瑞香狼毒水提物小鼠血清对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的：探讨瑞香狼毒水提物（SCLA）的抗癌作用及机制。方法：以不同剂量SCLA灌胃给药后,于不同时间采集小鼠血清,处理体外培养的人膀胱癌T24细胞,用MTS比色法,于酶标仪上测定吸光度值,观察SCLA对细胞增殖的影响。结果：SCLA小鼠血清显著降低T24细胞增殖。结论：瑞香狼毒抑制人膀胱癌T24细胞增殖,可能成为膀胱癌新的治疗药物。     

瑞香狼毒总黄酮提取物对肺癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究瑞香狼毒总黄酮提取物对肺癌A549细胞的增殖抑制、细胞周期的影响.方法 采用超声波技术提取瑞香狼毒根中的总黄酮.四甲基偶氮唑盐法检测总黄酮提取物对A549细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测总黄酮提取物对A549细胞周期和凋亡的影响.结果 瑞香狼毒总黄酮提取物呈明显的时间-剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,即随着时间的延长、总黄酮提取物浓度的增加,抑制作用增强;总黄酮提取物可诱导A549细胞凋亡,并将A549细胞阻滞在G1期.结论 瑞香狼毒总黄酮提取物具有抗肺癌的活性.     

PDTC对膀胱癌EJ细胞Livin、Survivin mRNA表达影响

目的:探讨体外细胞培养,观察核转录因子κB通路特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平的影响。方法:采用Real-time PCR法检测以不同浓度不同时间的PDTC处理的膀胱癌EJ细胞的凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平情况。结果:PDTC可降低膀胱癌EJ细胞凋亡抑制因子Livin、Survivin mRNA表达水平,呈剂量-时间依赖性,且呈负相关(P<0.05)。结论:PDTC可使膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平减少,其机制可能与NF-κB通路被抑制相关。     

小檗胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制.方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测各组Caspase-3蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:BBM能呈时间剂量依赖性地抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡;免疫细胞化学结果显示BBM作用24 h后K562细胞Caspase-3蛋白表达升高,Survivin蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:BBM能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与Caspase-3蛋白的表达增高及Survivin蛋白的表达降低有关.     

黄芩素联合U0126促进人膀胱癌T24细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨黄芩素联合U0126促进人膀胱癌细胞系T24凋亡的分子机制.方法 用黄芩素和U0126处理人膀胱癌T24细胞株,(1)CCK8检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测T24细胞周期的变化;(3)显微镜观察细胞凋亡;(4)流式细胞仪检测早期细胞凋亡和晚期细胞凋亡;(5)Real Time PCR检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平;(6)Western blot检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平.结果 黄芩素或U0126浓度越高,T24细胞增殖能力逐渐下降(P<0.05);不同浓度的黄芩素刺激人膀胱癌细胞株T24,T24细胞数量随浓度上升而逐渐减少(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株S期的细胞数量显著低于黄芩素、U0126单独处理组(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株早期凋亡和晚期凋亡均显著高于黄芩素、U0126单独处理组(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞株ERK1/2、Bcl-2和P38的mRNA表达水平显著低于黄芩素或U0126单独处理组(P<0.05);黄芩素与U0126联合处理组的T24细胞ERK1/2、P38的磷酸化水平以及Bcl-2的蛋白表达量均显著低于黄芩素或U0126单独处理组(P<0.05).结论 黄芩素和U0126均可显著抑制人膀胱癌细胞增殖,诱导T24早期凋亡和晚期凋亡且具有浓度依赖性,且两者具有协同效应.因此,黄芩素和U0126可用于治疗膀胱癌.     

瑞香狼毒水提物对肺癌细胞耐药基因蛋白表达的影响

目的探讨瑞香狼毒水提物对三种肺癌耐药基因蛋白表达的影响。方法用瑞香狼毒水提取物处理两肺癌细胞株（人小细胞肺癌NCI—H446和人非小细胞肺腺癌NCI—H157），用药前后分别用免疫组织化学sP法检测肺癌细胞中：多药耐药基因（MDR）、肺耐药蛋白（LRP）、生存素（survivin）的表达情况。利用形态学图像分析，比较瑞香狼毒用药前后三种耐药基因蛋白表达的情况。结果瑞香狼毒用药前后两肺癌细胞株三种癌基因表达情况如下：NCI—H446细胞株用药前MDR、LRP和Survivin细胞阳性率和辉度均高于用药后（P〈0．05）。NCI—H157细胞株用药前MDR、LRP和细胞阳性率和辉度均高于用药后（P〈0．05），而Survivin的表达用药前后差异不显著（P〉0．05）。结论瑞香狼毒提取物对两种肺癌细胞株的某些耐药基因蛋白的表达有明显的抑制作用。     

丹参酮IIA对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡和细胞周期蛋白B1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨丹参酮IIA(TanIIA)对膀胱癌T24细胞株体外增殖、凋亡以及细胞周期蛋白B1(CyclinB1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3信使核糖核酸(Caspase-3 mRNA)表达的影响。方法体外培养T24细胞,分别给予不同浓度(5 mg/L和10 mg/L)TanIIA,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV/PI检测细胞凋亡,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)检测细胞CyclinB1、Caspase-3 mRNA的表达。结果 MTT结果显示:5～10 mg/L TanIIA作用48 h均对T24细胞增殖有抑制作用,对细胞凋亡有诱导作用,而且CyclinB1mRNA下调及Caspase-3 mRNA上调,且均呈浓度依赖性。结论 TanIIA可能通过抑制CyclinB1mRNA和增加Caspase-3mRNA的表达水平,抑制膀胱癌T24细胞增殖及诱导凋亡,发挥抗膀胱癌的作用。     

RNA干扰靶向Survivin促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的研究

目的针对凋亡抑制因子Survivin应用RNA干扰技术（RNA interference,RNA）i抑制膀胱癌细胞株BIU-87细胞内源性Survivin基因的表达进而促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡.方法构建重组质粒pshRNA-survivin1、pshRNA-surv-ivin2和pshRNA-survivin 3并转染BIU-87细胞株,应用免疫组化法检测细胞中Survivin蛋白的表达,通过噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长增殖抑制率,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果重组质粒转染BIU-87细胞后,Survivin蛋白表达明显下调,细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑.结论膀胱癌细胞高表达Survivin,RNA干扰特异性抑制Survivin表达,可以促进膀胱癌细胞凋亡和增殖活性明显下降.     

氧化苦参碱体外诱导膀胱癌T24细胞凋亡

目的观察氧化苦参碱对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法不同浓度(0.625、1.25、2.5 mg/mL)氧化苦参碱作用于膀胱癌T24细胞,采用流式细胞术、光镜及电镜观察其诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用。用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变。免疫印迹法检测survivin和caspase-3蛋白的表达情况。结果氧化苦参碱作用人膀胱癌细胞后,光镜及电镜下均见到典型的细胞凋亡形态,流式细胞术观察发现凋亡峰。同时观察到氧化苦参碱抑制survivin的转录和表达,对caspase-3有上调作用(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过抑制survivin、上调caspase-3表达诱导膀胱癌T24细胞发生凋亡。     

吡柔比星诱导膀胱癌细胞的凋亡及抑制PLCε基因的表达

目的 探讨吡柔比星对膀胱癌细胞增殖的影响及其作用机制。 方法 膀胱癌细胞T24和BIU-87分别用0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L的吡柔比星处理24、48、72 h ,用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR、RT-PCR检测磷脂酶Cε（PLCε）mRNA及凋亡调控基因Bcl-2 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测PLCε蛋白的表达。将膀胱癌细胞分为空白组、吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、吡柔比星联合PLCε干扰腺病毒载体（Ad-shPLCε）处理组,检测并比较各组细胞增殖和Bcl-2蛋白的表达量。 结果 在膀胱癌细胞T24、BIU-87中,吡柔比星对细胞的抑制率呈浓度、时间依赖性,即随着药物浓度增加、处理时间延长,细胞抑制率升高;吡柔比星促进T24和BIU-87细胞凋亡,并且抑制PLCε和Bcl-2表达。吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组均能抑制细胞增殖和Bcl-2表达,且Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组的抑制作用高于吡柔比星处理组,差异有统计学意义 （P<0.05）。 结论 吡柔比星能有效抑制膀胱癌细胞的增殖,可能与其抑制PLCε癌基因及下游Bcl-2基因的表达有关。     

Effect of small interfering RNA targeting survivin gene on biological behaviour of bladder cancer

Background Bladder cancer is the most common type of urinary system tumours. It is frequently associated with genetic mutations that deregulate the cell cycle and render these tumours resistant to apoptosis. Survivin, a newly discovered member inhibitor of apoptosis protein （IAP） family in several human cancers, by inducing cell proliferation and inhibiting apoptosis is frequently activated in bladder cancer. We studied the influence of small interfering RNA （siRNA） targeting survivin on the biological behaviour of bladder cancer cells. Methods A double strand survivin target sequence specific siRNA was designed and synthesized. After transfection of bladder cancer cell line T24 by siRNA/liposome complex with increasing concentrations （50-200 nmol/L）, the transfectant cells were intratumourally injected at different doses （5 μg or 50 μg）. The effects were measured in vitro and in vivo. Results The selected siRNA efficiently down-regulated survivin mRNA expression in a dose and time dependent manner. The maximal effect was achieved at the concentration of 100 nmol/L, at which survivin expression level was down-regulated by 75.91%. The inhibition rate of cell growth was 55.29% （P〈0.01） and the markedly increased apoptotic rate was 45.70% （P〈0.01）. In vivo intratumoural injection of 50 μg siRNA-survivin could notably orevent the growth of bladder cancer （P〈0.01） in xenografted animals. Conclusion The application of siRNA-survivin could markedly inhibit survivin expression in bladder cancer cell line by inducing apoptosis and inhibiting the growth of the tumour. It may become a new gene therapy tool for bladder cancer.     

BIRC5基因沉默对人膀胱癌细胞系T24增殖抑制的研究

目的 探讨靶向抑制膀胱癌细胞系T24中BIRC5基因的表达后,该基因编码产物Survivin蛋白对膀胱癌增殖的影响.方法 将设计合成的靶向BIRC5序列的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染膀胱癌细胞系T24,应用RT-PCR技术和Western blot方法检测目的基因转录及表达水平.通过生长曲线来检测survivin基因沉默后细胞增殖的改变.结果 特异性siRNA转染后,survivin mRNA及蛋白水平均明显下降.与空白对照组相比较,转染组细胞增殖情况明显受到抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 特异靶向survivin的siRNA能有效抑制survivin的表达,显著抑制细胞的增殖,为膀胱癌的临床治疗提供新方向.     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响

目的探讨中成药得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应（RT—PCR）法测定survivin mRNA的表达。结果（1）得力生在4mL／L-100mL／L浓度范围内可抑制A549细胞增殖,此作用与药物体积浓度无明显相关关系,但该作用具有时间依赖性（r=0．991,P=0．001）。（2）20mL／L浓度的得力生在体外可诱导A549细胞凋亡,且其作用具有时间依赖性（r=0．997,P=0．049）。（3）RT—PCR结果显示,得力生可明显抑制A549细胞中表达survivin,与对照组相比,差异具有统计学意义（r=4．333,P〈0．05）。结论得力生可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与抑制survivin基因表达有关。     

靶向抑制survivin对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响

目的 探讨反义survivin—脂质体复合物对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响及机制,为胰腺癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法 用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胰腺癌细胞系PANC—1细胞;通过RT—PCR、Western印迹试验检测survivin表达水平;MTY法测量细胞生长情况;流式细胞术测定caspase—3活性及凋亡率;电镜观察细胞形态学变化;应用激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价脂质体反义复合物在亚细胞水平对survivin蛋白分子的影响。结果 反义survivin脂质体复合物有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,IC50值为300nmoL／L,最大效应浓度为500nmoL／L,此时表达水平下调了80％。类似细胞生长抑制结果为MTY实验所证实。与此同时,caspase—3活性和凋亡率随转染时间延长而逐渐递增,并出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。免疫荧光分析,标记有FITC—绿荧光染色的survivin蛋白分子在未转染的细胞浆中清晰可见,并呈“斑点”状分布;而在转染细胞中几乎没有发现,但是符合细胞凋亡的形态学特征。结论 靶向抑制联系细胞增殖和凋亡的关键分子—survivin在胰腺癌治疗中有良好的应用前景。     

槲皮素对人肺癌细胞株A-549细胞增殖的抑制作用

目的：观察槲皮素对人肺癌细胞株A-549细胞增殖和凋亡的影响。方法以不同浓度槲皮素培养人肺腺癌细胞株A-549细胞后,采用MTT法检测槲皮素对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化;通过倒置显微镜、Heochst33258荧光染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变;Western blot方法检测凋亡抑制蛋白Survivin的表达情况。结果不同浓度槲皮素作用于人肺腺癌细胞株A-549细胞24h后,细胞存活率显著降低,且与剂量呈依赖关系。15、30、60μmol/L的槲皮素作用于人肺腺癌细胞株A-549细胞24h后,细胞阻滞发生在G2/M期;凋亡率分别为（7.24±1.73）%、（12.57±2.7）%和（26.02±1.67）%,与浓度为0的凋亡率[（2.67±2.32）%]比较,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;从形态学上观察到肺癌细胞发生凋亡或坏死。通过Western blot检测发现,随着槲皮素作用浓度的增加Survivin蛋白的表达逐渐降低。结论槲皮素对人肺癌细胞株A-549细胞株有抑制其增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期阻滞及抑制凋亡抑制蛋白Survivin的表达有关。     

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞增殖及APC基因表达的影响

目的:探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As₂O₃）对人膀胱癌T24细胞增殖及腺瘤性结肠息肉病相关基因（adenomatous polyposis coli,APC）表达的影响。方法:采用2、4、8 μmol/L的As₂O₃处理T24细胞,MTT法检测T24细胞增殖抑制率;脱氧核糖核酸原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;用RT-PCR及Western blot法分别检测As₂O₃对T24细胞中APC mRNA和蛋白表达的影响。结果:As₂O₃在2~8 μmol/L浓度范围内处理T24细胞72 h可有效抑制细胞增殖（P<0.01）;促进细胞凋亡（P<0.01）;增加APC mRNA和蛋白表达（P<0.01）。结论:在一定浓度范围内（2~8 μmol/L）As₂O₃可以有效抑制T24细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与上调APC基因的表达有关。     

顺铂诱导survivin表达改变与宫颈癌细胞化疗敏感性的关系

目的探讨survivin基因在顺铂(DDP)诱导的宫颈癌细胞凋亡中的作用.方法用宫颈癌Hela细胞株进行培养传代,MTT试验检测DDP不同药物浓度对宫颈癌细胞生长的抑制作用.分别在加药前、加药后24、48、72 h和96 h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测survivin mRNA和蛋白的表达.同时利用流式细胞术定量检测细胞周期和细胞凋亡.结果 DDP对宫颈癌细胞生长均有明显的抑制作用,并有浓度和时间的依赖性.随浓度增加,宫颈癌细胞凋亡率表现先上升,后下降;随时间延长,在高浓度DDP组凋亡率明显增加,在低浓度DDP组凋亡率增加不明显.0.1 mg/L和1 mg/L DDP处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加.结论小剂量顺铂处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加,这可能是宫颈癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一.