儿童神经母细胞瘤中多药耐受相关蛋白(MRP)基因的表达与N-myc癌基因的扩增和过分表达有关

最近有人提出多药耐受相关蛋白(MRP)基因编码一个新的膜转运蛋白,在许多人类细胞株中该基因的表达与非P-糖蛋白介导的多药耐受相关。为了进一步阐明MRP在临床药物耐受中的作用,作者应用KNA多酶链反应检测了5种神经母细胞瘤株SH-SY5Y、LA-N-1,LA-N-2,IMR-32和BE(2)-C和25例原发性未治疗的神经母细胞瘤标本中MRP基因的表达以及N-myc癌基因和MDR_1基因的表达。结果表明5种细胞株中有3种细胞株SH-SY5Y、IMR-32和BE(2)-C有明显高水平的MRP基因表达。25例神经母细胞瘤标本中MRP表达水平显著高于正常外周血单核细胞内该基因的表达水     

P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白和谷胱苷肽S-转移酶在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的　探讨P 糖蛋白、多药耐药相关蛋白 (MRP)和谷胱苷肽S 转移酶 (GST π)在小儿神经母细胞瘤 (NB)中的表达及临床意义。方法　应用免疫组织化学SP法检测 70例NB组织中P 糖蛋白、MRP和GST π的表达。结果　P 糖蛋白、MRP和GST π的阳性率分别为 61 4% ( 43 / 70 )、3 8 6%( 2 7/ 70 )和 5 1 4% ( 3 6/ 70 )。P 糖蛋白与MRP、P 糖蛋白与GST π、MRP与GST π及P 糖蛋白、MRP与GST π共表达阳性率分别为 3 2 9% ( 2 3 / 70 )、3 5 7% ( 2 5 / 70 )、2 7 1% ( 19/ 70 )和 2 4 3 % ( 17/ 70 )。P 糖蛋白、GST π与MRP均具有相关性 (r =0 3 87,P =0 0 0 1;r=0 3 0 0 ,P =0 0 12 ) ,P 糖蛋白与GST π无相关性 (r=0 169,P =0 161)。年龄大于 1岁的NBP 糖蛋白和MRP的表达阳性率 ( 72 3 % ,48 9% )均高于小于 1岁者 ( 3 9 1% ,17 4% ,P <0 0 5 )。分化性NBP 糖蛋白、MRP和GST π表达 ( 93 3 %、86 7%和80 0 % )均明显高于无分化的NB( 5 2 7%、2 5 5 %和 43 6% ,P <0 0 5 )。有转移的NBMRP表达( 61 9% )高于无转移者 ( 2 8 6% ,P <0 0 5 )。P 糖蛋白、MRP和GST π表达与性别和分期无关。MRP阳性者中位生存期和 2年累计生存率 ( 2 0个月 ,48 9% )均较阴性者 ( 2 4个月 ,77 9% )下降 (P <0 0 5 )     

N-myc在视网膜母细胞瘤细胞株FMC-RB_1中的扩增

在视网膜母细胞瘤演变过程中,N-myc表达的作用是有争议的。N-myc只在有限的几种正常和肿瘤组织中表达。视网膜母细胞瘤比正常已分化的视网膜表达较高水平的N-myc特异mRNA,这种表达如果不是经常的话,也具有一定的频率。对照之下,N-myc扩增已在几乎20%的视网膜母细胞瘤病例中检查到。在缺乏基因扩增的情况下,已发现N-myc高水平表达。但是,Squire等观察到胎儿视网膜和5个具有单拷贝N-myc的视网膜母细胞瘤其N-myc表达水平类似。他们认为,N-myc在视网膜母细胞瘤中     

重组神经生长因子受体基因在受体缺乏的神经母细胞瘤细胞系中的表达

神经母细胞瘤是儿童期的常见恶性肿瘤之一。临床上,半数以上神经母细胞瘤有明显的N-myc癌基因扩增。神经生长因子(NGF)可使某些神经母细胞瘤细胞分化成神经元样的细胞。但对有N-myc扩增的神经母细胞瘤则可能因NGF受体缺乏而无明显促分化反应。本研究运用重组DNA技术将人NGF受体基因重组到有N-myc扩增,且NGF受体表达很低的神经母细胞瘤系(IMR-32)中,经克隆化培养、筛选,建立了稳定的细胞系—IMR-32/NGFR和对照细胞系IMR-32/NEO。经用抗NGFR的单克隆抗体检测用Flow cytometry技术证实IMR-32/NGFR系中有明显的NGF受体表达,而其母系IMR-32和空病毒对照系IMR-32/NEO则无表达迹象,说明NGF受体表达在IMR-32/NGFR系中是特异的,并能同抗NGFR单克隆抗体特异结合。用Northern B10ting技术亦测得IMR-32/NGFR中NGFR的mRN A明显表达。而其母系IMR-32和对照系IMR-32/NEO则无明显表达。这说明IMR-32/NGFR系中NGFR在mRNA水平上亦是特异的。N-myc和K-ras癌基因在IMR-32、IMR-32/NEO、IMR-32/NGFR三系中无明显变化。在NGF处理后,形态上三系均无明显的分化迹象。但IMR-32/NGFR在神经原纤维轻链的表达上轻度增高。c-fos癌基因的表达见于所有三个细胞系,IMR-32/NGFR略强些。这些说明,在恢复了NGFR基因和表达之后,对N-myc和K-ra     

从HER-2/neu癌基因扩增推测乳腺癌之预后

最近,分子生物学家们通过对肿瘤实体标本的研究,已在特异性人类肿瘤组织中发现某些原癌基因的扩增现象及其它一些特异性原癌基因的过量表达。1984年Seeger等首先发现在人类神经母细胞瘤组织中存在N-myc的重复拷贝,并证实N-myc的扩增和该肿瘤的临床分期相关联。他们的实验研究表明N-myc扩增可作为一项独立的预后指标,而且肿瘤细胞中N-myc的拷贝数越多,则神经母细胞瘤患者预后越差。临床观察发现伴有N-myc扩增的Ⅱ期神经母细胞瘤患者和Ⅲ、Ⅳ期患者的预后无显著性差     

原发性视网膜母细胞瘤中的N-myc基因产物

视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿眼内最常见的恶性肿瘤。有证据提示,RB的发生与RB基因(该基因定位于13q14,具有抑制调控细胞内某些其它基因表达的功能)的一对正常的等位基因的丢失或失活有关。当正常的RB基因产物不存在时,受RB基因调控的那些基因就会持续地表达,致使所在细胞发生恶性转化。由于N-myc基因属于上述被调控基因之列,人们推测它在RB的发生发展过程中可能有重要的作用。李     

人神经母细胞瘤中bcl-2基因表达与肿瘤细胞凋亡间的关系及p16基因的表达

目的探讨人神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２基因表达状况及与细胞凋亡的关系，以及ｐ１６基因的表达况状。方法应用原位杂交和免疫组化技术检测神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２及ｐ１６两种基因的表达，并采用凋亡细胞原位检测方法对神经母细胞瘤组织切片中凋亡细胞数进行检测。结果原位杂交检测发现，２０例人神经母细胞瘤中，ｂｃｌ－２和ｐ１６基因表达阳性率均为９５％；免疫组化检测发现ｂｃｌ－２和ｐ１６蛋白表达阳性率均为１００％。χ２检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性。凋亡细胞原位检测结果显示，肿瘤组织凋亡细胞数量随ｂｃｌ－２基因表达增强而减少。结论人神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２基因有较普遍的表达，直接影响神经母细胞瘤中凋亡细胞的数量，ｐ１６基因未见明确的表达缺失。     

神经母细胞瘤染色体组型与预后的关系

神经母细胞瘤,除了已知的年龄及肿瘤分期等预后因素外,作者认为肿瘤染色体组型对判断该肿瘤的预后可能是重要的。为此,作者在获得14例儿童神经母细胞瘤细胞学基因资料的基础上,应用直接染色体制备或短期细胞培养方法,对28例不同分期的神经母细胞瘤患儿肿瘤染色体组型进行分析,同时对其中的10个病例进行原始肿瘤基因N-myc DNA分析。结果表明,18例Ⅳ期神经母细胞瘤病人有15例,3例Ⅲ期病人有2例肿瘤染色体组型出现1号染色体短臂异常,最常见断裂点     

siRNA下调astrocyteelevatedgene-1对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的: 探讨siRNA下调astrocyte elevated gene-1( AEG-1 )表达对神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法: 用设计合成的AEG-1 siRNA转染神经母细胞瘤细胞株M17和SK-N-SH,采用荧光定量RT-PCR技术观察AEG-1 siRNA对 AEG-1 基因表达的影响;用MTT法和克隆形成实验观察AEG-1 siRNA对神经母细胞瘤细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测下调 AEG-1 表达对神经母细胞瘤细胞凋亡及细胞周期的影响。结果: 用AEG-1 siRNA转染人神经母细胞瘤细胞,RT-PCR结果证实AEG-1 siRNA能显著基因下调 AEG-1 表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01);MTT法和克隆形成实验结果证明下调 AEG-1 表达可显著抑制神经母细胞瘤细胞的增殖;流式细胞术检测结果表明下调 AEG-1 表达可促进神经母细胞瘤细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G₀/G₁期。结论: AEG-1 siRNA可下调基因在神经母细胞瘤细胞中表达,并抑制神经母细胞瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。     

复发的急性白血病患者的多药耐药相关蛋白基因表达增强

鉴于多药耐药(MRD)基因的产物P-糖蛋白在临床耐药中起作用的观点难以得到直接证实;而近来又发现另一基因产物—多药耐药相关蛋白(MRP)的过度表达与某些细胞系的多药耐药产生有关,作者进一步采用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对62例初诊或复发的急性白血病患者的MRP和MRD基因从mRNA表达水平进行了检测。     

间变性淋巴瘤激酶基因在神经母细胞瘤中的致癌突变

晚期神经母细胞瘤是最难治的儿科肿瘤之一,它涉及多种遗传变异,包括高频率的N-myc基因扩增,染色体1p36和1q杂合子的丢失以及17q遗传物质的增加,这些都与神经母细胞瘤的发病机制有关。然而,由于缺乏有效分子靶点而阻碍了针对神经母细胞瘤治疗药物的研究进展。间变性淋巴瘤激酶(a     

干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达

背景：神经母细胞瘤是婴幼儿和儿童最常见的实体肿瘤之一,靶向肿瘤干细胞的治疗能够有望从根本上治愈肿瘤,但是肿瘤干细胞数量较少,并具有抗凋亡、抗放化疗能力等,导致其对于放疗、化疗并不敏感。 目的：探究干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义。 方法：收集2004年6月至2014年2月新疆医科大学第一附属医院小儿外二科诊治的58例神经母细胞瘤患儿临床资料,其中神经母细胞瘤患儿46例,节细胞母细胞瘤患儿12例,通过免疫组织化学分析法分析所有患儿肿瘤组织中的CD133表达水平,并研究神经母细胞瘤的病理分型、INSS分期、术后存活时长与CD133表达水平之间存在的联系。 结果与结论：共有22例(48%)神经母细胞瘤患儿CD133表达为阳性,有4例(33%)节细胞母细胞瘤患儿CD133表达阳性,肿瘤细胞胞浆为CD133主要表达部位。肿瘤组织各临床分期的CD133阳性率差异明显,其中1,2期为21%,3,4期为64%,4S期为36.4%,差异有显著性意义(P=0.011);组织分型为预后良好型患儿CD133阳性率为29%,明显低于预后不良组织型患儿(57%),差异有显著性意义(P=0.031)。CD133阴性患儿生存周期显著长于CD133阳性患儿(P < 0.05)。结果表明干细胞标志物CD133的表达与神经母细胞瘤发生、发展、转归有密切联系,在评估患儿术后存活时长、改进该病的诊断和治疗等方面具有重要意义。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

髓母细胞瘤与幕上原始神经外胚叶肿瘤中RASSF1A基因的甲基化差异

目的通过研究髓母细胞瘤与幕上原始神经外胚叶肿瘤（SPNET）中RASSF1A基因的甲基化改变,探讨颅内原始神经外胚叶肿瘤（PNET）的不同亚型中该基因的表遗传学差异及其意义。方法收集25例原发髓母细胞瘤,9例原发SPNET,3株髓母细胞瘤细胞系和2株SPNET细胞系。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子区的甲基化状态。应用去甲基化试剂5-aza-2’deoxycytidine处理存在基因表达缺失的细胞系,探讨基因表达与甲基化之间的关系。结果100％（25／25）的原发髓母细胞瘤、6／9的原发SPNET及全部PNET细胞系中均检测到RASSFIA基因的甲基化。相反,该基因甲基化在全部正常组织（包括2例小脑,5例大脑）中均未检测到。并且,RASSF1A在SPNET中的甲基化率明显低于髓母细胞瘤（Fisher精确检验,P=0．014）。在经去甲基化试剂处理的PNET细胞中,该基因表达得以恢复,证明甲基化与该基因沉默相关。结论RASSF1A甲基化是肿瘤特异性的,RASSF1A甲基化与PNET的发生有一定关联,不同亚型的PNET之间RASSF1A基因的不同甲基化状态提示髓母细胞瘤和SPNET是表遗传学上存在差异的两类肿瘤。     

AIF靶向短发夹RNA干扰重组载体对神经母细胞瘤细胞SHSY5Y的沉默作用

目的探讨AIF基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒对神经母细胞瘤细胞(SHSY5YAIF)基因的干扰作用。方法根据siRNA设计原则,构建靶向AIF基因的短发夹RNA干扰质粒(pGPU6/GFP/AIF),使用脂质体法转染人神经母细胞瘤细胞,通过RT-PCR和Wester blot印迹检测神经母细胞瘤细胞AIF基因mRNA和蛋白表达水平。结果 pGPU6/GFP/AIF重组质粒经限制性内切酶酶切及测序证明基因插入正确。质粒成功转染SHSY5Y细胞后,该细胞的AIFmRNA和蛋白表达明显下降(P0.05)。结论成功构建靶向AIF基因的shRNA表达载体转染神经母细胞瘤细胞,有效抑制AIFmRNA和蛋白表达,为AIF基因靶向治疗提供前期的实验依据。     

ALDH18A1调控神经母细胞瘤MYCN表达

目的探究乙醛脱氢酶18家族成员A1(ALDH18A1)与神经母细胞瘤恶性程度的关系及调控机制。方法免疫组化检测88例神经母细胞瘤患者中ALDH18A1和MYCN的表达以及同神经瘤恶性程度的关系,用转染ALDH18A1过表达和敲低载体对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行干预,Western blot检测MYCN蛋白表达;定量PCR检测MYCN的mRNA水平。结果在神经母细胞瘤组织中,ALDH18A1的表达在不同发病时间、肿瘤分期以及转移程度的患者中均呈显著差异(P0.001),同时MYCN同ALDH18A1的表达呈显著正相关(P0.001)。在ALDH18A1过表达组的SH-SY5Y细胞中,MYCN的蛋白及mRNA水平均大于ALDH18A1敲低组(P0.001)。结论 ALDH18A1能够通过促进MYCN的表达而加剧神经母细胞瘤的恶性程度。     

人神经母细胞瘤中bcl—2基因表达与肿瘤细胞凋亡间的关系及p16…

目的探讨人神经母细胞瘤中ｂｃｌ－２基因表达状况与细胞凋亡的关系，以及ｐ１６基因的表达况状。     

乳腺癌新辅助化疗对耐药基因MDR1和MRP表达的影响

目的:探讨乳腺癌新辅助化疗对耐药基因MDR1和MRP表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR方法检测20例乳腺癌病人新辅助化疗前、后肿瘤组织中耐药基因MDR1和MRP的表达情况,并采用自身对照研究新辅助化疗对耐药性的影响。结果:化疗前20例乳腺癌组织中有15例(75%)MDR1表达,18例(90%)MRP表达。化疗后,经自身对照检测发现,MDR1的表达无显著差异,而MRP的表达与化疗前相比有显著差异。结论:在乳腺癌中新辅助化疗对耐药基因MDR1的表达无影响,但可增加MRP的表达.     

初治急性髓系白血病成年患者I-mfa基因表达水平及临床意义的研究

目的探讨初治急性髓系白血病(AML)成年患者I-mfa基因表达水平及其与疾病发展、预后的临床意义。方法选择110例AML患者,其中男性66例,女性44例;年龄14~77岁,中位年龄32岁。通过实时荧光定量聚合酶链反应(realtime PCR)方法检测初治AML成年患者骨髓标本I-mfa基因的表达水平,分析其与疾病特征、临床疗效间的关系。结果以110例初治AML成年患者I-mfa基因表达量的中位数为分界点,将患者分为I-mfa基因低表达组66例和高表达组44例。在初治AML成年患者中,I-mfa基因表达水平在年龄、性别、FAB分型、外周血象、原始细胞比例、遗传学危险度分层及CD34表达间差异无统计学意义(P0.05)。I-mfa基因低表达组完全缓解(CR)率高于高表达组,差异有统计学意义(81.8%vs 59.1%,P=0.032)。I-mfa基因低表达组中位生存时间622 d(17~1 787 d),而高表达组患者中位生存时间418 d(14~1 806 d),差异有统计学意义(P=0.021)。结论 I-mfa基因低表达组初治AML成年患者CR率显著高于高表达组,其中位生存时间亦较高表达组长,提示I-mfa基因高表达AML成年患者可能预后较差,值得进一步研究。     

小鼠神经母细胞瘤N2a细胞脑啡肽酶基因的表达与启动子区甲基化和组蛋白修饰相关

目的研究小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a(N2a)细胞中脑啡肽酶(NEP)基因表达的表观调控机制,探讨DNA甲基化与组蛋白乙酰化之间的相互作用。方法体外培养N2a细胞,以3μmol/L、5μmol/L DNA甲基化酶抑制5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dc)及(300、500、700)nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)分别处理N2a细胞48 h和24 h。采用逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot法分别检测NEP的mRNA、蛋白表达;亚硫酸氢盐测序聚合酶链反应(BSP)法检测NEP基因启动子区DNA的甲基化水平;染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测NEP基因启动子区组蛋白H3的乙酰化水平。结果 5-Aza-dc和TSA均能剂量依赖地提高NEP基因的表达(P0.01);5-Aza-dc可诱导NEP基因去甲基化(P0.01);TSA可增高NEP组蛋白H3乙酰化水平(P0.05),但不能明显改变NEP基因DNA的甲基化水平(P0.05)。结论在小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中NEP基因的表达受DNA甲基化及组蛋白乙酰化的调控,组蛋白乙酰化水平并不影响DNA甲基化状态。     

人乳腺癌细胞化疗敏感性与相关基因表达的关系

目的探讨人乳腺癌细胞化疗敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系。方法MTT法检测5株人乳腺癌细胞株Bcap37、MCF-7、T47D、MDA-MB-231和MDA-MB-435对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性。流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-GP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和凋亡调控基因FAS、BCL-2、P53和P16的表达。结果不同人乳腺癌细胞株对同一药物敏感性差异较大。相关分析表明,细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达呈正相关(P<0.01),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关。结论人乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达有关。