祛寒逐风颗粒对骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的:观察祛寒逐风颗粒对膝骨性关节炎(KOA)大鼠炎症反应和NF-κB介导NLRP3炎性小体活化的影响。方法:建立骨性关节炎大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、祛寒逐风颗粒组(3,6,9 g/kg)和阳性药组,测量大鼠机械性痛阈值和膝关节直径,采用酶联免疫吸附实验测量大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6的含量变化,采用RT-PCR法测量大鼠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA含量,采用苏木精-伊红染色和阿尔新蓝染色观察组织的病理学变化,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17的蛋白水平。结果:与模型组比较,祛寒逐风颗粒组和阳性药组大鼠的机械性痛阈值增大,膝关节直径变小,血清中IL-1β、TNF-α和IL-6含量减少,组织中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平下调,软骨损伤和纤维化缓解,软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17蛋白表达下调。结论:祛寒逐风颗粒可能通过抑制NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化显着改善KOA大鼠的炎症反应并缓解疼痛,对骨关节炎发挥治疗作用。     

黄芪桂枝五物汤对神经病理性疼痛大鼠脊髓CX3CR1表达的影响

目的研究黄芪桂枝五物汤对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及对脊髓背角和背根节中脊髓小胶质细胞趋化因子受体1(CX3CR1)表达的影响。方法将50只SD大鼠随机分为模型组、黄芪桂枝五物汤高剂量组、黄芪桂枝五物汤中剂量组、黄芪桂枝五物汤低剂量组、塞来昔布组,每组10只。所有大鼠均建立坐骨神经慢性缩窄性损伤神经病理性疼痛模型,术后模型组给予生理盐水10 mL/kg灌胃,黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组分别给予黄芪桂枝五物汤0.2 mL/kg、0.1 mL/kg、0.05 mL/kg灌胃,塞来昔布组给予塞来昔布30 mg/kg灌胃,均1次/d,连续14 d。分别在造模前及术后3,5,7,14 d采用热刺痛仪测定各组大鼠的热缩足反射潜伏期,用免疫组化法检测各组大鼠脊髓背角和背根节中CX3CR1表达情况,用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测脊髓背角和背根节中CX3CR1 mRNA和蛋白的相对表达量。结果术后3 d各组大鼠热缩足反射潜伏期均较术前1 d明显缩短(P均<0.05),但模型组和塞来昔布组术后各时间段比较差异无统计学意义(P均>0.05);黄芪桂枝五物汤低、中剂量组从术后7 d开始、黄芪桂枝五物汤高剂量组从术后3 d开始热缩足反射潜伏期均明显长于模型组(P均<0.05)。免疫组化显示黄芪桂枝五物汤各剂量组脊髓背角和背根节中CX3CR1阳性细胞均显著少于模型组和塞来昔布组(P均<0.05),且黄芪桂枝五物汤高剂量组均明显少于黄芪桂枝五物汤低、中剂量组(P均<0.05),黄芪桂枝五物汤低、中剂量组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。模型组和塞来昔布组脊髓背角和背根节中CX3CR1 mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P均>0.05);黄芪桂枝五物汤各剂量组脊髓背角和背根节中CX3CR1 mRNA和蛋白相对表达量均显著低于模型组和塞来昔布组(P均<0.05),且黄芪桂枝五物汤高剂量组均明显低于黄芪桂枝五物汤低、中剂量组(P均<0.05),黄芪桂枝五物汤低、中剂量组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论黄芪桂枝五物汤对神经病理性疼痛模型大鼠具有显著镇痛作用,其可能通过调控脊髓背角和背根节CX3CR1的表达发挥作用,且呈一定剂量依赖性。     

黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型晚期糖基化终产物(AGEs)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨黄芪桂枝五物汤减轻糖尿病周围神经病变的作用机制。方法:以高脂饮食加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导法,制作糖尿病周围神经病变大鼠模型。造模成功后,按照随机数字表法分成模型组、黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组、甲钴胺组,共5组,另设正常组,自第5周开始黄芪桂枝五物汤干预,采用黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组(19. 40,4. 85,2. 43 g·kg-1·d-1)连续灌胃12周;甲钴胺组采用甲钴胺0. 25 mg·kg-1·d-1灌胃。实验结束后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测糖尿病周围神经病变大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB p65 mRNA含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β,TNF-α含量,坐骨神经组织RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达显著增加(P0. 01),p-NF-κB p65/NF-κB p65升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P0. 01)。经黄芪桂枝五物汤干预后,与模型组比较,各给药组血清IL-1β,TNF-α含量,RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达量均显著降低(P0. 01),黄芪桂枝五物汤高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(P0. 01),且呈剂量相关性,随黄芪桂枝五物剂量增加而效果明显。结论:黄芪桂枝五物汤可减轻糖尿病周围神经病变,其机制可能与阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路中组织细胞表面RAGE的表达、抑制NF-κB激活及其引发TNF-α触发的氧化应激和过度炎症反应,从而避免细胞受损和功能紊乱有关。     

“易层”贴敷抑制NLRP3炎症小体激活改善膝骨关节炎的实验研究

目的基于NLRP3/Capase-1轴研究易层贴敷膏药改善KOA滑膜炎症的治疗机制。方法将SD大鼠分为正常组,KOA组,"易层"组,抑制剂组,各组大鼠、滑膜HE染色,Western Blot检测大鼠滑膜NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白和软骨MMP-1、MMP-13蛋白表达水平,PCR检测滑膜NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达。结果 "易层"贴敷显著改善KOA大鼠滑膜炎症Krenn评分,IL-1β、TNF-α蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P0.05);在应用"易层"贴敷膏药后,KOA大鼠滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平均较KOA组下调,差异具有统计学意义(P0.05);而应用Caspase-1抑制剂后,具有同样的下调作用,两组间无统计学意义(P0.05);应用"易层"贴敷膏药干预后,KOA大鼠软骨中MMP-1及MMP-13水平下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 "易层"贴敷膏药可能通过下调NLRP3及Caspase-1的表达抑制KOA滑膜炎症,减少软骨组织MMPs水平,发挥保护软骨的作用。     

黄芪-丹参药对对特发性肺纤维化小鼠肺泡炎症及纤维化的影响

目的研究黄芪-丹参药对对特发性肺纤维化小鼠肺泡炎症及纤维化的影响。方法从软骨环间隙向心端一次性滴注博莱霉素构建小鼠模型,60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松组、黄芪组、丹参组、黄芪-丹参药对组,灌胃给药28 d。HE染色观察肺组织病理学的改变;Masson染色及羟脯氨酸含有量测定观察肺组织纤维化;利用碱性水解法检测肺组织中羟脯氨酸含有量;免疫组化检测TNF-α表达;Western blot检测TNF-α、p-IKK、NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达。结果 HE、Masson染色结果显示,模型组炎症细胞增多,大量浸润肺泡组织,肺组织间质性纤维化大量增生,经黄芪-丹参药对干预后肺组织炎症细胞、间质性纤维化有所改善。与模型组比较,黄芪-丹参药对组羟脯氨酸含有量降低(P0.01),TNF-α、p-IKK、NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。结论黄芪-丹参药对可以有效抑制肺泡炎症和控制肺纤维化发展,其作用可能与抑制TNF-α、P-IKK、NF-κB、NLRP3、IL-1β表达有关。     

黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝型骨关节炎大鼠免疫相关细胞因子的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝型骨关节炎大鼠CD4~+/CD8`+及相关细胞因子的作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、塞来昔布组、黄芪桂枝五物汤7 d组和黄芪桂枝五物汤14 d组,每组10只。除正常组外,各组大鼠均予冷固法复合外界环境刺激的方法复制阳虚寒凝型骨关节炎模型,共6周。造模结束前,各给药组分别灌胃给药,黄芪桂枝五物汤7 d组或14 d组分别给药7 d或14 d(30 g·kg-1),塞来昔布组给药7 d(20.82 mg·kg-1),正常组及模型组予生理盐水灌胃7 d,至造模结束。造模结束后,免疫组化法检测各组大鼠膝关节软骨诱导型一氧化氮合酶(i NOS),Ⅱ型胶原及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达,取大鼠血液流式细胞法检测CD4~+/CD8~+,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血液中白细胞介素-4(IL-4),C-反应蛋白(CRP)及胰岛素生长因子(IGF),低氧诱导因子1α(HIF-1α)含量。结果:与正常组比较,模型组CD4~+及CD4~+/CD8~+降低(P0.05),各用药组与模型组比较,黄芪桂枝五物汤14 d组和塞来昔布组CD4+及CD4+/CD8+升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL-4,CRP,HIF-1α及i NOS表达升高(P0.05),Ⅱ型胶原及TGF-β表达降低(P0.05);与模型组比较,各用药组Ⅱ型胶原及TGF-β表达升高(P0.05),IL-4水平降低(P0.05),黄芪桂枝五物汤14 d组CRP,i NOS及HIF-1α表达降低(P0.05),塞来昔布组CRP及i NOS(P0.05);各用药组之间,与塞来昔布组比较,黄芪桂枝五物汤7 d组和14 d组Ⅱ型胶原表达降低(P0.05),黄芪桂枝五物汤7 d组i NOS表达升高(P0.05)。IGF水平在各组无显著性差别。结论:黄芪桂枝五物可以调节机体免疫低下状态,并通过调节细胞因子IL-4及下游细胞因子i NOS,HIF-1α,TGF-β1等细胞因子水平的变化,对骨关节炎软骨细胞起正向修复作用。     

芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响

目的观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低剂量组、芍药苷高剂量组,每组12只。采用线栓阻断法制作大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h后进行再灌注,再灌注后1 h腹腔注射芍药苷(2.5、5 mg/kg),每日1次,连续7 d。Zea Longa 5分评价方法对大鼠进行神经功能评分。ELISA检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。RT-PCR和Westernblot分别检测大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠神经功能评分各时点均降低,芍药苷低剂量组第7日和芍药苷高剂量组第3、5、7日神经功能评分差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1和NLRP3m RNA和蛋白表达均上调;与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01)。结论芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症体信号通路分子的表达、减轻炎症反应相关。     

黄芪桂枝五物汤对骨关节炎大鼠血管新生的作用

目的:研究黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及相关因子的影响。方法:60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,塞来昔布组(20.82 mg·kg~(-1)),黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组(3.24,6.48,12.96 g·kg~(-1))。除正常组外,其余各组通过冷固法复合寒冷环境刺激42 d,复制OA模型。造模后,给药组分别灌胃相应药物,正常组和模型组给同等剂量蒸馏水,每天1次,连续28 d。末次给药24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中VEGF,前列腺素E_2(PGE_2),转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平;免疫组化染色检测左膝关节滑膜和软骨内VEGF表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测右膝关节滑膜白细胞介素-17(IL~(-1)7)和VEGF mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组血清、软骨和滑膜组织中VEGF表达均显著性升高(P0.01),同时,血清中PGE_2和TGF-β_1,滑膜组织IL~(-1)7水平均显著升高(P0.01);与模型组比较,各用药组血清、软骨和滑膜组织中VEGF表达均显著性降低(P0.05),同时,血清中PGE_2和TGF-β_1水平,滑膜组织中IL~(-1)7水平亦显著降低(P0.05);各用药组间比较,黄芪桂枝五物汤高剂量组膝关节滑膜组织IL~(-1)7较塞来昔布组升高(P0.05),黄芪桂枝五物汤中、高剂量组VEGF较塞来昔布组显著升高(P0.01),其余各组间比较均无显著性差异。结论:黄芪桂枝五物汤可能通过减轻骨关节炎大鼠血管新生相关细胞因子PGE_2和TGF-β_1等的表达而作用于VEGF,从而抑制膝骨关节处血管新生,减轻软骨损伤。     

仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎大鼠关节软骨损伤的修复作用及机制研究

目的观察仙鹿健骨汤对膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨损伤的修复作用并探讨其机制。方法 SD大鼠100只,根据体质量随机分成5组:对照组、模型组、仙鹿健骨汤各剂量组;模型组、仙鹿健骨汤各剂量组构建KOA大鼠关节软骨损伤模型,并于造模成功第1天开始给予相应药物灌胃,持续给予3个月,对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠注射液。试验结束后,测定大鼠膝骨性骨关节炎软骨Mankin′s评分、p38m RNA、NF-κB mRNA、p38、NF-κB、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白水平。结果与对照组比较,模型组、仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-кB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P 0.05);与模型组比较,仙鹿健骨汤各剂量组KOA软骨Mankin′s评分、p38、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平明显降低(P 0.05),且随着仙鹿健骨汤给药剂量的增加,KOA软骨Mankin′s评分、p384、NF-κB mRNA、蛋白表达水平、MMP-9、MMP-13、IL-1β蛋白表达水平逐渐降低,剂量-效应关系明显(P 0.05)。结论仙鹿健骨汤能明显减轻软骨细胞损伤程度,对KOA关节软骨损伤具有一定程度的修复作用,其机制与仙鹿健骨汤组能通过抑制炎症信号通路p38、NF-κB m RNA、蛋白表达水平的表达进而抑制细胞因子MMP-9、MMP-13、IL-1β的表达有关。     

腰痹通胶囊对退变腰椎间盘Ⅱ型胶原含量和 TNF-α、IL-1βmRNA 表达的影响

目的：观察腰痹通胶囊对兔退变腰椎间盘Ⅱ型胶原含量和TNF-α、IL-1βmRNA表达的影响。方法：采用纤维环针刺法复制兔腰椎间盘退变动物模型。造模成功后,将48只新西兰大白兔随机分为腰痹通、腰痛宁、美洛昔康、模型对照组4组,给药6周,处死后取退变的腰椎间盘,采用免疫组化染色法测定Ⅱ型胶原含量,RT-PCR法检测TNF-α、IL-1βmRNA的表达情况。结果：腰痹通、腰痛宁组Ⅱ型胶原的含量较美洛昔康和模型对照组均有明显提高,相比差异具有统计学意义（F=9．41,P=0．008〈0．01）。与模型组比较,腰痹通、腰痛宁、美洛昔康组TNF-α、IL-1βmRNA的表达均下调（F=10．32,P：0．006〈0．01）;腰痹通、腰痛宁、美洛昔康组TNF-α、IL-1βmRNA的表达比较差异没有统计学意义（F=3．26,P=0．086〉0．05）。结论：腰痹通胶囊提高了椎间盘中Ⅱ型胶原的含量,并下调了TNF-α、IL-1βmRNA的表达,减少了炎症介质的合成,这可能是腰痹通胶囊减缓椎间盘退变,治疗椎间盘退行性疾病的机制之一。