妊娠期接触糖皮质激素对子代大鼠海马SGK mRNA表达的影响

目的:研究妊娠期大鼠接触糖皮质激素(GCs)对子代大鼠海马组织血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)表达的影响，并初步探讨其可能原因。方法:根据大鼠发情周期进行合笼，次晨阴道涂片发现精子作为受孕0.5 d。孕鼠随机分为对照组和地塞米松组，每组10只。地塞米松组大鼠在妊娠第14 日起皮下注射地塞米松 0.1 mg/ (kg·d) ,对照组注射等量生理盐水。取出生后1、7和42 d的子代大鼠海马组织,采用real-time PCR法检测SGK和糖皮质激素受体(GR)mRNA表达情况。结果:地塞米松组子代出生时体质量明显低于对照组,随后出现追赶性生长；地塞米松组子代在出生后1、7、42 d，其海马组织SGK 和GR mRNA表达较对照组明显减少(P<0.05)。结论:妊娠晚期接触GCs可使子代大鼠海马SGK和GR的基础表达降低。     

散发性结直肠癌中hMLH1基因启动子区CpG岛MVPs图谱的绘制与分析

目的 绘制散发性结直肠癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化可变位点(methylation variable positions, MVPs)图谱,分析MVPs图谱与hMLH1蛋白表达的关系,寻找CpG岛中影响蛋白表达的关键CpG位点.方法 采用重亚硫酸盐测序方法检测患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态;采用免疫组化方法检测相应蛋白表达水平.结果 CpG岛1(CGI-Ⅰ)甲基化阳性率为20 %(6/30);CpG岛2(CGI-Ⅱ)甲基化阳性率为13.33 %(4/30).hMLH1蛋白表达阳性率为50 %(15/30).经χ2检验,CGI-Ⅰ甲基化与hMLH1蛋白表达缺失存在显著性差异(P＜0.05)、CGI-Ⅱ甲基化与hMLH1蛋白表达缺失无差异(P＞0.05).结论 CGI-Ⅰ甲基化可能导致hMLH1蛋白不表达,其中1～28 CpG位点为导致hMLH1蛋白表达缺失的关键区域.     

胃癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态及其与蛋白表达的关系

目的：探讨胃癌组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌生物学行为的关系,并分析hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化与其蛋白表达的相关性。方法：采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）技术和免疫组织化学SP法检测45例患者胃癌组织、正常胃组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况及蛋白的表达。结果：hMLH1基因启动子区CpG岛在胃癌及正常组织中的甲基化阳性率分别为33.3%和0（P〈0.05）;hMLH1蛋白在胃癌及正常组织中的阳性率分别为57.8%和95.2%（P〈0.05）;hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌的临床病理参数无关（P〉0.05）;hMLH1基因启动子甲基化与hMLH1蛋白表达呈明显的负相关（P〈0.05）。结论：hMLH1基因启动子区CpG岛的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的主要原因,hMLH1蛋白表达缺失与胃癌的发生有关。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路.方法 将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达;用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR (MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达.结果 在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P＜0.05);甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰;甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P＜0.05).结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生.     

妊娠期过多接触糖皮质激素对子代大鼠肝脏11β-HSD1表达的印迹效应

目的:探讨妊娠期过多接触糖皮质激素对子代大鼠肝脏再生糖皮质激素代谢酶11β羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)表达的印迹效应.方法:根据大鼠发情周期进行合笼,次晨阴道涂片发现精子作为受孕0.5 d.孕鼠共8只,随机分为地塞米松(DEX)组和生理盐水(NS)组,每组4只.DEX组孕鼠整个妊娠期注射DEX 0.05 mg/(kg·d),NS组孕鼠同等条件注射NS.取DEX和NS组出生后120 d子代大鼠肝脏组织, 采用Western印迹法检测11β-HSD1蛋白,RT-PCR方法检测11β-HSD1 mRNA、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK) mRNA,葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.结果:DEX组大鼠子代出生时的体质量比NS组明显降低, 但生后120 d子代大鼠的体质量与NS组无显著性差异.生后120 d子代大鼠中DEX组雌性子代肝脏组织内11β-HSD1蛋白和mRNA表达、PEPCK mRNA表达以及血糖浓度均显著高于NS组雌性子代(P<0.05), 但雄性子代大鼠没有显著差异.结论:妊娠期过多接触糖皮质激素可以印迹雌性子代大鼠肝脏11β-HSD1的表达增加,从而可能进一步导致PEPCK表达的增加和血糖浓度升高.这可能是妊娠期过多接触糖皮质激素印迹糖尿病发生的重要机制之一.     

亚慢性苯吸入小鼠凋亡相关基因Survivin、Bc12L13的表达与甲基化状态分析

目的：探讨亚慢性苯暴露小鼠凋亡相关基因Survivin、Bc12L13的表达与启动子甲基化状态.方法：C57BL/6J雄性小鼠亚慢性动式吸入苯,暴露浓度分别为0 ppm（对照组）、1 ppm（低浓度组）和100 ppm（高浓度组）.收集骨髓细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR （qPCR）检测Survivin、Bl12L13基因的表达,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定基因启动子区CpG岛甲基化水平.结果：与对照组比较,苯暴露组的细胞凋亡比例明显增大（P＜0.01）,低浓度组S期细胞比例增加,高浓度组S期和G2/M期细胞的比例均显著降低.低浓度组Survivin mRNA表达下降,高浓度组Survivin、Bcl2L13 mRNA表达均显著降低.两基因启动子区CpG岛均呈低甲基化状态,其甲基化水平未受苯暴露影响.结论：亚慢性苯吸入染毒影响小鼠骨髓细胞周期,增加细胞凋亡,降低Survivin、Bcl2L13 mRNA的表达,但不影响其基因启动子的甲基化状态.     

亚慢性苯吸入小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与甲基化状态分析

目的：探讨亚慢性苯暴露小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与启动子甲基化状态。方法：C57BL/6J雄性小鼠亚慢性动式吸入苯,暴露浓度分别为0 ppm（对照组）、1 ppm（低浓度组）和100 ppm（高浓度组）。收集骨髓细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR（qPCR）检测Survivin、Bcl2L13基因的表达,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果：与对照组比较,苯暴露组的细胞凋亡比例明显增大（P＜0.01）,低浓度组S期细胞比例增加,高浓度组S期和G2/M期细胞的比例均显著降低。低浓度组Survivin mRNA表达下降,高浓度组Survivin、Bcl2L13 mRNA表达均显著降低。两基因启动子区CpG岛均呈低甲基化状态,其甲基化水平未受苯暴露影响。结论：亚慢性苯吸入染毒影响小鼠骨髓细胞周期,增加细胞凋亡,降低Survivin、Bcl2L13 mRNA的表达,但不影响其基因启动子的甲基化状态。     

卵巢上皮性癌OPCML基因的表达缺失和启动子甲基化

目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因的失表达及CpG岛甲基化。结果在卵巢癌中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常卵巢组织(χ2=30·108,P=0·0000)和卵巢良性肿瘤组织(χ2=21·162,P=0·000)。SKOV-3和CAOV3细胞未见OPCMLmRNA表达,而3AO细胞可见OPCMLmRNA表达。在卵巢癌中,启动子CpG岛尤其是HapⅡ酶切位点甲基化率显著高于正常卵巢组织(χ2=13·630,P=0·0000)和良性肿瘤组织(χ2=11·797,P=0·000)。卵巢癌OPCML启动子CpG岛甲基化和mRNA失表达呈显著相关(r=11·589,P=0·002)。SKOV-3和CAOV3细胞有内切酶位点甲基化,而3AO细胞无酶切位点甲基化。结论卵巢上皮性癌细胞存在OPCML基因失表达;基因启动子CpG岛,尤其是HapⅡ酶切位点的甲基化是导致OPCML基因失表达的途径,但不是唯一途径。     

Maspin在大肠癌中的表达及其启动子5''CpG岛甲基化状态的研究

目的 探讨Maspin基因启动子5'CpG岛异常甲基化及蛋白表迭与大肠癌及其临床病理特征的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组织化学方法分别检测91例大肠癌组织及91例癌旁组织中Maspin基因的5'CpG岛甲基化和蛋白表达.结果 大肠癌和癌旁组织中,Maspin蛋白表达率分別为72.5%,92.3%,CpG岛甲基化率分别为20.9%,9.9%,两者差异均有显著性(P＜0.01,P＜0.05).肿瘤组织中的Maspin蛋白表达与大肠癌分化程度、Duke's分期及浸润深度相关,Maspin甲基化与大肠癌的Duke's分期及浸润深度相关.大肠癌Maspin蛋白阳性与阴性表迭的组织之间,CpG岛甲基化率的差异有显著性(P＜0.01).结论 Maspin基因异常甲基化是其蛋白表达缺失的主要原因之一,并在大肠癌的发生发展中起重要作用.     

C57 BL/6J小鼠肝脏中mPer1基因CpG岛甲基化分析

目的 建立分析C57 BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区甲基化状态的亚硫氢酸修饰法,检测mPer1表达峰、谷对应的甲基化状态.方法 利用实时定量PCR方法检测mPer1基因表达时相特点,并利用亚硫氢酸修饰法对小鼠肝脏组织mPer1基因启动子区域CpG岛和E-box甲基化情况进行了研究.结果 C57 BL/6J小鼠肝脏组织mPer1基因表达有显著波动性,表达高峰位于ZT13.低谷位于ZT01.序列分析显示mPer1基因启动子区含有CpG岛,并且该CpG岛覆盖与mPer1波动性表达密切相关的顺式元件E-box1和E-box2.亚硫氢酸修饰测序结果 显示,mPer1基因启动子区CpG岛和E-box均呈低甲基化或非甲基化状态.不同时间点mPer1基因CpG岛甲基化频率无显著变化(P=0.458).结论 肝脏中mperl基因启动子区CpG岛和E-box均为开放状态,可以与时钟相关转录因子结合.甲基化不参与调节mPer1基因的节律性表达.     

妊娠期染毒 PFOS 对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响

目的：研究妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响。方法：对妊娠第12天的SD大鼠采用灌胃方式染毒不同剂量PFOS（5、10mg／kg）。每天1次,连续8d。出生后第65（PDN56）天,检测子代成年雄性大鼠体质量及睾丸重量。采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾丸间质细胞（adult Leydig cell,ALC）类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）mRNA的相对表达量。结果：与对照组相比,5mg／kg剂量染毒组子体质量显著性降低（P〈0．001）,睾丸系数下降（P〈0．05）;睾丸组织中StAR mRNA的相对表达量下调（P〈0．05）。结论：妊娠期染毒PFOS可通过抑制ALC合成睾酮途径中StAR mRNA的表达水平,对子代成年雄性大鼠的生殖系统产生毒性作用。     

砷暴露对子代小鼠肺组织ERα表达性别差异的初步研究

目的 观察亲代母鼠砷染毒后子代不同发育时期肺组织内雌激素受体α（ERα）的表达变化规律及性别间的差异,探讨砷暴露在肺癌发生性别差异中的作用。方法 亲代母鼠在孕第8 d至子代断乳期砷灌胃染毒,子代在断乳期后砷饮水染毒至成年期。通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测子代雌雄小鼠在不同发育时期、不同剂量（低、中、高）亚砷酸钠染毒情况下,肺组织中\ERα mRNA和蛋白的表达水平。 结果 胚胎期雌性肺组织中\ERα mRNA表达水平低于雄性(\P\ERα mRNA表达水平高于雄性（断乳期中剂量组\P\P\ERα mRNA的表达水平差异无统计学意义;断乳、成年期雌性肺组织内\ERα mRNA的表达水平均高于胚胎期雌性（低、中、高剂量组\P\P\P<0.05)。 结论 亲代母鼠砷染毒可使子代雌性小鼠在断乳期、成年期时肺组织内ERα表达水平均高于雄性小鼠,对阐明环境污染物在肺癌发生性别差异中的作用具有重要的意义。     

塑化剂DEHP与植物雌激素GEN孕期暴露对雄性子代大鼠发育影响

目的:探讨DEHP与GEN孕期暴露对雄性子代大鼠发育的影响。方法:30只孕鼠于孕3d(GD3)至孕20d(GD20),每天按分组方案灌胃,观察干预后对子代大鼠及亲代母鼠的影响。结果:孕期单一暴露于DEHP(250mg/kg)及GEN(400mg/kg),平均每窝活产只数、仔鼠只数、出生时性别比、子代雄鼠体重及AGD/体重1/3、母鼠体重变化等较对照组无显著性变化(P<0.05)。孕期同时暴露于DEHP(250mg/kg)与低剂量GEN(50mg/kg),子代雄鼠体重较对照组的显著性下降(P?0.05)。孕期同时暴露于DEHP(250mg/kg)与高剂量GEN(400mg/kg),子代雄鼠体重较其余四组均出现显著性下降(P?0.05)。结论:孕期DEHP与GEN同时暴露对雄性子代大鼠体重造成一定影响。     

Significance and Expression of Serum and Glucocorticoid-inducible Kinase in Kidney of Mice with Diabetic Nephropathy

To investigate the expression and the role of three isoforms of Serum and Glucocorticoidinducible Kinase (SGK) in experimental diabetic nephropathy (DN), 12 male C57BL/6 mice of 8-weeks-old were divided into two groups. Streptozotocin (STZ)-induced diabetic nephropathy and normal controls were analyzed at the end of the 4th week after the induction of diabetes. Renal hemodynamics and histological studies were performed. The expression of SGK1 mRNA, SGK2 mRNA and SGK3 mRNA of kidney cortex were measured by RT-PCR, and the cortical SGK1 protein was detected with Western blotting. Our results showed that the blood glucose, blood HbA1c, 24h urinary protein, creatinine clearance and the renal index were all increased in DN group. More extracellular matrix (ECM) accumulation was observed. The level of cortical SGK1 mRNA and protein were up-regulated in DN group in comparison with control group. SGK2 and SGK3 mRNA were elevated in DN mice. In DN, mRNA level of three SGK isoforms and SGK1 protein were increased significantly. It is concluded that SGKs may contribute to the early renal injury of DN.     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏中GATA-4表达的影响

目的：探讨叶酸缺乏孕鼠的子代心脏发育过程中GATA-4基因和蛋白的表达改变。方法：成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组各18只，分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。两周后与成熟SD雄性大鼠交配。分别取孕13．5天（E13．5d）、孕17．5天（E17．5d）胚胎的心脏及新生鼠的心脏。用RT-PCR检测GATA-4基因mRNA的表达。Westem-blotting测GATA-4蛋白水平的表达。结果：GATA-4基因mRNA在E13．5d、E17．5d的胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量．实验组均显著低于对照组（P〈0．05）。GATA-4蛋白在E13．5d、E17．5d的胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量，实验组均显著低于对照组（P〈0．05）。结论：叶酸的缺乏影响GATA-4基因和蛋白水平的表达。可能导致心脏发生发育中形态的改变。从而造成心脏的功能缺陷。     

吸入性糖皮质激素对豚鼠速发性支气管哮喘反应的快速作用

目的：研究吸入性糖皮质激素对豚鼠速发性支气管哮喘的快速作用。方法：以卵白蛋白为抗原致敏豚鼠，抗原再次激发速发性支气管哮喘反应前，处理组雾化吸入糖皮质激素布地奈德（3mg/ml混悬于羟甲基纤维素赋形剂）5min，对照组雾化吸入赋形剂和生理盐水。实时测量哮喘豚鼠肺功能参数，肺动态顺应性（Cdyn)和肺阻力（RL)的变化，作为反映哮喘严重程度的指标。结果：基因组机制介导的糖皮质激素作用需要数小时才能起效，而抗原激发前雾化吸入糖皮质激素布地奈德在10min内明显抑制了豚鼠支气管哮喘反应的Cdyn和RL变化（P＜0.05)。结论：糖皮质激素布地奈德快速抑制豚鼠速发性哮喘，为研究糖皮质激素非基因组机制提供了直观的实验基础，进一步的研究将可能为糖皮质激素在包括哮喘在内的变态反应性疾病中的临床应用提供理论依据。     

子痫前期宫内环境导致子代大鼠海马HPA轴相关基因表达改变

 目的 研究子痫前期宫内环境对子代SD大鼠海马下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal, HPA)轴相关基因表达的影响。方法 通过给妊娠第14天SD大鼠连续皮下注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)至分娩的方法建立子痫前期大鼠动物模型,对照组予生理盐水1 mL皮下注射。用酶联免疫检测(ELISA)方法检测新生子代大鼠血皮质酮(corticosterone, CORT)浓度。用Real-time PCR方法和Western bolt分别检测8周龄子代大鼠海马组织糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone, CRH)、CRH受体1 (CRH receptor 1, CRHR1)和IL-6的mRNA水平及其蛋白质水平。结果 与正常子代新生鼠相比,子痫前期子代新生鼠血CORT浓度升高(P＜0.05)。与正常子代鼠相比,子痫前期青少年子代鼠海马GR、CRH 和CRHR1 mRNA和蛋白质水平均增加(P＜0.05),炎性因子IL-6 mRNA和蛋白质水平均增加(P＜0.05)。结论 子痫前期宫内环境影响子代大鼠海马HPA轴相关基因的表达,在子代学习记忆能力受损中起作用。     

Expression of Serum and Glucocorticoid-inducible Kinase1 in Diabetic Rats and Its Modulation by Fluvastatin

The expression of serum and glucocorticoid-induced protein kinase in the renal cortex of diabetic rats was examined, and the function of signal transduction mediated by SGK1 in diabetic nephropathy and its modulation by fluvastatin were also investigated. 24 male Wistar rats were randomly divided into normal control group （n = 8）, diabetic nephropathy group （n = 8） and fluvastatin-treated diabetic nephropathy group （15 mg/kg/d, n=8）. The metabolic parameters were measured at the 8th week. The expression of transforming growth factor β1 （TGF-β1） and fibronectin （FN） was immunohistochemically examined. The expression of SGK1 was detected by RT-PCR and Western blot, and CTGF mRNA was assessed by RT-PCR. As compared to DN, blood glucose, 24-h urinary protein, Cer and kidney weight index were all decreased and the weight was increased obviously in group F. At the same time, mesangial cells and extracellular matrix proliferation were relieved significantly. The levels of cortex SGK1 mRNA and protein were up-regulated, and both TGF-β1 and FN were down-regulated by fluvastatin. The mRNA of SGK1 was positively correlated with the CTGF, TGF-β1 and FN. SGK1 expression is markedly up-regulated in the renal cortex of DN group and plays an important role in the development and progress of diabetic nephropathy by means of signal transduction. Fluvastatin suppressed the increased SGKlmRNA expression in renal cortex and postponed the development of diabetic nephropathy.     

卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bax的表达与妊娠的关系

目的 :探讨卵巢颗粒细胞中凋亡相关蛋白bax的表达与妊娠率的关系。方法 :选择 4 2例适合作ICSI手术的不孕妇女 ,其中由于男性少精及无精的 2 1例 ,男性免疫性不孕 6例 ,女性免疫性不孕 7例 ,男女双方免疫性不孕 8例。根据妊娠情况 ,将其分为妊娠组 (18例 )、非妊娠组 (2 4例 )。通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)和免疫组织化学方法检测卵巢颗粒细胞凋亡率和bax蛋白表达率。结果 :妊娠组卵巢颗粒细胞凋亡率为 0 .17± 0 .0 2 ,显著低于非妊娠组 0 .36± 0 .0 3,P <0 .0 5。妊娠组bax阳性率为 0 .33± 0 .0 2显著低于非妊娠组 0 .6 6± 0 .0 4 ,P <0 .0 5。结论 :卵巢内卵丘颗粒细胞凋亡状态和凋亡相关蛋白bax的表达与胚胎质量有直接的关系 ,研究卵丘颗粒细胞凋亡和卵丘颗粒细胞的bax基因表达可作为预测ICSI成功的指标     

下丘脑Kiss1系统在产前应激诱导男性后代生殖功能异常中的潜在作用

下丘脑Kiss1系统是下丘脑-垂体-性腺轴中的一个重要组成部分,其通过促进促性腺激素释放激素的分泌,来调节生殖功能。最近研究发现,产前应激对男性后代生殖功能具有影响。然而,产前应激诱导的男性后代生殖功能下降的机制仍未阐明。通过对下丘脑Kiss1系统的治疗可能改善产前应激,诱导男性后代的生殖功能,该综述将讨论下丘脑Kiss1系统在产前应激诱导男性后代生殖功能异常中的潜在作用。