葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的:葛根素对成骨细胞体外增殖及Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:培养成骨细胞MC3T3-E1并分为对照组及10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组,处理24小时后检测成骨细胞标志基因、凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因的mRNA表达量。结果:10-6 mol/L PUE组、10~(-7) mol/L PUE组、10~(-8) mol/L PUE组细胞ALP、Runx2、OC。Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量均显著高于对照组,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量均显著低于对照组(P<0.05);且葛根素剂量越大,细胞中ALP、Runx2、OC、Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt10b、β-catenin的mRNA表达量越高,caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的mRNA表达量越低(P<0.05)。结论:葛根素能够有效促进成骨细胞的增殖及Wnt/β-catenin通路的活化。     

胡椒碱对成骨细胞成骨分化的影响

目的探讨胡椒碱对成骨细胞成骨分化的影响以及机制。方法分离、培养胎鼠颅骨成骨细胞,分别给予不同浓度的胡椒碱处理,采用MTT法检测胡椒碱对成骨细胞毒性的影响;采用碱性磷酸酶（ALP）染色和ALP活性检测试剂盒检测ALP活性;采用茜素红S染色评估成骨细胞成骨及矿化水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ALP、I型胶原蛋白α1（COL1A1）、成骨相关转录因子蛋白（OSX）、骨桥蛋白（OPN）、runt相关转录因子2（Runx2）的mRNA表达水平;采用Western blot检测Wnt 1和β-catenin蛋白水平;采用免疫荧光检测β-catenin分布与表达;采用Wnt/β-catenin信号途径特异性拮抗剂IWR-1验证胡椒碱对成骨细胞成骨分化的信号通路。结果在0～60μmol·L-1浓度范围内,胡椒碱对成骨细胞活力无明显影响（P>0.05）。在0～40μmol·L-1浓度范围内,胡椒碱呈剂量依赖性促进成骨细胞ALP活性（P<0.01或P<0.001）和矿化结节形成（P<0.05或P<0.01）,促进ALP、COL1A1、OSX、OPN和Runx2的mRNA表达水平（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,促进Wnt 1和β-catenin蛋白的表达水平（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。用IWR-1预处理后,由胡椒碱诱导的成骨细胞的基质矿化受到明显抑制（P<0.01）。结论胡椒碱可通过增强Wnt/β-catenin信号促进成骨细胞的成骨分化。     

RNA干扰抑制KLF10基因对MG-63细胞成骨分化的影响

目的:研究Kruppel样因子10(KLF10)在MG-63细胞向成骨细胞分化过程中的作用。方法:采用RNA干扰的方法抑制MG-63细胞中KLF10的表达,并使用成骨分化培养液诱导细胞分化,实时定量PCR检测成骨分化标志性基因ALP、OC、BSP及转录因子Runx2的mRNA的表达量变化,蛋白质印迹检测Runx2的蛋白表达。结果:诱导分化后,KLF10表达抑制细胞的ALP、OC的mRNA表达量低于正常细胞(P<0.05);KLF10表达抑制会直接导致Runx2的mRNA及蛋白表达量降低。结论:KLF10在MG-63细胞成骨分化过程中发挥重要作用。     

盘龙七片通过调节Wnt/β-catenin通路对BMSCs成骨分化的影响

目的 观察盘龙七片对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的作用并探讨其机制。方法 BMSCs细胞分为对照组和盘龙七片处理组。MTT检测细胞增殖并确定盘龙七片最佳浓度。RT-PCR和western blot分别检测Runx2、Osterix、COL1A1的mRNA和蛋白表达。检测骨钙素、碱性磷酸酶(ALP)及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达水平。结果 盘龙七片促进BMSCs增殖,且随着质量浓度的升高增加更明显(P<0.05)。盘龙七片组细胞中Runx2、Osterix、COL1A1的mRNA和蛋白表达高于对照组(P<0.05),骨钙素水平和ALP活性高于对照组(P<0.05);Wnt3和β-catenin的蛋白表达高于对照组(P<0.05),p-GSK-3β的蛋白表达低于对照组(P<0.05)。结论盘龙七片能够促进BMSCs细胞成骨分化,且其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin通路产生的。     

糖尿病足创面中Wnt/β-catenin通路变化与细胞因子、凋亡基因的相关性研究

目的:研究糖尿病足(DF)创面中Wnt/β-catenin通路变化与细胞因子、凋亡基因的相关性。方法:选择我院收治的DF患者作为DF组,同期因外伤收治的非糖尿病患者作为对照组。收集DF组的创面组织和对照组的正常皮肤组织,测定Wnt/β-catenin通路分子、凋亡基因的mRNA表达量以及细胞因子的含量。结果:DF组创面中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的mRNA表达量以及血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量明显低于对照组,糖原合酶激酶-3(GSK-3β)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的mRNA表达量以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量明显高于对照组;Wnt1、β-catenin与VEGF、IGF-1、bFGF、Bcl-2呈正相关,与TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3呈负相关;GSK-3β与VEGF、IGF-1、bFGF、Bcl-2呈负相关,与TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3呈正相关。结论:糖尿病足创面中Wnt/β-catenin通路受到抑制且与细胞因子分泌、凋亡基因表达的改变有关。     

骨碎补提取物调节成骨细胞活性、增殖及相关基因表达的实验研究

目的:研究骨碎补提取物对成骨细胞活性、增殖及相关基因表达的影响。方法:取SD大鼠,分离并培养股骨内的成骨细胞,分为用0.02g/mL骨碎补提取物处理的骨碎补组以及用不含血清培养基处理的对照组;处理后24、36、48h时,采用CCK-8试剂盒测定成骨细胞的增殖活力,采用荧光定量PCR试剂盒测定成骨活性相关基因、增殖相关基因的mRNA表达量。结果:处理后24、36、48h时,骨碎补组成骨细胞的增殖活力值显著高于对照组;骨碎补组成骨细胞中Runx2、OPN、OCN、ALP、OPG、PI3K、AKT、EKR1/2、CyclinD1、CDK2、CDK4、E2F的mRNA表达量显著高于对照组。结论:骨碎补提取物能够促进成骨细胞增殖、增加成骨细胞的成骨活性,同时通过PI3K/AKT、ERK1/2信号通路加速细胞周期的进程。     

脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields, PEMFs）对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖、成骨分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将培养的第3代大鼠BMSCs分为3组。3个组均以LG-DMEM完全培养基培养1 d,待细胞贴壁后更换新鲜培养基,对照组不做干预处理; PEMFs组进行8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预,每天40 min,持续21 d;成骨诱导基(OM)组加入成骨诱导剂,不予磁场干预。采用MTT法测定增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）、茜素红S染色进行成骨分化鉴定;利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测Wnt/β-catenin信号通路及成骨分化相关基因的表达。结果 相较对照组,成骨诱导剂在干预第7、14、21 d可提高BMSCs的增殖活性（P<0.05）;PEMFs促增殖作用不明显。在BMSCs分化方面,PEMFs组及OM组ALP、茜素红S染色阳性强度均高于对照组（P<0.05）。定量RT-PCR结果显示,PEMFs组及OM组Wnt1、Wnt3a、LRP5、β-catenin、BMP-2、Runx2、ALP、OC mRNA的表达相较于对照组在相应时间点均有所上调（P<0.05）。PEMFs组各检测结果较OM组低,但趋势基本一致。结论 PEMFs在8 Hz、3.8 mT条件下可促进BMSCs的成骨分化,这可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

还原型谷胱甘肽上调β-catenin蛋白表达促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GST)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。方法:通过碱性磷酸酶(ALP)染色以及细胞外钙化结节来检测成骨细胞MC3T3-E1的分化情况;GST干预MC3T3-E1成骨细胞株7 d、14 d和21 d后,利用Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、OSX、COLⅠ、OCN基因及Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、LRP5和GSK-3β的表达;通过Western blot检测β-catenin蛋白表达。结果:ALP染色观察到MC3T3-E1细胞外基质存在钙质沉积,且MC3T3-E1 ALP活性阳性。GST能明显提高MC3T3-E1细胞成骨相关基因以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。Western blot结果提示GST可以明显促进β-catenin蛋白的表达。结论:MC3T3-E1细胞本身具有一定的成骨细胞特性,有效浓度的GST能促进小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化,Wnt/β-catenin信号转导通路在成骨分化过程中起一定的调节作用。     

舒尼替尼通过Wnt/β-catenin信号抑制肾癌细胞体外生长和侵袭的实验研究

目的:研究舒尼替尼对肾癌细胞体外生长、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:培养肾癌细胞株ACHN并用不同剂量舒尼替尼(1、2、4、8μmol/L)进行处理,以不含舒尼替尼的处理条件作为阴性对照。处理后24h时,测定细胞中凋亡基因、侵袭基因、Wnt/β-catenin信号通路的mRNA表达量。结果:处理后24h时,1、2、4、8μmol/L舒尼替尼组中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量显著高于阴性对照组,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量显著低于阴性对照组;舒尼替尼剂量越高,细胞中NPRL2、Bax、caspase-3、caspase-9的mRNA表达量越高,MMP2、MMP9、Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin的mRNA表达量越低。结论:舒尼替尼能够通过抑制肾癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路来增加凋亡基因的表达、抑制侵袭基因的表达,进而抑制细胞的生长和侵袭。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶9与胃癌的侵袭和转移

胃癌的侵袭和转移依赖于肿瘤间质中的血管生成和细胞外基质的降解。血管内皮生长因子(VEGF)是目前所知的作用最强的促血管生成因子之一,它可以直接或间接地参与血管生成的每个环节。基质金属蛋白酶9(MMP-9)是一种与胃癌侵袭和转移密切相关的蛋白酶,它通过降解细胞外基质引起胃癌的侵袭和转移。现以VEGF、MMP-9的主要生物学效应、与肿瘤侵袭转移(尤其是胃癌)的关系及可能机制进行综述。     

浅谈治肺癌兼顾治风

[目的]探讨治疗肺癌兼顾治风的临床意义.[方法]通过对中医基础理论的分析、中医文献的阅读,以及结合导师奚肇庆教授临证治疗肺癌的经验,初步探析治疗肺癌兼顾治风的运用.[结果]无论外风还是内风,在肺虚情况下,均可侵袭肺脏,同时与气滞、血瘀、痰结、湿聚、热毒等相互胶结,日久积滞而成肺癌,并可导致肺癌的发展及转移.[结论]肺癌的发病机理复杂,风邪在肺癌发病、发展过程中均有促进的作用.在治疗时兼顾治风,可延缓疾病进程,缓解临床症状,提高临床疗效.     

电子健康及其发展研究

近几年电子健康体系建设引起广泛关注并取得成效。系统介绍电子健康发展历程,结合存在的一些问题探讨如何完善电子健康体系。通过现状分析对电子健康未来发展趋势进行展望,即发展人本电子健康,并就如何发展人本电子健康事业提出建议。     

心房颤动：心率与心律同等重要

两项新的研究显示，在心房颤动的药物治疗方面控制心率不仅与控制心律的疗效及操作相当，而且更加经济、安全。因而我们可以推测由于药物控制心率副作用较少，可能会降低心房颤动患者的住院率。     

The ivory towers are as resilient as ever

I have a patient called Betty. Betty is 75 and is weighed down by more than her share of troubles. She has had severe rheumatoid arthritis for as long as I have known her - which is approaching 30 years. Her pains, which are still severe despite hip and knee replacements, have been augmented by the recent death of her husband. Now she faces a further hurdle： the painkiller that is most effective for her is about to be withdrawn.     

象牙塔里的人们依旧如故

我有一个叫Betty的病人，她今年75岁。从我认识她以来，她就一直患有严重的类风湿关节炎，到现在已经快30年。尽管做了髋关节和膝关节的置换，她还是痛得很厉害。而最近丈夫的去世使她的病情更糟了。现在，她又面临一个新的问题：过去对她最有效的止痛剂即将从市场上消失。     

血管内皮细胞生长因子及其受体与白血病

血管新生在白血病发生、发展过程中起着重要的作用,血清血管内皮生长因子(VEGF)水平能够在一定程度上解释白血病血管新生现象,VEGF是作用最强、特异性最高的血管新生调节因子,白血病细胞不仅分泌VEGF还不同程度的表达VEGF受体,VEGF在刺激白血病细胞增殖、迁移中发挥重要作用。动态检测血清VEGF水平可在一定程度上了解白血病的状态和体内白血病细胞的总负荷量,对白血病的疗效及预后判断有一定的指导意义。文章综述VEGF及其受体与白血病的关系。