河南省2010年肠道病毒EV71型分离株全基因组序列分析

目的:了解2010年河南省流行的肠道病毒(EV)71型基因特征.方法:筛选2010年河南省分离的EV71型病毒株1株(EV71/Henan/DC/2010),进行全基因组序列测定和基因进化特性分析.结果:EV71/Henan/DC/2010与其他EV71病毒株相比,编码区无核苷酸的缺失或插入,5'UTR区和3'UTR区...     

肠道病毒71型河南分离株2株全基因组序列分析

目的:了解2011年河南洛阳和南阳地区流行的肠道病毒71型(EV71)基因特征。方法:分离洛阳和南阳地区EV71病毒各一株,分别进行全基因测序和基因进化分析。结果:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011的VP1区序列在进化树上均属于C4亚型,与国内流行株都具有较高同源性,与2008年广东流行株亲缘关系最近。这2株全基因核苷酸序列同源性为99.3%,氨基酸序列同源性为97.6%,并且氨基酸均没有发生明显改变。结论:EV71/Luoyang2011和EV71/Nanyang2011属于C4亚型,与我省及我国既往流行株相比,未发生大的变异。     

1株肠道病毒71型南京分离株的全基因组序列的测定及遗传进化分析

［摘要］目的: 对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）南京分离株EV71-NJ2012全基因组核苷酸序列进行测定,并与基因库中的代表性序列进行分析比对。方法: 登录基因库,选取不同国家和地区的EV71全基因组序列,设计8对覆盖病毒整个基因组且首尾部分重叠的引物,采用RT-PCR扩增出8个基因片段,通过测序和拼接获得全基因组序列,并与国内外其他EV71分离毒株一起用MEGA 4.0软件进行进化树分析,用DNAStar进行同源性分析。结果： EV71-NJ2012株的基因组长度为 7 404 bp, 其中5′非编码区(UTR)长742 bp, 3′UTR长82 bp,病毒基因组开放阅读框(ORF) 全长6 582 bp, 编码一个含有2 193个氨基酸残基的多聚蛋白。病毒序列在分型上属于C4a基因型,与上海株的核苷酸同源性最近,而与我国台湾、湖北等分离株的核酸序列差异较大。结论： EV71-NJ2012株基因组的组成和结构符合肠道病毒特征,与上海株亲缘关系最近,而与我国台湾、湖北分离株的差异较为明显。EV71-NJ2012株可能与上海株来源于EV71病毒株的同一种系。     

肠道病毒71型山东分离株全基因组序列分析

目的 探讨2008年山东省流行的肠道病毒71型(EV71)的基因特征。方法 以2008年山东省分离的一株EV71(JN200804)为样本,采用RT-PCR方法扩增并测定全基因组核苷酸序列,进行同源性比较和种系发生分析。结果 JN200804株的全基因组序列长度为7404个核苷酸,与其他EV71毒株相比,在编码区没有核苷酸的缺失和插入,5′ UTR和3′ UTR的长度和序列有差异。核苷酸同源性比较结果表明,JN200804株与安徽株(Fuyang/17.08/1)、浙江株(Zhejiang08)和北京株(BJ08)的核苷酸同源性均大于95%,与国际标准株BrCr的同源性仅为79.8%。氨基酸同源性比较结果表明,JN200804株与Fuyang/17.08/1同源性高达99.6%,与TW/2086/98同源性最低(94.5%)。根据P1、P2和P3区基因序列构建了种系进化树: JN200804株与C4亚型各毒株(Fuyang/17.08/1、Zhejiang08、BJ08、SHZH03、N3340-TW-02和SHZH98)同属一个分支,核苷酸同源性都在91%以上。结论 JN200804株属于EV71的C4亚型,与AnhuiFY08、Zhejiang08和BJ08的进化关系最为密切。     

2009年肠道病毒71型广州分离株的全基因组序列分析

目的分析2009年肠道病毒71型广州分离株GZHY09的全基因组序列,并与GenBank中的序列进行分析比对。结论从GenBank上选不同地区的EV71全基因组序列,设计相互重叠的覆盖病毒整个基因组序列的12对引物,采用RT-PCR扩增出12个基因片段,通过测序获得全基因组序列,并参考国内外各EV71基因型的分离毒株,用MEGA4软件进行进化树分析,用DNAStar软件中的MegAlign进行同源性分析。结果 12个重叠基因片段序列拼接获得EV71全基因组序列,共7404个核苷酸,同源性分析结果表明在VP1区,GZHY09株与中国大陆的Anhui08、Zhejiang08、Shenzhen08的核苷酸序列同源性比较高,其中以Anhui08最高(97.7%)。结论 GZHY09属EV71病毒的C4亚型,与近年我国大陆地区流行的EV71株在进化上属于同一基因型,与Anhui08、Zhejiang08、Shenzhen08具有高度的同源性。     

1株肠道病毒71型毒株的分离与鉴定

目的 探讨手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的分离与鉴定方法。方法 采集手足口病疑似病例的咽拭子标本1份接种于人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma cell, RD细胞),通过观察病毒的细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)来分析EV71的分离效果。分别利用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹分析(Western Blotting)方法来鉴定EV71病毒特异性核酸和蛋白。扩增EV71VP1区全长基因,对其序列进行同源性比较及遗传进化分析。结果 手足口病疑似病例咽拭子标本接种RD细胞传代至第2代后出现CPE。RT-PCR和Western Blotting检测结果均显示,感染组RD细胞中有EV71病毒特异性条带,暂命名为EV71分离株2016SHYP001。序列分析结果显示,2016SHYP001株病毒的VP1区核苷酸与C型代表株的同源性较高,为93.1%~98.3%;其中与C4a亚型代表株的同源性最高,为98.3%。进化树分析发现本地流行株与深圳地区流行株的亲缘较近。结论 成功分离出一株新的EV71病毒株2016SHYP001,其株型为C4a亚型。     

46例手足口病(EV71感染)重症病例临床分析

目的:探讨手足口病(EV71感染)重症病例早期临床特征。方法:以2011年3～9月在我院住院治疗的46例EV71感染引起的手足口病重症病例为研究对象,对其临床特征进行分析。结果:46例均为肠道病毒71型(EV71)感染,以1～3岁为主;临床特点:持续发热、皮疹、精神差、嗜睡、易惊、肢体抖动常见。血常规示白细胞计数增高16例(34.78%),血糖升高8例(17.39%),心肌酶谱CK-Mb升高11例(23.91%),腰穿示脑脊液白细胞计数在(8～59)×106之间,其中(15～59)×106有30例(65.22%),心电图示窦性心动过速5例(10.87%),全胸片检查31例(67.40%),其中3例(6.52%)示两肺纹理增粗、增多。所有病例均行腰穿检查,并积极给予甘露醇、甲强龙、丙球应用,所有病例均全部治愈,无一例进展为神经源性肺水肿。结论:本地区2011年手足口病重症病例主要为EV71感染(88.46%)引起,持续发热(以中高热为主)、精神差、嗜睡、易惊及肢体抖动是重症病例早期的主要表现;早期发现、早期予甘露醇、甲强龙、丙球积极治疗,可阻止病情向危重型发展,且患儿预后良好。     

福建省2010—2015年手足口病流行情况及EV71 VP1区基因特征

目的了解福建省手足口病流行概况及2015年相关肠道病毒71型(EV71)分离株的遗传特性,为完善手足口病的防治策略提供参考。方法对福建省2010年至2015年手足口病监测数据进行描述性流行病学分析,并选取2015年分离的40株EV71毒株进行VP1区基因序列测定、进化树分析和序列比较。结果 2010、2011、2013年度福建省手足口病仅出现一次流行高峰(5—7月),2012、2014、2015年度出现两次流行高峰(4—6月,9—10月),1年中病毒优势流行型别发生改变的年份(2012、2014、2015年)发病率较以单一型别病毒为优势流行型别的年份(2010、2011、2013年)高;发病人群主要集中在1到3岁年龄段的低龄儿童;重症率及病死率随流行型别中EV71比例的增加而相应增高。2015年流行的EV71病毒属于C4a亚型,可分为3个进化分支。与EU703814相比,福建省2015年流行毒株的核苷酸差异性较前几年有扩大趋势。结论福建省同一年份中肠道病毒的优势流行型别是否发生改变可能是导致手足口病不同的发病率及不同季节性分布特征的主要原因。2015年福建省EV71流行毒株仍以C4a亚型为主,存在多个传播链同时流行。3处氨基酸位点上(98,249,283)氨基酸的改变对病毒的意义尚需进一步研究。     

EV71肠道病毒感染与脑型手足口病的临床病理分析

目的探讨EV71肠道病毒感染与脑型手足口病的临床病理表现。方法对6例重症脑型手足口病的尸检材料进行病理临床分析。结果 EV71重症病例中枢神经系统病变突出:(1)脊髓、脑干炎,病变部位弥散性神经组织小灶状坏死,形成软化灶。血管周围淋巴细胞呈袖套状浸润。脑实质内淋巴细胞、单核巨噬细胞及少量中性白细胞浸润,小胶质细胞结节状增生。(2)脑、脊髓膜炎,软脑膜及蛛网膜下隙淋巴细胞、单核巨噬细胞浸润,浆液及纤维蛋白渗出。(3)肺淤血、肺水肿、肺实变、肺泡间隔少量淋巴细胞和单核细胞浸润和肺泡透明膜形成。结论EV71肠道病毒感染的小儿病变累及中枢神经时病情凶险,伴随有免疫机能损害、重度中毒性休克、急性呼吸窘迫及缺氧性心肌病,而引起直接死亡原因是严重中枢损害及急性呼吸窘迫征。     

EV71致重症手足口病引起心肌损伤的病理机制

目的 观察由新肠道病毒(EV71)引起的重症手足口病(HFMD)患儿心肌损伤的病理变化.方法 对7例由EV71引起的HFMD死亡患儿进行解剖,取心肌组织进行病理学检查,探讨其损伤及损伤机制.结果 HFMD患儿心外膜内有灶性炎细胞浸润;心肌纤维增粗、水肿,心肌间质内见散在的炎细胞浸润等病变.结论 EV71引起的HFMD可...     

肠道病毒71型与柯萨奇A组16型混合感染致手足口病并发中枢神经系统感染临床分析

目的 分析6例肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇A组16型(CoxA16)混合感染所致手足口病并发中枢神经系统感染患者的流行病学及临床特征.方法 回顾性分析6例EV71与CoxA16混合感染(混合感染组)所致手足口病并发中枢神经系统感染的临床特征、实验室检查、预后等,并与单纯EV71(EV71组)、CoxA16(CoxA16组)感染所致手足口病并发中枢神经系统感染患者进行比较.结果 6例EV71与CoxA16混合感染中5例为院外原发混合感染,1例不除外院内交叉感染.EV71与CoxA16混合感染致手足口病并发中枢神经系统感染的临床表现包括发热,手、足、口腔、臀部皮疹,肢体易惊、抖动,颈项强直,呕吐等.EV71组、CoxA16组、混合感染组患者的病情稳定时间分别为(59.0±38.1)h、(58.3±47.9)h、(86.4±44.4)h,体温稳定时间分别为(39.7±26.3)h、(28.3±17.9)h、(54.0±12.0)h,转危重型率分别为7.1%、0、1/6.结论 混合感染所致手足口病并发中枢神经系统感染的临床表现与EV71与CoxA16感染所致的手足口病无明显差别,但病情更重、病程较长,危重型的发生率较高.     

丙种球蛋白对重症EV71感染手足口病患儿细胞因子调节作用的研究

目的 研究静脉注射用丙种球蛋白(IVIG)对重症EV71感染相关手足口病外周血细胞因子的调节作用.方法 根据病情将治疗组患儿分成3组,脑膜脑炎组(ME组)14例、自主神经功能失调组(ANSD组)13例,肺水肿组(PE组)12例,均在入院12h内给予IVIG[lg/(kg ·d),2天]治疗.并设普通手足口病对照组(HFMD组)10例,给予一般治疗.比较治疗组患儿IVIG治疗前后血清中细胞因子TNF-d、IL-2、IL-10、IL-13、IL-6以及INF-γ水平的变化,及各组间年龄、发热时间、血糖、外周血白细胞计数、血清细胞因子水平及T淋巴细胞亚群的差异.结果 在IVIG使用前后,ME组患儿各细胞因子无明显改变,ANSD组患儿IL-13、IL-6明显下降(P＜0.05),PE组患儿IL-10、IL-13、IL-6、INF-γ明显下降(P＜0.05).各组之间比较,随着病情加重,血清中细胞因子IL-10、IL-6、IL-13浓度逐渐升高;血糖、白细胞计数同PE组比较有统计学差异(P＜0.05),同时外周血CD4/CD8比值、NK细胞比例PE组下降最为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IVIG治疗可调节危重症手足口病患儿的免疫功能,及时使用可改善预后.     

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组致手足口病临床特点分析

目的探讨肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)所致的手足口病在临床特征方面有无差异及对手足口病患儿的护理经验。方法回顾性分析我院感染科2010年6—9月收治的105例手足口病患儿的临床资料及预后。结果两组患儿呕吐、易惊或肢体抖动、抽搐、肺炎的发生率比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。两组神经源性肺水肿和呼吸衰竭的发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患儿最高体温、收缩压、舒张压及平静时最快心率、呼吸率的水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论对于手足口病患儿,应根据所感染病原体不同,加强临床观察,早期识别危重病例,及时进行有效的治疗和护理。     

EV71型手足口病患儿脑脊液T淋巴细胞亚群测定的临床意义

目的检测肠道病毒71型(EV71)手足口病(HFMD)患儿脑脊液T淋巴细胞亚群数量,探讨其在评估病情严重程度及预后的作用。方法选取2013年6月至2014年8月深圳市龙岗中心医院儿科住院的EV71型HFMD患儿250例作为研究组,根据中华人民共和国卫生部颁发的《手足口病诊治指南(2013年版)》诊断标准分为两组,其中150例患儿无合并症作为普通组;100例患儿出现神经系统受累表现作为重症组。重症组根据治疗结果分为痊愈组、后遗症及死亡组。使用四色流式细胞仪检测250例EV71型HFMD及100例热性惊厥患儿脑脊液T淋巴细胞亚群(CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+)的数量。结果 EV71型HFMD普通组和对照组脑脊液T淋巴细胞亚群(CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+)的数量比较,差异无统计学意义(P0.05);而普通组CD3~+CD56~+的数量升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。重症组脑脊液T淋巴细胞亚群(CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+)的数量均低于普通组(P0.05)。脑脊液T细胞亚群(CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+)的数量在死亡组最低、后遗症组次之,痊愈组恢复至接近正常值,三组组间比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论脑脊液T淋巴细胞亚群的数量变化在一定程度上与EV71型HFMD的病情严重程度及预后相关。     

EV71病毒感染动物模型研究进展

人肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起手足口病的主要病毒之一,并可导致严重的神经系统疾病,近年随着发病率的升高,严重威胁了婴幼儿的生命健康。可感染EV71的动物模型是研究其致病机理、疫苗评价和药物研发等的重要工具,然而目前尚未建立有效的EVT1感染标准化动物模型。本文将对不同物种的EV71病毒感染模型进行总结,并着重就利用基因修饰手段建立的EV71病毒感染模型进行讨论和展望。     

肠道病毒EV71型手足口病的临床观察及护理

目的总结98例肠道病毒EV71型手足口病患儿的病情观察及护理要点,以利早期发现重症病例,降低患儿的病死率,预防并发症。方法对收治的98例肠道病毒EV71型手足口病患儿,其中病情较重和危重的16例早期转院治疗,对82例予积极治疗和精心护理。结果82例患儿痊愈出院,无发生医院感染及死亡病例。结论系统的病情观察及精心的护理,可防止本病的传播,早期诊断、早期治疗可提高治愈率,防止并发症的发生。     

肠道病毒71感染的手足口病患儿体液免疫检濒及应用价值

目的通过测定手足口病（HFMD）患儿机体血清炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-01）、白细胞介素-6（IL-6）．免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及补体C3、C4水平,以探讨HFMD患儿体液免疫与HFMD的关系。方法收集舟山医院妇幼保健院区2010年6月-2012年12月HFMD患儿50例,其中30例肠道病毒71（EV71）感染呈阳性,20例呈阴性。另选取同期20例健康体检儿为对照。血清免疫球蛋白如IgA、IgG,IgM和补体C3、C4水平采用放射性免疫扩散法测定,血清TNF-α、IL-6采用化学发光免疫分析法进行测定。结果EV71阳性感染的HFMD患儿血清TNF-α、IL-6、IgA、IgG、IgM及补体C3、C4水平依次为（66．0±11．2）ng／L、（44．3±7．7）ng／L、（0．50±0．37）g／L、（8．09±3．55）g／L、（1．47±0．70）g／L、（0．96±0．51）g／L、（0．21±0．07）g／L,与其他肠道病毒引起HFMD相应指标水平比较,差异无统计学意义（t=0．462、0．734、0．209、0．125、0．259、0．209、0．833,均P〉0．05）,但EV71阳性感染组血清TNF—α、IL-6、IgA、IgG、IgM和补体C3、C4水平与对照组比较,差异均有统计学意义（t=20．398、19．496、4．319、2．756、2．379、2．146、3．148,均P〈0．05）,其中IgA、IgG和补体C3、C4水平较对照组明显降低,而IgM、TNF—α、IL-6则明显升高。结论EV71感染HFMD患儿的体液免疫功能紊乱．TNF—α、IL-6参与了HFMD的病理过程,可为HFMD的临床诊断、疗效观察及预后判断提供一定的理论依据。     

大连市肠道病毒71型基因特征分析

目的 了解大连市手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的VP1区段的基因特征.方法 用RT-PCR方法从手足口病患者临床标本中扩增EV71的VP1基因全序列,利用软件进行同源性分析和构建系统发生树.结果 测序获得的9株病毒基因与C4亚型代表株具有较高的核苷酸和氨基酸序列同源性.在系统进化树上,9株病毒基因与C4基因亚型代表株处于同一分支.结论 大连市EV71病毒株属C4亚型.     

EV71及CA16不同检测方法敏感度及特异性比较

目的比较检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)及柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)不同检测方法、不同生产厂家(A、B、C、D、E)荧光定量PCR检测试剂的敏感度及特异性。方法对EV71及CA16各10个病毒株进行稀释,取原倍、10-3及10-63个浓度,分别采用实时荧光定量PCR法(分别用不同厂家的检测试剂)、RT-PCR法、ELISA法及细胞培养4种方法进行检测,每种检测连续重复3次,然后将其结果进行比较分析。结果 EV71及CA16经不同方法及试剂检测后结果显示,荧光定量PCR方法敏感度最高,依次为细胞培养法、RT-PCR(VP1)法及ELISA法;细胞培养法、RT-PCR(VP1)法及ELISA法的特异性较荧光定量PCR检测方法的特异性高,但荧光定量PCR检测试剂均出现不同程度非特异的假阳性结果;不同的荧光定量PCR检测试剂中,D厂家试剂检测EV71和C厂家试剂检测CA16的敏感度和特异性最高。结论 RT-PCR(VP1)方法更适于检测EV71及CA16,如条件许可则建议联合采用细胞培养检测方法,提高检测结果的敏感度和特异性。     

ELISA方法检测肠道病毒71型抗体效果分析

目的分析酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对肠道病毒71型（EV71）的检测效果。方法以52份EV71型手足口病阳性患儿和55份正常儿童的血清为样本,用ELISA试剂盒和中和抗体方法分别检测,结果进行对比。结果与中和抗体方法相比较,ELISA方法敏感性为96．2％,特异性为92．7％,总符合率为94．4％。两种检测方法差异无统计学意义（χ^2=0．075,P〉0．05）。结论ELISA方法适用于EV71型手足口病常规诊断。