PPARα激动剂抑制脂多糖诱导的单核细胞组织因子表达和促凝血活性

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）激动剂（非诺贝特）对细菌脂多糖（LPS）诱导的单核细胞株THP-1细胞的组织因子（TF）表达和促凝血活性（PCA）的影响。方法用非诺贝特预处理THP-1细胞，分别用流式细胞术（FCM）和改良组织因子凝血时间法（TiFaCT）检测LPS刺激下THP-1细胞的TF蛋白表达水平和TF-PCA。结果非诺贝特抑制LPS诱导下THP-1细胞的TF蛋白表达上调，并以浓度依赖的方式抑制LPS诱导下的TF-PCA增加（F=62．79，P〈0．05）。50μmol／L和100μmol／L浓度的非诺贝特分别使TF-PCA下降到LPS组的29％和25％。结论PPARα激动剂抑制LPS诱导的单核细胞TF蛋白表达和TF-PCA，这可能是PPARα激动剂减少动脉粥样硬化血栓形成并发症的机制之一，并在血栓性疾病的防治中具有潜在的临床价值。     

PPARγ激动剂对单核细胞炎症反应的调控作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对单核细胞炎症反应的影响。方法体外培养THP-1人单核细胞,将细胞分为对照组、实验组、吡格列酮组和GW9662组。对照组仅加入细胞培养液;实验组用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激细胞;吡格列酮组在PAAF作用前加入终浓度为20μmol/L的PPARγ激动剂吡格列酮进行干预;GW9662组:在吡格列酮干预前30 min,先行加入PPARγ拮抗剂GW9662,最后加入PAAF。分组处理6 h后收集各组细胞,采用Real-Time PCR技术检测促炎症细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)mRNA的表达;分别采用RT-PCR和Western blotting法检测PPARγmRNA和蛋白的表达。结果 PAAF刺激后,与对照组比较,实验组、吡格列酮组和GW9662组细胞TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量明显升高,PPARγmRNA的相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);与实验组比较,吡格列酮组TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量明显降低,PPARγmRNA的相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);与吡格列酮组比较,GW9662组TNF-α和IL-6 mRNA的相对表达量均明显升高,PPARγmRNA的相对表达量明显降低,差异也有统计学意义(P0.05)。Western blotting检测结果显示:各组PPARγ的蛋白表达与mRNA表达的变化趋势相似,但吡格列酮组与对照组、GW9662组与吡格列酮组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PPARγ激动剂可通过上调PPARγ表达,减少PPAF刺激所致的促炎症细胞因子的产生,从而抑制单核细胞的炎症反应。     

PPARα激动剂降血脂作用的研究进展

PPARα是PPARs家族一个重要的亚型,PPARs是一组核激素受体,属于Ⅱ型核受体超家族。PPARα激动剂临床上用于治疗高脂血症。PPARα激动剂主要包括天然型和合成型两大类。其中,合成型PPARα激动剂从结构上可分为苯基并杂环类、酰脲类、酰胺类、苯基GFDA2唑(噻唑)类等。目前已有不少PPARα激动剂被批准用于临床或处于临床研究阶段。本文从PPARα的结构特点及生理功能出发,根据其结构分类,对上述各类PPARα激动剂的研究进展进行了综述。     

PPARα、β在高血压房颤患者外周血单核细胞中的表达

目的 通过研究高血压房颤(h-AF)患者外周血单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α、β(PPARα、PPARβ)的表达水平,探讨其在房颤发病中的可能作用。 方法 对103例h-AF患者(其中持续性房颤55例,阵发性房颤48例),以及按照年龄配对选取的50例单纯高血压患者采外周静脉血,采用实时荧光定量PCR方法,测定外周血单核细胞PPARα、PPARβ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6) mRNA的表达,酶联免疫吸附法测定血清C反应蛋白(CRP)和白细胞介素-1(IL-1)的水平。 结果 PPARα mRNA水平在单纯高血压患者、阵发性h-AF及持续性h-AF中逐渐降低(1.34±0.17、1.09±0.23、0.85±0.22),差异有统计学意义(P均<0.001);TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、CRP及IL-1逐渐升高,差异有统计学意义(P均<0.001);而PPARβ mRNA在各组之间差异无统计学意义。控制混杂因素后,偏相关分析提示左心房直径与CRP、IL-1、IL-6 mRNA及TNF-α mRNA呈正相关(P均<0.05);而偏相关分析提示PPARα mRNA与CRP、IL-1、IL-6 mRNA及TNF-α mRNA呈负相关,相关系数分别为-0.519、-0.532、-0.491和-0.528(P均<0.05)。 结论 在高血压房颤患者中,炎症相关指标表达的升高可能与心房重塑有密切的关系,并进而导致房颤的发生发展;而PPARα与上述炎症指标呈负相关,可能在调节房颤发生发展过程中起有益作用。     

大肠癌PPARγ和PPAR8基因的表达及其与临床病理的关系

目的研究大肠癌过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisomeproliferator—activatedreceptor,PPAR）中PPARy和PPAR8基因mRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。方法采用SYBRGreenI实时定量RT—PCR技术检测38例手术切除的大肠癌及相应癌外正常大肠组织中PPARγ和PPAR8mRNA的表达。结果①表达阳性率PPARymRNA在癌组织低于相应癌外正常组织（52．6％VS86．8％,P=0．001）,PPARSmRNA在两者间无差异（50．0％VS44．7％,P=0．646）。大肠癌组织PPARγmRNA的表达水平低于癌外正常组织[0．0016（0,0．017）VS0．011（0,0．088）,P=0．036];PPARSmRNA则两者间表达无差异[0．086（0,0．24）VS0．052（0,0．19）,P=0．73]。②大肠癌浸润越深,PPARγmRNA相对表达水平越低,PPAR8mRNA的表达与临床病理参数间无明显关联。③PPARγ和PPARSmRNA表达无相关性（r=0．098,P=0．560）。结论大肠癌PPARγmRNA低表达,且与大肠癌浸润程度有关;PPARγmRNA表达无明显上调,两基因间表达水平无相关性。     

PPARγ酌激动剂体外筛选模型的建立

目的：构建一种过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR）γ激动剂体外筛选模型,为筛选具有潜在治疗效果的PPARγ激动剂提供研究手段。方法：用脂质体2000（LipofectamineTM 2000）将含有PPARγ基因质粒（pIRES2-PPARγ）、萤火虫荧光素酶报告基因质粒（pPPRE×3-TK-Luciferase）以及内参照质粒（pRL-TK）按不同比例共转染入人胚胎肾细胞HEK293细胞,并对3种质粒比例进行优化;以不同配体处理转染3种质粒的HEK293细胞,通过检测荧光素酶相对活性来确定加入配体对PPARγ的激动效应;采用经典的PPARγ激动剂和PPARγ特异性拮抗剂,其他核受体激动剂以及PPARα激动剂考察不同化合物对PPARγ的激动作用程度,确定模型的特异性;以Z’值考察模型重复性;并观察了PPARγ激动剂的作用时间特点。结果：PPARγ质粒、报告基因质粒以及内参照质粒比例为2∶6∶1时相对荧光素酶活性最高;PPARγ激动剂罗格列酮可显著增加相对荧光素酶的活性而PPARγ特异性拮抗剂GW9662可抑制这种作用,且相对荧光素酶的活性随着处理时间的增加而升高;地塞米松,全反式维甲酸,雌二醇和非诺贝特无上述活性;重复9次实验后计算得Z’=0.70。结论：本研究成功建立了一种PPARγ激动剂筛选模型,且模型特异性和重复性较好,为进一步筛选具有PPARγ激动剂提供了理想的研究手段。     

PPARα、PPARγ及其激动剂的心血管保护作用研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是核受体超家族中由配体激活的核转录因子,通过作用于靶基因的启动子调节基因转录而发挥多种有益的生理作用.一直以来,人们对PPARα激动剂贝特类药物的调脂作用和PPARγ激动剂噻唑烷二酮类药物的降糖效应给予了较多的关注,而对其更为广泛的心血管保护作用研究较少.     

PPARγ激动剂抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞合成肿瘤坏死因子

目的:研究过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)激动剂(罗格列酮)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激乳鼠心肌细胞合成肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响,旨在探讨罗格列酮作用于心肌细胞时,在细胞因子调节中发挥的作用.方法:采用酶消化和差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞.罗格列酮预处理30min后,用AngⅡ与乳鼠心肌细胞共同培养24h,然后分别采用ELISA和RT-PCR法检测细胞培养上清液TNF-α含量和心肌细胞TNF-αmRNA表达水平.结果:AngⅡ刺激乳鼠心肌细胞TNF-α蛋白质合成和mRNA表达增加,罗格列酮抑制AngⅡ的作用(P＜0.01),且在一定范围内,浓度越高作用越强.结论:罗格列酮抑制AngⅡ刺激的乳鼠心肌细胞TNF-αmRNA表达和蛋白质合成,罗格列酮这一作用为治疗慢性心力衰竭提供了新的思路.     

PPARγ受体激动剂在脑梗死治疗中的研究进展

过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proli-ferator-activated receptor γ,PPARγ)是近年来提出的一个新概念,它是一类配体依赖的转录因子,是基因转录中传递过氧化物酶体增长因子效应的一类细胞核受体.     

PPARγ在绒毛组织中的表达与早期自然流产的关系

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPARγ)蛋白在正常早孕及早期自然流产患者绒毛组织中的差异表达,探讨PPARγ与早期自然流产的关系。方法应用免疫组化PV两步法、Western blot法检测PPARγ蛋白在正常早孕妇女(对照组,n=40)和早期自然流产患者(实验组,n=40)绒毛组织中的表达。结果免疫组化显示PPARγ蛋白主要在两组绒毛组织中细胞滋养层细胞及绒毛外滋养层细胞中表达;Western blot法显示PPARγ蛋白在实验组绒毛组织中的表达较对照组高,差异有统计学意义(P<0．01)。结论 PPARγ对妊娠早期滋养细胞浸润起负性调节作用,PPARγ蛋白表达水平增高,可能与自然流产的发生有关。     

PPAR及其激动剂与脂肪酸代谢及胰岛素抵抗

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)在脂肪细胞分化、脂肪酸代谢中起重要作用，PPAR及其所调控基因的激活可促进脂肪细胞分化、减少脂质产生、增加脂肪酸氧化，从而减少脂质的异位沉积，进一步改善损伤的胰岛素信号转导通路，逆转胰岛素抵抗。针对脂肪酸合成及氧化的关键调控点的药物可能是今后治疗胰岛素抵抗引发的一系列代谢异常的新的靶点。     

烫伤后创面脓毒症大鼠肝脏PPARα mRNA的表达

目的探讨烫伤后创面脓毒症大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体αmRNA的表达规律及意义。方法60只背部30%Ⅲ度烫伤大鼠随机分为创面脓毒症组和烫伤对照组,创面脓毒症组大鼠烫伤后10min创面涂布铜绿假单胞菌建立创面脓毒症模型,通过荧光定量PCR法测定伤前、伤后24h、48h、96h及7d的PPARαmRNA表达变化。结果大鼠烫伤后肝组织PPARαmRNA的表达在伤后早期轻度增强,此后表达明显下调,创面脓毒症组下降趋势更明显,致伤后96h表达量降低至最低点,并显著低于对照组（P〈0.05）。结论烫伤后创面脓毒症的发生引起肝脏PPARαmRNA表达下调,这种变化可影响肝脏脂质的代谢过程。     

非酒精性脂肪性肝病大鼠PPARα的表达及其意义

目的观察PPARα在大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）中的表达变化,以探讨其在NAFLD发生中的作用。方法16只雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组和模型组。采用喂饲高脂饲料复制大鼠非酒精性脂肪性肝病模型。观察不同处理组大鼠肝脏病理形态学的变化。应用生化法检测大鼠肝内游离脂肪酸（FFA）含量。应用免疫组化法观察大鼠肝内PPARα蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,模型组所有的大鼠均出现重度脂肪变性（〉75%）和程度不等的小叶内灶性炎细胞浸润;肝内FFA明显升高（P〈0.05）,大鼠肝内PPARα蛋白质的表达明显增强（P〈0.01）,主要为核内表达增强。结论NAFLD时存在FFA和PPARα表达的异常,PPARα表达异常在非酒精性脂肪性肝病的发病机制中可能起一定的作用。     

PPARγ在慢性乙型病毒型肝炎患者肝组织中的表达及意义

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在慢性乙型病毒型肝炎患者肝组织中的表达,并探讨其临床意义.方法:采用半定量RT-PCR法和免疫组化的方法检测慢性乙型肝炎患者肝组织中PPARγ表达情况,创伤意外肝破裂来源的正常肝组织作为正常对照.结果:肝组织中PPARγ水平与肝组织炎症无明显相关性(γ=0.457,P＞0.05);而正常肝组织和纤维化SO期等肝组织中PPARγ呈明显阳性,而纤维化S3、s4期肝组织中PPARγ表达呈弱阳性,强度明显低于正常肝组织(P＜0.05).PPARγ基因表达水平随着肝纤维化程度的增加而不断下降.结论:PPARγ在明显肝纤维化肝组织中表达下调,可能参与了慢性乙型肝炎肝纤维化的发病机制.     

胰岛素对单核细胞PPARγ配体结合转录活性的影响

目的探讨胰岛素对单核细胞中PPARγ配体结合转录活性的影响。方法在人类单核细胞系U937细胞中共转染PPARγ表达载体和PPARγ报告载体,后者表达虫荧光素酶,其启动子中含有PPARγ结合位点(PPRE),细胞表达虫荧光素酶的量受PPARγ配体结合转录活性决定,裂解细胞加入虫荧光素酶底物后,所产生的荧光强度即代表PPARγ的配体结合转录活性。结果共转染细胞加入已知PPARγ的配体吡格列酮后显著激活PPARγ的配体结合转录活性,使荧光强度增强4.53倍(P<0.001),而在加入吡格列酮同时加入胰岛素,荧光强度明显减弱,0.5μmol/L胰岛素使荧光值降低(21±6)%(P=0.024);1μmol/L的胰岛素则使荧光强度降低(41±7)%(P=0.006);胰岛素作用呈剂量依赖性(P=0.029)。结论胰岛素在单核细胞中显著抑制PPARγ的配体结合转录活性。     

高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织PPARα和CPT-I mRN A的表达

[目的]探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和肉碱棕榈酰转移酶(CPT-I)在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织中的表达及其意义.[方法]模型组SD大鼠给予高脂饲料喂养,对照组大鼠予以普通饲料喂养,12周末处死,HE染色,光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变;测定肝组织匀浆中CHO、TG含量;用自动生化分析仪检测血清ALT、AST、CHO、TG、LDL-C和HDL-C水平,比色法检测血清FFA含量,放免法测定血清TNF-α含量;以RT-PCR法检测大鼠肝组织中PPARαmRNA和CPT-I mRNA表达.[结果]模型组大鼠血清ALT、AST、FFA及TNF-α水平显著高于正常对照组(P＜0.01),血清CHO、TG、LDL-C水平和肝匀浆CHO、TG的含量也较正常对照组显著增高(P＜0.05,P＜0.01),而血清HDL-C明显低于正常对照组(P＜0.01);模型组大鼠脂肪变程度积分和炎症较正常组明显升高(P＜0.01),而肝组织PPARαmRNA和CPT-I mRNA的表达水平则显著下降(P＜0.01).[结论]持续12周的高脂饮食可以诱导NAFLD大鼠模型,模型组大鼠肝组织PPARαmRNA和CPT-I mRNA的表达降低,在肝细胞成脂性改变中起重要作用.     

高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织PPARα和CPT—ⅠmRNA的表达

[目的]探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和肉碱棕榈酰转移酶(CPT-Ⅰ)在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织中的表达及其意义。[方法]模型组SD大鼠给予高脂饲料喂养,对照组大鼠予以普通饲料喂养,12周末处死,HE染色,光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变;测定肝组织匀浆中CHO、TG含量;用自动生化分析仪检测血清ALT、AST、CHO、TG、LDL-C和HDL-C水平,比色法检测血清FFA含量,放免法测定血清TNF-α含量;以RT-PCR法检测大鼠肝组织中PPARαmRNA和CPT-ⅠmRNA表达。[结果]模型组大鼠血清ALT、AST、FFA及TNF-α水平显著高于正常对照组(P<0.01),血清CHO、TG、LDL-C水平和肝匀浆CHO、TG的含量也较正常对照组显著增高(P<0.05,P<0.01),而血清HDL-C明显低于正常对照组(P<0.01);模型组大鼠脂肪变程度积分和炎症较正常组明显升高(P<0.01),而肝组织PPARαmRNA和CPT-ⅠmRNA的表达水平则显著下降(P<0.01)。[结论]持续12周的高脂饮食可以诱导NAFLD大鼠模型,模型组大鼠肝组织PPARαmRNA和CPT-ⅠmRNA的表达降低,在肝细胞成脂性改变中起重要作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-α激动剂对高脂喂养大鼠脂肪因子表达的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激动剂非诺贝特对高脂饮食诱导的肥胖SD大鼠胰岛素敏感性和部分脂肪因子表达的影响。方法随机将大鼠分为3组(n=10):高脂饮食喂养加非诺贝特治疗组(简称治疗组)、高脂饮食喂养组(简称高脂组)和标准饮食对照组(简称对照组)。高脂饮食喂养SD大鼠6周后,以非诺贝特20mg·kg-1·d-1灌胃治疗4周,以RT-PCR法半定量测定脂肪组织部分脂肪因子肿瘤坏死因子-a(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、血管紧张素原(AGT)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)及脂联素mRNA的表达,同时检测血游离脂肪酸(FFA)、甘油三脂(TG),并用稳态模式评估法(HOMA)评价胰岛素抵抗(IR)指数。结果非诺贝特治疗4周后,高脂组、治疗组、对照组的血FFA分别为(2·37±0·60)、(1·59±0·30)、(1·33±0·34)mmol/L,TG分别为(0·48±0·11)、(0·30±0·04)、(0·36±0·07)mmol/L,HOME-IR指数分别为12·30±3·97、5·03±1·88、4·17±1·27;脂肪组织TNF-α的mRNA半定量值分别为1·726±1·408、0·713±0·711、0·593±0·382,脂联素分别为0·660±0·192、0·949±0·35、0·936±0·130;上述各指标治疗组与高脂组比较差异均有显著性(P<0·05),治疗组与对照组比较差异均无显著性(P>0·05);3组间的AGT、AT1R和IL-6的mRNA表达差异均无显著性(P>0·05)。结论PPAR-α激动剂非诺贝特具有改善高脂饮食诱导的脂质异常、提高胰岛素敏感性以及调节脂肪因子表达的作用。     

PPAR-γ激动剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的表型转化

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptorgamma,PPAR-γ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的抑制作用及其可能的机制.方法 体外培养小鼠血管平滑肌细胞,应用AngⅡ诱导VSMCs的表型转化,给予罗格列酮预处理后用Transwell检测细胞迁移并在激光共聚焦显微镜下观察细胞微丝骨架,用RT-qPCR和Western blot分别检测PPAR-γ、PKG Ⅰ α以及VSMCs收缩型标志因子(smooth muscle 22 alpha,SM22α)mRNA和蛋白水平.应用PPAR-y抑制剂预处理后再给予罗格列酮刺激,Western blot检测PKG Ⅰ α和SM22α蛋白水平.结果 ①罗格列酮(20 μmol/L)预处理可抑制AngⅡ诱导VSMCs的迁移(P＜0.05).②罗格列酮(20 μmol/L)预处理后可抑制AngⅡ诱导VSMCs微丝骨架的形成.③RT-qPCR检测结果显示:罗格列酮(20 μmol/L)预处理后可抑制AngⅡ诱导PKG Ⅰα和SM22α mRNA的下调作用(P＜0.05).④Western blot检测结果显示:罗格列酮(20 μmol/L)预处理后可抑制AngⅡ诱导PKG Ⅰ α和SM22α蛋白水平的下调作用(P＜ 0.05);PPAR-y抑制剂GW9662可减弱罗格列酮对PKG Ⅰα和SM22α的促表达作用(P＜0.05).结论 罗格列酮通过激活PPAR-y来抑制AngⅡ诱导VSMCs的表型转化,激活PPAR-y可能通上调PKG Ⅰ α表达发挥上述作用.     

电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织PPARγ mRNA表达的影响

目的应用电针刺激大鼠肝俞、足三里、丰隆、太冲穴,观察其对高脂饮食所致的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)的表达的影响。方法40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和药物组,每组10只。除正常组、模型组外,其他两组在造模12周后分别进行针灸和西药治疗;16周时将所有大鼠断头处死,用HE染色观察肝组织光镜下的病理改变;RT-PCR法检测PPARγmRNA表达情况。结果除正常组外其余各组大鼠肝组织PPARγmRNA的表达均较有不同程度的减弱(均P<0.01);模型组与电针组比较,差异非常显著(P<0.01);电针组和药物组比较,差异显著(P<0.05)。结论肝组织PPARγγmRNA的表达减弱与非酒精性脂肪性肝炎的发生密切相关,电针可以起到激活PPARγ的作用。