原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景：体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。 目的：检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。 方法：Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。 结果与结论：纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞  (P < 0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72 h内均随时间而显著增高(P < 0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。     

重组结缔组织生长因子对大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化的影响

目的:克隆和构建带大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/CTGF,并观察其对血管外膜成纤维细胞(AF)表型的影响。 方法:以AF总RNA为模板，进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)，获得CTGF的cDNA，克隆入pcDNA3.1(+)载体，酶切和测序鉴定重组子。将构建好的pcDNA3.1(+)/CTGF用脂质体法转入AF细胞。Western blotting观察CTGF的表达。同时观察转染pcDNA3.1(+)/CTGF对细胞表型的影响。 结果:成功构建大鼠CTGF基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/CTGF．并证明其能在真核细胞内表达。转染pcDNA3.1(+)/CTGF可以诱导AF表型转化。 结论:重组结缔组织生长因子可诱导大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化。     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景：蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。 目的：体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。 方法：体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。 结果与结论：蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为(15.2±2.0) μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达(P < 0.05)。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

Ifi204基因表达对大鼠血管外膜成纤维细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨ifi204基因过表达与沉默对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡和迁移的影响。方法原代培养大鼠VAF,利用携带ifi204基因的慢病毒颗粒或空载体慢病毒颗粒感染VAF,分别作为实验组(ifi204 lv组)和阴性对照组(blank lv组)。用ifi204基因小干扰RNA瞬时干预VAF使其沉默(ifi204 siRNA组)、空白小干扰RNA作为阴性对照组(control siRNA组),未经处理的VAF作为空白对照组(negative组)。流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果与blank lv组、control siRNA组、ifi204 siRNA组和negative组相比,ifi204 lv组的P204、P53 mRNA和蛋白表达及细胞凋亡率明显上调(P0.05),细胞迁移速度降低(P0.05)。转染ifi204 siRNA可抑制P204、P53的mRNA和蛋白表达(P0.05),提高细胞活力,抑制细胞凋亡(P0.05),加快细胞迁移速度(P0.05)。结论 ifi204基因表达对大鼠VAF细胞凋亡和迁移的影响可能与激活P53表达有关。     

干扰素诱导蛋白16对人脑血管外膜成纤维细胞增殖与迁移的影响及其机制

 目的：研究干扰素诱导蛋白16(IFI16)对人脑血管外膜成纤维细胞（HBVAFs）增殖与迁移的影响及其可能机制。方法：在HBVAFs中转染针对IFI16基因的小分子干扰 RNA (siRNA) 48 h后, 用2×106 U/L 干扰素-α（IFN-α）处理转染IFI16 siRNA细胞24 h。流式细胞术测定细胞周期,细胞划线法与Transwell法测定细胞迁移能力。应用 real-time PCR法和蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法分别测定细胞中 IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：转染IFI16 siRNA后,HBVAFs中IFI16、p53及p21 mRNA和蛋白表达水平下调,增加了细胞G1/S期转换。IFN-α可诱导HBVAFs中IFI16、p53及p21mRNA和蛋白表达水平上调,同时抑制细胞G1/S期转换与细胞迁移,但在转染了IFI16 siRNA的HBVAFs中IFN-α的上述作用受到抑制。结论：IFI16表达可以抑制HBVAFs增殖和迁移,其机制可能与激活p53和p21的表达有关。     

大鼠皮肤创伤修复过程中转化生长因子β1和β3的表达

背景：转化生长因子β在组织创伤修复中发挥核心和关键作用。 目的：观察转化生长因子β1和转化生长因子β3在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中表达量及表达部位的变化。 方法：制备大鼠皮肤全层切伤模型,长度1.5-2.0 cm,深及筋膜层。于伤后0 h,12 h,1 d,2 d,3 d,4 d,5 d,6 d,7 d处死大鼠,取损伤部位皮肤,采用免疫组织化学染色检测各时间点转化生长因子β1和转化生长因子β3的表达,并进行定量分析。 结果与结论：免疫组织化学染色显示,在创伤愈合的早期阶段(伤后1-5 d),转化生长因子β1和转化生长因子β3免疫阳性颗粒主要出现在上皮细胞、上皮基底层细胞胞浆、巨噬细胞等免疫细胞胞浆及肉芽组织中;随着创伤修复时间的持续,免疫阳性颗粒主要出现在真皮层的成纤维细胞及细胞外基质中。其中转化生长因子β1的表达在创伤后1-5 d最强,而转化生长因子β3在创伤后六七天时开始明显表达。可见在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中,转化生长因子β1的表达先于转化生长因子β3,提示转化生长因子β1与胶原形成及创伤修复关系密切,而转化生长因子β3在愈合后期表达量有升高趋势,其可能与创伤后期的组织改建密切相关。     

实验性兔动脉损伤后血管外膜成纤维细胞的变化

目的探索动脉损伤后,血管外膜成纤维细胞的变化。方法以球囊导管法制模,通过病理形态学、免疫组织化学、计算机图像分析和透射电镜观察兔髂动脉损伤后各时间点血管外膜成纤维细胞的增殖与表型转化情况;并通过V染色血管外膜成纤维细胞的分布、测量面积并反映成纤维细胞表型转化后的合成与分泌功能。结果以球囊导管法制造兔髂动脉损伤动物模型100%成功,观察到损伤后外膜细胞首先发生增殖,成纤维细胞发生表型转化,并在电镜下观察到成纤维细胞的迁移现象。结论动脉损伤后,血管外膜成纤维细胞首先增殖,转化为肌成纤维细胞,表达α-肌动蛋白(α-actin),并向内膜转移。     

低氧对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1表达的影响

应用核酸原位杂交及增强化学发光免疫斑点法,观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条 件培养液（ＮＥＣＣＭ和 ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_１（ＴＧＦβ_１） ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果表 明：Ｈ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ表达为Ｎ组的１．３６倍（Ｐ＜０．０１）,同时在其培养上清液中,ＴＧＦβ_１蛋白含量也明显升高为Ｎ 组的１．８倍。ＨＥＣＣＭ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ和蛋白表达较ＮＥＣＣＭ组均下降,ｍＲＮＡ为ＮＥＣＣＭ组的９０％,Ｐ＜０．０１。蛋 白含量为后者的６２．２％。提示：（１）低氧促进入胚肺成纤维细胞合成和分泌ＴＧＦβ_１。（２）在低氧条件下,肺动脉内皮 细胞可能合成某种因子,抑制成纤维细胞ＴＧＦβ_１基因转录和蛋白表达。     

转化生长因子β1抑制人肾小管上皮细胞的增殖

背景：慢性肾衰竭进展过程中的一个重要病理改变是炎症和纤维化,主要包括肾小球和肾小管的炎症和纤维化。目前大多数研究主要集中于肾小球,对于肾小管病变的研究相对较少。但实际上部分疾病的肾小管病变出现在肾小球病变之前,其对于疾病预后更具有指导意义。 目的：观察转化生长因子β1对人类肾小管上皮细胞HK-2增殖的影响,探索转化生长因子β1在肾小管炎症和纤维化方面的作用。 方法：将传代培养的HK-2细胞分成空白对照组和转化生长因子β1作用组,分别使用DMEM/F12培养液,以及含转化生长因子β1(2,5,10 μg/L)的DMEM/F12培养液培养,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并使用MTT法检测细胞增殖情况。 结果与结论：转化生长因子β1能显著抑制人肾小管上皮细胞的增殖,并促使细胞向纤维样改变,与空白对照组相比差异有显著性意义(P < 0.05),其抑制增殖作用并不随转化生长因子β1质量浓度的增大而显著增强,作用时间可持续至72 h。结果可见转化生长因子β1能够抑制人肾小管上皮细胞的增殖,并具有促进肾间质纤维化的作用。     

损伤家兔动脉后外膜成纤维细胞增殖、表型变化与TGF-β1表达的关系

目的:观察损伤家兔动脉后外膜成纤维细胞增殖、表型变化与TGF-β1表达的关系。方法:采用免疫组化、透射电镜和原位杂交技术,观察兔腹主动脉损伤后外膜细胞增殖、细胞表型、超微结构和TGF-β1 mRNA表达水平的变化。结果: 损伤后3 d和7 d血管外膜PCNA 阳性细胞显著增多, 14 d接近正常。外膜细胞在损伤后逐渐获得α-actin表达 ,3 d呈弱阳性,7 d和14 d呈强阳性改变。损伤后7 d和14 d外膜细胞发生了显著的超微结构改变:大量的微丝出现和粗面内质网明显扩张,呈现出肌成纤维细胞的特征。损伤后3 d,外膜开始出现TGF-β1 mRNA表达,7 d和14 d表达持续上调,至28 d表达开始下调。 结论: 提示动脉损伤后外膜成纤维细胞增殖水平和表型变化与TGF-β1表达水平具有相关性。     

转化生长因子β1对软骨组织代谢影响的研究进展*

背景：转化生长因子β1可以介导软骨合成、抑制胶原和蛋白多糖分解,在诱导软骨分化和维持软骨表型上起着重要作用,实现软骨缺损的功能性修复。 目的：从生物学特性、在生物工程中的应用、基因多态性、信号通路及微小RNA等方面综述转化生长因子β1对软骨组织代谢影响的研究进展。 方法：以“transforming growth factor-β1,Cartilage Differentiation,cartilage matrix”为英文检索词,以“转化生长因子β1,软骨分化,软骨基质”为中文检索词。经第一作者检索2007/2012CNKI数据库及SPRINGERLINK数据库有关转化生长因子β1对软骨组织代谢影响的研究进展方面的文献130篇,根据纳入排除标准保留54篇进行总结。 结果与结论：转化生长因子β1可诱导间充质细胞向软骨细胞分化,促进软骨特异性基质的合成,保护软骨基质不被各种蛋白酶水解破坏,能够增强软骨组织自身再生能力,实现使软骨的损伤逆转,在软骨修复领域展现了巨大的潜在应用价值。     

Transforming growth factor beta 1 expression in gastric carcinoma.

Many types of human malignant tumor have been reported to amplify transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta 1) gene and overexpress its protein. However, little work has been done about the content of TGF-beta 1 protein in tissue and blood of patients with malignant tumors. TGF-beta 1 protein of tissue (n = 29) and serum TGF-beta 1 levels in patients with gastric carcinoma (n = 62) were compared with those in normal subjects (n = 10) using a TGF-beta 1 enzyme-linked immunosorbent assay. Also, expression of TGF-beta 1 mRNA (n = 20) and immunohistochemical distribution of the protein (n = 70) in gastric carcinoma tissues were studied. The immunohistochemical expression of TGF-beta 1 protein was significantly correlated with the tissue TGF-beta 1 content (r = 0.45 : p < 0.05). The content of TGF-beta 1 was 311 +/- 212 ng/g wet carcinoma tissue. TGF-beta 1 mRNA was expressed in gastric carcinoma cells. However, unexpectedly serum TGF-beta 1 levels in patients with gastric carcinoma were lower (97.1 +/- 29.4 ng/ml) than those in normal subjects (140.3 +/- 85.7 ng/ml, P < 0.05). Our results support that the tumor cells directly produce TGF-beta 1 and that semiquantitative immunohistochemical staining method for TGF-beta 1 protein is a validative method for TGF-beta 1 protein quantitation.     

Transforming growth factor beta signal transduction

Transforming growth factor beta1 (TGF-beta1) is the prototypic member of a large family of structurally related pleiotropic-secreted cytokines that play a pivotal role in the control of differentiation, proliferation, and state of activation of many different cell types including immune cells. TGF-beta family members have potent immunosuppressor activities in vitro and in vivo. These cytokines trigger their biological effects by inducing the formation of a heteromeric transmembrane serine/threonine kinase receptor complex. These receptors then initiate intracellular signaling through activation of Smad proteins, and specific Smads become phosphorylated and associate with other Smads. These heteromeric Smad complexes accumulate in the nucleus, where they modulate the expression of target genes. Recent data support the notion that Smads are important intracellular effectors of TGF-beta in immune cells. Here, we review recent advances in TGF-beta signal transduction in immune cells.     

转化生长因子β1促进骨髓间充质干细胞迁移与上调Snail表达有关

背景：转化生长因子β1可促进骨髓间充质干细胞迁移及增殖,但机制尚不清楚。 目的：观察转化生长因子β1对体外培养的骨髓间充质干细胞侵袭力的影响,以及对Snail、基质金属蛋白酶2表达的调节作用。 方法：采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞。用改良的Transwell小室检测0,0.5,1,2,5,10 μg/L的转化生长因子β1对细胞迁移的影响。用脂质体转染针对Snail基因的特异性小分子干扰RNA至骨髓间充质干细胞,观察转染前后Snail和基质金属蛋白酶2 的表达。 结果与结论：外源性转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞迁移的促进作用具有剂量依赖性,在2 μg/L时达到最高。在此浓度下,Snail、基质金属蛋白酶2 mRNA表达明显增高。Snail基因沉默可以明显抑制转化生长因子β1对基质金属蛋白酶2表达的促进作用。提示转化生长因子β1可通过促进骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶2的表达提高其迁移能力,此作用与上调Snail表达有关。     

Transforming growth factor beta 1 as a prognostic factor in pulmonary adenocarcinoma.

AIMS--To evaluate the efficacy of transforming growth factor beta (TGF-beta) for the prognosis of pulmonary adenocarcinoma. METHODS--TGF-beta was detected immunohistochemically using the avidin-biotin-peroxidase complex technique in resected pulmonary adenocarcinomas from 88 patients. RESULTS--Of the 88 patients, 39 were TGF-beta negative and 45 TGF-beta positive. The five year survival rate was 56% for the TGF-beta negative and 16% for the TGF-beta positive group. CONCLUSIONS--TGF-beta can be used as a prognostic factor in pulmonary adenocarcinoma.     

Transforming growth factor beta in Alzheimer''s disease.

Alzheimer's disease (AD) has been hypothesized to be an inflammatory condition. We hypothesized that anti-inflammatory cytokines, such as transforming growth factor beta (TGF-beta), counteract the inflammatory process. In the present study, we found that TGF-beta levels were elevated in both cerebrospinal fluid and serum samples obtained from AD patients < 6 h after death. Serum TGF-beta levels were also markedly elevated before death. These results suggest that elevated TGF-beta levels in AD may represent a protective host response to immunologically mediated neuronal injury.     

Transforming growth factor beta (TGF-beta) and autoimmunity

TGF-beta1 deficient mice develop multifocal inflammatory autoimmune disease and serve as a valuable animal model of autoimmunity. Transgenic expression of a dominant negative form of TGF-beta receptor type II in T cells have enabled the study of cell lineage specific effects of TGF-beta providing clues to the potential etiology of autoimmunity. These studies suggest that TGF-beta deficiency may induce autoimmune disease by influencing a number of immunological phenomena including lymphocyte activation and differentiation, cell adhesion molecule expression, regulatory T cell function, the expression of MHC molecules and cytokines, and cell apoptosis. The spectrum of effects appears to be significant in mucosal immunity and may contribute to the pathogenesis of inflammatory bowel disease.