诱导11β-HSD1表达对GC保护血管内皮炎性损伤作用的影响

目的探讨诱导11β-HSD1的表达在GC保护血管内皮炎性损伤中的影响。方法用甘草次酸(GA)诱导人脐静脉内皮细胞11β-HSD1的表达,观察GA作用后体外培养的人脐静脉内皮细胞在LPS和(或)Dex刺激下IL-6等炎性细胞因子的分泌及发生凋亡的变化,同时观察不同浓度的GA对人脐静脉内皮细胞11β-HSD1的表达的诱导情况。结果 GA单独作用于人脐静脉内皮细胞时,能够上调11β-HSD1mRNA的表达。GA与GC(Dex)合用也可促进11β-HSD1mRNA的表达。GA能显著抑制LPS诱导的HUVEC分泌IL-6和sICAM-1,同时显著降低LPS诱导的HUVEC的细胞凋亡率。结论 GA通过诱导11β-HSD1表达,可增强GC抑制IL-6等前炎症细胞因子的产生,加强对血管内皮细胞炎性损伤的保护。     

地塞米松抑制小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素—18的表达

目的：研究糖皮质激素（GC）对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）IL-18表达的调控作用。方法：以半定量RT-PCR法检测经不同浓度地塞米松（Dex）处理的Mφ脂多糖（LPS）诱导的IL-18mRNA的表达,以ELISA法检测Mφ培养上清IL-18的含量。结果：Dex剂量依赖性地抑制MφLPS诱导的IL-18mRNA及等抑制作用可被糖皮质激素受体拮抗剂-RU486阻断。结论：GC能抑制MφLPS诱导的IL-18的表达。     

二十碳五烯酸对脂多糖刺激的内皮细胞炎症因子分泌的影响

目的 观察二十碳五烯酸(EPA)对脂多糖(LPS)刺激的内皮细胞炎症因子分泌的影响.方法 以原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为实验对象,乳酸脱氢酶(LDH)释放率试验筛选EPA作用于HUVEC的适宜浓度;ELISA法检测EPA对于LPS刺激后HUVEC的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白介素-6(IL-6)表达的影响.结果 100 μmol/L和200 μmol/L的EPA作用可引起HUVEC释放LDH明显增加,故实验选取EPA浓度≤50 μmol/L;LPS刺激HUVEC分泌MCP-1和IL-6增加,均于24 h达到高峰;EPA可显著抑制LPS诱导的MCP-1和IL-6表达,其抑制作用随EPA剂量的增加而增强.结论 EPA对由LPS诱导的内皮细胞炎症因子的表达具有显著抑制作用.本实验为EPA运用于各种炎症性疾病的治疗提供了理论依据.     

二十碳五烯酸对脂多糖刺激的内皮细胞炎症因子分泌的影响

目的观察二十碳五烯酸(EPA)对脂多糖(LPS)刺激的内皮细胞炎症因子分泌的影响。方法以原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为实验对象,乳酸脱氢酶(LDH)释放率试验筛选EPA作用于HUVEC的适宜浓度;ELISA法检测EPA对于LPS刺激后HUVEC的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白介素-6(IL-6)表达的影响。结果100μmol/L和200μmol/L的EPA作用可引起HUVEC释放LDH明显增加,故实验选取EPA浓度≤50μmol/L;LPS刺激HUVEC分泌MCP-1和IL-6增加,均于24 h达到高峰;EPA可显著抑制LPS诱导的MCP-1和IL-6表达,其抑制作用随EPA剂量的增加而增强。结论EPA对由LPS诱导的内皮细胞炎症因子的表达具有显著抑制作用。本实验为EPA运用于各种炎症性疾病的治疗提供了理论依据。     

内毒素上调血管内皮细胞11β-HSD2基因的表达

目的探讨内毒素对血管内皮细胞内11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2) mRNA 的影响,以及p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK) 在其中所起的作用.方法应用逆转录-聚合酶链反应,测定血管内皮细胞在不同剂量内毒素作用时11β-HSD2 mRNA 的量以及采用p38 MAPK特异性抑制剂SB20358(10 mmol/L) 抑制p38 MAPK后11β-HSD2 mRNA 的量.结果内毒素1.0、10、20、50、100 μg/L 与血管内皮细胞共培养24 h后11β-HSD2 mRNA/β-actin mRNA均不同程度高于正常培养水平,而SB203580 抑制p38 MAPK后可部分抑制内毒素引起的11β-HSD2 mRNA水平增高.结论内毒素可诱导11β-HSD2基因转录增强,激活p38 MAPK可能是一种重要机制.     

扁塑藤素对LPS诱导的HUVEC细胞功能损伤和焦亡的作用

目的研究扁塑藤素对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及可能机制。方法 建立LPS诱导HUVEC损伤模型,HUVEC细胞分为对照组、LPS组以及低、中、高剂量扁塑藤素组(0.1、0.2、0.4 μmol/L扁塑藤素)。CCK-8法测定细胞活力;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18蛋白水平;蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测焦亡相关分子NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达量。 结果与对照组比较,LPS组细胞活力和SOD含量显著下降(P＜0.05),LDH和MDA含量、NLRP3、Caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA表达量均显著升高(P＜0.05)。扁塑藤素呈剂量依赖性提高细胞活力和SOD含量,抑制LDH、MDA,降低NLRP3、Caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA表达水平(P＜0.05)。 结论扁塑藤素呈剂量依赖性抑制细胞焦亡和减轻氧化应激,从而改善LPS诱导的HUVEC功能损伤。     

原代人脐静脉内皮细胞分泌IL-1的研究

为探讨内皮细胞作为抗原提呈细胞（APCs）的功能，培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察了其在某些因素影响下，分泌白细胞介素1（IL-1）的情况。结果表明，细菌脂多糖（LPS）可诱导HUVEC释放IL－1，增加LPS的浓度或延长其诱导时间，可提高IL-1的释放活性。γ干扰素（IFNγ）可协同LPS促进HUVEC释放IL－1。协同诱导的动力学表明：IFNγ对LPS诱导HUVEC释放IL－18h之前无明显效应，24h后，协同促进效应明显提高。     

医疗机构“管办分离”的经济法原理分析

目的:探讨高浓度葡萄糖刺激下糖皮质激素对大动脉内皮细胞11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达的影响.方法:将猪髂动脉内皮细胞培养于高糖(30 mmol/L)中,分别加入不同浓度糖皮质激素刺激,用RT-PCR法检测11β-HSDI,11β-HSD2mRNA表达情况,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:正常对照组中,仅有少量的11β-HSD1 mRNA及蛋白表达,高糖状态下,11β-HSD1 mRNA和蛋白表达升高,且随着可的松浓度的增加而增加(P<0.05);高糖状态下,11β-HSD2 mRNA和蛋白表达元明显变化.结论:糖皮质激素使高糖培养下的动脉内皮细胞11β-HSD1表达增加,可能与糖尿病血管病变的发生发展有关.     

不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶基因表达的影响

目的:观察葡萄糖下对大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的影响,及11β-HSD1与TGF-β1,ET-1等细胞因子之间的关系;同时观察反义寡核苷酸对高糖条件下大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的干预作用.方法:猪髂动脉内皮细胞分别培养于不同浓度葡萄糖(5.6,10.0,20.0,30.0 mmol/L)中,用RT-PCR法检测11β-HSD1,11β-HSD2,TGF-β1,ET-1 mRNA的表达,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:高糖状态干预48 h后,11β-HSD1,TGF-β1mRNA表达随葡萄糖浓度的增加而增加,呈现一定的相关性;11β-HSD1蛋白表达随葡萄糖浓度增加而增加.采用11β-HSD1与11β-HSD2反义寡核苷酸干预后11β-HSD1与11β-HSD2 mRNA和蛋白质表达完全被抑制,同时TGF-β1的表达降低.结论:葡萄糖刺激血管内皮细胞11β-HSD1 mRNA和蛋白质表达增加,且在高糖状态下,11β-HSD1 mRNA的表达与TGF-β1RNA表达有直线相关性,11β-HSD1可能与糖尿病及其血管并发症相关.     

养阴剔络方对人脐静脉内皮细胞炎症机制的作用

目的研究养阴剔络方对脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症机制的作用。方法100μg/mL的LPS诱导HUVEC发炎,用2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐（cck-8）比色法检测细胞存活数量,用elisa法测IL-6、IL-8、TNF-a的含量。结果养阴剔络方对LPS诱导的HUVEC炎症有明显的抑制作用,对LPS诱导的HUVEC细胞产生的IL-6、IL-8、TNF-a等炎症因子有明显的降低作用。结论养阴剔络方对LPS诱导的细胞炎症机制有很好的保护作用。     

球松素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察球松素对人脐静脉内皮细胞的保护作用。方法采用灌注消化法分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,并对其进行形态学和免疫组织化学染色鉴定。用脂多糖（LPS）诱导建立人脐静脉血管内皮细胞的损伤模型,随后用球松素作用于受损伤细胞,观察其对HUVEC的保护作用。结果倒置显微镜下可见细胞呈梭形,单层铺路石状排列,Factor VIII相关抗原免疫组织化学染色鉴定阳性。100μg/L的LPS对脐静脉内皮细胞生长有明显的抑制作用,可作为人脐静脉内皮损伤模型的造模浓度。球松素能减轻LPS对细胞的损伤（P〈0.05）,并呈剂量依赖关系。结论球松素对LPS所诱导的人脐静脉内皮细胞损伤有保护作用。     

大蒜素对人脐静脉细胞抗氧化损伤保护作用

目的：研究大蒜素（Allicin）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护作用及其作用机理。方法建立H2O2诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型;采用MTT、RT-PCR、Western-blot等方法检测来探究大蒜素对其保护作用与可能作用机制。结果大蒜素能够减少H2O2诱导HUVEC的凋亡;使基因eNOS的表达显著增加;使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加,Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用,对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。     

人脐静脉内皮细胞脂多糖刺激后上调基因表达谱的分析

目的 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)受脂多糖(LPS)刺激后上调基因表达谱进行筛选及分析。方法 以受LPS刺激HUVEC为实验方，末刺激别HUVEC为驱使方，进行抑制消减杂交(SSH)建立消减cDNA文库，经菌落原位斑点杂交筛选文库后将阳性克隆测序和同源性分析，并用RT-PCR验证新的cDNA序列。结果 共获得25条上调表达的基因，分别与炎症反应、细胞骨架重构、细胞生长和凋亡、胞内信号转导相关，并克隆到3条新基因表达序列标签(EST)，RT-PCR验证了这些新EST序列只在LPS刺激的内皮细胞中表达。结论 抑制消减杂交有效地克隆了人脐静脉内皮细胞LPS刺激后上调表达基因，有助于阐明LPS直接激活血管内皮细胞的分子机制。     

Lipopolysaccharide upregulates the expression of Toll-like receptor 4 in human vascular endothelial cells

目的：探讨内皮细胞TLR2和TLR4的表达以及内毒素对其表达的影响。方法：按RNA提取试剂盒说明书提取内毒素作用后的ECV-304(人脐静脉内皮细胞株)和人脐静脉内皮细胞总RNA,运用逆转录PCR(RT-PCR)检测细胞TLR2和TLR4mRNA的表达。结果：人脐静脉内皮细胞和ECV304细胞株均能表达TLR2和TLR4mRNA,但是,TLR4的表达水平明显强于TLR2的表达,LPS能明显上调TLR4的表达,但对TLR2的表达无影响。结论：本研究提示TLR4能明显上调LPS作用的信号转导分子,在LPS对内皮细胞的激活效应中具有重要的作用;ECV-304是内皮细胞研究的良好的实验模型,可代替人脐静脉内皮细胞而较为广泛应用。     

热休克蛋白90和糖皮质激素受体比例失衡对哮喘患者T淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)与糖皮质激素受体(GR)比例失调对T淋巴细胞凋亡的作用,同时观察地塞米松(Dex)对HSP90和GR mRNA表达的影响.方法选择10例哮喘患者和7例正常对照,利用格尔得霉素(GA)特异性阻断HSP90的作用, 造成功能性HSP90与 GR比例降低,用碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪计数凋亡细胞的方法,观察用Dex和GA处理的T细胞凋亡情况;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察Dex和GA处理对哮喘T淋巴细胞HSP 90和GR mRNA 表达的影响.结果 Dex可明显诱导哮喘T淋巴细胞的凋亡(3 3 .8%±3.2% 比 23.2%±1.5%,P<0.01),GA对T淋巴细胞的凋亡无明显影响,却可阻断Dex诱导T淋巴细胞凋亡的作用(24.5%±6.0% 比 33.8%±3.2%, P<0.01);De x对正常人T淋巴细胞的凋亡有诱导作用,但其程度较弱(25.9%±3.5% 比 23.1%±1.5%, P<0.05).Dex可抑制哮喘患者T淋巴细胞HSP90和GR 的表达(分别为1.23±0.16比1.68±0.38 和 0.42±0.06比0.54±0.07, P 均<0.05),GA对 Dex的这一作用有阻断作用,但GA本身对HSP90和GR mRNA的表达无明显影响.结论 HSP90/GR 比例降低可影响Dex诱导的T细胞凋亡;Dex对哮喘患者GR和HSP90mRNA的表达有下调作用,而 Dex的这一作用可被GA所阻断.     

白花丹参上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

[摘要]目的研究白花丹参对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及对凋亡相关基因Bcl-2表达的调节。方法应用酶消化灌注法分离人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定。取对数生长期的细胞分组进行干预(白花丹参高剂量组0.10 g/ml, 白花丹参低剂量组0.01 g/ml),应用流式细胞技术观察细胞凋亡情况,应用免疫细胞荧光技术检测凋亡相关基因Bcl-2的表达。结果在白花丹参干预下,H2O2诱导的HUVEC凋亡率降低(高剂量组P<0.01,低剂量组P<0.05),高剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.01)。结论白花丹参对H2O2诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,这种作用与Bcl-2表达上调有关。     

Ghrelin抑制ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的:研究ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用。方法:采用Ho-echst 33258荧光染色、Western blot法和硝酸还原酶法研究ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用。结果:Hoechst 33258染色荧光检测发现,与正常对照组相比,ox-LDL组HUVEC中出现大量凋亡细胞,凋亡率明显增加,与ox-LDL组比较,ghrelin预处理组HUVEC细胞凋亡率呈剂量依赖性下降;Western blot检测结果表明,与对照组比较,ox-LDL可上调内细胞中Caspase-3表达,而经过ghrelin预处理后能剂量依赖性降低Caspase-3蛋白表达;硝酸还原酶法结果显示,ox-LDL可显著减少内皮细胞培养液中NO含量,经过ghrelin预处理后,ghrelin能剂量依赖性增加NO含量。结论:ghrelin对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有拮抗作用,可能与其抑制ox-LDL引起的细胞内Caspase-3蛋白水平升高及NO合成下降有关。     

shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对乳腺癌血管生成潜力的影响

目的 研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞株诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响.方法 通过质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR、Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达;应用人乳腺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察人乳腺癌细胞株通过shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响.结果 质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平:对乳腺癌细胞诱导的人脐静脉血管内皮细胞HUVEC形成管腔样结构的能力有显著的抑制作用(P<0.05).结论 shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞诱导管腔形成能力.     

脂多糖和氧化型低密度脂蛋白协同促进人内皮细胞表达细胞间黏附分子-1

目的探讨脂多糖(LPS)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达(HU-VEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA以及p38蛋白激酶是否参与此过程。方法将生长至汇合的HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+SB203580组、ox-LDL组、HUVEC+SB203580组、LPS+ox-LDL组。采用原位杂交检测其细胞间黏附分子-1 mRNA的表达。用免疫细胞化学法检测正常对照组、脂多糖组和氧化型低密度脂蛋白组p38蛋白激酶蛋白的表达。结果培养的HUVEC能表达较低水平的ICAM-1 mRNA。原位杂交显示各实验组的ICAM-1 mRNA明显高于对照组(P<0.01)。免疫细胞化学显示,p38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为8.3%,当HUVEC暴露于LPS或ox-LDL后,细胞核阳性表达率升至38.5%或48.6%。结论LPS和ox-LDL能诱导HUVEC表达ICAM-1 mRNA,p38蛋白激酶可能参与了该过程。     

一氧化氮对血管内皮细胞凋亡的影响

目的：研究一氧化氮（NO）对人血管内皮细胞凋亡的影响。方法：TNF－α刺激培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）后，用流氏细胞术Annexin V方法检测细胞凋亡情况，用分光光度法检测细胞上清液中NO水平，结果：低浓度N抑制TNF－α诱导的内皮细胞凋亡，而高浓度NO能促进内皮细胞凋亡，结论：低浓度NO对HUVEC有抗凋亡作用而高浓度NO则有促凋亡作用。