Ⅰ型胶原蛋白生物膜在损伤肌腱内源性愈合过程中的作用

目的探讨Ⅰ型胶原蛋白生物膜材料在损伤肌腱内源性愈合过程中的作用。方法选取16只健康SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组8只。通过手术切割缝合方法建立大鼠损伤肌腱模型,采用改良Kessler法修复损伤的肌腱。实验组在损伤肌腱修复后使用Ⅰ型胶原蛋白生物膜包裹处理后关闭伤口,对照组在损伤肌腱修复后直接关闭伤口,分别于治疗后第1、2、3、4周取材,HE染色观察肌腱愈合情况,免疫荧光(IF法)检测肌腱愈合过程中Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果随着治疗时间推移,肉眼观察到实验组肌腱光滑,与周围组织极少有粘连;对照组肌腱损伤处与周围组织粘连明显。HE染色发现,实验组肌腱细胞及胶原纤维沉积呈线性排列,较为整齐;对照组肌腱组织周围可见大量成纤维细胞及毛细血管向肌腱细胞浸润,与肌腱细胞融合,胶原排列紊乱,实验组肌腱愈合质量明显优于对照组。免疫荧光检测发现,2组成熟新生肌腱细胞多表达Ⅰ型胶原,核被染成蓝色荧光,显微镜下观察可见荧光足够亮,并能稳定较长时间;通过染色细胞计数,治疗后1~4周实验组Ⅰ型胶原蛋白表达高于对照组(P<0.05),胶原纤维排列更加有序(P<0.05)。2组表达Ⅰ型胶原蛋白特性的细胞比例比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ⅰ型胶原蛋白生物膜材料在损伤肌腱内源性愈合过程中有促进作用。     

磷酸果糖抑制肌腱胶原产生和趾屈指肌腱吻合后的粘连

背景：有实验证实外源性6-磷酸果糖能降低肌腱细胞Ⅰ型胶原的产生量,减轻肌腱术后粘连的形成。 目的：观察6-磷酸果糖对肌腱术后粘连形成的影响。 方法：取72只兔行中趾屈指肌腱切断吻合,随机分成实验组与对照组(n=36),分别于腱鞘内注入6-磷酸果糖与生理盐水,术后4,8周后行肌腱粘连检测、生物力学测定、组织学观察和扫描电镜观察;术后1,2,4,8周采用原位杂交方法测定肌腱转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达。 结果与结论：术后4,8周,与对照组比较,实验组肌腱缝合处光滑,屈趾肌腱滑动距离较长,肌腱滑动受限较轻(P < 0.05),但两组最大抗断裂载荷差异无显著性意义(P > 0.05);扫描电镜和组织学观察结果显示,对照组胶原纤维排列紊乱,实验组胶原纤维排列整齐。实验组转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平均低于对照组(P < 0.05)。证实6-磷酸果糖能有效抑制转化生长因子β1在肌腱损伤修复中的作用,减轻粘连形成。     

链霉素缓释复合降解膜植入损伤肌腱局部腱周结缔组织的变化

背景：国内外学者曾用生物、非生物及药物等方法,诸如生物膜、透明质酸钠、纤维素密封胶等材料进行大量肌腱修复防粘连研究,但到目前为止尚未取得突破性进展。 目的：观察肌腱损伤局部植入链霉素复合降解膜后腱周结缔组织的增生。 方法：切断SD大鼠跟腱后,随机数字表法分为3组,分别在肌腱断端缝合处植入链霉素复合缓释降解膜、维生素C复合缓释降解膜、空白缓释降解膜。术后90 d行肌腱损伤局部组织学观察、羟脯氨酸含量和生物力学指标检测。 结果与结论：链霉素复合缓释降解膜组肌腱缝合处内部的成纤维细胞、胶原纤维均较其腱周围、维生素C复合缓释降解膜组、空白缓释降解膜组多;腱缝合处肌腱周围多为正常结构的疏松结缔组织,很少有增生的结缔组织长入肌腱内部;肌腱与周围组织分界清晰,最大抗拉强度、羟脯氨酸含量明显优于其他两组。表明链霉素复合缓释降解膜通过抑制腱周结缔组织增生,防止腱周结缔组织增生长入腱内,从而减轻或防止粘连形成。     

促进肌腱愈合:细胞治疗和基因治疗的前景如何?

背景:近年来关于防治肌腱粘连的各种观点与方法层出不穷,目前尚没有一种方法能完全有效的防治肌腱粘连。目的:通过广泛查阅近年来肌腱粘连的相关文献,总结阐述肌腱粘连的原因、机制,并介绍几种较为热门的预防方法。方法:检索1992年1月至2014年1月PubMed数据库及维普中文科技数据库文献。英文检索词为"Tendon Injuries;tendon adhesion;Healing;mechanisms;prevention",中文检索词为"腱损伤;肌腱粘连;肌腱愈合;机制;预防"。纳入与肌腱粘连的原因愈合方式及预防肌腱粘连的相关文献。纳入41篇文献进行分析探讨。结果与结论:研究认为肌腱粘连与肌腱愈合机制之间有密切关联。肌腱的愈合过程中包括肌腱的内源性愈合和外源性愈合,内源性愈合肌腱表面的纤维细胞经过自身增殖促进肌腱的愈合;外源性愈合是由肌腱周围组织通过生成肉芽形成瘢痕愈合。不同的肌腱缝合方法同样会造成肌腱修复过程的迥异,抗张力大,且表面平滑的缝合方法被认为是减轻肌腱粘连的有效手段。通过增加或减少相应大分子物质可以抑制外源性愈合。高分子化合物不仅具有屏障作用同时具有促进内源性愈合的作用。将基因和间充质干细胞导入肌腱,有利于肌腱的愈合,标志着细胞治疗和基因转移已开始成为目前促进肌腱的愈合的新途径。     

修复运动性肌腱断裂防粘连材料的应用

背景：随着肌腱外源性愈合学说和内源性愈合学说的建立,如何抑制外源性愈合,促进内源性愈合成为解决肌腱粘连的关键。而腱周局部防粘连屏障物的运用是近年来研究的热点。 目的：综述防粘连材料在修复运动性肌腱断裂过程中的应用进展。 方法：应用计算机检索1990-01/2010-12 PubMed数据库及维普数据库有关生物材料防治肌腱粘连的研究进展、防粘连材料的临床应用及效果方面的相关文献,英文检索词“tendon adhesion,absorbability antiseize continually membrane,Anti-adhesion membrane”,中文检索词“肌腱断裂,肌腱粘连,防粘连膜,生物材料,运动损伤”。检索文献量总计127篇。最终纳入符合标准的文献25篇。 结果与结论：目前肌腱防粘连材料的研究已经取得显著成果,但所研究的材料利弊各异。诸如生物膜替代腱鞘,虽有效地阻止了外源性愈合,但因阻隔了营养物质的渗透,不利于肌腱愈合;药物薄膜具有屏障隔离的作用,减轻外源性愈合从而达到防止或减轻粘连的目的,局部组织对药物薄膜排斥性小,临床应用前景较好;可吸收材料可以在体内降解、吸收,不需二次手术取出,生物相容性良好,但其组织黏附性、机械强度和存留时间有待进一步研究;不可吸收材料因通透性能相对较差常需二次手术取出,使其临床应用受限;有些材料具有毒副作用和严重的炎性反应,临床上已经基本不再使用。在防粘连材料真正成为一种治疗肌腱无粘连愈合和功能重建之前,以上问题都是亟待研究和解决的。     

手指屈肌腱粘连的研究进展

目的 探讨手指屈肌腱粘连的原因、治疗及预防的研究进展。方法 以指屈肌腱、肌腱粘连、肌腱愈合为关键词,在PubMed、CNKI、万方数据等数据库中使用计算机检索2016年6月之前的有关手指屈肌腱粘连的原因、治疗及预防的相关文献,进行分析总结。结果 手指屈肌腱粘连原因是因为屈肌腱损伤和腱周环境的破坏,导致外源性愈合参与过多形成肌腱粘连。通过手术锐性分离肌腱粘连组织,修复或重建腱周组织,可治疗屈肌腱粘连;而通过应用生物屏障、采用防粘连药物和改良的缝合方法等能有效预防屈肌腱粘连。结论 根据手指屈肌腱粘连原因,屈肌腱粘连应以预防为主。在损伤修复过程中,行多种方法综合干预,可有效减少手指屈肌腱粘连的发生。     

几丁糖防治运动损伤后的肌腱粘连

背景：肌腱损伤是运动训练中的常见损伤,在肌腱损伤修复过程中易形成粘连,从而使肌腱原有的功能下降或丧失。目前受到国内外学者瞩目的防治肌腱粘连的方法是防粘连材料的应用,在众多材料中,几丁糖备受关注。 目的：综述了几丁糖防治运动损伤后的肌腱粘连。 方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1990-01/2010-12关于几丁糖防治运动损伤后肌腱粘连的文章,在标题和摘要中以“几丁糖,肌腱,粘连,运动损伤”或“chitosan,tendon,adhesion,sports injury”为检索词进行检索。选择文章内容与几丁糖防治运动损伤肌腱粘连相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。根据纳入标准选择29篇文章进行综述。 结果与结论：肌腱主要由胶原纤维组成,其生物力学特性与胶原纤维密切相关。肌腱损伤后的愈合过程通过外源性愈合和内源性愈合两条途径完成,外源性愈合是产生粘连的主要原因。动物实验及临床实验均表明几丁糖具有良好的预防肌腱粘连的效果,其作用机制主要有降低胶原纤维的产生、屏障隔离、加速止血、抗菌消炎等。因此几丁糖是一种较为理想的预防肌腱粘连的物质,但应用中仍发现一些问题有待解决。     

骨形态发生蛋白12诱导骨髓间充质干细胞构建组织工程肌腱

背景：以往肌腱损伤的修复方法有端端吻合、自体肌腱移植、同种异体肌腱或人工肌腱移植等,但均有其各自缺点。 目的：探讨以家兔骨髓间充质干细胞为种子细胞,骨形态发生蛋白12诱导,聚羟基乙酸复合材料作为支架材料,预构组织工程化肌腱重建家兔跟腱缺损的可能性。 方法：家兔抽取股骨近端骨髓,分离所得细胞传代至第2代,加入10 μg/L骨形态发生蛋白12诱导分化,并与Ⅰ型胶原溶液按一定比例移植于预张的聚羟基乙酸缝线上预制组织工程化肌腱备用。将家兔制备成跟腱缺损模型,分别采用不同方法修复跟腱缺损：组织工程化肌腱修复,Ⅰ型胶原-聚羟基乙酸缝线修复,丝线行端端修复。修复12周对各组肌腱行形态学、力学及组织病理学观察。 结果与结论：修复12周家兔肌腱组织病理切片：组织工程化肌腱组可见大量梭形纤维母细胞顺应力学方向排列均匀分布于胶原中,纤维细胞明显增多,胶原致密;Ⅰ型胶原-聚羟基乙酸缝线组可见部分纤维组织增生伴少许肉芽组织形成,胶原纤维呈松散网丝状,细胞排列紊乱分布不均;丝线组可见纤维组织旁见大量肉芽组织形成。修复12周家兔肌腱生物力学强度：骨形态发生蛋白12+聚羟基乙酸重建肌腱的力学强度明显优于Ⅰ型胶原-聚羟基乙酸组,与丝线缝合组差异无显著性意义;但骨形态发生蛋白12+聚羟基乙酸重建肌腱的力学强度低于正常肌腱。提示以自体骨髓间充质干细胞作为种子细胞,骨形态发生蛋白12诱导,以聚羟基乙酸为支架,可望构建组织工程化肌腱。构建的组织工程肌腱具有一定的生物力学特性,能用于修复跟腱缺损。     

指屈肌腱Ⅱ区断裂缝线指外牵弓预防肌腱粘连的效果

目的：报道应用缝线指外牵引来预防指屈肌腱Ⅱ区断裂术后的粘连效果。方法：在10倍的手术显微镜进行清创，用津下缝合法行肌腱端端缝合，外加连续内翻缝合，之后分别在断腱远近端缝一线牵出伤口作为牵引线。结果：术后随访3个月～1年，术后半年TAM法作疗效评定。优：35指，良：12指，可：5指。总的优良率：93．4％。结论：本方法使肌腱的抗拉力强度大，牵引线还可使吻合口减张，有利于肌腱早期的功能锻炼，预防肌腱粘连。     

损伤肌腱再生修复过程中胶原纤维的形成与降解

在跟腱缺损的动物模型中植入人发角蛋白(human hair keratin，HHK)人工腱进行修复，观察HHK人工腱诱导自体腱形成过程中胶原纤维的形成与降解。实验发现：在HHK人工腱植入后1周，肌腱的断端有新生腱细胞(成腱细胞)；第3周，人发之间的组织中成腱细胞增多，顺着人发的方向生长，成行排列，且与损伤肌腱的长轴平行，有时可见细胞分裂相，     

烫伤创面愈合后的瘢痕形成与神经支配

背景：既往研究表明神经因素在创面愈合中具有重要调控作用,但有关神经调节与创面愈合后瘢痕形成之间的关系鲜有报道。 目的：观察烧伤创面愈合过程中神经支配与创面愈合质量之间的关系。 方法：将30只大鼠右侧T9~L1阶段脊神经根切断,制作失神经支配皮肤模型;然后在大鼠背部右侧失神经支配皮肤区域制作直径4 cm的深Ⅱ度烫伤创面,设为模型组,左侧对称正常皮肤制作同样的创面,设为对照组,伤后连续观察创面变化,于7,14,21 d采用免疫组织化学法观察Ⅰ和Ⅲ胶原分泌情况,并计算Ⅰ/Ⅲ型胶原比例的变化,探讨创面愈合速度及愈合质量。 结果与结论：模型组Ⅰ,Ⅲ型胶原分泌和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值于伤后各时间点均显著低于对照组(P < 0.05)。模型组Ⅰ型胶原分泌与伤后7,14,21 d逐渐增加(P < 0.05),Ⅲ型胶原于伤后21 d时分泌明显增高(P < 0.05),Ⅰ/Ⅲ型胶原比值与伤后21 d时明显降低(P < 0.05)。结果证实,创面早期神经支配可以促进创面愈合,创面重塑期减轻神经支配可能会改善创面重塑质量。     

应力刺激下兔冈上肌腱急性断裂术后腱-骨修复Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化

目的　研究应力刺激对其腱-骨修复Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达影响,探讨应力刺激在肩袖损伤术后腱-骨修复中的作用。 方法　选取18只成年雄性新西兰白兔,术前随机选取两只白兔处死,以熟悉解剖结构及对照用。余16只白兔随机分为2组: A组（应力刺激组）与B组（非应力刺激组）。A组术后第2周开始训练;B组正常笼养。分别于术后2、4、6、8周训练结束后处死,取材,每次每组各处死两只,行Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达检测。 结果　⑴术后2周,两组胶原染色阳性,但无明显差别;⑵术后4周,两组胶原染色阳性,A组Ⅰ、Ⅲ型胶原染色颜色均较B组深,且稍显均匀,犹以Ⅲ型胶原为明显;⑶术后6周,Ⅰ、Ⅲ型胶原染色阳性分布均较前广泛, A组较B组明显,且胶原纤维排列相对有序;⑷术后8周,A组胶原排列相对更为有序,Ⅰ型胶原染色较Ⅲ型更为均匀分布,Ⅲ型胶原明显减少。 结论　应力刺激能够促进兔冈上肌腱急性断裂术后腱-骨界面胶原合成,从而促进肩袖损伤术后腱-骨修复。     

川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞 结缔组织生长因子的表达

背景：作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。 目的：观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。 方法：体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24 h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。 结果与结论：与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调(P < 0.05)。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调(P < 0.05);培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低(P < 0.05)。结果表明,siRNA 沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。     

异种生物型防肌腱粘连膜的兔实验研究

目的研究不同异种生物型膜预防新西兰大白兔趾伸肌腱粘连的效果.方法成年新西兰大门兔54只,不分性别,随机分A、B、C组,每组18只,A组为正常对照组,B组为超薄膜组,C组为薄膜组.将新两兰大白兔左足第三趾伸肌腱切开,再缝合,B、C两组分别局部包裹超薄膜及薄膜.手术后2、4、6周取材,分别行大体观察、组织学检杳和炎性反应评估.结果组织学检查显示,两组肌腱愈合进程无明显差异.B组肌腱内未见明显炎性反应,外保护膜薄而均匀,炎性反应较轻.C组肌腱炎性反应较重,外保护膜出现水肿与纤维素样变性.结论局部应用超薄膜及薄膜均能减轻肌腱术后粘连,前者局部炎性反应较轻,而后者见明显炎性反应.超薄膜是一种较理想的预防肌腱粘连的可降解材料.     

Ⅰ/Ⅲ型胶原膜联合自体骨髓间充质干细胞修复兔膝关节软骨缺损

背景：研究表明Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原都有利于骨髓间充质干细胞的黏附、增殖和分化。 目的：观察Ⅰ/Ⅲ型胶原膜联合自体骨髓间充质干细胞修复兔膝关节软骨缺损的可行性。 方法：取24只新西兰大白兔制作双膝股骨滑车直径3.8 mm、深2 mm关节软骨缺损模型,分为2组：实验组缺损区植入Ⅰ/Ⅲ型胶原膜-自体骨髓间充质干细胞复合物,对照组缺损区植入单纯Ⅰ/Ⅲ型胶原膜。 结果与结论：膝关节股骨标本组织学染色显示,实验组植入8周时为类透明软骨修复,12周时接近于正常软骨;对照组植入8周时以纤维样组织修复为主,12周时为纤维软骨修复。实验组植入后8,12周组织学评分均明显高于对照组(P < 0.001)。表明运用Ⅰ/Ⅲ型胶原膜-自体骨髓间充质干细胞复合物可修复关节软骨缺损。     

疡愈涂剂对糖尿病大鼠创面Ⅰ、Ⅲ胶原合成及MMPs、TIMP-1表达的影响

目的：观察疡愈涂剂促进糖尿病迟缓愈合伤口的修复作用及其分子机制。 方法： 实验分为对照组、模型组、疡愈涂剂高、中、低剂量组。除对照组外，大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg，造成实验性高血糖。30 d后，各组动物复合背部全厚皮切除直径为1.6 cm的伤口。分别观察疡愈涂剂对创面愈合时间、愈合率的影响；天狼星红染色法以及免疫组化法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值，并观察金属蛋白酶-1、-13(MMP-1、-13)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平及MMP-1、-13 与TIMP-1比值。 结果： 疡愈涂剂各剂量组创面愈合时间明显短于模型组(P<0.01)，愈合率明显高于模型组(P<0.01,P<0.05)。在伤口用药的第3、7、11 d，高、中剂量组创面Ⅰ型胶原含量以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值显著高于模型组(P<0.01)。在伤口用药第3 d疡愈涂剂中剂量、第7、11 d各剂量组创面Ⅲ型胶原显著高于模型组(P<0.01)。各剂量组在第7 d创面MMP-1、-13均高于模型组(P<0.01,P<0.05)，而MMP-1 在第11 d与模型组趋于一致且MMP-13明显低于模型组(P<0.01,P<0.05)。各剂量组在3、7、11 d创面TIMP-1均明显高于模型组(P<0.01,P<0.05)，在第11 d各剂量组MMP-1、TIMP-1比值明显低于模型组(P<0.01)，在第3、7 d高、中剂量组创面MMP-13、TIMP-1比值高于模型组(P<0.01)，而到第11 d高、中、低各剂量组均明显低于模型组(P<0.01)；第11 d高、中剂量组MMP-13、TIMP-1比值低于低剂量组(P<0.05)。 结论： 疡愈涂剂可能通过调节影响胶原代谢的MMPs、TIMPs表达平衡，促进胶原的合成和沉积，从而加速创面的愈合。