人羊水间充质干细胞分离培养方法的优化

背景：目前关于人羊水间充质干细胞的体外分离培养方法不一,获得较多数量的间充质干细胞仍有困难。 目的：分离80份羊水标本,比较不同的体外培养方法,优化筛选到一种合适的培养纯化条件,为人羊水间充质干细胞的基础研究和临床广泛应用奠定基础。 方法：无菌条件下采集足月分娩和终止妊娠引产的羊水,分离羊水细胞,比较孕期、不同培养基、接种密度、首次换液时间对人羊水间充质干细胞原代培养过程的影响,通过细胞化学染色方法检测细胞代谢情况,观察人羊水间充质干细胞的生物学特性。 结果与结论：相同培养条件下,采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基,以5×10⁴/cm² 的密度接种,首次换液时间为6 d时,人羊水间充质干细胞原代培养成功率较高。孕期为14~20周的人羊水间充质干细胞培养成功率高于晚期妊娠(21~36周)及足月分娩(37~42周)的羊水。人羊水间充质干细胞强表达过碘酸-雪夫、酸性磷酸酶、酸性α-醋酸萘酚酯酶染色,弱表达中性粒细胞碱性磷酸酶,不表达过氧化酶、苏丹黑染色。提示,优化筛选到一种合适的人羊水间充质干细胞培养纯化条件。     

羊水间充质干细胞体外培养方案的优化及生物学特性***

背景：目前干细胞工程种子来源多样化,羊水中存在胎儿脱落细胞,可分离培养出间充质来源干细胞。 目的：探索不同成分培养基对人羊水间充质干细胞(human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells,h-AFMSCs)体外培养的影响,并分析最适培养基体外培养的 h-AFMSCs 的生物学特性,建立优化的h-AFMSCs培养方案。 方法：孕16~24周的孕妇产前检查中获得羊水进行原代及传代培养并采用6种不同的培养基成分对h-AFMSC进行培养。 结果与结论：从孕中期羊水中可分离出h-AFMSCs,体外使用低糖DMEM培养基(L-DMEM)+体积分数10%胎牛血清与合成培养基MESEN PRO体积比1∶1配制的培养基对其扩增促进作用最强。h-AFMSCs高表达CD29、CD73、CD90、CD105、CD166,低表达CD14、CD34、CD45及HLA-DR;分离培养的h-AFMSCs高表达的干细胞基因为OCT-4和Nanog;h-AFMSCs体外具有向成骨、成脂细胞分化的潜能且具有抑制淋巴细胞增殖的作用。提示孕中期羊水是低免疫原性的h-AFMSCs的良好细胞来源。 关键词：羊水;间充质干细胞;优化培养;生物学特性;培养基 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.016     

不同体积分数脐血血清与骨髓间充质干细胞的增殖

背景：制备脐血血清体外扩增、培养间充质干细胞成为目前的研究热点,但尚无不同体积分数脐血血清对骨髓间充质干细胞的增殖能力的影响的报道。 目的：观察比较不同体积分数的脐血血清对骨髓间充质干细胞的增殖能力的影响。 方法：无菌条件下取20例人骨髓标本,采用密度梯度离心法提取单个核细胞,分别用体积分数为5%,7.5%,10%,15%,20%的脐血血清+DMEM/F12培养基,行骨髓间充质细胞培养,取第3代细胞,用MTT法观察不同体积分数的脐血血清对间充质干细胞的增殖能力的影响。 结果与结论：在体积分数5%,7.5%,10%的脐血血清+DMEM/F12培养基组,细胞增殖能力较佳,明显优于体积分数15%,20%的脐血血清+DMEM/F12培养基组,差异有显著性意义(P < 0.05)。说明在较低体积分数脐血血清培养体系中,骨髓间充质干细胞增殖状态活跃。     

脐血间充质干细胞的适宜培养条件☆

背景：目前有关脐血间充质干细胞培养的实验较多,主要从改善培养基成分、脐血细胞的分离方法以及首次换液时间等方面进行调整,目前尚未建立一个安全、高效的培养体系。 目的：探讨脐血间充质干细胞的适宜培养条件。 方法：于新疆医科大学第一附属医院产科取健康产妇的脐血,比较不同换液时间、不同培养基、不同体积分数的胎牛血清对脐血间充质干细胞原代培养效果的影响。 结果与结论：首次第5~7天换液、低糖DMEM、IMDM培养基有利于脐血间充质干细胞的生长。但还不能认为含体积分数为30%胎牛血清与含体积分数为20%胎牛血清的培养基在培养脐血间充质干细胞方面有差别。关键词：脐血/胎血;间充质干细胞;培养;培养基;换液时间;胎牛血清 缩略语注释：MSCs：mesenchymal stem cells,间充质干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.14.017     

影响脐血间充质干细胞分离培养的关键环节

背景：脐血中存在间充质干细胞,目前国内外尚未见到对脐血间充质干细胞体外分离、培养及扩增较统一且有效的方法。 目的：探讨影响人脐血间充质干细胞成功分离培养的相关因素。 方法：分别从不同胎龄(≥40周,37周和≤32周),脐血中单个核细胞数量(≥2.5× 10⁹ L^-1,< 2.5×10⁹ L^-1), 不同细胞接种浓度(1×10⁷,1×10⁹,1×10¹¹ L^-1),不同体积分数胎牛血清(5%,10%,15%,20%)以及培养瓶是否被胎牛血清包被等方面对人脐血间充质干细胞分离培养成功率进行比较。 结果与结论：脐血间充质干细胞的分离培养成功率为58.3%,且随胎龄的增高而培养成功率降低(P < 0.01);脐血中单个核细胞浓度≥2.5×10⁹ L^-1组培养成功率高于< 2.5×10⁹ L^-1组(P < 0.01);相同容量脐血中单个核细胞数量与胎龄呈负相关(r = -0.95,P < 0.01);1×10¹¹ L^-1组原代及传代培养的间充质干细胞生长及扩增情况高于1×10⁷,1×10⁹ L^-1;体积分数5%FBS组间充质干细胞贴壁速度较其他3组略慢,但细胞纯度较高,且细胞传代速度与其他3组无明显差别;胎牛血清包被组脐血间充质干细胞原代和传代后的纯度及扩增能力均高于未包被组。提示脐血间充质干细胞分离培养成功率受多种因素的影响：通过选择较低胎龄的胎儿,采集足够量的脐血,以较高的细胞密度接种,培养基中添加较低浓度的胎牛血清,并将培养瓶预先用胎牛血清进行包被,能在体外建立稳定的脐血间充质干细胞培养体系。     

肝纤维化大鼠血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

背景：近年来临床运用骨髓间充质干细胞移植治疗晚期肝纤维化取得了较好疗效,但由于肝源稀少,骨髓干细胞体外分化为成熟肝细胞的技术仍然不成熟。 目的：探讨骨髓间充质干细胞体外诱导其分化为肝细胞的可行性。 方法：构建大鼠肝纤维化模型,分离、纯化并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,制备正常及肝纤维化大鼠血清,取第3代骨髓间充质干细胞分组培养,分别加入以下培养基：DMEM+体积分数10%胎牛血清;肝细胞生长培养基(HGM)+体积分数5%胎牛血清;HGM+5%正常大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清+25 μg肝细胞生长因子。观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,采用Realtime-PCR检测甲胎蛋白和细胞角蛋白18的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白水平,ELISA法检测培养上清液中转化生长因子β1表达。 结果与结论：正常大鼠血清能促进骨髓间充质干细胞的增殖;肝纤维化大鼠血清对骨髓间充质干细胞促增殖作用最好,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用肝细胞生长培养基能提高分化率。     

脐带间充质干细胞在不同培养体系条件下的生物学特性

背景：体外培养的脐带间充质干细胞在不同培养体系下生长状态差异显著,因此选取一种更适合的培养基相当必要。 目的：对比观察人脐带间充质干细胞在3种培养基中的生长增殖情况,并检测细胞免疫表型以及间充质干细胞的诱导分化能力。 方法：在无菌条件下用贴块法收获人脐带间充质干细胞,用T75培养瓶培养传代后,取第3代脐带间充质干细胞分别种入到含体积分数为5%胎牛血清的DMEM/F12培养基、含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和Mesen PRO RSTM培养基中,培养第1,3,5,7天进行细胞计数,绘制细胞生长曲线。采用流式细胞仪分析第3代脐带间充质干细胞免疫表型,并检测其成骨及成脂肪诱导分化能力。 结果与结论：培养出的第3代人脐带间充质干细胞高表达CD44、CD73、CD90、CD105,不表达CD29、CD31、CD34、HLA-DR。经成脂诱导后,油红O染色可见胞浆中有大量红色小脂滴;成骨诱导后,茜素红染色后镜下可见成骨样细胞团,说明脐带间充质干细胞在体外具有多向分化的潜能。在倒置显微镜下观察可见含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中的细胞集落密集,形态均匀,而其他2种培养基中的细胞集落密集程度和形态都不如前者好。在培养传代细胞时,可优先选择含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

大规模间充质干细胞培养技术评估

目的通过对间充质干细胞体外培养技术的系统评价,为制定间充质干细胞临床研究的管理规定提供相关信息。方法采用文献调研和专家讨论的方式对间充质干细胞的细胞来源、分离方法、培养技术、保存、安全性、质量监控等方面进行评估。结果①来源：间充质干细胞可以来源于骨髓、脂肪、脐带、脐带血、胎盘等众多组织。②分离方法：常用密度梯度分离法、流式分选法和直接培养法,通过其贴壁生长的特性进一步纯化。③培养方式：原始间充质干细胞数量很少,但经过2~3周的体外扩增培养,可以满足临床使用的数量级,间充质干细胞培养体系有开放式平面培养和全封闭式生物反应器培养方式,要求在 GMP 条件下的洁净实验室内进行。④培养基：间充质干细胞培养基主要有含胎牛血清培养基、人 AB 血清或血小板裂解物替代胎牛血清的培养基以及成分确定的无血清培养基,临床使用应尽量避免使用异种血清。⑤细胞冻存：间充质干细胞可以深低温保存而不改变生物学特性,低温保护剂有二甲基亚砜、甘油、羟乙基淀粉等。⑥安全性：体外培养的间充质干细胞在8~10代以内,基因型稳定,应用于临床是安全的。超过10代以后,风险增加。目前尚未发现培养的间充质干细胞与新生肿瘤有直接关系。⑦间充质干细胞质量监控标准包括供体筛选、细胞微生物安全检测（细菌、真菌、支原体）,细胞功能鉴定（诱导分化、流式鉴定）,基因组不稳定性或细胞衰老判定等。结论间充质干细胞来源广泛,取材方便,其分离和培养技术成熟。可以在体外实现大规模的培养,满足临床使用的数量级,并且可以实现长期保存而不改变生物学特性。间充质干细胞体外培养技术还缺乏相应的标准规范,更适用于临床的无血清培养基和冻存保护剂还有待于进一步的研究与论证。     

姜黄素调控大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景：姜黄素能明显降低破骨细胞的骨重吸收,诱导破骨细胞凋亡,抑制破骨细胞形成。 目的：观察不同浓度姜黄素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。 方法：采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代后采用成骨培养基进行成骨诱导,在诱导前3 d于诱导培养基中分别加入0(对照),10,15 μmol/L姜黄素。 结果与结论：接种培养7 d,倒置显微镜下可见分散的骨髓间充质干细胞小集落,集落细胞呈放射状生长。随培养时间延长,细胞集落增大,细胞形态为长梭形。加入成骨培养基7 d后细胞形态逐渐由长梭形变为多角形,随成骨诱导时间延长形态变化更加明显。加入不同浓度姜黄素后骨髓间充质干细胞增殖无变化。姜黄素呈剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性及Runx-2、血红素单加氧酶1的表达。提示姜黄素能有效促进大鼠骨髓间充质干细胞早期成骨分化,其机制可能与提高干细胞血红素单加氧酶1的表达有关。     

人脐带间充质干细胞对宫颈癌Hela细胞增殖特性的影响

背景：间充质干细胞具有向炎症损伤部位和肿瘤组织特异性趋化的特性,深入研究间充质干细胞对肿瘤细胞生长增殖的影响成为亟需解决的问题。 目的：探讨人脐带间充质干细胞对宫颈癌Hela细胞增殖特性的影响。 方法：将不同细胞数的人脐带间充质干细胞或不同质量浓度的人脐带间充质干细胞条件培养基与宫颈癌Hela细胞共培养3 d,CCK-8检测Hela细胞的增殖抑制情况。 结果与结论：Hela细胞与人脐带间充质干细胞比例分别为1︰3、1︰2、1︰1、2︰1、4︰1、8︰1的情况下,相对应的细胞增殖抑制率分别为67.12%、47.18%、31.15%、27.61%、15.55%、15.95%;利用5,10,20,40,60,100 mg/L人脐带间充质干细胞条件培养基对Hela细胞进行培养,相对应的细胞增殖抑制率分别为0.61%、40.1%、63.47%、80.61%、93.56%、90.65%,说明人脐带间充质干细胞和条件培养基呈一定的浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

Growth behavior of amnion cell cultures

Both amniotic fluid samples and amniotic fluid cell cultures of a total of 52 patients were evaluated. At 15 to 16 weeks' gestation there are 2.2 X 10(4) cells/ml amniotic fluid increasing significantly to 3.7 X 10(4) cells/ml at 19 to 20 weeks' gestation. The percentage of viable cells is about 18. After 10 d of culture 14.4 +/- 8.2 cell colonies/culture flask are developed consisting of 61% AF-cells, 33% E-cells and 6% F-cells. After 14 d of culture 60 +/- 32 metaphases/cell culture flask were found. At the 10th day of culture 80% of cell colonies are already present indicating that reduced duration of culture appears possible. Therefore the interval to diagnosis can be shortened and a possible interruption of pregnancy can be earlier done under reduced risks.     

Thyroid hormones and thyrotropin in amniotic fluid.

Thyroid hormone and thyrotropin concentrations in amniotic fluid were studied by radioimmunoassays during pregnancy. The mean thyroxine concentration was 398 ng per 100 ml at 15 to 19 and 440 ng per 100 ml at 36 to 42 weeks. Although 3,3',5-tri-iodothyronine was undetectable (less than 25 ng per 100 ml), 3,3',5'-tri-iodothyronine levels were very high (range, 132 to 605 ng per 100 ml) at 15 to 30 weeks, but decreased substantially (range, 54 to 130 ng per 100 ml) thereafter. Thyrotropin was undetectable. The mean thyroxine and 3,3',5-tri-iodothyronine levels in amniotic fluid were much lower and the mean 3,3'5'-tri-iodothyronine much higher than the corresponding values in maternal serum at both 15 to 19 and 36 to 42 weeks of pregnancy. Measuring thyroid hormones in amniotic fluid, especially 3,3',5'-tri-iodothyronine, may aid in the diagnosis of fetal thyroid dysfunction and in identification of pregnancies of less than 30 weeks' gestation.     

Human amniotic fluid lacks interleukin-2 and interleukin-15 but can interact with the beta-chain of the interleukin-2 receptor

The present study investigated whether an explanation for the conflicting reports on the interleukin-2 (IL-2) status of amniotic fluid is due to the presence of IL-15 which shares biological activities with IL-2 and utilizes the IL-2 receptor beta-chain. Amniotic fluids from 45 normally progressing pregnancies between 14 and 16 weeks after the last menstrual period were assayed for IL-2 and IL-15 by bioassay and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The ability of amniotic fluids to induce cytotoxic T lymphoblastoid line-2 (CTLL-2) cell proliferation was demonstrated to be dependent upon bioassay culture conditions. In serum-free medium each amniotic fluid stimulated CTLL-2 proliferation with a mean level of IL-2-like bioactivity of 14.7 +/- 2.3 ng/ml but amniotic fluids failed to induce CTLL-2 proliferation in serum-supplemented medium. Treatment with neutralizing anti-IL-2 or anti-IL-15 antibodies failed to inhibit amniotic fluid-induced CTLL cell proliferation in serum-free medium, indicating a lack of IL-2 and IL-15 bioactivity. In contrast, treatment with anti-IL-2 receptor beta-chain antibody significantly reduced amniotic fluid-induced proliferation. The lack of IL-2 and IL-15 activity in amniotic fluids was confirmed using ELISA. Although high levels of IL-15 immunoactivity were detected in all samples, specificity controls showed a lack of specific IL-15 immunoactivity in amniotic fluid. Pretreatment of amniotic fluids with 100-500 ng/ml mouse immunoglobulin G abrogated IL-15 immunoactivity, indicating that amniotic fluid contains molecules binding to Fc regions of immunoglobulins and responsible for false ELISA positivity. These studies unequivocally show that amniotic fluid lacks IL-2 and IL-15 but can stimulate CTLL-2 cell proliferation via the IL-2 receptor beta-chain. The absence of IL-2 and IL-15 in normal mid-trimester amniotic fluid suggests that the cytokine profile of human pregnancy appears to be associated with a bias against type 1 cytokines within the feto-placental unit.     

荧光原位杂交技术在未培养羊水快速产前诊断中的应用

目的建立运用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测未培养羊水细胞染色体数目的产前诊断方法。方法对100例妊娠15—26周抽取的羊水未经培养进行FISH检测,均采用13、21、18、X、Y号染色体荧光探针检测,同时行羊水培养染色体核型分析,比较两种检测方法结果的一致性。结果100例产前诊断者中未培养羊水细胞FISH检测均于48h内完成,发现6例21-三体和1例18-三体,与羊水培养染色体核型分析结果一致,后者显示6例21-三体中4例为完全型、2例为易位型21-三体。结论FISH技术与传统的羊水培养染色体核型分析相比较,具有方法快速、简便、准确可靠的特点,但无法完全取代传统的染色体核型分析,应两者结合应用于临床。     

羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立

文题释义： 羊水干细胞：羊水是由多种细胞组成的异质细胞群,其中包括胎儿脱落的表皮细胞、呼吸道上皮细胞、消化道和泌尿道等体腔管道的脱落细胞、羊膜脱落细胞等。羊水中包含有向内、中、外3个胚层分化潜能的干细胞,约占1%,近年来研究发现羊水干细胞在体外通过特殊的诱导微环境能够分化成多种不同类型的细胞,使羊水来源干细胞成为干细胞研究的一个新热点。 悬滴培养：与传统的二维培养模式不同,悬滴培养提供的三维环境有利于促进各种干细胞的增殖与分化,可以使细胞聚集,相互紧密接触,从而促进细胞之间的相互作用,进而提高或增强干细胞的生物学功能。羊水干细胞悬滴培养可形成拟胚体结构,具有较强的分化潜能,有助于提高定向诱导分化效率。 背景：利用干细胞分化代替受损神经元的设想,已经逐渐受到科研工作者的关注。胚胎干细胞和诱导性多能干细胞虽然具有良好的神经元分化潜能,但由于接种活体动物具有致瘤性,限制了其进一步的深入研究。 目的：建立稳定的羊水干细胞分选、培养、成神经诱导分化体系,探讨其作为神经元再生种子细胞的可行性。 方法：经B超引导下,穿刺获取孕19-22周期间的羊水样本10 mL,磁珠分选其中c-Kit阳性的羊水干细胞。免疫荧光染色鉴定羊水干细胞标记物Oct-4、Sox2;RT-PCR检测羊水干细胞多次传代后干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达;羊水干细胞悬滴培养4 d观察拟胚体的形成情况;采用“两阶段”分步诱导羊水干细胞向神经元方向分化,免疫荧光染色观察Neuro D、Tuj1的表达。 结果与结论：①羊水中可分选出大约1%的c-Kit阳性羊水干细胞;②(75.0±4.6)%的羊水干细胞表达Oct-4,(86.0±2.8)%的羊水干细胞表达Sox2;③RT-PCR方法检测干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达量并不随细胞传代数的增加而改变;④经悬滴培养可形成拟胚体并表达Oct-4;⑤免疫荧光证实未经诱导的羊水干细胞表达神经元标记物Tuj1,但缺乏典型的神经元形态特征;RT-PCR证实不同羊水干细胞标本都能检测到Tuj1的表达,同一样本多次传代也能稳定检测到Tuj1的表达;⑥羊水干细胞经碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子3的两阶段分步诱导后表达神经干细胞标记物Neuro D和神经元标记物Tuj1,具有神经元样细胞的形态特征。 ORCID: 0000-0001-6488-2055(宗凌) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

Culture method for amniotic fluid cells

The effect of the period of pregnancy and the concentration of the cell suspension to be cultured on success in the culture of amniotic fluid cells was studied on 29 samples. The optimal time for taking amniotic fluid for quick and successful culture was found to be the 17th week of pregnancy. The need to allow for the concentration of the cell suspension before addition of the cells to the culture medium, depending on the period of pregnancy, was demonstrated.Laboratory of General Cytogenetics, Institute of Medical Genetics, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR N. A. Fedorov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 87, No. 6, pp. 625–627, June, 1979.     

重组人促红细胞生成素干预人源羊水干细胞向心肌前体细胞的分化*

背景：研究发现人源羊水干细胞可向心肌前体细胞分化。 目的：观察不同浓度重组人促红细胞生成素对人源羊水干细胞向心肌前体细胞分化的影响。 方法：用含0,1.0,5.0,10.0,20.0 U/mL重组人促红细胞生成素的诱导培养基诱导鉴定后的人源羊水干细胞向心肌前体细胞分化,诱导24 h后换为完全培养基继续培养。 结果与结论：诱导分化14 d,倒置显微镜下可见细胞由长梭形逐渐变短增宽,相邻的细胞间有融合现象,似类肌管样结构,以5.0 U/mL重组人促红细胞生成素的诱导分化率最高;RT-PCR检测显示重组人促红细胞生成素可促进细胞Nkx-2.5和GATA-4 mRNA的表达,以5.0 U/mL重组人促红细胞生成素的作用最强。说明外源性重组人促红细胞生成素能剂量依赖性促进人源羊水干细胞向心肌前体细胞分化。     

Vascular endothelial growth factor is bound in amniotic fluid and maternal serum.

To study vascular endothelial growth factor (VEGF) and placenta growth factor (PlGF) concentrations and their possible binders, serum from 22 non-pregnant and 55 pregnant women (15 at weeks 10-13; 40 at term), umbilical vein (n = 24) and artery (n = 13) and amniotic fluid (a pool of 50 at weeks 15-17; 11 at term) were assessed for VEGF and PlGF by an enzyme-linked immunosorbent assay. In amniotic fluid and maternal serum VEGF concentrations were <16 ng/ml and added VEGF was not recovered. VEGF was detected in serum from mothers post-partum (137 +/- 142 ng/l, mean +/- SD), umbilical artery (421 +/- 288 ng/l) and vein (502 +/- 339 ng/l) and non-pregnant controls (182 +/- 147 ng/l), and added VEGF was fully recovered. PlGF was detected in pregnancy serum (52 +/- 23 ng/l early pregnancy; 439 +/- 217 ng/l term pregnancy) and in amniotic fluid (early pregnancy 56 ng/l; term pregnancy 30 +/- 18 ng/l). PlGF was fully recovered in all samples. Gel filtration and isoelectric focusing revealed that in maternal serum and amniotic fluid [125I]VEGF was bound to a protein with an Mr of 400-700 kDa and an isoelectric point of approximately 8. This protein was not identical with alpha-2-macroglobulin (by an immunofluorometric assay), pregnancy zone protein or pregnancy associated plasma protein-A (by immunodiffusion). In conclusion, VEGF-binding activity is present in amniotic fluid and maternal blood. It disappears after delivery and is not detectable in fetal or non-pregnant serum.