人白细胞介素2基因修饰诱导的肥大细胞瘤细胞广泛凋亡

人白细胞介素２基因修饰诱导的肥大细胞瘤细胞广泛凋亡郭宁李秀森刘晓丹人白细胞介素２基因修饰诱导的肥大细胞瘤细胞广泛凋亡@郭宁@李秀森@刘晓丹...     

异基因型和同基因型MHCⅡ类基因转染对小鼠肥大细胞？…

目的：提高肿瘤细胞的免疫原性。方法：将异基因型或同基因型的ＭＨＣⅡ类基因转染至小康习肥大细胞瘤Ｐ８１５中，用此细胞接种同系小鼠，１个月后给不成瘤的小鼠再接种野生型Ｐ８１５细胞，观察小鼠的存活情况。结果：转同基因型ＭＨＣⅡ基因的Ｐ８１５细胞接种同系小鼠后，４／１０不成瘤，而异基因型ＭＨＣⅡ基因转染组，１０／１０不成瘤。１个月后不成瘤的小鼠再接种野生型的Ｐ８１５细胞，同基因型转染组２／４不成瘤，异型转     

小鼠肥大细胞瘤P815模型的建立与初步应用

目的 建立小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５种植瘤模型，并对其体内诱发特异性ＣＴＬ应答机理进行初步的研究。方法 经有限稀释法筛选Ｐ８１５单克隆瘤系，用ＲＴ－ＰＣＲ及产物ＤＮＡ测序鉴定肿瘤抗原Ｐ１Ａ基因的表达；在此基础上，用活瘤苗免疫同系小鼠，经标准＾５１Ｃｒ释放试验检测在体特异性ＣＴＬ的活性。结果 筛选出了一个Ｐ８１５单克隆成瘤系Ｐ８１－Ｆ３，并鉴定该瘤存在Ｐ１Ａ基因的表达，用活瘤疫苗免疫６只步鼠，在３只体内     

IL-12对小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫学作用

目的 研究小鼠肥大细胞瘤P815基因疫苗和鼠IL-12对该疫苗的免疫学作用。方法 将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI-neo中；用P815细胞对DBA/2小鼠右腹侧皮下注射，构建P815小鼠肿瘤模型；以重组基因疫苗单独或与鼠IL-12真核表达质粒一起肌肉注射，观察肿瘤的消长，特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗全的生成情况。结果 重组基因疫苗在体外有很好的表达，注射后CTL的杀伤效率为40%，IL-12共注射的CTI，杀伤效率达到60%，免疫后，30%小鼠的肿瘤出现消退；同IL-12共注射则有50%的小鼠的肿瘤出现消退，2种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论 重组P1A肿瘤疫苗能有效激活机体的肿瘤特异免疫应答；基因疫苗对小鼠P815肿瘤的治疗作用主要归因于细胞免疫；IL-12有增强这种免疫应答的作用。     

IL-2基因修饰成纤维细胞对肝癌荷瘤小鼠的治疗实验

目的研究双顺反子逆转录病毒载体介导ＩＬ－２基因转导成纤维细胞对小鼠肝癌的治疗作用。方法利用双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＩＬ－２将ＩＬ－２基因转导小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３，然后将分泌ＩＬ－２的成纤维细胞与６０Ｇｙγ射线照射的肝癌Ｈ２２细胞皮下植入三天前５×１０５或２．２×１０５肝癌Ｈ２２细胞皮下注射的ＢＡＬＢ／ｃ鼠。结果分泌ＩＬ－２的成纤维细胞治疗组能明显增加荷瘤小鼠的生存率（Ｐ＜０．０２５），抑制肿瘤生长（Ｐ＜０．０５），在肿瘤植入第７０天无肿瘤形成的小鼠再次注射１×１０６Ｈ２２细胞仍然不发生肿瘤。５１Ｃｒ释放试验表明来自照射Ｈ２２与分泌ＩＬ－２成纤维细胞混合液注射的小鼠脾细胞与５１Ｃｒ标记的Ｈ２２细胞共培养后，５１Ｃｒ特异释放明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结论实验结果表明ＩＬ－２基因修饰的成纤维细胞能诱导针对肝癌的特异免疫反应。     

氧化苦参碱对LAK细胞活性的影响

ＬＡＫ细胞具有很强的广谱杀瘤作用，而氧化苦参碱具有较强的免疫抑制作用。本文研究了氧化苦参碱对ＬＡＫ细胞活力的影响，结果表明：氧化苦参碱可抑制ＩＬ－２对小鼠脾细胞的促增殖作用，并且对ＩＬ－２活化ＬＡＫ细胞杀伤Ｐ８１５的能力也有抑制作用。当ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）与２００μｇ／ｍｌ的氧化苦参碱共同孵育４ｄ后，可使ＬＡＫ细胞杀瘤能力（在效靶比为１００：１时）的８２．５％被抑制。同时氧化苦参碱本身对Ｐ８     

荷瘤宿主T细胞信号传导缺陷与基因治疗

大量研究表明荷瘤宿主Ｔ细胞信号传导缺陷导致Ｔ细胞功能异常，即Ｔ细胞外于无反应状态。而ＩＬ－２基因修饰的瘤苗进行基因治疗的动物实验 肿瘤部位分泌高浓度ＩＬ－２，可以有效地逆转Ｔ细胞信号传导缺陷，使细胞功能恢复，增强机体的抗肿瘤免疫反应，达到抗肿瘤的目的。     

Hsp70L1增强肿瘤细胞疫苗免疫原性的研究

目的:考察Hsp70L1对肿瘤细胞免疫原性的增强作用。方法:用RT-PCR的方法,从小鼠黑色素瘤B16细胞和C57BL/6小鼠脾脏中获得TRP2153-243及Hsp70L1基因。分别插入pcDNA3.1/V5-His真核表达载体,构建pHSP70L1、pTRP和pTRP2-Hsp3种表达载体。分别转染B16肿瘤细胞并制备坏死或凋亡瘤苗,免疫C57BL/6小鼠后移植B16肿瘤细胞,观察肿瘤生长曲线,采用流式细胞术(FCM)或微量细胞毒的方法检测荷瘤小鼠细胞因子INF-γ和CTL活性。结果:将经过HSP70L1、TRP2及TRP2-HSP基因修饰的坏死或凋亡的B16肿瘤细胞免疫正常小鼠后,观察到Hsp70L1及TRP2-Hsp基因修饰的坏死瘤苗可显著抑制荷瘤鼠肿瘤的生长,并显著促进荷瘤鼠脾脏淋巴细胞CTL活性和IFN-γ产生(P0.05,P0.01);HSP70L1免疫刺激作用在坏死瘤苗中更明显。结论:Hsp70L1可明显提高B16瘤苗的免疫原性,且对坏死细胞瘤苗的作用更显著。     

通过维持微环境IL－2水平抑制肿瘤形成

为研究肿瘤微环境中ＩＬ－２对肿瘤生长的抑制效应，用转基因方法，将携带ｍＩＬ－２ｃＤＮＡ基因的牛乳头瘤病毒载体（ＢＣＭＧ）转染小鼠Ｂ１６瘤细胞，获稳定持久分泌ｍＩＬ－２的Ｂ１６细胞株（ｍＩＬ－２＋Ｂ１６）。动物实验结果显示：ｍＩＬ－２＋Ｂ１６细胞的致瘤性明显下降，但体外生长率与其亲代Ｂ１６细胞相比较无区别。用ｍＩＬ－２＋Ｂ１６细胞诱导的小鼠腹腔渗出细胞（ＰＥＣ）对ＹＡＣ－１靶细胞和Ｂ１６靶细胞的体外杀伤能力比对照组ＰＥＣ（Ｂ１６诱导的ＰＥＣ）高一倍以上（Ｐ＜０．０１）。表明提高微环境中的ＩＬ－２水平能提高抗肿瘤免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，从而抑制肿瘤的形成。     

黄芪多糖对IL－2／LAK抗肿瘤增强作用的动物实验研究

采用Ｃ５７ＢＬ／６鼠荷其自发产生的黑色素瘤Ｂ＿１６细胞，以生存期为指标，建立了黄茂多糖（ＡＰＳ）增强ＩＬ－２／ＬＡＫ抗肿瘤作用的动物模型，结果表明：ＡＰＳ自身具有一定的抗肿瘤作用，ＡＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）与ＩＬ－２／ＬＡＫ（５×１０￣３Ｕ／ｋｇ、５×１０￣７／ｋｇ）的抗肿瘤作用相似，荷瘤鼠生存期分别为２１．５７±１．８１天和２０．８６±１．８６天（荷瘤对照鼠为１５．７１±０．４９天）；ＡＰＳ对ＩＬ－２／ＬＡＫ的抗肿瘤效应有明显的增强作用，二者在上述剂量下联合应用，荷瘤鼠生存期为２４．８６±２．７３天（Ｐ＜０．０１）。并对荷瘤鼠进行动态细胞免疫功能观察，提示：ＡＰＳ和ＩＬ－２／ＬＡＭ均具有抵抗鼠脾ＮＫ细胞活性，ＩＬ－２产生能力和腹腔Ｍψ吞噬能力下降的作用，ＡＰＳ对ＩＬ－２／ＬＡＫ仍有显著增强效应。     

通过维持微环境IL－2水平抑制肿瘤形成

为研究肿瘤微环境中ＩＬ－２对肿瘤生长的抑制效应，用转基因方法，将携带ｍＩＬ－２ｃＤＮＡ基因的牛乳头瘤病毒载体（ＢＣＭＧ）转染小鼠Ｂ１６瘤细胞，获稳定持久分泌ｍＩＬ－２的Ｂ１６细胞株（ｍＩＬ－２＋Ｂ１６）。动物实验结果显示：ｍＩＬ－２＋Ｂ１６细胞的致瘤性明显下降，但体外生长率与其亲代Ｂ１６细胞相比较无区别。用ｍＩＬ－２＋Ｂ１６细胞诱导的小鼠腹腔渗出细胞（ＰＥＣ）对ＹＡＣ－１靶细胞和Ｂ１６靶细胞的体外杀伤能力比对照组ＰＥＣ（Ｂ１６诱导的ＰＥＣ）高一倍以上（Ｐ＜０．０１）。表明提高微环境中的ＩＬ－２水平能提高抗肿瘤免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，从而抑制肿瘤的形成。     

骨巨细胞瘤的细胞遗传学研究

对１９例手术切除骨巨细胞瘤组织和４例骨巨细胞瘤细胞系进行了细胞遗传学研究，发现瘤细胞多为异倍体，染色体众数多为亚二倍体。核型分析表明第１７，１８号染色体丢失频率较高，染色体末端缺失和端粒融合是骨巨细胞瘤最常见的细胞遗传学改变。我们将骨巨细胞瘤染色体高度非随机断裂点和同一患者体细胞染色体脆性部位与目前公认的癌基因点进行比较，发现三个位点分别与癌基因ＭＥＴ，ＦＬＴ，ＹＥＳ２／ＰＤＧＦＢ（ｓｉｓ）同位或     

单纯疱疹病毒I型感染鼠的抗感染机理研究

单纯疮疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－Ｉ）属疱疹病毒科，它可引起人和动物的急性感染与持续性感染。国外文献报道，在ＨＳＶ－Ｉ感染的康复过程中，细胞免疫起着关键的作用。国内此类报道甚少。研究结果表明：ＨＳＶ－Ｉ标准株（ｋｏｓ）经自行扩增后，测得病毒毒力３．２×１０￣８ＴＣＩＤ５０／ｍｌ，ＬＤ５０为３．２８．并以１０￣４ＰＦＵ，ＨＳＶ－Ｉ经腹腔感染小鼠，建立感染动物模型。同时，用此病毒体外感染Ｐ８１５细胞，可在细胞表面检出ＨＳＶ－Ｉ病毒抗原。当小鼠感染ＨＳＶ－Ｉ病毒后，在感染初期脾细胞诱生ＩＦＮ的能力迅速上升（感染鼠２５６．０±０．０Ｕ／ｍｌ，正常鼠３７．３±６．０Ｕ／ｍｌ），至２１天时降至正常组水平，这一变化与感染鼠ＮＫ活性动态观察结果相吻合。实验还发现，ＨＳＶ－Ｉ感染鼠脾细胞诱生ＩＬ－２的能力也是增高的。虽然在感染早期有一短暂的下降，这可能与动物在感染初期的应激状态有关。结合体外诱导ＬＡＫ及ＨＳＶ－Ｉ／ＣＴＬ实验结果推测，脾细胞诱生细胞因子能力的增高，为体内产生ＬＡＫ及ＣＴＬ提供了条件。体内转移试验进一步证实ＬＡＫ及ＨＳＶ－Ｉ／ＣＴＬ在体内对感染鼠均有不同程度的保护作用，以过继转移ＨＳＶ－Ｉ／ＣＴＬ的保护作用更强。     

星形胶质细胞谱系及星形细胞瘤起源的研究

各种神经胶质细胞中数目最多、分布最广的星形细胞担负了神经胶质细胞的大部分功能。根据对两种神经组织标志物─ＧＦＡＰ、Ａ－２Ｂ－５抗体的反应不同，将星形细胞分为１型（ＧＦＡＰ＋Ａ－２Ｂ－５－）和２型（ＧＦＡＰ＋、Ａ－２Ｂ－５＋）。研究指出两型星细胞来源于不同祖细胞，而存在两个谱系，星形细胞胶质瘤与星形细胞具有同样的谱系源。对小胶质细胞在星形细胞发生和分化中的作用亦予以阐述。     

抗原基因修饰的树突状细胞诱导机体产生特异性免疫应答的实验研究

目的：探讨腺病毒介导的肿瘤抗原基因修饰的树突状细胞（ＤＣ） 体内免疫后对抗原特异性抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法：以βｇａｌ 为模拟抗原,以转染有ＬａｃＺ基因并稳定表达βｇａｌ 的淋巴瘤细胞Ｅ２２ 为肿瘤细胞模型,用携带编码βｇａｌ的ＬａｃＺ基因的重组腺病毒载体（ＡｄＬａｃＺ） 转染小鼠骨髓ＤＣ,检测转染的效率及ＬａｃＺ基因修饰ＤＣ刺激Ｔ细胞增殖的能力,观察皮下免疫ＬａｃＺ基因修饰ＤＣ后小鼠引流区淋巴结细胞数量和组分的变化以及诱导产生ＣＴＬ和抵抗Ｅ２２ 细胞再攻击的能力。结果：ＬａｃＺ基因修饰后２４ 、４８ 、７２ ｈ,均能检测到８０％ 以上的ＤＣ表达βｇａｌ,此基因修饰的ＤＣ可有效刺激同基因型小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖反应;将其皮下免疫小鼠１ ｗ 后再接种Ｅ２２ 细胞,小鼠的存活期较其他ＤＣ免疫小鼠显著延长,但对Ｂ１６ 黑色素瘤细胞的攻击无免疫保护作用。此外,ＬａｃＺ基因修饰的ＤＣ免疫小鼠的引流淋巴结细胞数量显著增加,且产生了针对Ｅ２２ 的而非ＥＬ４ 或Ｂ１６ 的特异性ＣＴＬ。结论：腺病毒介导的肿瘤抗原基因修饰的ＤＣ能有效诱导机体产生特异的抗肿瘤免疫反应。     

反应性星形胶质化的形成机制及研究进展

脑损伤后修复过程中，小胶质细胞释放出多种多肽，神经元和星形胶质细胞分泌的ｂＦＧＦ以及星形胶质细胞释放的ＧＭＦ均参与和调节星形胶质细胞的激活。与此同时，脑源性抑制因子活性降低。反应性星形胶质化以细胞肥大为主，其ＧＦＡＰ含量增加。ＧＦＡＰ的生成，受到ｇｆａ基因的控制     

MHCI类抗原多肽致敏IL—2基因修饰的树突状细胞对小鼠引流淋巴结T细胞亚群

目的：探讨ＭＨＣ Ｉ类分子限制性肿瘤抗原多肽Ｍｕｔｌ体外冲击白细胞介素２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２,ＩＬ－２）基因修饰的树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｔｉｃ ｃｅｌｌｓ,ＣＤ）对小鼠体内特异性免疫的活化机制。方法：用腺病毒作为载体介导小鼠ＩＬ－２基因修饰ＤＣ,用小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌３ＬＬ细胞株ＭＨＣ Ｉ类分子限制性八肽Ｍｕｔｌ冲击ＩＬ－２基因修饰的ＤＣ（ＤＣ－ＩＬ－２Ｍｕｔｌ）免疫小鼠,用流式细胞术（ＦＡＣＳ）分析免疫保护小鼠接受３ＬＬ细胞再攻击后引流淋巴结内Ｔ细胞亚群的比例变化。结果：用Ｍｕｔｌ冲击的ＤＣ免疫的小鼠抵抗３ＬＬ细胞再攻击时,引流淋巴结内ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞比例明显升高,ＤＣ－ＩＬ－２－Ｍｕｔｌ免疫保护的小鼠接受３ＬＬ细胞再攻击后引流淋巴结内ＣＤ８＾＋和ＮＫ细胞的比例都明显升高。结论：研究表明ＭＨＣ Ｉ类     

肿瘤抗原冲击致敏的IL—2基因修饰的巨噬细胞治疗肾癌的实验 …

目的：观察体外肿瘤抗原冲击致敏的白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的巨噬细胞对肾癌小鼠的治疗其相关的免疫机理。方法：通过重组腺病毒的介导，将ＩＬ－２基因转入新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞，经肿瘤抗原冲击致敏后回输治疗原位肾癌小鼠，ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测脾脏ＮＫ和ＣＴＬ活性。结果：ＩＬ－２基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后体内回输可使肾癌小鼠肺转移结节明显减少，存活期明显延长，４０％肾癌小鼠达到长期存活。     

检测Epstein-Barr病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞方法的建立及其初步研究

目的建立一种非放射性、简便易行的可检测特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，并且初步应用于Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒的细胞免疫应答。方法用重组的ＥＢＶ－ＬＭＰ１痘苗病毒、ＴＫ＋痘苗病毒和杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白分别免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，用Ｐ８１５细胞和乳酸脱氢酶法检测ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的杀伤效应。结果重组ＥＢＶ－ＬＭＰＩ痘苗病毒免疫组原发ＣＴＬ水平和体外诱生的二次ＣＴＬ水平均高于ＴＫ＋痘苗病毒免疫组和正常组；杆状病毒系统表达的ＥＢＶ－ＬＭＰ１蛋白免疫组的ＣＴＬ水平也明显高于正常鼠。结论本法可以较好的反映ＥＢ病毒特异性细胞毒性Ｔ细胞的水平，而且再一次说明ＬＭＰ１基因能够诱发特异性的细胞免疫。     

黑色素瘤与活化B淋巴细胞融合株的建立及体内外的生长特性

以５０％ＰＥＧ为融合剂，将Ｃ５７ＢＬ／６来源的Ｂ１６黑色素瘤与ＬＰＳ活化的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｂ淋巴细胞进行融合。融合细胞经ＨＡＴ选择性培养基的筛选，用有限稀释法克隆到一表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７的融合瘤株。与Ｂ１６相比，该融合瘤株在体外生长缓慢，接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠发现其体内的致瘤性也有下降。实验结果提示：与活化的Ｂ淋巴细胞融合可以改变瘤细胞的免疫生物学特性。