海南省间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型及地理分布

目的 确定海南省疟区间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因型及地理分布,为制定合理的防治对策提供科学依据。方法 采用套式等位特异聚合酶链反应（PCR）技术,检测在海南省疟区内感染的间日疟病人滤纸血滴样本。结果 在99份受检血样中,有54份显示约700bp和约180bp二条扩增带,为温带族虫株,占54.54%;33份显示约700bp扩增带,为热带族虫株,占33.33% ;12份显示约700bp和588bp两条扩增带,为PV-2型虫株,占12.12%。结论 海南省流行的间日疟原虫CSP呈多态性,且存在地理分布差异。     

海南省间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型及地理分布

目的确定海南省疟区间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因型及地理分布,为制定合理的防治对策提供科学依据.方法采用套式等位特异聚合酶链反应(PCR)技术,检测在海南省疟区内感染的间日疟病人滤纸血滴样本.结果在99份受检血样中,有54份显示约700 bp和约180 bp二条扩增带,为温带族虫株,占54.54%;33份显示约700bp扩增带,为热带族虫株,占33.33%;12份显示约700 bp和588 bp两条扩增带,为PV-2型虫株,占1 2.1 2%.结论海南省流行的间日疟原虫CSP呈多态性,且存在地理分布差异.     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的：了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。方法 用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样31份，Chelex-100离子交换法用于提取滤纸血样中的DNA，改进的套式－等位特异－PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增，分析和鉴定。结果 在19份广西当地间日疟病例血样中17份鉴定为温带族虫株（89．5％），2份为热带族株（10．5％）；12份输入病例血样中，温带族8份（66．7％），热 带型3份（25．0％）PV－2型1份（8．3％）。结论 目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主，少数热带族病例出现在环江和防城县，但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因片段的扩增应用于诊断间日…

根据间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因序列，设计并合成间日疟原虫特异性引物一对，采用聚合酶锭反应技术，进行间日疟原虫感染的检测。结果：（１）从间日疟原虫患者的全血ＤＮＡ中扩增出约７７２ｂｐ的基因片段，经限制性内切酶切，证实为间日疟原虫ＣＳＰ基因片段；（２）与间日疟原虫亲缘上近的三株恶性疟原虫，弓形虫，利什曼原虫和正常人全血核酸抽提物经扩增后均未见特异性的扩增条带；（３）该检测体系可检测出间日疟原     

不同地理间日疟原虫环子孢子蛋白基因多态性的特征

探讨间日疟原环子孢子原白基因多态性的地理特征及其实用意义。用ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增与电泳切带纯化法，获得所研究的基因片段；用引物标记周期反应测序法，测定ＤＮＡ序列；用图解法分析比较各地ＣＳＰ基因的氨基酸序列的变化。     

辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型分析

目的探讨辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的基因型与地理分布。方法采集镜检确诊的间日疟患者血样15份,Chelex-100离子交换法提取DNA,进行单管-套式PCR扩增,根据琼脂糖凝胶电泳结果判定环子孢子蛋白(CSP)基因型别。结果 12份本地感染间日疟血液标本中6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族虫株(占50.00%),6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型混合虫株(占50.00%);3例输入性间日疟病例中PV-Ⅰ型热带族和温带族各1例,PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型虫株混合感染1例。结论目前辽宁省间日疟原虫存在2种CSP基因型,即PV-Ⅰ型温带族虫株和温带族、PV-Ⅱ型混合感染虫株,无热带族虫株。     

间日疟原虫环子孢子蛋白和裂殖子表面抗原的多态性

虽然恶性疟原虫疫苗抗原研究取得了较大进展，目前已制备出许多恶性疟原虫期特异性抗原［１］，但间日疟原虫的研究因不能体外培养而受限制。本文将主要描述至今已特征化了的两种间日疟原虫候选疫苗抗原：环子孢子蛋白和裂殖子表面抗原－１。为了资料的完整性和选择性，本...     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的　了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。　方法　用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样 31份 ,Chelex- 10 0离子交换法用于提取滤纸血样中的 DNA,改进的套式 -等位特异 - PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增、分析和鉴定。　结果　在 19份广西当地间日疟病例血样中 17份鉴定为温带族虫株(89.5 % ) ,2份为热带族虫株 (10 .5 % ) ;12份输入病例血样中 ,温带族 8份 (6 6 .7% ) ,热带型 3份 (2 5 .0 % ) ,PV- 2型 1份(8.3% )。　结论　目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主 ,少数热带族病例出现在环江和防城县 ;但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因片段的体外扩增,鉴定民克隆

目的：体外扩增、鉴定并克隆间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因约７７２ｂｐ的基因片段，包容ＣＳＰ基因的Ⅰ区、中央９肽重复区、重复后可变区及Ⅱ区。方法：采用ＰＣＲ法扩增出ＣＳＰ目的基因片段，以低熔点琼脂糖回收纯化，并以限制必丙切酶ＢｓｔＮＩ酶发鉴定后，采用Ｔ载体连接方案，插入中间体载体ＰＵＣ１９的多克隆位点，构建重组体ＰＵＣ１９／ＣＳＰ，并转化大肠杆菌ＪＭ１０７，蓝白菌斑初筛阳性重组子，并以ＰＣＲ法     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的鉴别研究

[目的 ]建立间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因分型法用于地理株的鉴定。[方法 ]Chelex 10 0离子交换法提取滤纸血样中的微量DNA ;套式PCR和等位特异PCR技术、琼脂糖电泳分析法、斑点印迹和Southern印迹 探针杂交技术分别用于判别性片段的扩增、分析和鉴定。[结果 ]用本文描述的套式 等位 特异PCR分型法 ,从一小片滤纸血样提取的微量DNA中 ,扩增出不同长度范围的 3种判别性片段 :6 5 0～ 770bp(间日疟种特异 ) ,15 0～2 30bp(温带族特异 ) ,5 88～ 6 15bp(PV 2型特异 )。用本法检测参考虫株出现的带型和长度与设计的靶序列完全吻合。检测 5 9份国内感染血样 ,42份鉴定为温带族虫株 ,15份为热带族虫株 ,2份为PV 2型虫株。 4份境外感染血样中 ,2个巴基斯坦分离株均为温带族 ,缅甸和老挝各 1株均为热带族虫株。 [结论 ]①本法能同时区分PV 1型 ,PV 2型以及温带族与热带族虫株 ,且较现有 (PCR 探针杂交 )法更为简便、快捷 ;②现场血样初步检测结果显示 :我国存在PV 1型 (温带族与热带族 )虫株和PV 2型虫株 ,也可能存在温带族东南亚组虫株。     

云南省不同感染来源间日疟原虫环子孢子蛋白基因多态和种群结构分析

目的分析云南省不同感染来源间日疟原虫环子孢子蛋白(Pvcsp)基因序列,揭示当地Pvcsp基因的种群结构和遗传多样性。方法收集中国疾病预防控制中心传染病网络直报系统中2014-2017年报告的云南省本地和输入性间日疟病例流行病学资料及血样。提取血样中疟原虫基因组DNA,巢式PCR扩增并测序。采用MEGA 5.04、Arlequin 3.5.2.2软件进行单倍型、期望杂合度(He)分析,DnaSP 5.10计算核苷酸多样性(TT)、同义置换率(Ks)、错义置换率(Ka)及群体间遗传分化指数(Fst)。结果共检测间日疟病例血样969份,扩增获得650~750 bp大小的目的条带759份,包括云南本地感染者血样39份、非洲16份、缅甸688份、老挝13份、柬埔寨2份、巴基斯坦1份。单倍型分析结果显示,759条Pvcsp基因序列存在90个单倍型,其中29个为PV-I型温带族(类似VK210型),50个为PV-Ⅰ型热带族(类似VK210型),11个为PV-Ⅱ型(类似VK247型);3种基因型所占比例分别为51.4%(390/759)、41.1%(312/759)、7.5%(57/759),分布于云南本地感染、缅甸输入性病例中,但非洲、老挝及其他地区的输入性病例只表现为PV-Ⅰ型。PV-Ⅰ型、PV-Ⅱ型氨基酸序列突变分别发生在29、10个位点。759份病例血样的He为0.224,π为0.075,Ka/Ks为0.48。除去柬埔寨和巴基斯坦,Pvcsp基因在老挝输入性病例中的遗传多样性最高(He=0.422,π=0.03),云南本地与非洲输入性病例中的遗传分化最高(Fst=0.082),与缅甸输入性病例的遗传分化最低(Fst=0.002);Pvcsp基因在非洲与东南亚地区输入病例中属中等程度的遗传分化,在东南亚地区输入病例中遗传分化很小。结论云南省不同感染来源间日疟原虫环子孢子蛋白基因存在3种基因型,以PV-Ⅰ型温带族为优势虫株,不同基因型的种群结构和遗传分化不同。     

我国南方五省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型与疟疾防治效果关系的探讨

目的 探讨我国南方间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因型种群结构、疟区分类及其防治意义。 方法 应用单管-套式/多重PCR对采自海南、云南、广西、广东、贵州等5省（自治区）共346份间日疟原虫阳性患者滤纸血样作环子孢子蛋白（CSP）基因型鉴定， 结合5省（自治区）疟疾历史资料和近年流行状况进行分析。 结果 广东、广西和贵州等3省（自治区）疟原虫PV-1型温带族虫株均占90% 以上，热带族仅有个别发现，未见PV-2型；云南省疟原虫PV-1温带族占71.4%、 热带族占28.6%，PV-2型仅个别发现；而海南省PV-1型温带族、热带族和PV-2型等3大基因型类群分别约占1/3。 结论 广东、广西和贵州等3省（自治区）间日疟原虫PV-1型温带族占绝对优势, 疟疾控制效果好, 而海南、云南两省间日疟原虫基因型类群较复杂，疟疾控制难度大，说明间日疟原虫种群基因型结构复杂性和多重感染程度是影响当地间日疟流行势态及其防治效果的重要因素，是防治与监测中重要的流行病学指征之一。     

我国华南间日疟原虫裂殖子表面蛋白1等位基因分型和序列分析

目的　了解我国间日疟原虫MSP1(PvMSP1)的等位基因类型和序列的多态性。方法　用特异的引物通过套式PCR方法体外扩增包含PvMSP1的ICB5与ICB6之间的基因片段 ,并对部分扩增产物进行序列测定和分析。结果　 2 7份间日疟原虫患者血样中 ,有 16份 (5 9 9% )扩增得到Belem型基因产物 ,2 5 (92 6 % )份扩增出Sal- 1型基因产物 ;两种不同等位基因型虫株的混合感染率为 5 1 9%。序列分析结果发现一个以前未见报告的基因内重组类型。结论　我国间日疟原虫虫株存在两种PvMSP1等位基因型 ,Sal- 1型可能是主导型 ;不同等位基因型的混合感染率较高     

缅甸拉咱市氯喹治疗间日疟的敏感性评价

缅甸拉咱市单纯间日疟原虫感染者48例分为氯喹A方案组（26例）和B方案组（22例）,分别采用成人总剂量1 200 mg （第1天顿服600 mg,第2、3天300 mg/d）和1 500 mg（第1天顿服750 mg,第2、3天375 mg/d）的三天疗法治疗。于服药当天、服药后第1、2、3、7、14、21和28天采集指血或耳垂血制作厚、薄血涂片检查疟原虫,测量体温和观察药物不良反应。氯喹治疗后,两组病例血内无性体原虫3 d内全部阴转。第28天随访治愈率为100%。结果表明,缅甸拉咱市的间日疟病例对氯喹治疗均敏感,该边境地区间日疟病例可采用氯喹进行临床治疗。     

恶性疟原虫FCC-1/HN株环子孢子蛋白基因片段的亚克隆及表达

目的 构建恶性疟原虫FCC－1／HN株CSP基因的重组真核表达质粒pBK－CSP,在大肠杆菌中进行表达,并进行鉴定。方法 采用限制性内切酶法从重组的大肠杆菌－分枝杆菌穿梭质粒pBCG5.6/CSP中分离出经过测序鉴定的CSP基因片段,将其亚克隆于pBK－CMV真核表达载体,构建重组真核表达质粒pBK-CSP.经IPTG诱导,重组质粒在大肠杆菌DH5α中进行表达,并进行SDS－PAGE及免疫印迹分析。结果 从pBCG5.6/CSP中分离出SP基因片段,成功构建pBK-CSP重组质粒;SDS－PAGE及免疫印迹分析结果显示特异性蛋白条带的相对分子质量约为42000。结论 从pBCG5．6／CSP中成功分离出CSP基因片段,并成功构建pBK-CSP重组质粒,诱导表达CSP非融合蛋白,为恶性疟原虫DNA疫苗的研制奠定了基础。     

外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究

目的 探讨外源性一氧化氮（NO）对红内期间日疟原虫的杀伤作用。 方法 采集以早期滋养体期为主,原虫密度＞0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100 μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠（SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mmol/L）,SNP + 血红蛋白（Hb）0.15 mmol/L,SNP + 硫酸亚铁（FeSO₄）0.15 mmol/L,SNP + L-半胱氨酸（L-cyst）1.00 mmol/L,SNP + FeSO₄ 0.15 mmol/L+ L-cyst 1.00 mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00 mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37 ℃ 5% CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3 h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。 结果 SNP 0.02 mmol/L组,间日疟原虫抑制率为（0.84±1.69）%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用（P＞0.05）;SNP 0.05 mmol/L组,间日疟原虫抑制率为（12.26±3.04）%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用（P＜0.01）。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP 1.00 mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自（85.40±2.90）%下降为（5.90±2.90）%、 （25.86±4.02）%、 （30.16±2.75）%和（16.71±2.30）%。结论 外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO₄可以逆转这种杀伤作用。     

Nest-PCR和PCR-RFLP在恶性疟原虫地理株基因分型及多态性研究中的应用

目的 分析套式PCR（nest-PCR）和限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）方法在恶性疟原虫地理株裂殖子表面蛋白（MSP2）基因多态性研究中的分型效率及特异性。 方法 分别在海南省三亚市和云南省腾冲县等地通过静脉采血法采集疟疾患者血样98份,其中恶性疟88份,间日疟10份。另从上海地区的健康人群中抽取10份血样作为阴性对照。用nest-PCR和PCR-RFLP方法分别对疟原虫地理株进行MSP2等位基因分型,并对分型结果进行归纳和比较分析。 结果 常规nest-PCR方法对于恶性疟原虫地理株MSP2等位基因的总检出效率为79.8％（166/208）,其中,对于FC27家族等位基因的检出效率为92.7％（101/109）,但对3D7家族等位基因的检出率仅为65.7％（65/99）,且无法鉴定具体的等位基因。PCR-RFLP分型法检出效率比nest-PCR法提高了20.2%,且特异性好。 结论 PCR-RFLP相对于常规的nest-PCR分型法具有检出效率、分辨率和特异性皆高的优点,可以鉴定地理株中具体的等位基因类型。     

间日疟原虫抗药性研究进展

疟疾作为一种致死性很高的全球性寄生虫病,一直被全世界所关注,疟疾的控制也被列入全球三大公共卫生问题之一。由于疟疾抗药性的流行和蔓延,尤其是间日疟抗性的快速传播,使得疟原虫抗性的检测、预测以及新药的研发成为当前研究重点。针对这一系列问题,本文对当前间日疟抗药性检测方法、分子机理以及热点抗间日疟药物做一综述。     

恶性疟原虫CSP基因重组蛋白及DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答比较

本文利用恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白 (PfCSP)基因DNA质粒通过不同途径、不同剂量免疫小鼠 ,观察其产生的体液免疫应答反应 ,并将其与相应的重组表达蛋白疫苗进行比较。结果显示 :DNA免疫刺激机体产生抗体反应强度的免疫途径依次为肌肉、静脉和皮下 ;宿主对DNA免疫存在一定的剂量依赖性 ;ELISA和Dot -ELISA检测免疫后 4周和 7周 ,DNA质粒组刺激机体产生抗体的滴度均显著低于相应的重组蛋白组。表明PfCSPDNA疫苗与重组表达蛋白疫苗均可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答 ,但前者诱导高滴度的抗体反应需要更长的时间