大鼠血管平滑肌细胞分离培养的探讨

目的：培养大鼠血管平滑肌细胞。方法：手术显微镜下分离主动脉和肺动脉，再用翻转干涸法进行操作。结果：显微镜下分离组织，岢基本除净动脉纤维脂肪层和外膜，再用刀片轻刮内膜，可保证所贴组织块为地动脉中膜。传至第三代时，用台盼蓝检查细胞传代成活率９５％，光镜、电镜和免疫组化鉴定培养细胞，培养细胞纯度９６％。结论：贴块片简便易行、经济、又可以防止膜损伤，可为血管病理变化研究提供适宜的细胞。     

大鼠输精管平滑肌细胞的体外培养

目的建立从SD大鼠的输精管中提取、培养获得平滑肌细胞的方法.方法取SD大鼠的输精管,用酶消化法分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增.倒置相差显微镜下观察体外培养的平滑肌细胞的生长情况,用平滑肌特异性的抗α-SMA做免疫组化染色,鉴定培养的细胞.结果平滑肌细胞体外培养呈长梭形,并出现"峰-谷"样生长特征.用抗α-SMA免疫组化染色的方法鉴定所培养为平滑肌细胞,其纯度为(91.3±5.2)%.结论成功地建立了从SD大鼠输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的稳定模型.     

大鼠肺动脉平滑肌细胞的培养

大鼠肺动脉壁薄，平滑肌细胞数少，经人工继代培养后细胞往往显示与在体内时不同的反应，故用荧光分光光度计检测该处细胞内钙难于实现。共焦激光显微钝可以测试一个细胞内钙浓度的动态变化，要求所测试细胞必须是非收缩细胞，且较牢固地粘附在培养皿上。本法应用０．２％Ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ，０．０１２５％Ｅ－ｌａｓｔａｓｅ，０．１２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ分离大鼠肺动脉平滑肛细胞进行原代培养，经间接荧光抗体染色法证明９５％以上为平滑肌细胞。此法培养的细胞可用于共焦激光显微镜测试细胞内Ｃａ（２＋）等浓度的动态变化。     

SD大鼠自体平滑肌细胞的获取和体外培养

目的建立从SD大鼠的输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的方法.方法取SD大鼠的输精管,用酶消化法分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增.倒置相差显微镜下观察体外培养的平滑肌细胞的生长情况,用平滑肌特异性的抗α-SMA做免疫组化染色,鉴定培养的细胞.结果平滑肌细胞体外培养呈长梭形,并出现"峰-谷"样生长特征.用抗α-SMA免疫组化染色的方法鉴定所培养为平滑肌细胞,其纯度为(91.3±5.2)%.结论成功建立了从SD大鼠的输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的稳定模型.     

大鼠血管平滑肌细胞的培养和鉴定

目的:建立一种方便快捷的培养大量大鼠血管平滑肌细胞的方法,为心血管疾病的体外实验研究提供实验材料。方法:采用改良的组织块贴壁法进行原代培养,差异贴壁法纯化细胞,常规胰酶消化法传代,使用倒置相差显微镜进行形态学观察,通过检测平滑肌肌动蛋白对细胞进行免疫组化鉴定。结果:培养4代的平滑肌细胞纯度达96%以上。镜下可见培养细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫组化染色显示胞质内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论:本研究所介绍的组织贴块培养法较为成熟,可为心血管疾病病因、机制的研究和防治提供一个理想的实验材料。     

组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞的探讨

目的：探讨分离、培养大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）的方法,为研究损伤性血管疾病提供有用的体外研究模型。方法：用组织贴壁、反转干涸的方法分离、培养大鼠主动脉平滑肌细胞并进行传代培养。采用形态学和抗α－SM－actin免疫组织化学鉴定证实为SVMC。结果：细胞呈VSMC特征性“峰”“谷”状生长,历次原代培养经鉴定均为高纯度的VSMC。经传代培养至20代,细胞维持原有生长性状,细胞活力未见减低。结论：组织贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞具有简便、易行、细胞损伤小、活力及纯度高的优点,是研究损伤性血管疾病良好的体外研究模型。     

糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法的探讨

目的:对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法进行探讨,建立糖尿病大鼠血管平滑肌细胞模型,为糖尿病慢性血管并发症研究奠定基础。方法:建立糖尿病大鼠模型,用组织贴壁法体外培养胸主动脉血管平滑肌细胞。结果:糖尿病大鼠造模成功。用贴壁法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,3d后相差显微镜下可见细胞游出,培养7～10d左右细胞重叠生长达多层,高低起伏呈“峰—谷”状。平滑肌细胞actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论:糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快,培养条件要求严格,在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。     

组织块法培养大鼠肠系膜小动脉的平滑肌细胞

利用贴块法成功地大量培养了大鼠肠系膜小动脉的平滑肌细胞。培养的细胞经光镜和免疫组化鉴定为平滑肌细胞。方法简便，经济，为阻力血管的细胞水平的研究提供了实验材料。     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响

目的　研究 5 - HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制 .方法　采用 Ca2 +指示剂 Fluo- 3/ AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞 ,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化 .结果　基础状态下 SFSMC[Ca2 + ]i 荧光强度 (FI)为 2 6 4± 15 ,5 - HT 10μmol· L- 1 使荧光强度的变化 ΔFI为 16 .5± 2 .6 ;细胞外无钙时 ,5 - HT升高[Ca2 + ]作用被减弱 ,但除去细胞外钙 ,并使用内罗啶 (ryan-odine)孵育后 ,5 - HT 不再引起荧光强度的变化 ;10μmol· L- 1 米安舍林 (mianserin)可部分拮抗 5 - HT升高[Ca2 + ]i 的作用 ,赛更定 (cyprohetadine)不能抑制 5 - HT升高的胞内钙 ;Mn92 0 2和拉西地平 (lacidipine)均能完全抑制 5 -HT升高 [Ca2 + ]i 的作用 .结论　 5 - HT可通过促进外钙内流及钙池 (SR)释放使 [Ca2 + ]i 升高 ;在胃底平滑肌 5 - HT升高胞内钙部分通过 5 - HT2 受体 ,而不是通过 5 - HT1 C受体 ;5 -羟色胺通过 L型钙通道促外钙内流 ;二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞 L 型钙通道 ,而完全抑制 5 - HT促胞内钙升高的作用     

大鼠腹主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的 探讨一种简单、经济获取腹主动脉血管平滑肌细胞的方法,为相关研究提供实验材料.方法 应用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,运用自然纯化法进行细胞纯化,并使用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学观察以及免疫组化鉴定.结果 90%的组织块接种存活,培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫荧光化学技术检测显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论 本法简便可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

气道平滑肌细胞培养的探讨

目的 建立气道平滑肌体外稳定培养的方法。方法 利用组织贴块法和胶原酶消化法培养大鼠气道平滑肌细胞,培养的细胞经形态学和免疫细胞化学染色鉴定。结果 培养细胞呈典型的"谷峰状"生长 ,胞浆内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。结论 建立了高纯度、性能稳定且生长快速的大鼠ASMCs 体外培养模型,为相关疾病的研究奠定良好的基础。 【关键词】 气道 平滑肌细胞 细胞培养     

胶原酶消化法培养大鼠远端肺静脉平滑肌细胞

目的：探索大鼠发病机制远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）的原代培养方法,为体外研究肺血管疾病提供实验材料.方法：采用显微操作和Ⅰ型胶原酶消化法原代培养大鼠远端PVSMC,对培养的细胞进行形态学观察、平滑肌α-actin免疫荧光染色鉴定,并用激光扫描共聚焦显微镜计算纯度.结果：镜下培养的细胞呈典型的＂峰-谷＂状生长,平滑肌细胞特异的平滑肌α-actin蛋白阳性表达,细胞纯度达98.5%.结论：用胶原酶消化法能够原代培养大鼠远端PVSMC,所获细胞数量多、纯度高.     

自发性高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞培养及鉴定

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)阴茎海绵体平滑肌(CCSM)细胞体外培养的方法、生物学性状及与WKY大鼠CCSM细胞培养的区别.方法:采用组织块培养法并应用差速贴壁法进行纯化,倒置相差显微镜观察其形态,免疫荧光与流式细胞仪法进行鉴定.结果:镜下可见平滑肌细胞呈梭形生长、平行排列及部分区域峰-谷现象,免疫荧光显示胞浆α-肌动蛋白染色呈阳性.WKY大鼠CCSM细胞第4d开始从组织块边缘游离出,SHR大鼠CCSM细胞第8d开始游离出.WKY与SHR大鼠CCSM细胞经纯化一次后纯度(％):WKY=97.00±1.03,SHR=84.90±5.99,差异具有统计学意义(P＜0.01);WKY与SHR大鼠CCSM细胞经两次纯化后纯度(％):WKY=98.24±1.05,SHR=96.92±1.06,其差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SHR与WKY大鼠CCSM细胞的原代培养在生长时间及纯化上存在显著差异,但可通过适当方式缩小其差异并在短期内获得大量高纯度SHR大鼠CCSM细胞,为高血压性勃起功能障碍的研究奠定基础.     

血管平滑肌细胞的培养及鉴定

目的探讨以简便、高效的方法获取血管平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料.方法采用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,综合运用自然纯化、机械刮除、差异贴壁法进行细胞纯化,并应用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定.结果90%的组织块接种存活,5代的平滑肌细胞纯度达98%以上.镜下培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论本法简便、可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

丝裂原活化蛋白激酶在大黄素收缩大鼠胃平滑肌细胞中的作用

[目的]研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩信号转导途径中的作用机制。[方法]酶解法分离的大鼠胃平滑肌细胞经过培养后分为3个实验组:空白对照组、大黄素组、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(Calphostin C 大黄素)。通过Western blotring方法分析p44／42 MAPK在不同实验组中的表达量变化。[结果]磷酸化p44／42 MAPK的表达量在对照组最少,大黄素组最多,抑制剂组表达量较大黄素组少;三组表达量的差别具有显著性(P值均<0．01)。[结论]磷酸化p44／42 MAPK的表达量变化说明,在相同实验条件下,PKC受抑制后,磷酸化p44／42 MAPK的表达明显低于未受抑制的试验组。本实验结果提示, PKC到p44／42 MAPK信号转导通路参与了大黄素对大鼠胃平滑肌细胞收缩活动的调节。     

荧光定量法测量平滑肌细胞内钙离子浓度的探讨

目的 研究平滑肌细胞内Ca²⁺浓度的动力学变化,建立一种定量测量细胞内Ca²⁺浓度的方法。方法 分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)细胞,用荧光探针Indo-1和激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞Ca²⁺浓度的动力学变化;首先在37 ℃环境下标定Ca²⁺ 探针indo-1的解离常数Kd值,根据荧光-浓度换算公式将测量的荧光强度值换算成Ca²⁺ 浓度值。结果 激光扫描共聚焦显微成像技术测量的细胞荧光图像分析显示,平滑肌细胞[Ca²⁺]_i 在地塞米松的刺激下显著上升,有时会出现自发钙波的现象,并且细胞内出现钙超载的现象(细胞荧光图像呈现白色)。通过测量得到的Kd值结合荧光强度-浓度换算公式可准确地测量细胞内[Ca²⁺]_i。结论 荧光定量法结合共聚焦显微成像技术可以简易、快捷地监测细胞内钙离子的动力学变化,不失为一种定量测量细胞内钙离子的方法。     

大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的探讨Wistar大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养的方法及其生物学特性.方法采用组织块培养法进行培养并行免疫组化鉴定,观察其形态及测定细胞活性.结果大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,体外贴壁快,在合适的条件下能够生存并保持其稳定的生物学特性.结论大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞原培养方便可行,对研究阴茎勃起及ED机制有较大帮助.