成纤维样滑膜细胞Toll样受体在类风湿性关节炎的研究进展

Toll样受体（toll-like receptor,TLRs）是一种I型跨膜蛋白受体,可识别微生物上特定结构的病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）和宿主自身损伤细胞产生的损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns,DAMPs）,在天然免疫中发挥着重要作用。     

炎性复合体mRNA在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的研究炎性复合体(inflammasomes)在类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及对细胞自身的影响。方法 (1)用Real-time PCR检测IPAF和NALP1 mRNA在3例关节创伤(正常组)、4例骨关节炎(OA组)和6例RA(RA组)患者滑膜细胞中的表达情况;(2)分别用培养液(对照组)、脂多糖(LPS,LPS组)、LPS+苄氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-(O-甲酰)-氟甲基酮(Z-VAD-FMK,Z-VAD-FMK组)、肿瘤坏死因子(TNF,TNF组)及TNF+Z-VAD-FMK处理6例RA患者滑膜细胞24 h后,应用Real-time PCR技术检测IPAF和NALP1 mRNA表达情况。结果 (1)OA组IPAF和NALP1的mRNA表达均明显高于正常组和RA组(P<0.01),RA组IPAF和NALP1的mRNA表达均高于正常组,但差异无统计学意义。(2)TNF组IPAFmRNA较对照组表达增加达408%(P<0.05);TNF组NALP1 mRNA较对照组表达增加达119%(P<0.05),LPS组的水平是TNF组的1.18倍(P<0.05)。结论炎症因子TNF影响炎性复合体mRNA在RA-FLS中的表达。     

E2F2在类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞中的表达研究

目的 研究E2F2在类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞（RA FLs）中的表达,分析其表达与类风湿关节炎病理特征的关系,以及调控E2F2表达的机制。方法 采用瞬时转染的方法将E2F2 siRNA转染入RA FLs后,应用RT-PCR 法筛选干扰效率最高的siRNA,并应用MTS法检测干扰E2F2表达后对RA FLs增殖的影响,采用ELISA法检测E2F2下游基因表达的变化。采用RT-PCR法检测分别使用TNF-α和PDTC刺激RA FLs以及共同使用TNF-α和PDTC刺激RA FLs后E2F2的表达。通过染色质免疫沉淀法（ChIP）检测调控E2F2表达的方式。结果 在siE2F2后,与对照组相比E2F2在mRNA水平表达显著降低（P<0.01）,细胞增殖能力减弱（P<0.05）。在RA FLs中TNF-α通过NF-κB信号通路调控E2F2表达。结论 在RA FLs中E2F2存在高表达现象,并且E2F2的高表达参与RA的病变过程,TNF-α通过NF-κB信号通路调控E2F2表达,可做为治疗类风湿关节炎的新靶点。     

人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞培养及生物学特性研究

目的 探讨人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)的分离及生物学特性.方法 分别取4例RA患者膝关节滑膜组织、1例软骨瘤患者膝关节滑膜组织和1名健康人膝关节滑膜组织,采用组织块培养法培养FLS,使用相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术(FCM)检测培养细胞的表面标志,酶联免疫吸附法定量检测RA第4代FLS细胞培养液上清液白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素1β(IL-1β)水平.结果 组织块培养法成功培养出FLS.RA患者FLS细胞4~7 d细胞数量明显增加,8~12 d细胞可以长满瓶底.第3代以后细胞均质性最好,3~7代细胞稳定且增殖活跃,8代以后增长缓慢并逐渐老化.软骨瘤患者和健康人滑膜组织培养7 d后才有散在单个FLS细胞爬出,大约16 d后FLS细胞可以长满瓶底.FCM分析RA第4代FLS CD90+细胞的百分率为99.04%,CD3+为2.73%,CD3-CD19+为0.29%,CD3-CD16+CD56+为2.81%,CD14+为5.89%,CD55+为54.17%.RA第4代FLS细胞培养上清液IL-1RI浓度为(158.63±20.32) pg /ml,IL-1β为(4.67±0.82) pg/ml. 结论 组织块培养法能有效分离RA患者FLS,FLS具有高水平表达CD90、IL-1RI和IL-1β的特性.     

CXCL16/CXCR6在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及其在滑膜细胞增殖中的作用

目的：探讨趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）中的表达及其对FLS增殖的作用。方法:纳入RA 8例、骨关节炎（osteoarthritis,OA）7例、健康对照3例,采用组织块贴壁方法体外分离培养人膝关节FLS,第3~5代细胞用于后续研究。Western blot方法检测CXCL16及其受体CXCR6在3组FLS的表达水平;不同浓度的重组人CXCL16(0、10、50、100、200 μg/L)刺激3组FLS后,细胞活性检测试剂盒-8（cell counting kit,CCK-8）检测FLS增殖水平;Western blot方法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS中pAKT/AKT水平;ELISA法检测重组人CXCL16刺激后RA-FLS培养上清中TNF-ɑ、IL-6、MMP-3、RANKL水平。结果: RA-FLS中CXCL16、CXCR6蛋白表达水平均明显高于OA组和对照组（P<0.05）,OA组和对照组间差异无统计学意义;重组人CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后RA-FLS增殖能力明显高于非刺激组（P均<0.05）,OA组和对照组FLS经CXCL16刺激后细胞增殖水平无明显变化（P>0.05）;200 μg/L CXCL16刺激后,RA-FLS表达pAKT/AKT明显增高;CXCL16（50、100、200 μg/L）刺激后,RA-FLS培养上清中IL-6和RANKL表达明显增加（P < 0.05）,而MMP-3、TNF-ɑ水平无明显变化。结论:CXCL16及其受体在RA-FLS中表达增高,重组人CXCL16可促进RA-FLS增殖活化、分泌炎性因子增加,提示CXCL16参与了RA的滑膜炎症。     

佐剂诱导关节炎大鼠模型的建立及成纤维样滑膜细胞的分离

目的建立类风湿性关节炎(RA)动物模型;从炎性关节滑膜中分离成纤维样滑膜细胞(FLS)。方法应用热灭活结核杆菌H37Ra菌株与矿物油混合制备改良的佐剂,尾根部皮内注射Lewis大鼠诱导关节炎;剪取成功诱导关节炎大鼠的病变踝关节,从中剥离滑膜组织,充分剪碎后采用胶原酶消化法分离成纤维样滑膜细胞。结果成功诱导了大鼠关节炎,发病率为100%,发病时间有规律,组织学表现与RA相似;成功在体外培养了FLS并对其进行了鉴定,掌握了其生长形态和特征。结论成功制备RA动物模型并获得FLS,为今后RA发病机制探索和药物评价提供了良好的体内动物模型和体外细胞模型。     

赤芍801对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞fas/faslmRNA表达的影响

目的 :探讨赤芍801对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中fas/fasl mRNA表达的影响。方法:RA患者关节液原代培养获取FLS,分别用浓度为0、4和64μg/mL的赤芍801作用24h后,提取总RNA并逆转录成cDNA,分别采用RT-PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测fas/fasl的表达。结果:逆转录PCR结果显示,fasl mRNA在RA FLS中未被检测出,fas mRNA在RA FLS中有表达。实时荧光定量PCR结果表明fas mRNA相对表达量在4μg/mL赤芍801刺激24h后增加无统计学意义。但在64μg/mL赤芍801刺激24h后增加有统计学意义(P<0.05)。结论:赤芍801可体外诱导RA FLS fas mRNA表达上调;未检测到fasl mRNA在RA FLS中的表达。     

丹参诱导类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL的表达

目的 观察丹参对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞中Fas/FasL mRNA表达的影响.方法 RA患者关节滑液经原代培养,获取成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs),分别用终浓度为0、0.2 mg/ml和0.4 mg/ml的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存.随机选取正常人外周血,通过分离单个核细胞提取总RNA并逆转录成cDNA保存作为阳性对照.分别采用RT-PCR和SYBR Green适时荧光定量PCR方法检测Fas/FasL mRNA的表达.结果 RT-PCR结果显示,FasL只在外周血标本上有表达,而在各浓度处理的RA FLSs没有检测到;Fas无论在外周血还是不同浓度处理的RA FLSs上均有表达.定量PCR结果显示,Fas的表达量随丹参浓度增加而增加,并且在丹参浓度为0.4 mg/ml时具有统计学差异(P<0.05).Fas mRNA的表达与相应浓度下RA FLSs的凋亡率存在相关性(r=0.998,P<0.05).结论 丹参可体外诱导RA患者成纤维样滑膜细胞Fas mRNA表达上调;未检测到FasL mRNA在RA患者FLSs中的表达.Fas mRNA的上调可能与丹参诱导RA FLSs凋亡有关.     

成纤维样滑膜细胞激活在类风湿关节炎中的关键作用及其靶向治疗的研究进展

类风湿关节炎(RA)是临床常见病和多发病,以滑膜组织增生、间质炎性细胞浸润、微血管新生、血管翳形成及软骨和骨组织的破坏等为主要病理特征。目前,其发病机制尚未明确,有越来多研究表明成纤维样滑膜细胞的异常激活在疾病发生、发展中起着关键的作用。靶向成纤维样滑膜细胞的研究策略可为有效治疗RA提供新思路。     

类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康对照外周血(peripheral blood,PB)、10例RA患者滑液(synovial fluid,SF)中NK-22细胞(NKp44+CCR6+NK细胞)比例。流式细胞术分选滑液NK-22细胞,鉴定细胞纯度;体外悬浮培养2周,佛波酯(PMA()20ng/ml)和ionomycin(0.5μmol/L)刺激后NK-22细胞培养上清液分别作用于成纤维样滑膜细胞(fibroblastlike synoviocytes,FLS)24 h、48 h、72 h、96 h,MTT法检测成纤维样滑膜细胞增殖情况。ELISA检测NK-22细胞培养上清中IL-22、T0.N05F)-;αR浓A度患。者结滑果液①NKR-A22患细者胞外比周例血为N4K.5-62%2细,明胞显比高例于为自0身.9外56周%,血明比显例高1于.31健5%康(对P<照0.外05)周。血②N流K式-22分细选胞2比×1例04个0.0N0K3%-2(2P细<胞,细胞纯度>90%。③PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清作用于成纤维样滑膜细胞24 h、48 h、72 h、96 h可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖(P<0.05)。④PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清中IL-22、TNF-α浓度分别为941.82 pg/ml和368.10 pg/ml。结论类风湿关节炎患者关节液NK-22细胞可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖,其可能机制与NK-22细胞能分泌白介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子(TNF-α)有关。     

银杏内酯B对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的影响

①目的探讨银杏内酯B对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synovi-al cells,FLS）的影响。②方法雄性Wistar大鼠皮内注射Ⅱ型胶原,建立CIA大鼠模型,然后取其滑膜组织用胶原酶消化法进行原代培养,取3~5代的滑膜细胞。应用MTT比色法检测1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L的银杏内酯B作用24、48和72h后FLS的增殖水平。③结果（1×10-9~1×10-5）mol/L的银杏内酯B作用24、48和72h,均能明显抑制FLS的增殖（P〈0.05）,且具有时间、剂量依赖性。④结论银杏内酯B能明显抑制CIA大鼠FLS的增殖并呈时间、剂量依赖性改变。     

HIF-1α及 VEGF 在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的研究类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞在体外常氧和缺氧培养条件下缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的差异性及意义。方法对RA患者及骨关节炎（OA）患者的关节滑膜细胞在体外常氧和缺氧条件下分别进行培养,根据培养条件分为常氧组、缺氧6h组及缺氧12h组;采用免疫印迹法分别检测各组成纤维样滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达情况。结果与常氧组相比,缺氧6h及12h的RA和OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时RA和OA患者缺氧12h组滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达高于缺氧6h组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。RA和OA患者3组滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均呈正相关（均P＜0.05）。常氧组RA与OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均无统计学差异（均P＞0.05）;而缺氧6h和12h组中RA滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达均高于OA滑膜细胞,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论在缺氧条件下RA患者滑膜细胞HIF-1α及VEGF表达显著升高且密切相关,可能缺氧-HIF-1α-VEGF这一信号途径在RA的发生、发展中起着重要作用。     

雷公藤甲素抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的自噬与存活

目的 探讨雷公藤甲素抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞（rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes, RA-FLSs）的自噬与存活。方法 体外培养人RA-FLSs细胞,使用不同浓度的雷公藤甲素（0、10、20、30、40、50 ng/mL）处理RA-FLSs细胞,处理24、48、72 h后,采用CCK-8试剂盒测定RA-FLSs的增殖能力,确定对细胞增殖能力抑制50%时所需的雷公藤甲素浓度（半数最大抑制浓度,IC₅₀）。基于RA-FLSs增殖能力测定的实验结果,选取最佳雷公藤甲素作用浓度处理RA-FLSs,处理24、48、72 h后,检测RA-FLSs自噬荧光强度;采用Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、Bax和caspase-3蛋白表达水平。结果 雷公藤甲素呈剂量依赖性的抑制RA-FLSs细胞的增殖,雷公藤甲素浓度为40 ng/mL时,细胞增殖活力显著下降（P<0. 001）,24、48、72 h的IC₅₀分别是42.31、40.71、42.71 ng/mL。因此后续的实验选用雷公藤甲素的上药浓度为40 ng/mL。与空白组相比,40 ng/mL雷公藤甲素作用RA-FLSs 24、48、72 h后,均能减弱LC3Ⅱ自噬荧光、显著降低自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达水平（P<0. 05）,显著增加凋亡蛋白Bax、caspase-3表达水平（P<0.05）;且在处理48 h时,40 ng/mL雷公藤甲素抑制自噬及促进凋亡的作用较处理24 h及72 h强。结论 雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎的作用机制可能与通过抑制RA-FLSs自噬,从而对RA-FLSs产生抑制增殖和促进凋亡作用。这一发现表明雷公藤甲素是一种治疗类风湿性关节炎的潜在药物。     

uPAR在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的功能及机制

【目的】 采用RNA干扰(RNAi)技术阻断类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)基因的表达,探讨uPAR基因沉默后对RA-FLS功能产生的影响及有关机制?【方法】 收集行关节置换术或滑膜清理术的RA患者的滑膜组织,组织块法培养RA-FLS?通过阳离子脂质体转染的方法,转染体外合成的特异性uPAR-siRNA;利用荧光定量PCR法和Western blotting法检测uPAR沉默效果;CCK8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期改变;Transwell趋化小室测定细胞的迁移能力;Western blotting技术分析沉默uPAR基因对RA-FLS中PI3K/AKT通路的影响?【结果】 uPAR-siRNA能有效阻断RA-FLS中uPAR基因在mRNA和蛋白水平上的表达?沉默uPAR基因后,细胞48?72?96 h增殖抑制率分别为(17.51 ± 2.27)%?(28.62 ± 4.82)%?(22.91 ± 5.78)%,显著高于对照组(P < 0.05);uPAR-siRNA干扰后,被阻滞于G0/G1期的细胞增加,而S和G2/M期的细胞减少;Transwell趋化小室结果显示:与对照组相比,特异性干扰组的RA-FLS迁移细胞数(35 ± 11)相比空白对照组(138 ± 21)和NC-siRNA组(136 ± 19)明显减少(P < 0.05);转染后的RA-FLS相对于对照组,PI3K?AKT?GSK3β的磷酸化水平显著降低(P < 0.05)?【结论】 uPAR在RA-FLS的增殖?周期及迁移中起重要作用,这可能与其对PI3KAKT通路的激活有关?     

IL-27诱导人成纤维样滑膜细胞产生IL-6的免疫机制

目的：探讨白介素-27（interleukin-27,IL-27）对人成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocyte,FLS）的体外活化效应及细胞内信号传导机制。方法：IL-27处理FLS后,酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测细胞培养上清液中白介素-6（interleukin-6,IL-6）水平的变化;信号通路抑制剂处理FLS后1 h,用IL-27刺激FLS 48 h,ELISA检测细胞上清液中IL-6的水平变化;Western blot检测IL-27刺激FLS不同时间细胞内信号通路蛋白的磷酸化水平。结果：IL-27能刺激正常关节来源的FLS（N-FLS）和RA患者关节来源的FLS(RA-FLS)产生IL-6,IL-27（50 ng/mL）刺激N-FLS产生的IL-6水平[（1329.10±113.15） pg/mL]和刺激RA-FLS产生的IL-6水平[（1 583.70±129.54） pg/mL]较其阴性对照明显升高（P=0.001,P=0.001）。用不同浓度（0、10、20、50、100 ng/mL）IL-27分别处理2种细胞不同时间（0、12、24、48 h）,产生IL-6的水平随浓度和时间增加而升高,具有时间和剂量依赖性。JAK抑制剂AG490和JNK抑制剂SP600125可显著抑制IL-27诱导N-FLS和RA-FLS产生IL-6。IL-27刺激N-FLS和RA-FLS后,细胞内信号通路蛋白JAK2和JNK的磷酸化水平明显升高（JAK2：F=303.000,P=0.000;F=640.400,P=0.000;JNK：F=98.840,P=0.000;F=54.820,P=0.001）。结论：IL-27可通过激活FLS细胞内JAK2和JNK信号通路上调FLS产生IL-6水平,从而增强关节滑膜的炎症反应。     

昆母汤醇提液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡及 caspase －3表达的影响

目的：观察昆母汤醇提液对人类风湿关节炎（ RA）成纤维样滑膜细胞（ FLS）凋亡及对caspase－3表达的影响,探讨昆母汤治疗 RA 的部分作用机制。方法滑膜组织取自行关节置换术或关节镜检查术的8例活动性 RA 患者,分离出 FLS 进行原代培养,采用流式细胞仪检测法检测昆母汤醇提液对 RA －FLS 细胞凋亡率的影响,采用酶联免疫吸附测定法检测培养上清液 caspase －3蛋白含量的变化。结果昆母汤醇提液和甲氨蝶呤均可显著促进 RA －FLS 的凋亡,且昆母汤醇提液促 RA －FLS 凋亡能力在一定程度上呈剂量依赖性。高剂量昆母汤醇提液可使 TNF －α诱导的 caspase －3表达量增加。结论昆母汤可能通过促进 caspase －3的表达来促进RA －FLS 凋亡,具有治疗 RA 的潜在价值。     

红景天苷对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用及其意义

目的：探讨红景天苷对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）增殖的抑制作用,阐明其控制类风湿关节炎（RA）的分子机制。方法：体外培养HFLS-RA,采用TNF-α及不同浓度红景天苷处理细胞,分为正常对照组（0.0μg·L^-1TNF-α）、模型对照组（10.0μg·L^-1TNF-α）及12.5、25.0、50.0、100.0μmol·L^-1红景天苷组（10.0μg·L^-1TNF-α＋相应浓度红景天苷）。MTT法检测HFLS-RA的增殖活力,ELISA法检测细胞上清液中β-catenin、基质金属蛋白酶7（MMP-7）和Cyclin-D1表达水平,Western blotting法检测细胞中β-catenin蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型对照组HFLS-RA增殖活力明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组HFLS-RA增殖活力虽降低,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50.0和100.0μmol·L^-1红景天苷组HFLS-RA增殖活力降低（P<0.05）。与正常对照组比较,模型对照组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平虽降低,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50和100μmol·L^-1红景天苷组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,模型对照组细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于正常对照组（P<0.01）;12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组细胞中β-catenin蛋白表达水平虽低于模型对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50.0和100.0μmol·L^-1红景天苷组细胞中β-catenin蛋白表达水平低于模型对照组（P<0.05）。结论：红景天苷可抑制HFLS-RA的增殖,其控制RA的机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关联。     

白藜芦醇对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 研究白藜芦醇（Res）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法 应用四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM）检测FLS的增殖水平和细胞周期分布。结果 50～400μmol/L的Res作用24、48h和25～400μmol/L的Res作用72h,均能明显抑制FLS的增殖（P＜0.05）,且具有时间剂量依赖性。细胞周期分析显示与对照组比较,Res处理组的FLS的S期细胞所占百分比例明显增加（P＜0.01）;G2/M期细胞所占百分比例明显减少（P＜0.01）,并呈剂量依赖性。结论 Res对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞具有生长抑制作用,其抗增殖效应呈现一定的剂量、时间依赖方式。该作用可能与Res能够使FLS的细胞周期阻滞于S期有关。     

RNA干扰HIF-1α对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的VEGF表达及增殖的影响

目的 探讨shRNA特异性干扰沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）的血管内皮生长因子（VEGF）表达及其增殖的影响.方法 获取9例RA患者滑膜组织进行RA-FLS的分离培养及传代.将FLS分为4组：常氧组、缺氧组、阴性质粒组（转染阴性质粒）和阳性质粒组（转染HIF-1α阳性质粒）,常氧组进行常规培养,后3组进行缺氧培养12h;采用Western blot和qRT-PCR法分别检测各组FLS中HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达情况.将缺氧组、阴性质粒组和阳性质粒组的FLS分别于缺氧条件下培养6、12、24、48h,应用MTT比色法检测各组细胞增殖情况.结果 与常氧组相比,缺氧组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达明显升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而阴性质粒组和缺氧组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达水平无明显差异（P＞0.05）;阳性质粒组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGF mRNA较缺氧组下调,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.4组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGF mRNA表达呈正相关（P＜0.01）.缺氧培养12h后阳性质粒组的FLS生长较缺氧对照组及阴性质粒组减慢,差异有统计学意义（P＜0.05）,而后两组FLS生长无统计学差异（P＞0.05）.结论 RNA干扰HIF-1α表达能有效下调RA-FLS中HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA水平,并且能抑制FLS的异常增殖.