TGF—α诱导体内成骨效应

目的：β转化生长因子（ＴＧＦ－β）可诱导间充质细胞合成软骨特异性蛋白聚糖和Ⅱ型胶原，刺激成骨细胞的增殖及胶原合成。本实验旨在探讨牛血小板ＴＧＦ－β在体内的成骨活性。方法：以牛血小板为原料，采用酸醇抽提方法，提取血小板蛋白。经柱层析纯化出其中分子质量为２５ｋｕ的ＴＧＦ－β。在小鼠股骨中下段前方骨膜下注射ＴＧＦ－β溶液２０μｌ（含ＴＧＦ－β４００ｎｇ）；每日一次，最长连续注射１０次。结果：骨膜下注射Ｔ     

牛血小板TGF－β提取、纯化及其诱导小鼠股骨成骨作用

牛血小板ＴＧＦ－β提取、纯化及其诱导小鼠股骨成骨作用［孙玉鹏，陆裕朴，胡蕴玉等．中华骨科杂志，１９９５；１５（９）：６１０～６１３］作者以牛血小板为原料，采用酸醇抽提方法，提取血小板蛋白．相继进行两次Ｂｉｏ－ＧｅｌＰ６０柱层析，分离纯化出其中分子质量...     

TGF-β诱导体内成骨效应

目的：β转化生长因子（ＴＧＦ┐β）可诱导间充质细胞合成软骨特异性蛋白聚糖和Ⅱ型胶原，刺激成骨细胞的增殖及胶原合成．本实验旨在探讨牛血小板ＴＧＦ┐β在体内的成骨活性．方法：以牛血小板为原料，采用酸醇抽提方法，提取血小板蛋白．经柱层析纯化出其中分子质量为２５ｋｕ的ＴＧＦ┐β．在小鼠股骨中下段前方骨膜下注射ＴＧＦ┐β溶液２０μｌ（含ＴＧＦ┐β４００ｎｇ）；每日一次，最长连续注射１０次．结果：骨膜下注射ＴＧＦ┐β，注射后第３日，骨膜间充质细胞增殖、软骨细胞分化；第７日开始软骨细胞大量增殖，并有软骨内化骨效应；第１４日，大量新生骨痂形成；随后骨改建，出现板层骨．结论：骨膜下注射ＴＧＦ┐β导致局部新生骨质形成过程与正常骨折愈合时相一致，表明外源性的ＴＧＦ┐β可以启动骨生成过程；意味着ＴＧＦ┐β在骨折修复及骨移植方面有潜在性应用前景     

体外培养神经干细胞CNTF、TGF-β1和IGF-1的表达

目的研究培养神经干细胞（NSC）中CNTF,TGF-β1,IGF-1基因表达情况.方法取小鼠胎鼠海马,分离纯化培养NSC,提取总RNA,RT-PCR技术检测CNTF,TGF-β1,IGF mRNA的表达情况.结果培养NSC中各因子mRNA均有表达;CNTF,TGF-β1表达较强,IGF-1表达较弱.结论体外培养的NSC表达CNTF,TGF-β1含量较高,可能是应用其治疗神经疾病的理论基础.     

VEGF 和TGF-β在先天性胫骨假关节患者骨膜中的表达

目的：明确血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子-β（TGF-β）在先天性胫骨假关节（CPT）患者病变处骨膜组织中的含量,探讨其在发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学方法（SP^TM法）对19例CPT患者病变骨膜组织内VEGF 和TGF-β的 表达进行检测,以10例正常骨膜为阴性对照, 15例胫骨闭合骨折骨折断端周围骨膜做阳性对照。结果：VEGF和TGF-β主要在CPT患者骨膜组织内血管内皮细胞胞浆中表达,VEGF和TGF-β表达量在假关节病变部位骨膜中少于创伤后骨折断端的骨膜（P<0.01）,而与正常骨膜比较差异无显著性（P>0.05）。结论：CPT的发生可能与其骨膜组织中VEGF和TGF-β含量显著降低有关。     

益髓颗粒对ITP小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及其相关因子影响的研究

目的建立免疫性血小板减少性紫癜（ITP）小鼠动物模型,观察益髓颗粒对模型小鼠脾脏CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞（Treg）及血清TGF-β1的影响,探讨益髓颗粒的免疫调节机制。方法 40只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松治疗组、益髓颗粒治疗组,除正常组外,其余各组均隔日一次按100μl/20g腹腔注射1：4豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）建立ITP小鼠模型,造模第8天开始各组均按0.2ml/10g·d-1体积灌胃,正常组、模型组灌服生理盐水,益髓颗粒组治疗按0.3g/10g·d-1灌胃,连续8天后眼球取血分离血清,ELISA法检测TGF-β1,取脾制备脾单细胞悬液,用流式细胞仪检测脾Treg。结果模型组小鼠Treg细胞比例、TGF-β1水平明显低于正常组;泼尼松及益髓颗粒治疗组Treg细胞比例及TGF-β1水平均高于模型组,但Treg仍未达到正常水平,与正常组比仍存在差异,而TGF-β1与正常组比差异不明显无统计学意义。结论 ITP小鼠Treg细胞比例减少、TGF-β1水平降低可能与ITP的细胞免疫失调相关,益髓颗粒可通过提高ITP小鼠Treg细胞的比例及血清TGF-β1水平而对ITP的细胞免疫失调起调节作用。     

TGF-β1对小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对小鼠子宫内膜基质细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞,在此细胞培养体系中加入不同浓度的 TGF-β1,终浓度为0．1、2．5、5．0、10．0、20．0 ng／mL ,培养48 h 后通过 ELISA 法检测培养液中 MMP-9的含量。结果与对照组比较,实验组随 TGF-β1浓度的增加,小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达上升,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论小鼠子宫内膜基质细胞体系中,TGF-β1可能通过调控 MMP-9的表达,参与调节细胞外基质代谢。     

两种制备方法的紫癜方对ITP模型小鼠血清细胞因子的影响

目的 观察两种制备方法的紫癜方对特发性血小板减少性紫癜（ITP）模型小鼠血清细胞因子的影响.方法 采用免疫法建立ITP模型,设立正常组（C）、模型组（M）、醋酸泼尼松组（DC）、血美安组（X）、紫癜水提组（S）和紫癜工艺组（G）,采用ELISA法检测各组小鼠血清中IL-11、TPO、和TGF-β1的含量.结果 M组、X组和S组小鼠血清IL-11和TGF-β1含量明显高于C组,DC组和G组小鼠血清TGF-β1含量明显高于C组;DC组、X组、S组和G组小鼠血清IL-11含量明显低于M组;G组小鼠血清TGF-β1含量明显高于M组;X组和S组小鼠血清TGF-β1含量较M组有下降趋势;G组小鼠血清IL-11含量明显低于S组,血清TGF-β1含量明显高于S组.M组小鼠血清TPO含量较C组有升高趋势,但无显著性差异;其它各组小鼠血清TPO含量比较,无显著性差异.结论 紫癜方治疗ITP的可能机制之一是通过改变血清中IL-11和TGF-β1的含量而发挥的,两种制备方法的紫癜方对血清细胞因子的影响有差异.     

人血小板TGFβ的提取纯化及鉴定

目的 建立一种快速、简单、实用的从人血小板提纯化生长因子β（ＴＧＦβ）的方法。方法 改良的白膜回浆法提取人血小板,酸醇抽撮裂解法提取血小板中的ＴＧＦβ及２次凝胶过柱法纯化ＴＧＦ－β。所有提取及纯化步骤均在酸性条件下进行以防止管壁对ＴＧＦβ的吸附和生物活性的影响;使用了易挥发的溶媒和缓冲液便于冻干时去除。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 泳及薄层分析显示纯化后的ＴＧＦβ纯度达到８９．３８％,在ＥＧＦ参与下１０     

益气消癍汤治疗特发性血小板减少性紫癜实验研究

目的：益气消癍汤对特发性血小板减少性紫癜（ITP）小鼠模型IL-2、IL-6、转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响,为探讨中药疗效的作用机制及临床用药提供依据。方法：采用免疫法腹腔注射APS（豚鼠抗小鼠血小板血清）建立ITP小鼠模型,将50只BALB/C小鼠随机分为5组,分为正常组、模型组、泼尼松组、维血宁组、益气消癍汤组,观察小鼠一般情况、脾脏、外周血小板、骨髓巨核细胞及血清IL-2、IL-6、TGF-β1的水平。结果：治疗后,各组均能提高ITP小鼠模型体重,而泼尼松组、益气消癍汤组体重上升优于维血宁组,有显著性差异。各组均能缩小ITP小鼠模型脾脏,有显著性差异;益气消癍汤组、泼尼松组缩小脾脏明显,优于维血宁组。各药组均能提高血小板计数,有显著性差异;益气消癍汤组、泼尼松组提高血小板效果更好,有显著性差异。各组均能降低ITP小鼠模型骨髓巨核细胞,有显著性差异;益气消癍汤组、强的松组下降明显,有显著性差异。用药后,各组ITP小鼠模型IL-2、IL-6、TGF-β1水平均降低,泼尼松组、维血宁组、益气消癍汤效果相当。结论：益气消癍汤对ITP模型小鼠有明显治疗效果。     

小鼠Leydig细胞中调控类固醇合成时EGF与TGF-β1的相互作用

目的 探讨在纯化的小鼠Leydig细胞的原代培养中,转化生长因子-β1(TGF-β1)和表皮生长因子(EGF)在调控类固醇合成中的相互作用.方法 纯化小鼠睾丸Leydig细胞,并将其分为四组,不加EGF或TGF-β1的空白对照组、仅加入EGF(10ng/ ml; 72h)的EGF组、仅加入TGF-β1(1ng/ml; 48h)的TGF-β1组和加入EGF与TGF-β1的EGF+ TGF-β1组.在不同条件下,通过特定的放射免疫(RIAs)法检测培养基中睾酮和脱氢表雄酮(DHEA)的表达水平. 结果 TGF-β1和EGF分别增强了人绒毛膜促性腺激素 (hCG)刺激睾酮合成的功能,二者的最大浓度效应在促性腺激素的激素作用中是叠加效应.它们的叠加效应来自一种复杂的相互作用,这一相互作用发生在胆固醇底物水平和3β-羟基类固醇脱氢酶/异构酶(3βHSDI)作用的水平. 结论 TGF-β1和EGF对于线粒体胆固醇底物活性的相互抑制效应,伴随着对3βHSDI活性的刺激增加效应,表明这两种生长因子对于促性腺素诱导的睾丸雄激素合成具有叠加效应.     

转化生长因子—β和重组人骨形成蛋白—2刺激骨膜成骨的实验研究

目的：探讨骨膜成骨的细胞来源及分子机制．方法：将转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）和重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）分别与陶瓷化牛骨（ＣＢＢ）复合后，种植于小鼠股骨附近的肌肉间隙内．植入后３，５，７，１４，２１ｄ取材，光镜观察股骨的组织学变化并测量第１４日标本的股骨厚度．结果：植入ｒｈＢＭＰ－２／ＣＢＢ后第５日，骨膜内未分化间充质细胞聚集增生，第７日可见软骨生成．植入ＴＧＦ－β／ＣＢＢ第７日，骨膜内见大量软骨及膜内骨形成．第１４日，上述两种植入物骨膜内均见新骨形成活跃，新生骨小梁增多，其周围有成骨细胞．第２１日，骨膜内的新生骨均趋向成熟并与宿主股骨相连．新生骨的厚度二组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）．结论：骨形成蛋白和ＴＧＦ－β在体内均具有扩散作用并可刺激骨膜成骨．二者在骨膜内的靶细胞不同．骨形成蛋白诱导骨膜中间层的未分化间充质细胞向骨细胞系分化；ＴＧＦ－β刺激骨膜深层的骨祖母细胞、成骨细胞等的增殖和功能活跃．     

转化生长因子-β1转基因小鼠巩膜厚度研究

目的采用转化生长因子-β1（TGF-β1）转基因小鼠,研究高水平的TGF-β1对巩膜厚度以及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）水平的影响,以探讨TGF-β在巩膜重塑中的作用及可能的机制。方法应用Alb/TGF-β1（Cys^223,225Ser）转基因小鼠模型作为实验对象,同窝出生的C57BL/6J野生型小鼠作为对照组。ELISA法测定血浆TGF-β1浓度。Western blot法测定巩膜组织TGF-β1、MMP-2及TIMP-2浓度,应用Whatman Biometria凝胶分析软件分析Western blot结果。对全眼球经视神经乳头正中石蜡切片进行数码图像分析测定后极部巩膜厚度。结果TGF-β1转基因小鼠血浆TGF-β1浓度约为野生型对照小鼠的1.68倍（P〈0.01）,转基因小鼠巩膜组织中TGF-β1的表达水平是野生型小鼠的2.68倍（P〈0.01）,MMP-2的表达水平和野生型小鼠差异无显著性意义,TIMP-2的水平是野生型小鼠的3.15倍（P〈0.01）,转基因小鼠后极部巩膜厚度较野生型小鼠显著增厚（P〈0.01）。结论TGF-β1浓度增高会导致巩膜增厚。TGF-β1通过升高TIMP-2的水平抑制MMP-2的活性,从而抑制胶原的降解导致巩膜增厚。     

重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的: 构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1. 方法: 应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析. 结果: 成功构建了人TGF-β1重组融合表达质粒pGEX-4T-1-TGF-β1, 表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约为39×103处出现了一条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TGF-β1抗体特异性的结合能力. 结论: 成功构建了人TGF-β1基因的原核表达载体并纯化了该基因的原核表达产物,为下一步的人TGF-β1自体疫苗的研制奠定了基础.     

rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

目的：探讨人促血小板生成素(human thromlbopoietin，hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定。方法：利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段，将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区，转化大肠杆菌M15，得到pQE30-TPO的工程菌，诱导目的蛋白表达、纯化。将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射，观察注射后不同时间血小板量的改变。结果：经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养，该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带。将纯化后的表达蛋白注射小鼠，结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用。结论：在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO，该产物具有促血小板生成的活性。     

紫癜方对ITP模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响

目的:观察两种制备方法获取的紫癜方提取物对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响。方法:免疫法建立ITP模型,设立正常组(C)、模型组(M)、醋酸泼尼松组(DC)、血美安组(X)、紫癜水提组(S)和紫癜醇提加水提组(G),采用RT-PCR和Western Blot检测各组小鼠脾TGF-β1和TLR4的表达。结果:与M组比较,DC组、X组、S组和G组脾TGF-β1和TLR4 mRNA和蛋白表达升高;与DC组比较,S组和G组脾TGF-β1 mRNA和蛋白表达升高,G组脾TLR4蛋白表达水平升高;与X组比较,S组和G组脾TGF-β1、TLR4 mRNA和蛋白表达升高。结论:两种制备方法的紫癜方治疗ITP可能与上调脾组织TGF-β1和TLR4的表达有关。     

紫癜方对ITP模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响

目的：观察两种制备方法获取的紫癜方提取物对特发性血小板减少性紫癜（ITP）模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响。方法：免疫法建立ITP模型,设立正常组（C）、模型组（M）、醋酸泼尼松组（DC）、血美安组（X）、紫癜水提组（S）和紫癜醇提加水提组（G）,采用RT-PCR和Western Blot检测各组小鼠脾TGF-β1和TLR4的表达。结果：与M组比较,DC组、X组、S组和G组脾TGF-β1和TLR4 mRNA和蛋白表达升高;与DC组比较,S组和G组脾TGF-β1 mRNA和蛋白表达升高,G组脾TLR4蛋白表达水平升高;与X组比较,S组和G组脾TGF-β1、TLR4 mRNA和蛋白表达升高。结论：两种制备方法的紫癜方治疗ITP可能与上调脾组织TGF-β1和TLR4的表达有关。     

慢性肝病患者血小板参数检测的临床意义

<正>慢性肝病的病理基础是肝纤维化,在肝纤维化过程中TGF-β转化因子起着重要的作用,血小板是TGF-β的丰富来源,当肝细胞坏死时,集聚在坏死区的血小板被激活释放TGF-β,因而推测血小板也参与纤维化形成过程。本文对100     

都匀亚洲牛带绦虫病小鼠肝纤维化肝脏CTCF、TCF-β1的表达意义

目的研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）与转化生长因子-β1（transforming growthfactor-betal,TGF-β1）在都匀亚洲牛带绦虫小鼠肝纤维化肝脏中的表达状况及意义。方法用昆明小鼠感染都匀亚洲牛带绦虫建立小鼠肝纤维化模型;感染小鼠于30、40、50、60 d剖杀,HE染色观察肝脏病理变化,免疫组化法检测肝内CTGF、TGF-β1蛋白的表达水平。结果感染小鼠30 d时形成都匀亚洲牛带绦虫肝纤维化,40d时肝内CTGF和TGF-β1蛋白表达达高峰,随后出现下降,感染小鼠CTGF和TGF-β1蛋白表达水平具有直线相关性。结论CTGF与TGF-β1的表达与都匀亚洲牛带绦虫小鼠肝纤维化形成有密切关系,TGF-β1的致纤维化作用可能部分通过CTGF的生物学作用介导,阻断CTGF的传导通路可能是绦虫病肝纤维化治疗的有效靶点。     

雷洛昔芬对去卵巢大鼠骨组织TGF-β1基因表达的影响

目的探讨TGF-β1基因在绝经后骨质疏松症（PMO）发病中的意义及雷洛昔芬对该基因表达的调节作用。方法通过复制大鼠骨质疏松动物模型,进行股骨和椎骨骨密度测定,提取胫骨骨组织总RNA,用RT-PCR法扩增检测各组大鼠骨组织TGF-β1 mRNA的表达水平。结果与O组相比,E组和RL组TGF-β1 mRNA表达水平升高（P〈0.05）。E组和RL组与S组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论低剂量雷洛昔芬可上调TGF-β1基因的表达,从而促进骨形成,抑制骨吸收。