尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中的临床意义

目的 探讨尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中的临床价值。方法 选取2013-02～2014-02在广东省茂名市妇幼保健院儿科住院的小于3岁的下呼吸道感染患儿298例,入院后留取痰培养,同时用尿标本检测肺炎链球菌抗原。结果 298例患儿的痰液纯培养阳性率9.7%,尿肺炎链球菌抗原阳性率16.4%,痰液纯培养阳性组患儿的尿肺炎链球菌抗原阳性率(86.2%)明显高于阴性组(8.9%)(P＜0.01)。尿肺炎链球菌抗原检测的敏感性为86.2%,特异性为91.1%,准确度为90.6%。结论 尿肺炎链球菌抗原检测在儿童肺炎链球菌肺炎诊断中有较好的临床价值,与痰培养结合有助于提高该病的诊断准确率,值得临床推广应用。     

呼吸道病原菌基因检测法诊断儿童肺炎链球菌感染的临床价值

目的 探讨呼吸道病原菌基因检测法对诊断儿童肺炎链球菌感染的应用价值。 方法 收集2016年6月-2017年6月在首都儿科研究所附属儿童医院呼吸科住院的初诊细菌性肺炎患儿224例,每位病例采集深部痰或支气管肺泡灌洗液标本,按传统病原菌培养是否分离到肺炎链球菌分为非肺炎链球菌组136例和肺炎链球菌组88例。用呼吸道病原菌核酸检测试剂盒(恒温扩增芯片法)检测2组病例中的病原菌,应用SPSS 17.0统计软件及Kappa检验来对比2种检测方法的检出效能。 结果 非肺炎链球菌组应用呼吸道病原菌基因检测法检出肺炎链球菌40例,其中深部痰标本检出32例,支气管肺泡灌洗液标本检出8例;肺炎链球菌组应用呼吸道病原菌基因检测法检出肺炎链球菌80例,其中深部痰标本检出52例,支气管肺泡灌洗液标本检出28例。与传统病原学培养对比,呼吸道病原菌基因检测肺炎链球菌的灵敏度、特异度、总符合率、阳性预测值、阴性预测值分别为90.9%、74.4%、80.3%、66.7%、92.3%。2种检测方法对肺炎链球菌的检出率具有较好的一致性(Kappa>0.4)。 结论 呼吸道病原菌基因检测具有快速、特异、灵敏的优势,与传统的病原学分离培养检验有较高的一致性及总符合率,能为临床医生提供可靠的诊疗依据。      

咽拭子及痰液标本肺炎支原体培养对支原体肺炎诊断的影响

目的通过患儿咽拭子及痰液标本肺炎支原体的培养,比较两种标本的培养结果及对儿童支原体肺炎诊断的影响。方法以2007年6月-2008年6月第四军医大学西京医院儿科住院的支气管肺炎患儿231例为研究对象;选取其中42例经ELISA法检测血清肺炎支原体阳性（急性期血清MP-IgM抗体滴度≥1：80[5]或恢复期血清MP-IgG有4倍升高）的患儿作为试验组,选取其中42例年龄及性别与试验组相匹配的ELISA法检测血清肺炎支原体抗体阴性（急性期血清MP-IgM及恢复期血清MP-IgG阴性）的患儿作为对照组,对两组患儿均同时进行咽拭子及痰液标本的肺炎支原体快速培养,并对两种标本的培养结果进行分析。结果试验组42例患儿中有26例痰液标本或咽拭子肺炎支原体快速培养阳性,阳性率61.9%（26/42例）。26例痰液标本或咽拭子肺炎支原体快速培养阳性的患儿中,18例患儿为痰液标本阳性,阳性率69.2%（18/26）,8例患儿为咽拭子标本阳性,阳性率30.8%（8/26）,其中7例患儿的痰液标本和咽拭子培养均阳性。对照组42例患儿中有1例咽拭子MP快速培养阳性。结论痰液标本MP快速培养的阳性率高于咽拭子培养的阳性率,与咽拭子相比,痰液标本是诊断支原体肺炎最佳的标本类型。对于ELISA法血清MP阳性的患儿,痰标本MP快速培养检测MP的临床意义远大于ELISA法血清MP阴性的患儿。     

两种不同方法检测肺炎链球菌的结果对比分析

目的：比较常规痰培养与荧光定量聚合酶链反应（Polymerase chain reaction ,PCR）对肺炎链球菌的检测结果。方法：选择我院检验科2010年9月－2014年9月社区获得性肺炎患者86例,收集患者痰液,分别进行痰培养及PCR ,比较两种方法对肺炎链球菌的检测结果。结果：痰培养方法检测到肺炎链球菌感染例数为4例,检出率为4.7％：荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染例数为26例,检出率为30．2％。荧光定量PCR对社区获得性肺炎患者的检出例数显著高于传统痰培养,且差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：荧光定量PCR作为检测肺炎链球菌的一种方法,简单有效,值得临床推广应用。     

快速检测肺炎链球菌recA、ply及16SrRNA基因的多重降落PCR方法建立及应用

目的：建立快速检测肺炎链球菌recA,ply及16SrRNA基因的多重降落PCR方法并应用。方法：设计肺炎链球菌的特异基因recA,ply及其菌属保守序列16SrRNA基因的引物,建立多重降落PCR的反应体系及条件,通过该方法检测13株标准菌株的基因以判定recA、ply、16SrRNA基因的检测特异性;并通过对不同稀释度肺炎链球菌DNA的检测判定该方法的灵敏度。最后,应用多重降落PCR方法检测98份痰标本的肺炎链球菌,并与细胞培养法进行比较。结果：建立的多重降落PCR方法检测肺炎链球菌的特异性达100％,灵敏度达5pg／μL,该方法对98份痰标本中肺炎链球菌的检测结果与细胞培养法一致。结论：成功建立检测肺炎链球菌的多重降落PCR方法,灵敏度高,特异性强,可用于临床标本肺炎链球菌的快速检测。     

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法，探讨荧光PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针，并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本，应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果荧光定量PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100％、30％。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法，具有重要的应用价值。     

多重降落PCR检测痰标本肺炎链球菌与b型流感嗜血杆菌

目的:建立可同时检测痰标本中肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)与b型流感嗜血杆菌(Hae-mophilus influenzae type b,Hib)的多重降落PCR。方法:以Sp cpsA基因、Hib capⅡ区为靶标设计引物,并用Primer-BLAST在线软件检测其特异性,多重降落PCR检测492份痰标本,并以标准菌株作为对照,结果与细菌培养法进行比较。结果:所建立的多重降落PCR对Sp、Hib的检测下限分别达6.3 pg、0.2 pg;与细菌培养法相比,灵敏度及总灵敏度均达100%,检测Sp、Hib特异性分别为94%、98%,总特异性达92%。结论:所建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可作为Sp、Hib感染的快速诊断与流行病学研究的备选手段。     

血液中肺炎链球菌的AFLP快速检测方法的建立

目的 建立扩增片段长度多态性（AFLP）快速检测血液中肺炎链球菌的方法。方法 针对肺炎链球菌的管家基因16SrRNA基因设计特异引物,优化反应条件,建立肺炎链球菌的AFLP检测方法。通过对模拟临床血液感染细菌标本的检测,评价该方法的特异性和灵敏度。结果 7个模拟临床血液感染肺炎链球菌标本经AFLP法检测,结果均为阳性;15个模拟临床血液感染非肺炎链球菌标本经该法检测,结果均为阴性;该法检测血液标本中肺炎链球菌的灵敏度为1．5×10_4cfu／mL。结论 建立的AFLP方法检测血液中肺炎链球菌简便快速,特异性好、灵敏度高,适合肺炎链球菌血流感染的早期诊断。     

不同临床标本微生物检验的阳性率结果对比分析

目的:分析不同临床标本微生物检出阳性率的结果。方法:将2017年1月至6月100例标本作为观察组,另选择2016年7月至12月100例标本为对照组,比较两组的痰液标本、尿液标本以及呼吸道标本等微生物的检出阳性率。结果:观察组的尿液检出阳性率以及痰液检出阳性率均明显高于对照组;两组的呼吸道标本和血液标本阳性检出率差异不显著。结论:通过对比不同临床标本微生物的就检查阳性率结果,可以规范检出步骤,提高检测水平。     

新型MGB探针特异性检测变形链球菌

目的:设计一种新型TaqManMGB探针,利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌,提高PCR法检测变形链球菌的特异性,减少检测的假阳性。方法:提取6种不同链球属细菌的DNA,分别进行巢式PCR和TaqManMGB实时荧光定量PCR,比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性。巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物,第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物。TaqManMGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同,设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配,不与其他细菌的基因序列匹配。将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16μg/L按5倍梯度稀释,制备出实时荧光定量PCR的标准曲线。结果:变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段,出现假阳性结果。TaqManMGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株,不检出其他链球菌,比巢式PCR特异性更好。TaqManMGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的最低检出浓度为20μg/L。结论:本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqManMGB探针,建立利用TaqManMGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法。     

495例肺炎患儿支气管肺泡灌洗液与痰液细菌培养对比研究

目的探讨肺炎患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)与痰液细菌培养的阳性率差异。方法采集2015年3月～2017年11月我院综合内科诊断为肺炎,住院期间既取痰液又取支气管肺泡灌洗液行细菌培养和鉴定的患儿495例,比较痰液及支气管肺泡灌洗液培养阳性率的差异。结果 495例患儿支气管肺泡灌洗液培养阳性者34例,阳性率为6.9%,居前三位者分别为:肺炎链球菌16例(47.1%),肺炎克雷伯菌11例(32.4%),大肠埃希菌4例(11.8%),其他3例(8.7%);培养结果与病情相符者32例,符合率94.1%。痰培养阳性者41例,阳性率为8.3%,居前三位的细菌分别为:肺炎链球菌21例(51.2%),金黄色葡萄球菌9例(22.0%),流感嗜血杆菌5例(12.2%),其他6例(14.6%);培养结果与病情相符者28例,符合率68.3%。结论支气管肺泡灌洗液与痰液细菌培养阳性率无明显差异,但支气管肺泡灌洗液培养结果有更高的临床符合率,结果更可靠,对抗生素使用的指导意义大于痰液。     

DNA探针杂交快速检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌

目的 建立一种早期快速检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的分子生物学方法。方法 采用聚合酶链反应（PCR）合成肺炎链球菌和流感嗜血杆菌特异的DNA探针和细菌16S rRNA的通用探针，并用生物素标记DNA探针，分别与细菌、病毒和真菌DNA杂交。并将该方法评价临床样本的检测。结果 聚合酶链反应分别扩增出263、351、370bp三种DNA探针，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌只与其对应的探针杂交，细菌通用探针和病毒、真菌间无交叉反应。该法可检测出1ng细菌DNA，100份痰标本利用该方法检测出11份肺炎链球菌和8份流感嗜血杆菌，其阳性率高于痰培养。结论 该方法简便、快速、特异，具有较高的应用价值．可应用于临床检测。     

社区获得性肺炎的病原学研究及耐药性分析

目的:了解我院南区社区获得性肺炎(CAP)的病原学特征及耐药情况,合理使用抗生素。方法:对205例符合CAP诊断标准的患者留取痰或血进行细菌培养,采用血清学方法检测血中肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌抗体等非典型病原体。结果:193例细菌培养显示,病原分离阳性79例(40.9%);200例血清学检查,在非典型病原体感染中以肺炎支原体感染最为常见。结论:CAP的病原谱及其对药物敏感性的差异为临床合理使用抗生素提供了理论依据。     

DNA探针杂交快速检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌

目的 建立一种早期快速检测肺炎链球菌和流感嗜血杆菌的分子生物学方法。方法 采用聚合酶链反应(PCR)合成肺炎链球菌和流感嗜血杆菌特异的DNA探针和细菌16SrRNA的通用探针,并用生物素标记DNA探针,分别与细菌、病毒和真菌DNA杂交。并将该方法评价临床样本的检测。结果 聚合酶链反应分别扩增出263、351、370bp三种DNA探针,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌只与其对应的探针杂交,细菌通用探针和病毒、真菌间无交叉反应。该法可检测出1ng细菌DNA,100份痰标本利用该方法检测出11份肺炎链球菌和8份流感嗜血杆菌,其阳性率高于痰培养。结论 该方法简便、快速、特异,具有较高的应用价值,可应用于临床检测。     

PCR法与培养法检测儿童肺炎易感细菌结果比较

目的探讨PCR法和培养法对儿童肺炎易感细菌检测的应用价值。方法采用PCR法及细菌培养法对113例呼吸道感染患儿的临床标本进行检测,对两种检测方法的结果进行比较。结果 113例临床标本中,培养法检测阳性率46.9%(53/113),其中流感嗜血杆菌2例,大肠埃希菌8例,肺炎克雷伯菌15例,肺炎链球菌3例,金黄色葡萄球菌12例,表皮葡萄球菌6例,铜绿假单胞菌7例。PCR法检测阳性率69.9%(79/113),在79例阳性标本中检出病原菌85株,其中73例标本检测出单一病原,6例标本为混合感染。流感嗜血杆菌18例,大肠埃希菌8例,肺炎克雷伯菌17例,肺炎链球菌16例,金黄色葡萄球菌10例,表皮葡萄球菌10例,铜绿假单胞菌6例。结论与培养法相比,PCR法可以提高肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等较难培养细菌的检出率,应将PCR法与培养法结合作为肺炎易感细菌的检测方法,为临床医师合理选择抗生素奠定基础。     

肺炎患儿肺炎支原体感染的实验室检测

目的：探讨肺炎患儿肺炎支原体（ＭＰ）感染的实验室检测方法。方法：使用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测６７６例肺炎患儿ＭＰ的感染,其中１３９例同时采用支原体培养进行检测;１１２例做间接血凝试验（ＩＨＡ）。结果：ＰＣＲ法对ＭＰ感染的检出率明显高于培养法（Ｐ〈０．０１）,双份血清ＩＨＡ的检测率和ＰＣＲ法比较无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,单份血清ＩＨＡ的检出率明显低于ＰＣＲ法（Ｐ〈０．０１）。结论：ＰＣＲ法     

老年社区获得性肺炎124例临床分析

目的:研究老年社区获得性肺炎(CAP)患者的致病菌株种类,为CAP患者的治疗提供经验与方法。方法:对124例老年社区获得性肺炎患者的发病情况进行详细了解,并取所有患者痰液进行细菌培养,分析老年社区获得性肺炎患者的致病菌的分布情况。结果:124例老年社区获得性肺炎患者感染的细菌分布情况为:肺炎链球菌39例,金黄色葡萄球菌11例,肺炎克雷伯杆菌8例,肺炎支原体9例,铜绿假单胞菌14例,大肠埃希菌12例,流感嗜血杆菌2例,痰培养阴性患者29例。且致病菌中以肺炎链球菌(31.45%),明显多于其他各种致病菌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:老年社区获得性肺炎患者的致病菌种类多,主要以肺炎链球菌为主。