西比灵对缺血性神经元胞质内钙离子和细胞活性的影响

目的　研究类缺血状态下神经元胞质内游离钙离子及细胞活性变化 ,探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及西比灵的治疗意义 .方法　利用 Ca2 +指示剂 Flu- 3/AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的神经元 ,共聚焦技术检测细胞内荧光强度的变化 ,利用四唑蓝 (MTT)比色试验检测缺血性神经元的损伤程度 .结果　给予神经元类缺血处理 10 min后 ,缺血组神经元胞质内钙离子浓度和细胞损伤程度明显高于西比灵预处理组 (P<0 .0 1) .结论　西比灵可明显抑制神经元胞质内钙离子的升高 ,减轻由此引发的缺血性神经元的损伤程度     

三磷酸腺苷引起大鼠三叉神经节胞内钙离子信号转导机制的研究

目的探讨三磷酸腺苷(ATP)对三叉神经痛大鼠感觉神经元内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及其信号转导机制。方法 SD大鼠眶下神经缩窄造成三叉神经痛模型,造模后1周处死大鼠,取出三叉神经节(TG),分离出完整的小直径神经元(﹤600μm2)用于钙离子成像,通过使用荧光染料来标记相关激动剂,检测毒胡萝卜内酯(Tg,1μmol/L)、咖啡因(Caff,20 mmol/L)和ATP(100μmol/L)作用下TG小直径神经元内[Ca2+]i变化。结果①在正常外液和无钙外液中,在大鼠TG小直径神经元上分别给予Tg、Caff和ATP均能够引起[Ca2+]i不同程度升高;②在无钙外液中,ATP引起的TG神经元[Ca2+]i升高可被Tg可逆性地抑制(n=8,P<0.01);③在无钙外液中,ATP引起的TG神经元[Ca2+]i升高可被P2受体阻断剂苏拉明(suramin,100μmol/L)明显抑制;④在正常外液中,Tg引起TG神经元[Ca2+]i升高,当升高达到最大后再次给予ATP,仍然能引起[Ca2+]i进一步升高。结论在大鼠TG神经元中同时存在IP3敏感钙库和ryanodine敏感钙库。ATP可通过两种途径引起细胞内[Ca2+]i升高,一种途径是激动P2Y受体引起IP3敏感钙库的Ca2+释放,另一种途径是激动P2X受体引起细胞外Ca2+内流。在无钙外液中,ATP引起的TG神经元[Ca2+]i升高是通过IP3敏感钙库释放引起的。     

NGF和CgA对RWPE-1细胞内钙离子浓度变化的影响及其在慢性前列腺炎中的作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)和嗜铬颗粒蛋白A(CgA)处理后前列腺上皮细胞系RWPE-1细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的差异及NGF和CgA在慢性前列腺炎(CP)发病中的作用.方法 不同浓度的NGF和CgA(50、200 ng/ml)刺激RWPE-1细胞,用激光共聚焦显微镜观察不同浓度的NGF和CgA刺激后细胞内[Ca2+]i变化,加入TRPV1受体拮抗剂后继续观察细胞内[Ca2+]i变化.然后,将正常细胞外液换成D-PBS,再加入NGF和CgA观察细胞内[Ca2+]i变化.结果 50 ng/ml NGF和CgA刺激细胞后,细胞内[Ca2+]i未见明显变化.200 ng/ml NGF和CgA刺激细胞后,细胞内[Ca2+]i明显增加,加入TRPV1受体拮抗剂后,细胞内[Ca2+]i未见明显变化.将正常细胞外液换成D-PBS,用NGF和CgA刺激后,细胞内[Ca2+]i未见明显改变.结论CP的发生可能是通过分泌和释放NGF和CgA,引起前列腺上皮细胞膜TRPV1通道开放,促使细胞内钙离子浓度增加,导致前列腺上皮分泌功能下降所致.     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞内游离钙离子浓度的影响

目的观察8-Br-cAMP和槲皮素对人食管癌Eca-109细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组细胞同时培养48 h,用激光共聚焦显微镜观察3组细胞内钙离子的荧光强度.结果对照组细胞内游离钙离子荧光强度为59.2±8.1,Br组细胞内游离钙离子荧光强度为63.3±8.5,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);Q组细胞内游离钙离子荧光强度为113.3±12.5,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论提示Br和Q诱导细胞凋亡的信号传导途径可能存在一定差异.     

齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对ROS和细胞内Ca2+含量的影响

目的 探讨齐墩果酸对白血病Jurkat细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用,分析凋亡发生与细胞内活性氧(ROS)及钙离子浓度([Ca2+]i)变化的关系.方法 应用MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期;DCFH-DA荧光定量法检测ROS含量;Fluo-3AM荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化.结果 齐墩果酸对Jurkat细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,0,40,80,160 μmol/L齐墩果酸作用24 h细胞凋亡率分别为(7.36±0.40)％、(19.80±1.59)％、(29.39±0.64)％、(34.72±0.94)％,G0/G1期细胞比例分别为(54.26±1.43)％、(85.83±0.91)％、(91.18±1.32)％、(92.90±1.19)％.80 μmol/L和160μmol/L齐墩果酸处理24 h,细胞中ROS和[Ca2+]i水平均明显高于对照组(P＜0.05),ROS和[Ca2+]i水平均与细胞凋亡率呈正相关(r分别为0.95、0.97).结论 细胞中ROS和Ca2+可能参与了齐墩果酸对Jurkat细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用.     

异丙酚对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响

目的:评价异丙酚对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响,探讨其对听觉外周感受器(耳蜗)的作用。方法:急性分离豚鼠耳蜗外毛细胞,选择30个活力较高的外毛细胞,随机分为3组(n=10):对照组(C组)、30μmol/L异丙酚组(P1组)和100μmol/L异丙酚组(P2组)。用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,P1组和P2组分别给予30、100μmol/L异丙酚或咖啡因处理5min,然后加入氯化钾,采用激光共聚焦显微镜测定细胞内荧光强度的峰值,反映细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果:异丙酚可抑制氯化钾诱发的[Ca2+]i增加并与浓度呈正相关,而对咖啡因诱发的[Ca2+]i增加无明显影响。结论:异丙酚可抑制豚鼠耳蜗外毛细胞Ca2+跨膜内流,降低[Ca2+]i,而对内质网功能无明显影响。     

舒缩血管物质对肺动脉平滑肌细胞膜电位、胞浆及线体Ca2+的作用效应

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO)对肺动脉平滑肌细胞膜电位、胞浆钙离子浓度([Ca2+]i)和线粒体钙离子浓度([Ca2+] mit)的影响.方法:肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterysmooth muscle cells,PASMCs)分别负载相应的荧光探针:胞浆钙荧光指示剂(Fluo - 4/AM)、细胞膜荧光指示剂(Di -8 - ANEPPS)、细胞线粒体钙荧光指示剂(Rhod -5F),然后给予一定浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO),在激光共聚焦扫描显微镜下,测定[Ca2+]i荧光、细胞膜电位、[Ca2+] mit荧光.结果:AngⅡ基本不影响细胞膜电位,但可一过性引起[Ca2+]i升高,这种[Ca2+]i的升高可导致[Ca2+]mit小幅升高,进而启动线粒体钙离子的释放和[Ca2+] mit的大幅度降低;NO可迅速减弱PASMCs膜电位荧光强度,使细胞处于明显的超极化状态,同时,[Ca2+]i迅速下降,300s时达到最低,并维持在这一水平,[Ca2+]mit也迅速降低,形成低谷平台后迅速回升,并基本稳定于、稍低于初始值的水平.结论:AngⅡ收缩血管可能与线粒体钙释放和[Ca2+] mit的大幅降低有关;NO舒张血管可能与细胞超极化、[Ca2+]i、[Ca2+] mit降低有关.     

丙泊酚对人子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网钙释放功能的影响

目的观察丙泊酚对足月产妇子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网Ca2+释放功能的影响,探讨其抑制子宫平滑肌收缩功能的可能机制。方法取正常孕足月待产的子宫平滑肌组织,胶原酶消化法培养子宫平滑肌细胞。①40个孔板中活性良好的子宫平滑肌细胞随机等分为4组(n=10):对照组(C组)、低浓度丙泊酚组(P1组)、中浓度丙泊酚组(P2组)、高浓度丙泊酚组(P3组),用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,分别给予Hank液、10μmol/L丙泊酚(终浓度)、50μmol/L丙泊酚、250μmol/L丙泊酚处理20 min,然后加入40 mmol/L氯化钾,每个孔板在激光共聚焦显微镜下随机选定10个子宫平滑肌细胞,利用图形分析软件分析细胞内钙荧光强度,取钙荧光强度峰值的平均值反映子宫平滑肌细胞游离Ca2+浓度([Ca2+]i)。②再以20 mmol/L咖啡因代替氯化钾,其余处理及分组同前。结果①与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),加入氯化钾后[Ca2+]i均升高(P<0.01);与C组相比,加入氯化钾后P1组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),P2组和P3组加入氯化钾后[Ca2+]i明显低于C组(均P<0.01),且P3组[Ca2+]i低于P2组(P<0.05)。②与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(均P>0.05),加入咖啡因后[Ca2+]i升高(P<0.01);加入咖啡因后各组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚可浓度依赖性地抑制足月产妇子宫平滑肌细胞电压依赖型钙通道开放而减少Ca2+跨膜内流,而对肌浆网Ryanodine型Ca2+释放功能无明显影响。     

丹曲林钠对类缺血小鼠皮质神经元的[Ca2+]i和细胞活力的影响

目的: 观察类缺血后神经元内钙离子浓度及细胞活性的变化,探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及丹曲林钠(Dantrolene)的作用. 方法: 采用孕小鼠皮层神经元培养技术,应用相差显微镜观察培养的神经元形态,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子浓度. 结果: 给予神经元类缺血处理5 min后,神经元内钙离子浓度与丹曲林钠组无显著差异(P>0.05). 类缺血处理10 min后再灌注15 min细胞损伤程度较丹曲林钠干预组[Ca2+]i和MTT有显著性差异(P<0.01). 结论: 丹曲林钠可抑制神经元细胞内钙离子浓度的升高,降低缺血性神经元损伤的程度.     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.     

内皮素通过增强库容性钙内流促进肺血管平滑肌细胞增生

目的通过观察内皮素-1(ET-1)诱导人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增生的作用机制及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化,探讨ET-1在肺动脉高压(PAH)发病过程中的作用,为进一步干预治疗提供有效的基础依据。方法体外培养HPASMCs并分为:正常对照组和内皮素组(ET-1:0.01μmol/L,0.1μmol/L,1.0μmol/L)。分别应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和细胞计数检测细胞的增生情况,荧光钙成像法测定[Ca2+]i,运用RealTime-PCR、WesternBlotting检测编码钙库操控性钙通道(SOC)的规范瞬时受体电位1(TRPC1)基因及蛋白表达情况。结果ET-1可促进HPASMCs增生,且ET-1诱导的细胞增生依赖于细胞外Ca2+的内流,ET-1处理的细胞中[Ca2+]i和库容性钙内流(CCE)显著升高,同时TRPC1基因转录与蛋白表达也明显增加。结论ET-1能显著促进肺血管平滑肌细胞增生,其机制可能与上调编码SOC的TRPC1表达、增加库容性钙内流使肺血管平滑肌细胞的[Ca2+]i异常升高有关。     

钙离子、钙通道与白血病的关系

目前治疗白血病的有效机制之一就是诱导白血病细胞的凋亡与分化,大量研究表明,诱导白血病细胞凋亡与分化的过程中都伴随着细胞内钙离子浓度([Ca2+ ])的变化.可见细胞内[Ca2+]对白血病细胞有着一定的影响.     

齐墩果酸对肝癌细胞Hep3B增殖和凋亡的作用研究

目的 研究齐墩果酸对人肝癌细胞株Hep3B增殖和凋亡的影响及其与细胞内钙离子浓度{[Ca2+]i}关系.方法 将浓度分别为40、80、100 μg/ml齐墩果酸作用于肝癌Hep3B细胞24 h以后,DAPI染色,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞形态变化;以11组不同浓度齐墩果酸 (5～400 μg/ml)作用Hep3B...     

As2O3引起LoVo细胞内钙离子浓度增高及意义

目的　观察LoVo细胞株经As2 O3 作用后细胞内钙离子浓度的改变并探讨其意义。方法　应用流式细胞仪观察亚二倍体细胞峰并检测LoVo细胞内的钙离子浓度。应用光镜、电镜观察As2 O3 对LoVo细胞生长的抑制作用、凋亡细胞形态和线粒体形态。结果　①As2 O3 引起细胞内Ca2 +浓度升高 (P <0 .0 1) ,呈剂量依赖关系 (P<0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 .0 μmol/L组Ca2 +浓度最高 ;②在各时间段 ,对照组的Ca2 +浓度无变化 (P >0 .0 5 ) ,而经As2 O3 作用后Ca2 +浓度出现变化 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 0min时Ca2 +浓度均已增高 ,10h时增高最明显 ,至 2 4h ,0 .5 μmol/LCa2 +浓度回复到 2 0min时的水平 ,1.0和 2 .0 μmol/L组则低于 2 0min时的浓度 ;③As2 O3 抑制LoVo细胞生长 ;④LoVo细胞经As2 O3 作用后在光镜、电镜下出现细胞凋亡的形态学改变 ,并见线粒体肿大、嵴破坏或消失。流式细胞仪检测发现高浓度组凋亡细胞数高于对照组和低浓度组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。结论　As2 O3 作用于LoVo细胞引起细胞内钙离子浓度增高 ,可能通过引起线粒体功能的改变而诱导细胞凋亡。     

Urocortin Ⅰ对缺氧/复氧损伤心肌细胞钙离子的影响

目的 观察UcnⅠ对成年大鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞钙离子的影响.方法 通过Langendorff离体心脏灌注系统,用Ⅱ型胶原酶逆行灌注法分离成年大鼠心肌细胞,培养20 h后随机分为正常组(N组)、缺氧/复氧组(L/R组)、UrocortinⅠ组(UcnⅠ组)、5-羟葵酸+UrocortinⅠ组(5- HD+UcnⅠ组).各处理组心肌细胞加入Fluo - 3/AM荧光探针,用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的荧光强度.结果 I/R组心肌细胞内钙离子浓度较N组高(P＜0.05),UcnⅠ组较N组荧光强度明显增强(P＜0.01),而5- HD+UcnⅠ组心肌细胞内钙离子荧光强度与UcnⅠ组比较明显降低(P＜0.05).结论UcnⅠ可使成年大鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞内钙离子浓度升高,5- HD则可阻断UcnⅠ的作用,提示UcnⅠ导致缺氧/复氧后心肌细胞钙离子浓度的升高可能跟ATP敏感性钾通道开放有关.     

大鼠肝癌细胞系H4-ⅡE钙内流的检测方法

目的利用大鼠肝癌细胞系H4-ⅡE建立一种适用于贴壁生长的细胞检测细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的方法.原理用荧光染料fluo-3在细胞内能与游离Ca2+结合.在一定波长的光激发下,可发出荧光,根据荧光的强度来检测细胞内游离Ca2+浓度及钙内流的方法.方法以H4-ⅡE细胞系为材料,通过Ca2+回加技术、荧光显微镜技术和UMANS计算机软件或Axon计算机成像系统来记录图像和处理数据.结果可检测、定量细胞内游离Ca2+的浓度,并可用以研究细胞钙信号的传递和传导机制.结论该方法较为简便、易行,相对费用较低,适用于国内实验室.     

丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察丹皮酚对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制。方法用不同浓度丹皮酚处理体外培养的LoVo细胞24、48、72、96 h,CCK-8比色法测定其对结肠癌LoVo细胞的活力的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;根据CCK-8结果分为丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)和对照组,处理48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化;RT-PCR和Western blot法检测RUNX3基因表达情况。结果丹皮酚能显著降低LoVo细胞存活率,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)处理细胞48 h后,凋亡率分别为(12.3±1.3)%、(22.4±1.5)%、(36.2±2.1)%,与对照组[凋亡率(2.3±0.9)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚组处理48 h后,细胞钙离子荧光强度分别为(41.36±4.62),(57.51±3.83)和(69.43±3.76),与对照组[荧光强度(24.45±3.74)]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚能上调RUNX3基因的表达,呈剂量依赖性。结论丹皮酚能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞内Ca2+含量和上调RUNX3基因的表达有关。     

甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞功能及细胞内游离钙的影响

目的:观察甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞分泌功能及对细胞内钙离子平均荧光强度的影响。方法:体外分离SD大鼠胰岛细胞进行单层细胞培养,与不同浓度甘油三酯(0、0.25、2.5、5.0、10.0mmol/L)共同孵育72小时,进行葡萄糖负荷试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素水平,以评价胰岛细胞功能变化;采用Flou-3/AM荧光染色法,共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子荧光强度的强弱,以间接反映细胞内游离钙的水平。结果:5.0、10.0mmol/L甘油三酯可抑制胰岛细胞的高糖刺激下的胰岛素分泌(p<0.05);甘油三酯组(2.5、5.0、10.0mmol/l)细胞内钙离子平均荧光强度均明显增强,与对照组比较有显著性差异(p<0.05)。结论:甘油三酯可以导致胰岛细胞内游离钙水平异常升高,影响细胞的分泌功能。     

缩胆素诱导兔Oddi括约肌细胞钙动员途径

目的　探讨 CCK引起兔 Oddi括约肌细胞收缩的钙动员机制 .方法　取新西兰兔 Oddi肌组织 ,进行原代细胞培养 .将培养的 4- 7代细胞行 Fluo- 3/AM负载 ,用激光共聚焦显微镜测量不同拮抗剂对 CCK诱导的细胞内 Ca2 +增加的影响 .结果　不加拮抗剂 10 - 7m ol· L- 1 CCK使细胞内 Ca2 +增加 (130± 43) %,用 EGTA+维拉帕米阻断细胞外钙离子内流时 ,CCK诱导细胞 Ca2 +增加 (10 4± 2 3) %,而用肝素时细胞内Ca2 +增加值为 (2 3± 19) %,加入普鲁卡因后细胞内 Ca2 +增加(85± 37) %.同其他组对比 ,肝素明显抑制了 CCK诱导的Ca2 +升高 (P<0 .0 1) .结论　 CCK通过动员细胞内 IP3 敏感钙库的钙离子引起 Oddi细胞 Ca2 +升高 ,该途径可以被肝素所抑制