调节。     

肾癌 c-myc癌基因产物p62的表达与临床意义

采用ABC法免疫组化技术,检测8例正常肾组织,46例肾癌石蜡包埋标本中p62的表达,并用显微分光光度计测得每例肾癌标本p62的表达强度.结果发现正常肾组织标本中p62染色阴性,46例肾癌标本中29例p62染色阳性,p62的表达位于细胞核内.P62的表达强度与肾癌的病理分级、临床分期呈正相关,与预后呈负相关.     

去纤酶对冠状动脉损伤后C-fos基因表达的影响

目的：探讨去纤酶抑制血管损伤后内膜增生的机制。方法：以犬冠状动脉内植入过大钽丝支架致血管内膜过度增生为动物模型,用常规组织方法,免疫组化及ｍＲＮＡ原位杂交技术分别检测新生内膜厚度,新生内膜中血管平滑肌细胞增生及Ｃ－ｆｏｓ基因的转当情况,并采用随机对照方法观察去纤酶对血管损伤后内膜增生程度,α平滑肌肌动蛋白表达及Ｃ－ｆｏｓ基因转录的影响。结果：去纤酶组新生内膜厚度,α平滑肌肌动蛋白的表达及Ｃ－ｆｏｓ     

子宫内膜腺癌组织中P~(21ras)的表达及意义

应用Ｐ２１ｒａｓ单克隆抗体，用ＡＢＣ免疫组织化学法分析子宫内膜腺癌组织中Ｐ２１ｒａｓ的表达。结果表明：子宫内膜腺癌组织中Ｐ２１ｒａｓ阳性表达率及表达强度明显高于其他组织（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００５），且随组织学分级增高而增高。说明：子宫内膜腺癌的发生、发展均与ｒａｓ基因变异有关。提示：Ｐ２１ｒａｓ单抗做为子宫内膜腺癌诊断标志物及临床应用的可能性。     

ras癌基因点突变的研究

N-ras基因第12密码子、K-ras基因第12和13位密码子无已知的限制性内切酶的酶切位点,不能使用PCR-RFLP方法分析这些位点的突变。我们在PCR引物的3’端引入了一个误配的硷基使之正好成为某限制性内切酶的酶切位点,因而能使用PCR-RFLP方法分析上述位点的突变。本文使用PCR-RFLP方法分析了c-Ha-ras基因第12和61位、N-ras基因第12位、K-ras基因第12位和13位密码子的点突变。     

白血病C-MyC癌基因的表达(附10例白血病分析)

本文检测10例白血病C-myC癌基因在蛋白质水平上的表达,发现4例不缓解白血病的C-myC阳性细胞百分比以及C-myC总的表达量明显高于缓解期病人的表达,2例病人临床及骨髓象已达缓解,但C-myC蛋白阳性细胞百分数及C-myC蛋白总表达量仍维持高水平表达,分别于28天及37天复发。这提示,C-myC蛋白的表达水平是预示白血病复发的更敏感的指标。另外,10例白血病病人的C-myC阳性细胞百分数均较骨髓内幼稚细胞百分数为高,提示一部分形态上看来是正常的细胞,仍有C-myC的表达,这部分细胞很可能是白血病细胞。