乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

背景：有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。 目的：观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。 方法：应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900 mmol/L 乙醇中作用24 h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500 mmol/L乙醇中作用6,12,24 h,AnnexinV/ PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427 mmol/L 乙醇中作用24 h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2 和Caspase-3 mRNA表达水平。 结果与结论：MTT检测结果显示427 mmol/L 是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/ PI检测结果表明,与0 mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高(P < 0.05)。与0 mmol/L组比较,乙醇作用24 h后427 mmol/L组bcl-2 mRNA表达水平下降,Caspase-3 mRNA表达水平增加(P < 0.05)。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。     

乙烯雌酚可诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化

背景：关于雌激素对骨髓基质干细胞作用的报道尚不多。 目的：观察乙烯雌酚对兔骨髓基质干细胞成骨分化的影响。 方法：体外培养骨髓基质干细胞,用0,10^-7,10^-6,10^-5 mol/L浓度乙烯雌酚干预,并设地塞米松10^-8 mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L为阳性对照。 结果与结论：乙烯雌酚干预培养24,48,72 h,10^-6 mol/L组显著促进了骨髓基质干细胞增殖(P < 0.01)。干预48 h 10^-5 mol/L组显著抑制细胞增殖,干预72 h 10^-7 mol/L组显著抑制细胞增殖(P < 0.01)。10^-7 mol/L组乙烯雌酚干预25 d后开始出现钙化结节;10^-7,10^-6 mol/L组干预14,21 d碱性磷酸酶活性显著增加。证实乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化。     

锌离子浓度可影响兔骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化#br#

文题释义：骨髓间充质干细胞：间充质干细胞是一种多能干细胞,最早于骨髓中发现,后来陆续在外周血、脂肪等组织中被分离出来。相比于其他来源的干细胞,骨髓间充质干细胞不仅具有自我更新及多向分化潜能,同时还能分泌某些有助于血管生成的细胞因子;在骨修复方面,其能在促成骨的同时促进局部毛细血管的再生,有较好的应用前景。 成骨分化：人体内干细胞在生长增殖过程中,受各种生物因素如细胞调控因子、激素水平以及细胞微环境中微量元素的影响,可向不同组织分化。影响成骨分化的因素包括降钙素、锌离子、铜离子、钙离子、骨形态发生蛋白2、生长分化因子5等,因此量化每一个影响因素对于骨组织工程具有重要意义。 背景：锌离子是人体所必需的金属微量元素,在抑制破骨细胞活性和促进细胞成骨分化方面起着重要作用。然而,不同浓度锌离子对兔骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响却鲜有研究。 目的：评价不同浓度锌离子对兔骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响,探索最适宜的锌离子浓度。   方法：从乳兔长骨骨髓内提取骨髓间充质干细胞培养并传代,分为6组,即10^-4,10^-5,10^-6,10^-7,10^-8 mol/L锌离子组以及空白对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖活性并绘制生长曲线,碱性磷酸酶试剂盒评价细胞的成骨分化能力,活/死细胞染色表征细胞的生长活性,茜素红染色观察细胞的矿化能力,荧光定量PCR检测成骨相关基因的表达。   结果与结论：①除10^-4 mol/L锌离子组之外,随着时间延长,各组细胞数量呈增长趋势,且10^-7 mol/L锌离子组在培养5 d后细胞数量最多,而10^-4 mol/L锌离子组细胞数量最少;②细胞培养14 d后,当锌离子浓度为10^-7 mol/L时,碱性磷酸酶活性最高,10^-4 mol/L时碱性磷酸酶表达量最低;③活/死细胞染色显示10^-7 mol/L锌离子组活细胞数量最多,10^-4 mol/L锌离子组则几乎全为死细胞;④细胞培养14 d后,当锌离子浓度为   10^-7 mol/L时,可观察到明显的钙结节形成,且成骨相关基因表达水平最高;⑤结果表明,锌离子在一定浓度范围内,能有效促进兔骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化,且浓度为10^-7 mol/L时,其促增殖、成骨诱导及促矿化能力最强。因此,在培养基中添加适宜浓度锌离子,有利于兔骨髓间充质干细胞的成骨分化。 ORCID: 0000-0003-1353-2148(赵桥) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

地塞米松诱导成骨细胞凋亡的蛋白激酶C途径

背景：地塞米松以增加细胞周期时间的方法提高细胞凋亡来减少成骨细胞和骨细胞的数量。蛋白激酶C是细胞内信号传导通路的一种,与细胞凋亡有关已有相关文献报道。 目的：探讨地塞米松诱导成骨细胞凋亡在蛋白激酶C细胞内信号转导途径方向的机制。 方法：取胎鼠骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,分为塞米松模型组、佛波醇组和星型胞菌素组。地塞米松模型组加入1×10^-6 mol/L地塞米松,佛波醇组加入1×10^-6 mol/L地塞米松和1×10^-7 mol/L佛波醇,星型胞菌素组加入1×10^-6 mol/L地塞米松和1×10^-7 mol/L星型胞菌素,观察不同干预组细胞的增殖或抑制,并对细胞膜及细胞质中蛋白激酶C含量的变化进行检测。 结果与结论：地塞米松可明显的诱导凋亡,加入佛波醇后凋亡明显增加,加入星形孢菌素后凋亡明显减少。加入地塞米松后胞浆的蛋白激酶C明显减少,包膜明显增加。加入地塞米松不同时间,胞浆和胞膜的蛋白激酶C变化在30 min最明显。说明地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制与蛋白激酶C有关,地塞米松为蛋白激酶C激动剂。细胞受到刺激后,胞浆的蛋白激酶C转移至包膜,胞浆中的蛋白激酶C量减少,包膜中的增加。     

地塞米松浓度与脐带间充质干细胞的成骨分化

背景：在地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠的共同作用下,人脐带间充质干细胞可以向成骨细胞分化。作为糖皮质类激素的地塞米松,其浓度对人脐带间充质干细胞体外成骨分化存在着影响。 目的：探寻人脐带间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中地塞米松的优选浓度。 方法：采用植块法从正常足月新生儿脐带中分离培养间充质干细胞。取第3代细胞进行日常细胞培养和诱导分化实验。流式细胞术检测所获细胞的表面标记表达情况,成脂、成骨诱导分化鉴定人脐带间充质干细胞。倒置相差显微镜观察成骨分化过程中细胞形态的变化。以含1×10^-8 mol/L,5×10^-8 mol/L,1×10^-7 mol/L 3种浓度地塞米松的成骨诱导液对人脐带间充质干细胞进行成骨诱导。盐酸四环素荧光及Von Kossa染色法对比观察钙结节形成。反转录-聚合酶链反应法对比检测细胞骨桥蛋白基因表达。 结果与结论：植块法分离的人脐带间充质干细胞形态均一,多为梭形,平行排列生长或旋涡状生长。流式细胞术检测CD29,CD73和CD90呈阳性表达,CD31,CD34和HLA-DR呈阴性表达。成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O染色呈阳性。盐酸四环素荧光结果和Von Kossa染色结果显示,所形成的钙结节大小及数量,均随着地塞米松浓度的增加而增强、增多。反转录-聚合酶链反应检测结果显示,3种浓度地塞米松组的骨桥蛋白基因均有表达,且表达强度随着地塞米松浓度的增加而增强。提示成骨诱导液中地塞米松浓度为1×10^-7 mol/L时,能更有效地诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。 目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 方法：将0.001,0.01,0.1,1.0 μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48 h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 µmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高(P < 0.01),其中辛伐他汀浓度在0.1 μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著(P < 0.01);同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 µmol/L组细胞凋亡率下降(P< 0.01),其中0.1 µmol/L组凋亡率下降最显著(P < 0.01)。0.1 µmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

芒果苷对缺氧损伤骨髓间充质干细胞凋亡的保护

背景：缺氧性死亡限制了细胞移植和组织再生中细胞的应用。 目的：观察芒果苷对氯化钴作用下骨髓间充质干细胞缺氧损伤性凋亡的保护作用。 方法：体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,应用氯化钴建立细胞缺氧模型,以芒果苷对缺氧损伤下的骨髓间充质干细胞进行保护,通过MTT实验观察芒果苷对大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤的保护作用;采用流式细胞仪检测芒果苷对大鼠骨髓间充质干细胞缺氧保护的细胞凋亡及线粒体膜电位检测结果。 结果与结论：氯化钴能显著抑制大鼠骨髓间充质干细胞的生长,并且呈明显的剂量依赖关系。氯化钴200 μmol/L处理细胞12 h,诱导细胞凋亡率为(42.49±3.96)%;处理细胞24 h,诱导细胞凋亡率为(46.37±4.49)%,随着芒果苷浓度的增加,大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤的凋亡率逐步减少(P < 0.01),芒果苷对大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤具有保护作用,且呈浓度依赖性。结果提示,氯化钴缺氧模型能成功诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,具有剂量准确可控、无特殊设备要求、易操作等优点;芒果苷能有效抑制缺氧损伤时骨髓间充质干细胞的凋亡,对细胞具有保护作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

糖皮质激素促间充质干细胞的成骨效应

背景：糖皮质激素是有效的免疫抑制和抗炎症药物而广泛应用于临床,然而长期服用后也会引起一些不良反应如骨质疏松症。糖皮质激素通过促进成骨细胞与骨细胞的凋亡,同时抑制间充质干细胞向成骨细胞分化,导致成骨细胞数量减少;然而在一定的条件下,糖皮质激素又能够促进间充质干细胞表达成骨细胞标志基因诱导其向成骨方向分化。 目的：对以地塞米松为代表的糖皮质激素在间充质干细胞成骨分化中发挥的作用以及可能的分子机制进行综述。 方法：由第一作者检索PubMed数据库1978至2012年有关地塞米松和间充质干细胞成骨分化的文献,英文关键词“Mesenchymal stem cell,dexamethasone,osteogenesis,osteoporosis,Runx2,BMP,Noggin,GILZ,glucocorticoid receptor”以不同的组合方式查找,排除重复性的研究,最终保留55篇进行归纳综述。 结果与结论：地塞米松能够调节Runx2,Noggin以及亮氨酸拉链蛋白等基因调控间充质干细胞成骨分化。当糖皮质激素作用于间充质干细胞时,可能由糖皮质激素受体介导其生理作用,也可能在糖皮质激素与其受体结合之前就受到11β-羟甾类脱氢酶的调节。另外,生理剂量(10^-8 mol/L)的地塞米松能促进间充质干细胞成骨分化,药理剂量(≥10^-7 mol/L)有抑制作用。     

基质细胞衍生因子1预处理抑制大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡

背景：研究发现基质细胞衍生因子1除参与趋化干细胞定向迁移途径,还具有抗凋亡作用。 目的：观察基质细胞衍生因子1预处理后对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。 方法：以不同浓度H₂O₂诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,取最适宜浓度100 μmol/L用于实验。不同质量浓度基质细胞衍生因子1干预100 μmol/L H₂O₂诱导后的大鼠骨髓间充质干细胞,选择0.2 mg/L最佳保护质量浓度用于实验。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞,随机分组：正常对照组不进行任何处理;损伤组在培养液中加入H₂O₂作用24 h;基质细胞衍生因子1预处理组于H₂O₂损伤细胞前6 h加入基质细胞衍生因子1;基质细胞衍生因子1+AMD3100(基质细胞衍生因子1受体CXCR4的阻断剂)组于H₂O₂细胞损伤前6 h加入基质细胞衍生因子1与AMD3100共孵。 结果与结论：H2O2能体外模拟缺血缺氧环境诱导骨髓间充质干细胞凋亡,且作用呈剂量依赖性。与损伤组比较,加入基质细胞衍生因子1预处理后细胞凋亡明显减轻(P < 0.01),细胞E2F6基因表达增强(P < 0.05),E2F1基因表达减少(P < 0.05),线粒体细胞色素C转位减少(P < 0.05),Caspase-3活性降低(P < 0.05),AMD3100可阻断基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的保护作用。提示基质细胞衍生因子1可能通过增强E2F6基因,负性调控E2F1基因抑制线粒体损伤导致的骨髓间充质干细胞凋亡。     

芍药苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：研究显示芍药苷具有补血及治疗自身免疫性疾病的功效,骨髓间充质干细胞对机体的造血及免疫功能也起着重要的作用,但芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖及细胞因子的分泌和表达有何影响报道较少。 目的：探讨芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖及白细胞介素6表达的影响。 方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,用流式细胞术和成脂及成骨诱导法鉴定人骨髓间充质干细胞生物学特性,MTT法检测不同浓度芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖的影响,ELISA 法测定芍药苷干预人骨髓间充质干细胞后培养上清液中白细胞介素6的分泌水平,RT-PCR 检测芍药苷干预后白细胞介素6 mRNA的表达情况。 结果与结论：成功分离出骨髓间充质干细胞,具有成骨、成脂分化潜能。与对照组相比,芍药苷浓度为2 μmol/L和10 μmol/L可明显促进骨髓间充质干细胞增殖。10 μmol/L芍药苷干预骨髓间充质干细胞后,G₀/G₁期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高。10 μmol/L芍药苷干预组骨髓间充质干细胞白细胞介素6的分泌和mRNA表达均显著高于对照组(P < 0.01)。由此得出,一定浓度的芍药苷可促进骨髓间充质干细胞增殖,并提高骨髓间充质干细胞分泌白细胞介素6水平和基因表达。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

大麻素2型受体激活对钛颗粒诱导成骨细胞凋亡的干预作用

BACKGROUND: Impaired osteogenesis caused by osteoblast apoptosis is a main reason of aseptic loosening. Type-2 cannabinoid receptor activation can promote osteoblast proliferation and reduce apoptosis. OBJECTIVE: To investigate the inhibitory effect of HU-308 (type-2 cannabinoid receptor agonist) on the osteoblastic MC3T3-E1 cells co-cultured with titanium particles and its relative mechanism. METHODS: Mouse MC3T3-E1 cells were cultured in vitro and divided into five groups: cells were cultured in the normal medium as blank control group, cultured in the medium with 2.5 g/L titanium particles as titanium group, cultured in the medium containing 2.5 g/L titanium particles plus 10^-9, 10^-8 and 10-⁷ mol/L HU-308 as low-, medium- and high-concentration groups, respectively. Forty-eight hours later, cell proliferation, apoptosis, levels of reactive oxygen species and mitochondrial membrane potential as well as Caspase-3 activity were assessed. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the black control group, the cell proliferation activity and the level of mitochondrial membrane potential were significantly reduced and the apoptosis rate, the level of reactive oxygen species and Caspase-3 activity were significantly increased in the titanium group (P < 0.01 or P < 0.05). Compared with the titanium group, the cell proliferation activity and the level of mitochondrial membrane potential significantly increased in the high-concentration group, and the apoptosis rate and Caspase-3 activity significantly decreased in the medium- and high-concentration groups (P < 0.05). These findings demonstrate that HU-308 can effectively improve the impaired osteogenesis induced by titanium particles, probably through modulating reactive oxygen species and elevating mitochondrial membrane potential and Caspase-3 activity.      

虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响

背景：虎杖多年来一直是烧伤、创伤创面愈合治疗方剂中的一味主药,因成分复杂,具体药理作用难以进一步研究,对于虎杖苷促愈合作用目前未见文献报道。 目的：分析不同浓度虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响。 方法：取烧伤后行瘢痕切除植皮4例患者剩余小中厚皮片,原代培养人成纤维细胞。用含有10^-6,10^-5,10^-4,10^-3,10^-2 mol/L不同浓度虎杖苷培养液作用第2代人成纤维细胞,未加虎杖苷的培养液作为对照。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;ELISA法检测上清中纤维结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况。 结果与结论：10^-5、10^-4 mol/L组促进成纤维细胞增殖最明显,10^-2 mol/L组吸光度值显著下降,细胞生长受抑制。10^-3 mol/L组G1期细胞大幅度下降,细胞有S期阻滞现象。10^-2 mol/L组有明确的促凋亡作用。10^-2 mol/L组上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较其他各组显著增高(P < 0.05);纤维结合蛋白较对照组显著增高(P < 0.05),较其他各组有所下降(P < 0.05)。说明低浓度虎杖苷有促进成纤维细胞增殖、保护细胞免于凋亡及促进纤维结合蛋白的表达与合成分泌的作用,促进成纤维细胞增殖的最适浓度应为10^-5~10^-4 mol/L。     

瘦素对HepG2细胞中BSEP蛋白表达及信号通路的影响

目的:探讨瘦素(leptin)对人肝癌细胞(Hep G2)胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)蛋白表达及信号通路的影响。方法:体外培养Hep G2细胞,不同瘦素浓度(10-8、10-7和10-6mol/L)作为刺激因子,分别培养24 h、48 h和72 h后用Western blotting法检测Hep G2细胞的AMPKa、BSEP蛋白表达及AMPKa磷酸化(pAMPKa)水平;筛选BSEP蛋白表达的最佳培养时间及瘦素浓度点,加入10μmol/L AMPK阻断剂compound C进行细胞培养,用Western blotting法检测BSEP蛋白表达。结果:(1)不同浓度瘦素干预Hep G2细胞72 h时,随瘦素浓度增高AMPKa蛋白表达量逐渐增高,在瘦素浓度为10-6mol/L时AMPKa蛋白表达最强(P0.01);(2)不同浓度瘦素干预Hep G2细胞24 h后,AMPKa磷酸化水平与瘦素浓度呈剂量依赖逐渐增强(P0.01),相同瘦素浓度组AMPKa磷酸化水平随时间逐渐增加(P0.01);(3)不同浓度瘦素干预Hep G2细胞24 h后,BSEP蛋白表达水平与瘦素浓度呈剂量依赖逐渐增强(P0.01),相同瘦素浓度组BSEP蛋白表达量随时间逐渐增加(P0.01);(4)72 h测得10-6mol/L瘦素组和10-6mol/L瘦素+10μmol/L compound C组BSEP蛋白表达较正常对照组均增加(P0.01),compound C可降低BSEP蛋白的表达(P0.01)。结论:瘦素可通过"leptin-AMPK-BSEP"途径促进Hep G2细胞BSEP蛋白表达;瘦素可促进Hep G2细胞AMPKa蛋白表达及AMPKa磷酸化水平。     

肝星状细胞活化增殖和凋亡及奥曲肽的影响

背景：肝星状细胞的活化增殖在肝硬化的发生发展中起关键作用,临床广泛应用的生长抑素衍生物奥曲肽有多种生物学效应,但它对肝星状细胞的活化增殖及凋亡有何影响尚不清楚。 目的：观察奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响。 方法：实验选用肝星状细胞株HSC-T6的传代细胞。MTT法检测不同浓度(1×10^-2,1×10^-3,1×10^-4,1×10^-5,1×10^-6,0 mmol/L)奥曲肽干预24,48,72 h对肝星状细胞增殖的影响;TUNEL凋亡检测试剂盒荧光显微镜方法检测不同浓度(0,1×10^-5,1×10^-2 mmol/L)奥曲肽干预24 h对肝星状细胞凋亡的影响。 结果与结论：奥曲肽浓度越高、作用时间越长对培养的肝星状细胞增殖抑制越明显,呈现浓度和时间依赖性;奥曲肽对培养的肝星状细胞凋亡随奥曲肽浓度的增加而增加。结果可见奥曲肽对培养的肝星状细胞增殖抑制呈浓度 (0~10^-2 mmol/L)和时间(24,48,72 h)依赖性,并能诱发其凋亡。     

内分泌和化疗对乳腺肿瘤患者干细胞的影响

BACKGROUND:Tumor stem cells are the root of cancer recurrence and metastasis, so clinical researches should focus on the effects of different treatments on tumor stem cells. OBJECTIVE:To explore the effects of endocrine therapy and chemotherapy on stem cells in patients with breast cancer. METHODS:After recovery and cultivation of estrogen receptor-positive human breast cancer cell lines MCF-7, passage 3 cells in logarithmic phase were selected and divided into three groups containing control, estradiol and estradiol with tamoxifen groups. The estradiol group was divided into three subgroups: 10^-7, 10^-8 and 10^-9 mol/L estradiol was added into the medium, respectively; the estradiol with tamoxifen group was divided into three subgroups: 10^-7, 10^-8 and 10^-9 mol/L estradiol with 10^-6 mol/L tamoxifen were added into the medium, respectively. The same amount of absolute ethyl ethanol was added into the medium of control group. Fifteen female patients with late recurrence and metastasis of breast cancer received chemotherapy as recurrence and metastasis group. Another 15 healthy volunteers were selected as healthy control group. RESULTS AND CONCLUSION:The proportion of CD44⁺CD24^-/low cell subsets in the estradiol and estradiol with tamoxifen groups was significantly higher than that of the control group (P < 0.05), and the proportion of CD44⁺CD24^-/low cell subsets in the estradiol group was significantly higher than that of the estradiol with tamoxifen group at the same concentration (P < 0.05). The proportion of CD44+CD24-/low cell subsets had no significant differences among groups at 10 and 20 days of culture (P < 0.05). The proportion of CD44⁺CD24^-/low cell subsets significantly increased in MCF-7 cells after 24-hour intervention with different chemotherapy drugs. But only the proportion of CD44⁺CD24^-/low cell subsets in the paclitaxel and doxorubicin groups was significantly higher than that of the control group after 20-day intervention (P < 0.05). Besides, the proportion of CD44⁺CD24^-/low cell subsets in the peripheral blood of healthy volunteers was significantly lower than that of the recurrence and metastasis group (P < 0.05). Among 15 patients with late recurrence and metastatic of breast cancer, 9 had stable disease, 5 had partial remission, 1 had failed chemotherapy and cancer progression. Moreover, the proportion of CD45^-CD44⁺CD24^-/low cell subsets in the peripheral blood of patients sensitive for chemotherapy was significantly lower than that before treatment (P < 0.05). In conclusion, both endocrine therapy and chemotherapy exert a certain effect on the CD44⁺CD24^-/low cell subsets of breast cancer positive for estrogen receptor. Given that CD44⁺CD24^-/low cell subsets in MCF-7 cells resist chemotherapy drugs, the proportion of CD45^-CD44⁺CD24^-/low cells in the peripheral blood of patients sensitive for chemotherapy is decreased.     

胰蛋白酶与糖皮质激素影响肺成纤维细胞增殖与骨架蛋白的表达

背景：肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。 目的：观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋白表达的变化。 方法：采用人肺成纤维细胞体外培养,胰酶处理24 h,终浓度分别为0,0.5,1.0,5,10 mg/L胰酶;地塞米松处理72 h,在有血清培养条件下进行,浓度范围10^-9-10^-6 mol/L。MTT法测定成纤维细胞增殖情况;免疫印迹方法测定细胞波形蛋白和肌动蛋白的表达。 结果与结论：胰蛋白酶在低浓度(0.1-0.5 mg/L)时刺激肺成纤维细胞增殖;而较高浓度(1-10 mg/L)明显抑制细胞生长。地塞米松对肺成纤维细胞增殖作用的影响不明显。胰蛋白酶显著上调肺成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白的表达,但对波形蛋白的表达无明显影响;地塞米松(10^-9-10^-6 mol/L)显著抑制波形蛋白的表达。结果表明在慢性阻塞性肺病等支气管肺慢炎症性疾病的发病过程中,胰蛋白酶和糖皮质激素可以通过参与成纤维细胞增殖和骨架蛋白的表达发挥作用。