辛伐他汀对C反应蛋白和脂多糖诱导的单核细胞合成白细胞介素6的影响

通过研究辛伐他汀对C反应蛋白和脂多糖诱导的人外周血单核细胞合成白细胞介素 6的影响 ,探讨辛伐他汀的抗炎作用。采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,应用酶联免疫吸附试验观察C反应蛋白和脂多糖刺激单核细胞产生白细胞介素 6的时间及剂量效应 ,其峰值与辛伐他汀抑制剂组进行比较。结果发现 ,白细胞介素 6的合成随C反应蛋白和脂多糖浓度的升高而增加 ,呈剂量依赖性 ;2 0mg/LC反应蛋白和 10 μg/L脂多糖刺激白细胞介素 6合成的开始时间分别是 4h和 2h ,均呈时间依赖性 ,在 2 4h达高峰 ,其峰值分别是 90 4± 77和 16 5 4± 76 5ng/L。辛伐他汀 (10 -8mol/L～ 10 -6mol/L)呈剂量依赖性抑制 2 0mg/LC反应蛋白诱导的单核细胞白细胞介素 6合成 ,仅 10 -6mol/L的辛伐他汀能抑制 10 μg/L脂多糖诱导的单核细胞白细胞介素 6合成。结果提示 ,C反应蛋白和脂多糖能诱导人单核细胞产生白细胞介素 6 ;辛伐他汀抑制C反应蛋白及脂多糖诱导的单核细胞白细胞介素 6合成 ;辛伐他汀对单核细胞炎症反应的抑制提示该药物可用于预防和治疗冠心病。     

缬沙坦对不同浓度C-反应蛋白诱导的单核细胞白细胞介素-6合成的影响

目的通过研究缬沙坦对C-反应蛋白(CRP)诱导的正常人外周血单核细胞合成白细胞介素-6(IL-6)的影响,观察缬沙坦的抗炎作用。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,应用酶联免疫吸附试验分别观察CRP(15、、10及20 mg/L)刺激单核细胞产生IL-6的时间及剂量效应,其峰值与缬沙坦抑制剂进行比较。结果CRP刺激单核细胞IL-6合成呈时间依赖性和剂量依赖性,20 mg/L CRP与5 mg/L CRP诱导IL-6合成开始的时间是4 h,在24 h达高峰,其峰值分别是(904±77)ng/L和(698±52)ng/L。高浓度缬沙坦(≥10-3mol/L)能抑制20 mg/LCRP诱导的单核细胞IL-6合成,较低浓度缬沙坦(1×10-6mol/L~1×10-3mol/L)能抑制5 mg/L CRP诱导的单核细胞IL-6合成。结论缬沙坦可用于轻度炎症时抗细胞因子治疗。     

辛伐他汀对C-反应蛋白诱导的抵抗素表达的实验研究

目的:探讨辛伐他汀对C-反应蛋白CRP诱导的人外周血单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达的影响。方法:分离培养人外周血单核细胞,分别与不同浓度的辛伐他汀(0.1,1,10μmmol/L)预孵育2 h,再与25μg/mL CRP共同培养24 h,分别用实时定量PCR和ELISA方法检测单核细胞抵抗素mRNA表达及细胞培养液中抵抗素的浓度。结果:辛伐他汀呈剂量依赖性地抑制CRP诱导的抵抗素mRNA和蛋白表达。结论:辛伐他汀可显著抑制CRP诱导的抵抗素的表达,提示CRP和抵抗素可能参与动脉粥样硬化(As)的进展,他汀类药物可能通过调节CRP诱导的抵抗素过度表达发挥其抗As作用。     

CRP和LPS致单核细胞NF-κB活化及IL-6合成的比较

目的观察C-反应蛋白和脂多糖诱导人外周血单核细胞合成白细胞介素-6水平及两者致单核细胞NF-κB活化的程度，比较其致炎作用。方法Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，应用ELISA法观察CRP和LPS刺激单核细胞产生IL-6的时间效应，比较其峰值。免疫细胞化学观察两者致单核细胞NF-κB活化的程度。结果CRP和LPS刺激IL-6合成开始的时间分别是4小时和2小时，呈时间依赖性，在24小时达高峰。LPS组峰值高于CRP组。在刺激16小时后，LPS组NF-κB活化的程度高于CRP组。结论CRP和LPS均能活化NF-κB，并诱导单核细胞产生IL-6；10ng／ml LPS的致炎作用强于20ug／ml CRP。     

C反应蛋白对人单核细胞抵抗素表达的影响

目的:研究C-反应蛋白(CRP)对培养的人外周血单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达的影响。方法:分离培养人外周血单核细胞,分为浓度效应组和时间效应组,即不同浓度的CRP(0,5,10,25,50μg/ml)刺激24h以及25μg/ml CRP刺激不同的时间(0,3,6,12,24h),分别用实时定量PCR和ELISA方法检测抵抗素的表达。结果:CRP可呈剂量依赖性和时间依赖性地诱导人单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达。结论:CRP可诱导人单核细胞抵抗素mRNA和蛋白表达。     

C反应蛋白对单核细胞妊娠相关血浆蛋白A表达的影响及机制研究

目的探讨C反应蛋白(CRP)对单核细胞妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)蛋白和基因表达的影响及其机制。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,分别采用Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应方法观察CRP刺激单核细胞PAPP-A蛋白和mRNA表达的时间及剂量效应。采用Active Motif的专利技术测定CRP对单核细胞核转录因子κB(NF-κB)活性的影响。同时观察给予NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理后,CRP对单核细胞PAPP-A表达的影响。结果 CRP(20 mg/L)刺激单核细胞2 h后,PAPP-A的蛋白和mRNA表达开始增加,呈时间依赖性,同时呈剂量依赖性诱导单核细胞的PAPP-A表达。CRP可显著增加单核细胞NF-κB p65水平,在给予NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理后,CRP诱导PAPP-A表达的作用受到抑制。结论 CRP可通过激活NF-κB上调单核细胞PAPP-A的蛋白和基因表达,这可能是急性冠状动脉综合征患者循环中PAPP-A升高的机制之一。     

C反应蛋白和肿瘤坏死因子-α对单核细胞妊娠相关血浆蛋白-A mRNA表达影响的实验研究

目的 研究C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人外周血单核细胞妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A) mRNA表达的影响.方法 采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,用RT-PCR方法分别观察CRP和TNF-α刺激单核细胞PAPP-A mRNA表达的时间及剂量效应.结果 与空白对照组PAPP-A的mRNA表达(0.1842±0.0101)相比,CRP(20 mg/L)刺激单核细胞2 h后,PAPP-A mRNA表达开始显著增加(0.2128±0.0136),于24 h达最高值(0.6837±0.1360),呈时间依赖性.rhTNF-α(100 ng/ml)刺激后,PAPP-A mRNA表达在2 h迅速升高并达峰值(1.2546±0.0866),24 h仍高于空白对照组(0.8203±0.0413).CRP和rhTNF-α均可呈剂量依赖性诱导PAPP-A的mRNA表达,其中CRP(1、5、10和20 mg/L)刺激组PAPP-A 的mRNA表达分别为0.2544±0.0611、0.4177±0.1200、0.5828±0.0152和0.6837±0.1360,rhTNF-α(5、10、25、50和100 ng/ml)刺激组分别为0.2424±0.1378、0.3335±0.0196、0.5742±0.0131、0.6913±0.0219和0.8203±0.0413.放线菌素D(1 μg/ml)能抑制CRP和rhTNF-α对单核细胞PAPP-A mRNA表达的诱导作用.结论 促炎因子CRP和rhTNF-α可在转录水平直接调控人外周血单核细胞PAPP-A的基因表达,这可能是急性冠状动脉综合征患者循环中PAPP-A水平升高的机制之一.     

辛伐他汀对急性心肌梗死病人细胞因子的影响

目的了解急性心肌梗死病人血清肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)的变化,以及辛伐他汀对急性心肌梗死病人外周血单核细胞(peripheralbloodmononeuclearcell,PBMC)分泌的细胞因子的影响。方法测定冠心病稳定期病人93例(对照组)和急性心肌梗死病人102例血清TNF-α,IL-6和CRP浓度。离心取PBMC,分别加入辛伐他汀(浓度0,0.1,1.0,10μmol/L)和脂多糖诱导,进行细胞培养,孵化48h后,取上清液,用酶联免疫吸附法测定TNF-α和IL-6。结果与对照组比较,急性心肌梗死病人血清TNF-α,IL-6和CRP浓度明显升高,并随心功能Killip分级程度加重而升高(P<0.01),TNF-α和IL-6呈正相关(r=0.67,P<0.01),辛伐他汀剂量依赖性抑制PBMC分泌TNF-α和IL-6。结论急性心肌梗死病人TNF-α、IL-6和CRP浓度明显升高,辛伐他汀能抑制急性心肌梗死病人细胞因子的生成。     

辛伐他汀对CRP诱导变异型心绞痛患者NF-κB合成的影响

目的探讨NF-κB在变异型心绞痛(VA)中的作用和他汀类药物的干预效应。方法采集并培养VA患者(VA组,n=6)和健康对照者(对照组,n=6)的外周血单核细胞,使用C反应蛋白(CRP,终浓度为20 mg/L)刺激24 h;干预组采用辛伐他汀(终浓度10μmol/L)预先孵育单核细胞2 h,继以CRP刺激24 h。采用酶联免疫吸附法测定细胞核中NF-κB的水平,比较两组间的差异。结果基础状态下VA组中NF-κB的水平与对照组相比无差异,给予CRP刺激后,VA组及对照组中NF-κB的水平较其基础状态均升高(P<0.01),VA组较对照组升高幅度显著(P<0.01),辛伐他汀预孵育后可以有效抑制两组CRP刺激后的NF-κB表达(P<0.01)。结论 VA患者受到CRP刺激后外周血单核细胞中NF-κB的水平高于对照组,提示炎症机制可能在VA中发挥一定的作用;辛伐他汀可以有效抑制VA患者体内炎症反应的强度。     

细菌脂多糖诱导人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α的合成及核因子-κB的活化

为研究细菌脂多糖对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α合成和核因子-kB活化的影响，采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，经细菌脂多糖刺激后，应用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α水平随刺激剂量和时间的变化，应用免疫细胞化学方法观察核因子-Kb在单核细胞的激活随刺激时间的变化。发现核因子-kB在接受刺激15min-1h之间，随刺激时间的延长逐渐从胞质向胞核转移，1h达高峰。细菌脂多糖呈浓度依赖性（1-1000μg/L）诱导肿瘤坏死因子α合成，肿瘤坏死因子α在刺激后1h出现，6h达到高峰，其合成出现在核因子-kB的活化后。以上提示细菌脂多糖通过激活单核细胞内核因子-kB来诱导炎性细胞因子肿瘤坏死因子α的合成。     

Simvastatin inhibits interleukin-6 release in human monocytes stimulated by C-reactive protein and lipopolysaccharide

BACKGROUND: The accumulating evidence suggests that C-reactive protein (CRP) may have direct inflammatory effects on the vascular wall and that statin therapy may have important non-lipid anti-inflammatory effects confirmed by decreasing serum inflammatory markers, such as CRP. However, the effect of simvastatin on interleukin-6 (IL-6) release in cultured human monocytes was not investigated.DESIGN A prospective, human monocyte culture, simvastatin intervention study. METHODS: Monocytes were isolated from blood of healthy volunteers by the Ficoll density gradient and stimulated by broad concentrations of CRP (1-20 microg/ml) and lipopolysaccharide (LPS, 1-10 ng/ml) at indicated time points (0, 2, 4, 8, 16 and 24 h). Also 10-8-10-6 mol/l simvastatin was coincubated with cells in the presence of CRP and LPS. Measurements of IL-6 were performed from supernatants of cultured medium in duplicate, using a commercial assay kit. RESULTS: CRP and LPS induced the rapid release of IL-6, with significantly elevated levels in cultured supernatants at 4 h in the CRP group and at 2 h in the LPS group. The effects of CRP and LPS on IL-6 release of monocytes were dose and time dependent. A greater than 11-fold increase of IL-6 in the CRP group (20 microg/ml) and a greater than 26-fold increase in the LPS group (10 ng/ml) were observed at 24 h compared with the control group (945.7+/-98.3 pg/ml compared with 94.3+/-12.4 pg/ml and 1720.4+/-690.1 pg/ml compared with 70.1+/-16.7 pg/ml, P<0.001, respectively). However, 10-8-10-6 mol/l simvastatin inhibited significantly the production of IL-6 in monocytes stimulated by CRP and LPS in a dose-dependent manner, with the maximal inhibiting effect at a concentration of 10-6 mol/l (945.7+/-98.3 pg/ml compared with 180.9+/-31.2 pg/ml and 1720.4+/-690.1 pg/ml compared with 824.0+/-206.2 pg/ml, P<0.001 respectively). CONCLUSIONS: CRP and LPS could induce IL-6 release in human monocytes and simvastatin could inhibit this response in a dose-dependent manner, which may provide an insight into the mechanisms of anti-inflammatory or anti-atherosclerotic actions of simvastatin.     

阿托伐他汀对C反应蛋白诱导的CD14+单核细胞Toll样受体4表达影响的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对C反应蛋白(CRP)诱导的外周血CD14+单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达,以及TLR4信号传导下游炎症因子肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,探讨阿托伐他汀的抗炎机制.方法 不同浓度(0、5、25、50、100 μg/ml)和不同作用时间(0、6、12、24、48 h)的C反应蛋白(CRP)刺激正常人外周血CD14+单核细胞.给予CRP 50 μg/ml预先干预CD14+单核细胞2 h后,再用不同浓度的阿托伐他汀(1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 μmol/L)进行干预.应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,并应用定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein,MD2)mRNA的表达,ELISA法检测刺激前后细胞上清液TNFα、IL-6和MMP-9的蛋白水平.结果 (1)CRP 0 μg/ml组TLR4蛋白表达量为19.59%,CRP 5 μg/ml组的TLR4蛋白表达为29.33%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着CRP浓度的增加,TLR4蛋白表达量逐渐增加.以CRP 0 h组为空白对照,CRP 6 h组的TLR4蛋白表达量为25.75%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着时间的增加,TLR4表达量逐渐增加.(2)以CRP 50 μg/ml组为对照组,CRP 50 μg/ml和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4蛋白表达分别为(68.17±1.71)%、(52.43±1.38)%、(27.72±4.55)%、(17.46±3.20)%、(9.99±2.81)%.(3)以CRP 50 μg/ml组为标准,CRP 50 μg/ml〖JP〗和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4 mRNA分别为对照组的82.72%、67.34%、48.16%、30.88%、13.85%.MD2 mRNA分别为对照组的81.78%、71.04%、47.85%、27.06%、18.30%.随着阿托伐他汀浓度增加,TLR4和MD2的mRNA含量减少.(4)当单核细胞未受CRP和阿托伐他汀刺激时,分泌TNFα、IL-6和MMP-9的基础值分别为(16.3±5.8)pg/ml、(31.1±9.5)pg/ml 和(155.0±47.2)ng/ml.CRP 50 μg/ml组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(106.9±7.5)pg/ml、(566.9±10.0)pg/ml和(416.9±37.1)ng/ml,与空白对照组比较,差异均有统计学意义,P均<0.01.而CRP和阿托伐他汀2.5 μmol/L组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(81.1±5.4)pg/ml、(433.9±18.1)pg/ml和(310.5±16.3)ng/ml,与CRP 50 μg/ml组比较差异均有统计学意义,P均<0.01.结论 CRP可剂量依赖性和时间依赖性地增加CD14+单核细胞TLR4和MD2的表达,阿托伐他汀通过抑制CRP诱导单核细胞TLR4信号转导途径,降低炎症因子TNFα、IL-6和MMP-9的分泌,是其抗炎作用的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on C-reactive protein (CRP)induced Toll-Like receptor 4(TLR4)expression on CD14+ monocyte, and the production of proinflammatory cytokines tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin-6 (IL-6), matrix metalloproteinases-9 (MMP-9), and to study the anti-inflammatory mechanisms of statins. Methods The monocytes were isolated from blood of healthy volunteers by the Ficoll density gradient and stimulated by CRP with different doses (5, 25, 50, 100 μg/ml)and different exposure time (6, 12, 24, 48 h). Cells were also incubated with atorvastatin of different doses (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L)in the presence of CRP 50 μg/ml. The protein expression of TLR4 was measured by flow cytometry, mRNA expression of TLR4 and of myeloid differentiation protein (MD2)was detected by quantitative PCR. TNFα, IL-6, MMP-9 concentrations in supernatants of cultured medium were measured by ELISA.Results (1)Compared with the un-stimulated control group, enhanced TLR4 protein expression was already detected at a concentration of 5 μg/ml of CRP and increased in a dose-dependent manner (32.22±2.80)%, (49.94±5.58)%, (74.82±3.24)% and (90.82±2.88)% at 5, 25, 50 and 100 μg/ml CRP. (2)TLR4 protein expression on 50 μg/ml CRP stimulated cells also increased in a time-dependent manner (29.80±2.70)%, (47.44±4.41)%, (81.71±2.92)% and (50.57±3.34)% after 6 h, 12 h, 24 h, 48 h.(3)When monocytes were incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L), protein expression [(68.17±1.71)%, (52.43±1.38)%, (27.72±4.55)%, (17.46±3.20)%, (9.99±2.81)%］and mRNA expression (82.72%, 67.34%, 48.16%, 30.88%, 13.85%)of TLR4 as well as mRNA expression of MD2 (81.78%, 71.04%, 47.85%, 27.06%, 18.30%)were reduced in a dose-dependent manner. (4)Level of TNFα, IL-6 and MMP-9 in supernatants was significantly reduced by atorvastatin (2.5 μmol/L)compared with control group(P<0.01). When monocyte incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin 10.0 μmol/L, the level of TNFα, IL-6, MMP-9 decreased to (25.8±2.5)pg/ml, (128.2±14.7)pg/ml, (65.2±12.3)ng/ml, respectively.Conclusion CRP increased the protein expression of TLR4 on CD14+ monocyte in a dose-dependent and time-dependent manner. Atorvastatin can inhibit the signal transduction of TLR4 and reduce proinflammatory cytokines release induced by CRP on CD14+ monocyte, and this might be one of the anti-inflammatory mechanisms of atorvastatin.     

Influence of simvastatin on the production of pro-inflammatory cytokines and nitric oxide by activated human chondrocytes

OBJECTIVE: In addition to their cholesterol-lowering action, statins have been suggested to exert anti-inflammatory activities. In this study we evaluate whether simvastatin could influence the production of pro-inflammatory cytokines (interleukin (IL)-6 and IL-8) and nitric oxide (NO) by activated human chondrocytes. METHODS: Human isolated chondrocytes and cartilage explants were pre-incubated with simvastatin (0.5, 5, 10 and 50 micromol/L) for 48 h. Then the cultures were stimulated with a mixture of IL-1Beta and TNF-alpha (10 ng/mL) and co-incubated with simvastatin for an additional 48 h. A flow cytometric microsphere-based immunoassay was performed to detect cytokine secretion in the supernatants. NO production was quantified using the Griess assay. RESULTS: Simvastatin demonstrated significant dose-dependent inhibition of IL-6 and IL-8 production of isolated chondrocytes and cartilage explants up to 99% for IL-6 and up to 88% for IL-8 (p < 0.01). At the higher concentrations simvastatin decreased NO production by both isolated chondrocytes (up to 43%, p < 0.01) and cartilage explants (up to 30%, p < 0.01). CONCLUSION: This study demonstrates anti-inflammatory properties of simvastatin in chondrocytes in vitro, suggesting a potential cartilage-protective role for statins in arthritis.     

辛伐他汀对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的拮抗作用及其作用机制

目的: 探讨辛伐他汀对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的拮抗作用及潜在机制。方法: 分离培养 Sprague-Dawley(SD)大鼠(乳鼠)心肌细胞,随机分为对照组、缺氧2h/复氧4h(H/R4h)组、不同浓度(0.1、1.0及10 μmol/L)的辛伐他汀干预组及Toll样受体4(TLR4)中和性抗体MTS510组(浓度为10 μg/L)。H/R4h组给予缺氧2 h后，随即复氧4 h。细胞处理后，进行PI-AnnexinV染色用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率，用ELISA法检测心肌乳酸脱氢酶(LDH)的活性；用免疫印迹法测TLR4蛋白的含量。结果:与H/R4h组相比,辛伐他汀干预组可显著降低心肌细胞的凋亡率(16.0% vs. 28.6%,P<0.01)及LDH 的活性(P<0.01)，并呈剂量依赖性。中浓度的辛伐他汀组开始出现拮抗作用，峰值出现在高浓度辛伐他汀组, 加入MTS510阻断剂可降低心肌细胞的凋亡率及LDH的活性(P<0.01)。结论:辛伐他汀对H/R造成的心肌细胞损伤具有拮抗作用,并呈剂量依赖性,其作用机制可能与TLR4信号通路有关。     

C反应蛋白增强变异型心绞痛患者体内TNF-α和IL-6的表达

目的通过对变异型心绞痛患者及健康对照者外周血的单核细胞给予一定浓度的C反应蛋白（CRP）的刺激,比较两组中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-6（IL-6）的差异,并观察他汀类药物干预后其水平的变化,探讨炎症相关分子机制在变异型心绞痛中的作用和他汀类药物的干预效应。方法培养变异型心绞痛患者（病例组,n=6）和健康对照者（对照组,n=6）的外周血单核细胞,使用CRP（终浓度为20mg/L）刺激24小时;辛伐他汀干预采用辛伐他汀（终浓度10umol/L）预先孵育单核细胞2小时,继之以CRP刺激24小时。采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中的TNF-α和IL-6的水平,比较两组之间的差异。结果基础状态下病例组中TNF-α和IL-6的水平与对照组相比无显著差别,给予CRP刺激后,病例组及对照组中TNF-α和IL-6的水平较其基础状态均有明显升高（p〈0.01）,但病例组中TNF-α和IL-6的升高幅度较对照组更为显著（p〈0.01）,辛伐他汀预孵育后可以有效抑制两组患者CRP刺激后的TNF-α和IL-6表达（p〈0.01）。结论变异型心绞痛患者受到CRP刺激后外周血单核细胞中TNF-α,IL-6的水平明显高于对照组,提示炎症机制可能在变异型心绞痛中起着一定的作用;辛伐他汀可以有效抑制变异型心绞痛患者中炎症反应的强度。     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物. 方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入小同浓度辛伐他汀(0.01～10.00μmol/L)培养6～48 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素结合的植物凝集素(FITC-UEA-I)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数. 结果 辛伐他汀显著抑制骨髓源SPC增殖,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,SPC数量减少了(5.8±3.1)%(对照组与0.01μmol/L辛伐他汀组分别为4070±184与3833±126,P<0.05).辛伐他汀可促进EPC增殖,其促进作用随辛伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1.00μmol/L辛伐他汀作用24 h EPC数量增加(2.0±0.1)倍(对照组与1 μmol/L辛伐他汀组分别为1249±146与3762±138,P<0.01). 结论 辛伐他汀抑制SPC增殖,促进EPC增殖,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能.     

抗淀粉样蛋白42抗体对小胶质细胞释放炎性介质的影响

目的 观察淀粉样蛋白42(Aβ42)刺激BV-2小胶质细胞释放炎性介质白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)和一氧化氮(NO)的作用,以及对抗Aβ42抗体与人工合成抗Aβ42抗体对Aβ42刺激小胶质细胞释放炎性介质的抑制作用.方法 采集AD患者血清制备提纯抗Aβ42抗体,应用小鼠BV-2小胶质细胞作为体外细胞模型.分别用Aβ42、两种不同抗Aβ42抗体刺激细胞,分析刺激物对细胞活性的影响.将5 μoml/L Aβ42单独加入,以及分别与不同滴度的AD患者血清提纯的抗Aβ42抗体及相应滴度的人工合成抗Aβ42抗体(抗体滴度依次为5 μg/ml,1μg/ml,0.2 μg/ml)充分混合后加入体外细胞模型培养,于培养后6 h、12 h及24 h提取细胞上清液,测定IL-1β,IL-10,NO浓度.结果 Aβ42,人工合成和AD患者血清提纯的抗Aβ42抗体对BV-2细胞活性无影响,细胞存活率分别为(98.6±5.8)%,(101.9±2.8)%和(98.4±6.0)%,与正常对照组比较差异无统计学意义(F=0.407,P>0.05).Aβ42刺激BV-2细胞分泌炎性因子在12 h达高峰,IL-1β和IL-10浓度分别为(69.0±12.7)pg/ml和(24.1±4.0)pg/ml,NO浓度为(128.2±8.7)μmol/L,IL-1β和NO浓度均明显高于6 h及24 h(F=15.470,242.107;P<0.05),IL-10浓度与6 h及24 h比较差异无统计学意义(F=1.852,P>0.05).不同滴度的两种抗体均能明显抑制Aβ42刺激BV-2细胞分泌炎性因子.其中,同样是高浓度(5μg/ml)情况下,两种抗体的抑制作用差异无统计学意义(P>0.05);而抗体浓度均减低到0.2μg/ml时,AD患者血清提纯的抗Aβ42抗体对Aβ42刺激小胶质细胞释放炎性因子NO的抑制作用明显低于人工合成的抗Aβ42抗体[NO的浓度分别为(35.4±2.5)μoml/L和(19.2±3.3)μoml/L,P<0.05].结论 Aβ42存在刺激BV-2小胶质细胞释放炎性因子的作用;AD患者血清提纯的抗Aβ42抗体对Aβ42刺激小胶质细胞释放炎性介质的抑制作用下降.     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞迁移的影响

目的观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cell,SPC)和内皮祖细胞(endothelialprogenitor cell,EPC)迁移的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物。方法采用密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞,重悬于SPC培养基或EPC培养基,接种在纤维连接素包被培养板,平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定Dil标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)和FITC标记的荆豆凝集素Ⅰ(FITC-UEA-Ⅰ)双染阳性细胞为正在分化的EPC。分别收集培养8 d的SPC和EPC,加入不同浓度辛伐他汀(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)培养24 h。采用改良Boyden小室检测SPC和EPC迁移能力。结果辛伐他汀显著抑制SPC迁移,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,迁移SPC数量减少,0.01μmol/L辛伐他汀组与对照组SPC迁移比较,差异有统计学意义(39±3 vs.44±3,n=5,P0.05)。与SPC相反,辛伐他汀显著促进EPC迁移,其促进作用随辛伐他汀浓度升高而增加,1.0μmol/L时达最大效应,1.0μmol/L辛伐他汀组与对照组EPC计数比较,差异有统计学意义(37±5 vs.6±3,n=5,P0.01)。结论辛伐他汀选择性抑制SPC迁移,促进EPC迁移,其双向调节作用呈浓度依赖性,局部应用有促进损伤血管再内皮化和抑制新内膜过度增生的可能。