临床分离耐喹诺酮类铜绿假单胞菌gyrA基因单点突变研究

目的 研究临床分离铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的分子机制，对PCR－RFLP－SSCP分析铜绿假单胞菌gyrA基因突变的可行性评价。方法 以铜绿假单胞菌gyrA基因序列为靶序列，用PCR、PCR－SSCP、PCR－RFLP、DNA测序、OMIGA软件分析等方法，对铜绿假单胞菌gyrA基因突变进行研究。结果 在铜绿假单胞菌10株耐药突变株中，有8株的gyrA基因的83位表现出高频的单点突变，其突变方式全为ACC→ATC。gyrA的PCR扩增产物Sac Ⅱ酶切片段与测序结果一致。SSCP带谱与测序结果比较，除1株（PSA2）其SSCP带谱与标准株相同，但测序结果有点突变外，其余菌株与测序结果一致。结论 临床分离的铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物分子机制主要表现为gyrA基因83位氨基酸密码子突变（Thr-83→Ile)，利用PCR－SSPC－RFLP系统，可快速、准确地检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中至少1个碱基的差异。     

50株淋病奈瑟菌喹诺酮耐药决定区的DNA测序研究

目的　从基因水平了解淋病奈瑟菌 (NeisseviaGonorrhoeae ,NG )对喹诺酮类药物的耐药状况。方法　对收集自常州地区的 5 0株NG喹诺酮作用靶位酶 (DNA回旋酶 )GyrA基因进行PCR检测 ;并对喹诺酮耐药决定区 (quinoloneresis tance—determingregion ,QRDR )进行测序研究。结果　 5 0株NG菌经GyrA基因扩增均出现 372bp清晰明亮的荧光带 ,其产物经双脱氧末端终止法测序经与 (gi:5 2 940 7)序列比对 ,5 0株NG菌均存在第 91位和第 95位密码子的突变 ,第 91位密码子均由TTC→TCC ;第 95位密码子由GAC→GGC、GCC和AAC三种形式。结论　本文基因研究显示喹诺酮类抗生素对我国淋病的治疗已失去作用 ,在喹诺酮类新型药物研制中要加强对突变株的作用     

卡介苗增强人肺腺上皮细胞β—防御素-1基因的转录

目的 :研究嗜麦芽窄食单胞菌拓谱异构酶II和IV的突变与氟喹诺酮类药物的耐药关系 ,为新药开发提供实验依据。方法 :选择对环丙沙星MIC >2mg/L且主动外排机制阴性的菌株 ,对其gyrA和 parE的喹诺酮决定区域基因分别进行PCR扩增 ,纯化后直接测序。结果 :嗜麦芽窄食单胞菌在DNA解旋酶最常见的 83位和 87位没有突变 ,同时在GyrA的整个QRDRs没有氨基酸的改变 ,并且其 83位是Gln而不是其它革兰阴性菌常见的Ser或Thr。 5株菌中的parE各有 1株菌在 4 0 2和 4 32突变 ,但是该突变与FQNS耐药不相关 ,未观察到Valdezate研究中的 1 /2菌株的…     

金葡球菌拓扑异构酶Ⅳ基因突变与氟喹诺酮类药物耐药性关系的研究

本文目的是考察临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的拓扑异构酶Ⅳ (topoⅣ )基因突变与氟喹诺酮类抗生素耐药性的关系。采用琼脂二倍稀释法筛选甲氧西林和氟喹诺酮类药物敏感 /耐药的临床分离的金黄色葡萄球菌 ;从中选取 8株菌进行PCR扩增 ,对PCR产物进行单链构象多态性、限制性片段长度多态性和序列分析。实验结果显示 ,MRSA其耐药机制与氟喹诺酮类药物耐药机制可能存在一定的相关性 ,其中金葡球菌topoⅣ基因 grlA 80和 84两个位点突变与氟喹诺酮类药物耐药水平最为相关 ,而grlB 4 32、4 5 2双位点突变与氟喹诺酮类药物耐药…     

伤寒沙门菌DNA旋转酶gyrA及拓扑异构酶Ⅳ parC基因与耐喹诺酮类关系研究

目的 研究DNA旋转酶、拓扑异构酶Ⅳ在伤寒沙门菌耐喹诺酮类药物的作用.方法 对临床分离喹诺酮类敏感伤寒沙门菌275及其自发耐药变异菌RG1的gyrA、parC基因喹诺酮类耐性决定区进行PCR DNA直接测序分析.结果 表明伤寒沙门菌275 gyrA、parC与大肠埃希菌相应DNA序列分别有92.51%与97.01%同源性,推定氨基酸序列仅有3与6个的差异.伤寒沙门菌gyrA及parC也有较好同源性,相应区段氨基酸有60.92 %相同.伤寒沙门菌RG1与275相比,gyrA第247位T→G变异,致Ser 83 Ala氨基酸替换,两者parC完全相同.喹诺酮类药物对RG1 MIC较对伤寒沙门菌275上升32倍或以上.结论 DNA旋转酶、拓扑异构酶Ⅳ为喹诺酮类药物作用靶位,但以DNA旋转酶为主,该酶变异为伤寒沙门菌耐药的主要原因.     

喹诺酮类耐药机制

喹诺酮类药物在临床应用已近30年,耐药菌株逐年增加。据报道,1988年纽约市分离到的2833株耐药金葡菌中有149株是喹诺酮类耐药菌。除金葡菌外,主要的临床耐药菌还有绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌等。这类药物中最早出现耐药性的是萘啶酸,氟喹诺酮类对此种耐药菌仍然敏感,不产生交叉耐药性。其引人注目的特征就是产生     

产AmpC酶阴沟肠杆菌耐药的基础与临床

目的 :对我院阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率、耐药性及ampC结构基因序列进行分析 ,探讨阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的耐药性及临床特点。方法 :采用琼脂稀释法对我院临床标本中分离的阴沟肠杆菌进行产AmpC酶株的筛选 ,用酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶 ,并测定产AmpC酶菌株对 9种抗菌药物的MIC值。对 3株高度耐药阴沟肠杆菌产AmpC酶的结构基因和 1株敏感菌行PCR扩增并对产物序列进行分析 ,测序的菌株与E .cloacaep99进行了核苷酸序列比较和推导的氨基酸序列比较。结果 :阴沟肠杆菌产AmpC酶株的检出率为2 4 .6 %。产A…     

合肥地区淋球菌流行株gyrA和parC基因突变位点的分析

淋球菌gyrA和parC基因突变与喹诺酮类药物耐药密切相关。本文用测序法对 2 0 0 2年合肥地区分离的 5 0株淋球菌流行株进行gyrA和parC基因突变位点检测 ,并与 4种喹诺酮类药物的药敏结果比较分析。5 0株淋球菌来源于 2 0 0 2年安徽医科大学附属医院皮肤性病门诊。纸片扩散法药敏试验按美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCLS)标准进行。PCR扩增gyrA和parC基因喹诺酮类药物耐药决定区相关片段 (QRDR) ,扩增产物经1 5 %琼脂糖凝胶电泳 ,美国EAGEREYETM 图象分析系统扫描并照相。 5 0份DNA样本扩增产物由上海博亚生物技作者单位 :…     

人型支原体GyrA基因突变与喹诺酮耐药的关系研究

目的　探讨人型支原体 (Mh)GyrA基因突变与喹诺酮耐药的关系。方法　对 2株环丙沙星MIC >64μg/ml的Mh先进行分子鉴定 ,然后对其GyrA基因的喹诺酮耐药决定区 (QRDR)进行扩增和测序。结果　该 2株Mh临床分离株均存在GyrA基因第 83位氨基酸密码子由TCA[丝氨酸 ]至TTA[亮氨酸 ]的突变。结论　该 2株环丙沙星MIC >64μg/ml的Mh临床分离株存在GyrA基因突变     

PCR-RFLP检测拉米夫定抗HBV感染中聚合酶YMDD变异

目的 建立用PCR－限制性片段长度多态性技术（PCR－RFLP），分析拉米夫定抗HBV感染中聚合酶YMDD变异方法。方法 在拉米夫定抗HBV治疗过程中HBV DNA由阴性再次转为阳性患者及HBV DNA始终保持阳性的血清达1年或1年以上，用3对引物扩增HBV P基因的C区，扩增产物分别用3个限制性内切酶分析，酶切结果用8.4%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。检测HBV YMDD变异，同时血清用全自动测序仪检测YMDD变异。分析比较两者结果。结果 35例病人，包括33例HBV DNA再次阳性患者，2例用药1年HBV DNA未转阴。14例病人出现YMDD变异。PCR－RFLP结果为6例YVDD变异、4例YIDD、1例YI／MDD、21例YMDD与测序一致。另3例PCR－RFLP结果为YI／VDD，即混合变异，测序报告为2例YIDD、1例YVDD，分析相应的测序图，存在混合变异。并把YIDD与YVDD变异的血清混合，行PCR－RFLP，结果与YI／VDD一致。结论 用PCR－RFLP能快速、简便、灵敏地检测YMDD变异。     

环丙沙星耐药肠杆菌科细菌临床株qnr和aac(6')-Ⅰ b-cr基因的检测

目的 了解温州地区环丙沙星耐药肠杆菌科细菌临床株的qnr、aac(6')-Ⅰ b-cr基因的分布情况.方法 收集2005年8月-2008年4月间温州医学院附属第一医院环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌共461株,其中大肠埃希菌370株,阴沟肠杆菌39株,克雷伯菌属细菌52株.应用PCR方法 检测qnr和aac(6')-Ⅰ b幕因,DNA测序检测qnrA、qnrB、qnrS和aac(6')-Ⅰ b-cr基因;接合传递试验方法 探讨细菌质粒介导的耐药性传递情况.结果 461株环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中检出含qnr基因阳性菌株15株(3.25%),包括qnrA基因阳性株5株(4株阴沟肠杆菌和1株解鸟氨酸克雷伯菌)、qnrB基因阳性株4株(2株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希菌)、qnrS基因阳性株6株(2株肺炎克雷伯菌和4株大肠埃希菌);检出52株细菌(包括42株大肠埃希菌、4株阴沟肠杆菌和6株克雷伯菌属细菌)携带aac(6')-Ⅰ b-cr.15株qnr基因阳性的菌株同时携带aac(6')-Ⅰ b-cr,药敏结果 显示对业胺培南敏感但对多种抗生素耐药.15株qnr基因阳性的菌株中7株质粒接合传递试验成功,临床株对喹诺酮类和氨基糖苷类的耐药性部分传递给了受体株.结论 qnr基因在温州地区环丙沙星耐药的肠杆菌科细菌临床株中较少见,而aac(6')-Ⅰ b-cr基因存在较普遍.     

金葡球菌拓扑异构酶Ⅳ基因突变与氟喹诺酮类药物耐药性关系的研究

本文目的是探讨及考察临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的拓朴异构酶Ⅳ(topoⅣ)基因突变与氟喹诺酮类抗生素耐药性的关系。采用琼脂二倍稀释法筛选甲氧西林和氟喹诺酮类药物敏感、耐药的临床分离的金黄色葡萄球菌;从中选取8株菌进行PCR扩增,对PCR产物进行单链构象多态性、限制     

大肠杆菌对氟喹诺酮药物耐药机制的研究

目的:研究大肠杆菌耐药菌株对亲水或相对疏水性的氟喹诺酮类药物的耐药机制有无差异。方法:测定亲水性药物环丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星及相对疏水性药物托舒沙星在菌体内的蓄积量和主动外排泵的作用(荧光测定法):检测细菌膜孔蛋白OmpF有无缺失(SDS-PAGE法);检测细菌DNA回旋酶A亚基编码基因gyrA常见突变点(Ser-83)是否突变(3’BS-PCR法和PCR产物测序)。所研究的大肠杆菌菌株包括野生株Ecs及其实验室诱变耐药株R2、R256,临床分离耐药株R5、R6和膜孔蛋白标准株JF701     

嗜麦芽窄食单胞菌对氟喹诺酮类抗菌药的分子耐药机制研究

目的:研究嗜麦芽窄食单胞菌拓谱异构酶II和IV的突变与氟喹诺酮类药物的耐药关系,为新药开发提供实验依据.方法:选择对环丙沙星MIC>2mg/L且主动外排机制阴性的菌株,对其gyrA和parE的喹诺酮决定区域基因分别进行PCR扩增,纯化后直接测序.结果:嗜麦芽窄食单胞菌在DNA解旋酶最常见的83位和87位没有突变,同时在GyrA的整个QRDRs没有氨基酸的改变,并且其83位是Gln而不是其它革兰阴性菌常见的Ser或Thr.5株菌中的parE各有1株菌在402和432突变,但是该突变与FQNS耐药不相关,未观察到Valdezate研究中的1/2菌株的parE突变频率高且主要集中在437,465,477和485位的现象.结论:嗜麦芽窄食单胞菌对FQNS耐药与主动外排泵有关,可能与外膜的通透性降低有关,但与DNA解旋酶和拓谱异构酶IV的靶位点改变关系尚不明确,需进一步研究.     

应用实时荧光PCR技术检测HBV YMDD变异

目的　应用YMDD变异荧光PCR检测试剂盒检测乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)聚合酶基因区的酪氨酸 蛋氨酸 天门冬氨酸 天门冬氨酸基序 (tyrosine methionine asparticacid asparticacid ,YMDD)变异 ,希望能够替代目前使用的测序方法。方法　对 4 7例血清标本使用荧光PCR技术检测YMDD变异 ,其YMDD变异结果与DNA测序结果进行比较。结果　荧光PCR方法测得YMDD野生株 2 8例 ,变异株 19例 ;与DNA测序结果完全一致 ,符合率为 10 0 %。结论　荧光PCR技术检测YMDD变异具有方便、快速、准确的特点。     

我院耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌耐药机制与同源性分析

目的 调查耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(CRECL)中携带耐药基因类型与可移动遗传元件存在情况并对耐药菌株进行同源性分析。方法 收集2016年至2020年收集的52株临床分离的CRECL,通过PCR扩增、序列分析与多位点测序分型,确定其碳青霉烯耐药基因类型与菌株分子分型,检测菌株携带整合子、转座子、插入序列与接合质粒遗传标记基因等可移动遗传元件。结果 收集的52株CRECL共有4种ST型,分别为ST93型32株,ST90型14株,ST88型4株,ST177型2株。45株CRECL携带bla_NDM-1基因,14株携带bla_OXA-48基因,还检出有bla_KPC、bla_IMP与bla_VIM耐药基因。49株阴沟肠杆菌均检出整合酶基因IntI 1,47株阴沟肠杆菌检出插入序列ISEcp1。结论 我院CRECL主要的耐碳青霉烯酶基因为bla_NDM-1和bla_OXA-48基因,ST 93型为主要流行基因型。主要的可移动基因元件为Ⅰ类整合子和插入序列IS...     

泌尿系感染病原菌对氟喹诺酮类药物耐药性分析

目的分析我院泌尿系感染患者病原菌分布及对4种氟喹诺酮类药物耐药情况。方法收集泌尿系感染患者尿液中分离的致病菌株294株,采用K-B纸片扩散法进行4种氟喹诺酮类药物药敏分析。结果大肠埃希菌是引发泌尿系感染的主要病原菌,占53.7%,其次为肠球菌占16.3%。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株检出率分别为36.1%和23.5%,耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）和肠球菌氨基糖苷类高水平耐药菌株（HLGR）检出率分别为68.8%和77.1%,它们对4种氟喹诺酮类药物的耐药率高于非产ES-BLs、非MRSE、非HLGR菌株,呈现多重耐药性。结论泌尿系感染的病原菌分布广泛,耐药率呈上升趋势,应检测产ESBLs、MRSE和HLGR菌株的多重耐药情况,根据抗生素敏感试验合理选用抗菌药物进行治疗。     

志贺菌临床株喹诺酮类耐药与gyrA和parC基因点突变

近年来,肠杆菌科细菌对喹诺酮类耐药不断增加,国内外均有报道对喹诺酮类耐药的志贺菌,本文以志贺菌为例,一是了解和掌握杭州市志贺菌临床分离株喹诺酮耐药的流行趋势,对1998-2007年杭州地区分离到的202株志贺菌进行药敏实验,与2005年全国志贺菌药敏监测点进行比较[余华丽,常昭瑞,张立实,等.国家监测点2005年志贺菌菌型分布和药敏结果 分析.中华流行病学杂志,2007,28(4):370-373],分析志贺菌耐喹诺酮类分布情况,预测志贺菌耐喹诺酮类药物的发展趋势.二是探讨志贺菌临床分离株喹诺酮类耐药机制.     

阴沟肠杆菌中发现氨基糖苷类-氟喹诺酮类修饰酶基因aac(6′)-Ib-cr

对本院临床分离的阴沟肠杆菌进行耐药机制研究时，发现一株携带aac（6＇）-Ib-cr基因，该基因产物不仅对氨基糖苷类抗生素有修饰作用，对氟喹诺酮类也有修饰作用。     

阴沟肠杆菌喹诺酮类耐药qnr基因的发现

细菌对喹诺酮类药物的耐药机制主要是药物作用靶位的变异、细菌细胞膜通透性改变和／或主动外排系统过度表达导致药物在细菌体内浓度降低，这两种耐药机制由染色体介导引起，不具有水平传播性。最近Martine-Martinez L等发现了一个可编码喹诺酮耐药的多重耐药基因咿，qnr,qnr基因是由可接合质粒介导的喹诺酮类耐药基因，作用机制是其编码的蛋白质对喹诺酮类药物靶位点的保护，从而导致药物治疗失败。本文对2003年9月—2005年6月解放军98医院分离的44株阴沟肠杆菌中qnr基因进行筛查。