脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶的变化及意义

目的:观察脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化特点及其意义.方法:24只雄性SD大鼠随机分为脓毒症组和对照组,脓毒症组按5 mg/kg体重腹腔注射脂多糖(LPS),对照组给予等量生理盐水,于注射后2h、6h经腹主动脉采血、处死,比较动脉血气分析、ELISA法检测的肺组织iNOS、白介素-6(IL-6)含量、右下肺肺组织病理切片计算的病理学肺损伤积分.结果:与对照组比较,脓毒症组大鼠氧合指数显著下降、肺组织iNOS、IL-6含量、病理学肺损伤积分均显著增加,P＜0.01.结论:脓毒症大鼠肺iNOS的过度表达增加了炎症因子的释放、增加肺血管通透性,加重肺损伤.     

骨形态发生蛋白2和音猬因子体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

背景:研究表明,骨形态发生蛋白2和音猬因子联合诱导干细胞的定向分化存在理论上的可能性,但目前联合诱导间充质干细胞的方向纷繁复杂,且众说纷纭.目的:观察骨形态发生蛋白2和音猬因子在体外联合和单独应用促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的能力.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-12在江苏大学临床医学院实验室完成.材料:6周龄SPF级SD大鼠10只,体质量140～160 g,雌雄不拘,用于间充质干细胞的获得、培养和传代.重组人骨形态发生蛋白2、音猬因子为PeproTech公司产品.方法:将SD大鼠的间充质干细胞分离培养后分为4组:重组人骨形态发生蛋白2组:加入100 mg/L重组人骨形态发生蛋白2:音猬因子组:加入20 μg/L音猬因子:联合组:100 mg/L重组人骨形态发生蛋白2联合20 μg/L音猬因子作用于SD大鼠间充质干细胞:对照组:不加任何干预措施.主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;MTT法检测细胞培养第3,6,9,12天细胞增殖数和细胞碱性磷酸酶活性;以及成骨细胞表型的检测和Ⅰ型胶原蛋白免疫印迹分析,以比较各组诱导成骨能力的差异.结果:①间充质干细胞培养24 h后部分贴壁,贴壁细胞呈圆形或椭圆形,第7天左右细胞铺满瓶底,多为梭形.条件培养基培养3 d后,联合组细胞由长梭形转变为多角形.随后重组人骨形态发生蛋白2组细胞发生成骨样改变,音猬因子组细胞未见明显形态学改变.②相同时间点联合组、重组人骨形态发生蛋白2组、音猬因子组细胞吸光度均高于对照组(P<0.05).联合组和重组人骨形态发生蛋白2组在各时间点碱性磷酸酶表达量均高于音猬因子组和对照组(P<0.05).③间充质干细胞经诱导培养7 d后,碱性磷酸酶细胞化学染色联合组和重组人骨形态发生蛋白2组呈阳性,联合组可见胞质中棕黄色颗粒,音猬因子组和对照组阴性.诱导培养14 d后,Ⅰ型胶原免疫荧光染色音猬因子组和对照组均为阴性,联合组和重组入骨形态发生蛋白2组为阳性,但联合组细胞数量明显增多,细胞间融合较好,重组人骨形态发生蛋白2组细胞融合欠佳.矿化沉积茜素红染色音猬因子组和对照组仍为阴性,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组为阳性,联合组细胞间可见红色的钙结节.④蛋白免疫印迹分析显示,与对照组相比,联合组和重组人骨形态发生蛋白2组Ⅰ型胶原蛋白表达增加,联合组尤其明显,音猬因子组与之接近.结论:骨形态发生蛋白2和音猬因子在体外能明显促进间充质干细胞向成骨细胞分化并且具有明显的协同相关性.     

内毒素预处理对内毒素血症大鼠肝损伤的保护作用

目的 探讨内毒素预处理对内毒素血症大鼠肝损伤的保护作用.方法 采用直接注射内毒素的方法建市大鼠急性内毒素血症模型.雄性Wistar人鼠72只,随机分成三组:生理盐水对照组(N组,n=24只)、内素脂多糖(IPS)(L组,n=24只)和LPS预处理组(P组,n=24只),每组义按时间分为2 h组、4 h组、6 h组、12 h组4个亚组,每个亚组6只.P组:首次经腹腔注射LPS 0.25mg/kg;24 h后再经腹腔注射IPSO.5 mg/kg,其余两组给予等容量生理盐水.第二次腹腔注射72 h后,L组和P组经尾静脉一次注射LPS 10 mg/kg,N组给予等量生理盐水,L组和P组在注射LPS后2,4,6,12 h,N组在注射最后一次NS后2,4,6,12 h,各取6只取肝组织制成匀浆检测Toll样受体4(Toll likereceptor-4,TLR-4)、核因子-кB(nuclear factor kappa B,NF-кB)、肿瘤坏死因子-α(tulnor necrosis factor-a,TNF-α)和丙二醛(malondiahtehyde,MDA),抽血检测谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(ASF),取肝脏(肝左上叶)用10%的中性甲醛固定.采用SPSS 13.0统汁软件进行单因素方差分析.结果 内毒素血症时符时间点肝脏组织TLR-4,NF-кB和TNF-α浓度较对照组显著升高,而内毒素预处理后则有明显下降,其中内毒素血症时4 h组肝脏组织TLR-4,NF-кB和TNF-α分别为(38.76±0.67),(170.82±31.40),(293.16±49.49)和(6.263±0.351),显著高于对照组(P＜0.05),而内毒素预处理后上述指标降至(22.32±1.35),(135.55±26.44)和(234.23±44.96),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 内毒素预处理可减轻内毒素血症时的肝损伤,其机理可能与肝组织TLR-4,NF-кB和TNF-α的表达减少有关.     

NG-硝基-L-精氨酸对脂多糖诱导大鼠肺损伤时肺表面活性物质和细胞凋亡的影响

目的 探讨NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对内毒素性肺损伤大鼠肺表面活性物质(PS)和细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠24只,按随机数字表法均分为对照组、模型组、L-NA治疗组.模型组、L-NA治疗组舌下静脉注射脂多糖(LPS)复制内毒素性肺损伤模型;对照组给予等量生理盐水.L-NA治疗组于注射LPS 3 h后给予L-NA 20 mg/kg;对照组和模型组给予等量生理盐水.6 h后处死动物,取肺组织,用原位杂交法测定肺组织表面活性物质相关蛋白A(SP-A)mRNA表达;用流式细胞术检测肺组织细胞凋亡率;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达;用免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组SP-A mRNA表达[吸光度(A)值]明显下降(0.071±0.017比0.113±0.021),细胞凋亡率[(25.04±4.57)%比(11.37±3.08)%]、caspase-3蛋白表达(A值:298.64±37.11比110.24±14.35)、Bax蛋白表达(A值:0.145±0.011比0.076±0.010)明显升高,Bcl-2蛋白表达(A值:0.064±0.011比0.073±0.009)和Bcl-2/Bax比值(0.447±0.086比0.976±0.157)明显下降(均P<0.01).与模型组比较,L-NA治疗组SP-A mRNA表达(A值:0.085±0.015)和Bcl-2蛋白表达(A值:0.070±0.087)明显增强(P<0.01和P<0.05),但细胞凋亡率[(20.67±1.35)%]、caspase-3蛋白表达(A值:268.75±42.56)、Bax蛋白表达(A值:0.142±0.012)和Bcl-2/Bax比值(0.498±0.069)均无明显变化(均P>0.05).结论 L-NA不通过抑制肺细胞凋亡来减轻内毒素性肺损伤的程度,对调节凋亡相关基因caspase-3和Bax也无明显影响;而是可通过增强PS表达减轻内毒素性肺损伤.     

己酮可可碱及地塞米松对内毒素致急性肺损伤的保护作用

目的　探讨己酮可可碱 (PTX)和地塞米松防治内毒素 (LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的作用机制。方法　建立大鼠急性肺损伤模型 ,随机分成 4组 :LPS组、对照组、PTX组和地塞米松组 ,观察肺大体标本、组织病理和相关肺损伤生物学指标。结果　LPS组与对照组相比 ,肺组织病理显示肺间质及肺泡明显损伤和细胞浸润 ,肺损伤生物学指标如肺湿 /干重比、肺泡灌洗液中性粒细胞比及蛋白含量、肺泡通透指数和肺血管通透性均显著升高 ,一氧化氮 (NO)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)显著升高 (P <0 0 1)。PTX和地塞米松治疗组组织病理损害明显减轻 ,上述相应指标均下降。结论　用PTX和地塞米松治疗可使内毒素所致肺损伤程度减轻 ,其机制可能是通过抑制NO和iNOS活性来实现     

乌司他丁对内毒素致大鼠急性肺损伤时血清超敏C-反应蛋白和降钙素原的影响

目的探讨乌司他丁对内毒素所致的大鼠急性肺损伤时血清超敏C-反应蛋白和降钙素原的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,体重250～300g,分为对照组(n=10)、内毒素组(n=10)、治疗组(n=10)。内毒素组给予内毒素5mg/kg,治疗组同时给予内毒素5mg/kg和乌司他丁100000U/kg,对照组给予等量生理盐水。分别于制模后即刻、1h、3h、6h后测定血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和降钙素原(PCT),取肺组织光镜下的组织病理形态。结果光镜下可见对照组肺组织学正常,内毒素组肺间质明显增宽,大量炎性细胞浸润,肺泡腔内可见红细胞及炎性细胞,而乌司他丁治疗组上述病理表现明显减轻。三组大鼠制模后即刻、1h、3h、6h,血清hs-CRP和PCT水平增高,内毒素组分别为(35.2±12.4)mg/L和(5.75±1.31)μmol/L,高于对照组的(12.6±4.5)mg/L和(0.48±0.24)μmol/L,治疗组为(26.9±11.2)mg/L和(3.08±1.02)μmol/L,低于内毒素组。结论 hs-CRP和PCT可提示病情严重程度。乌司他丁明显降低肺组织的炎症反应,减轻肺组织的损害,对内毒素...     

内毒素型肺损伤与一氧化氮的关系及地塞米松对其影响

目的 :探讨内毒素型肺损伤与一氧化氮的关系及地塞米松对其影响。方法 :30只SD大鼠随机分成对照组、ET组、ET 地塞米松组 ,静脉注射内毒素 (2 0 0 μg/kg)造成急性肺损伤。结果 :4h后血浆和肺组织匀浆中NO2 -/NO3 -含量和丙二醛 (MDA)含量、肺系数、肺含水量、肺干湿相对密度均显著升高 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1) 。注射内毒素前 1h静脉注射地塞米松 (70mg/kg)可明显减轻内毒素引起的肺损伤 ,抑制内毒素引起的NO-2 /NO-3 含量和MDA含量及肺系数、肺含水量、肺干湿相对密度的升高 ,血浆、肺组织中NO-2 /NO-3 含量与MDA含量呈正相关。结论 :NO介导了内毒素型肺损伤 ,大量释放的NO参与肺损伤的脂质过氧化反应 ,地塞米松保护肺损伤作用可能与降低NO释放、抗脂质过氧化有关。     

诱导型一氧化氮合成酶在股骨头骺关节软骨缺血-再灌注后的表达

目的:对发育期髋关节股骨头骺关节软骨中诱导型一氧化氮合成酶在缺血-再灌注后的表达进行检测,了解其在缺血-再灌注后关节软骨损害中的作用。方法:实验于2005-11/2006-05在温州医学院完成。取4周龄雄性SD大鼠80只,体质量(75±10)g,将大鼠随机抽签法分为缺血-再灌注组和假手术组,每组40只。缺血-再灌注组以无损伤血管夹夹闭分叉处或稍上方夹闭腹主动脉3h,以50g/L水合氯醛6mL/kg腹腔内注射麻醉,腹腔内注入生理盐水1～2mL。假手术组开腹暴露腹主动脉5min常规关腹。两组分别于术后3,6,12,24,48h,5d,2,4周不同时间点对股骨头骺关节软骨诱导型一氧化氮合成酶表达进行免疫组织化学检测。切片观察股骨头骺关节软骨各层的着色情况,肉眼判断强弱情况及对着色强度进行灰度分析。结果:纳入大鼠80只均进入结果分析。①在假手术组未见明显的诱导型一氧化氮合成酶着色信号。在缺血-再灌注后3h也未见明显的诱导型一氧化氮合成酶表达,6h有诱导型一氧化氮合成酶的表达,24,48h,5d,2周的诱导型一氧化氮合成酶表达着色增强。②在股骨头骺关节软骨浅、中、深各层6,12,24,48h,5d均有着色,着色分布不尽一致。③在缺血-再灌注组的24,48h,5d浅层及中层的表达灰度增强,经比较,在上述时间点缺血-再灌注组有诱导型一氧化氮合成酶的增强表达(P<0.05)。结论:发育期髋关节缺血再灌注损害后关节软骨因素中有诱导型一氧化氮合成酶表达机制参与,抑制诱导型一氧化氮合成酶的表达可能有助于抗发育期关节软骨的损害。     

急性缺氧大鼠肺组织病理改变和诱导型一氧化氮合酶的表达

目的:观察急性缺氧时大鼠肺组织损伤和诱导型一氧化氮合酶的分布和活性变化。方法:实验于2004-01/2005-12在齐齐哈尔医学院微形态实验室完成。取Wistar雌性大鼠40只,随机分为正常对照组,缺氧1,3,5,7d组5组,每组8只。缺氧1,3,5,7d组大鼠分别吸入氮气与大气的混合气体(氮气的体积分数为0.95、氧气为0.05)1,3,5,7d建立急性缺氧模型,缺氧每天持续2h,其余时间同正常对照组一样置于常氧下。各组在缺氧完成后进行肺组织取材,进行常规苏木精-伊红染色观察肺组织的形态变化,免疫组织化学染色观察诱导型一氧化氮合酶的染色强度分析。结果:40只大鼠进入结果分析。①苏木精-伊红染色可见缺氧5,7d组肺气肿明显,平均肺泡面积大于正常对照组[(3543.15±150.64),(3724.32±324.67),(2789.12±110.45)μm2,t=9.8913,6.6797,P<0.01]。②随着缺氧时间的延长,诱导型一氧化氮合酶的表达范围逐渐扩大,且其表达的强度也逐渐增强,缺氧5,7d组所有肺组织和肺动脉均为强阳性表达。结论:①急性缺氧可导致大鼠肺组织发生病理改变。②急性缺氧时诱导型一氧化氮合酶在肺组织的表达增多,表达的范围和强度与缺氧时间正相关,与肺组织损伤程度正相关。③诱导型一氧化氮合酶可以作为缺氧程度和肺组织损伤程度的标志之一。     

重组人骨形态发生蛋白2在下颌骨牵引成骨过程中的作用

背景:重组人骨形态发生蛋白2能诱导未分化的间充质细胞不可逆地分化形成软骨和骨,从而导致新骨的形成.目的:观察在下颌骨牵引成骨过程中应用基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)对成骨的影响.方法:选用日本成年大耳白兔45只,随机分为3组,建立下颌骨牵引模型,分别将空白胶原、1.5mg和3.0mg重组人骨形态发生蛋白2胶原复合物植入下颌骨切开处,固定、牵引0.4 mm/次,2次/d,共计5d,总延长下颌骨4mm.在稳定期第1,3,7,14,28天分别处死各组动物,取牵引区新生骨痂行放射学及组织学检测.结果与结论:重组人骨形态发生蛋白2组中的新生骨组织较空白胶原对照组中多且成熟,3.0mg重组人骨形态发生蛋白2组较1.5 mg重组人骨形态发生蛋白2组新骨形成多且成熟.结果表明,重组人骨形态发生蛋白2能促进兔下颌骨牵引成骨,并且具有浓度依赖性.