BALB/c裸鼠与SCID小鼠皮下种植人肝癌模型的比较

背景：建立良好的肝癌模型是进一步研究肝癌诊断、治疗的基础,目前各种模型较多,但是进行评价的很少。 目的：比较两种免疫缺陷小鼠种植性肝癌的成瘤情况。 方法：免疫磁珠法从Huh7肝癌细胞中分选出CD133+肝癌干细胞,取1×106个细胞分别种植于BALB/c祼鼠及SCID小鼠颈背部皮下,观察两组20 d的成瘤及死亡情况,游标卡尺分别测量种植性肝癌的直径,以大于0.5 cm为成瘤成功。 结果与结论：24只BALB/c裸鼠中18只成瘤成功;24只SCID小鼠中16只成瘤成功。行χ2检验,两组成瘤效果差异无显著性意义(P  > 0.05),两组死亡情况比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。结果提示BALB/c组死亡率低,且价格低廉,更适合建立肝癌皮下种植模型。     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。方法BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×106个.0.2m l-1.只-1,观察肿瘤生长情况,45d处死。瘤组织作病理及电镜检查;取裸鼠周围血作甲胎蛋白(AFP)的检测;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。     

羟基红花黄色素A抑制人肝癌细胞系Huh7发生上皮-间质转化

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人肝癌细胞系Huh7迁移及侵袭的影响,并通过体内外实验探究其是否影响肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)。方法体外培养Huh7细胞,分为对照组、HSYA 80和160μmol/L实验组,分别处理24 h,用transwell小室法和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞vimentin和E-cadherin蛋白表达;建立Huh7细胞裸鼠皮下移植瘤模型,HE染色观察移植瘤和肝脏组织形态;免疫组化检测移植瘤组织TGF-β1、vimentin和E-cadherin表达情况。结果与对照组相比,HSYA实验组Huh7细胞迁移与侵袭能力明显下降,E-cadherin蛋白表达升高,vimentin蛋白表达下降(P0.05);与移植组相比,HSYA实验组(2.25 mg/kg)肝内无肿瘤细胞转移,移植瘤组织出现肿瘤细胞坏死,E-cadherin表达升高,vimentin和TGF-β1表达下降(P0.05)。结论 HSYA通过抑制肝癌细胞发生EMT,抑制肝癌细胞的迁移及侵袭能力。     

B7-1基因转染小鼠肝癌细胞诱导的抗瘤效应研究

目的：研究共刺激分子B7-1在抗肿瘤免疫中的作用.方法：体外观察转染B7-1基因及空载体的小鼠肝癌细胞株H22与同源小鼠脾细胞混合培养后,测定淋巴细胞增殖指数、CTL,于小鼠皮下接种不同H22细胞后观察肿瘤生长情况.结果：转染B7-1基因的H22细胞体外可刺激淋巴细胞增殖,增强CTL的杀伤活性,接种小鼠后成瘤潜伏期和荷瘤鼠存活期明显延长（P＜0.05）.结论：转入B7-1基因的小鼠肝癌细胞H22能增强免疫原性,能有效诱导CTLs介导的抗肿瘤免疫反应.     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤淋巴转移模型的构建与筛选

目的构建人肺腺癌的裸鼠皮下移植瘤模型,探讨不同注射部位对肿瘤生长和淋巴转移的影响。方法 20只BALB/c裸鼠随机分为4组,每组5只。分别于左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下注射A549细胞株,建立人肺腺癌移植瘤模型,考察各组裸鼠肿瘤生长和淋巴结转移情况。结果各组裸鼠成瘤明显,模型构建成功。背部近腋窝种植2组裸鼠肿瘤比后肢和爪垫种植的肿瘤出现时间早,生长速度快(P<0.05)。左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下移植瘤的淋巴结转移率分别为41.7%、42.9%、23.1%和21.4%。其中左侧背部近腋窝注射最为方便。结论裸鼠左侧背部近腋窝皮下注射A549细胞操作方便,肿瘤易生长,淋巴转移率高,是构建人肺腺癌皮下移植瘤淋巴转移模型的优选方案。     

慢病毒载体介导Nanog小分子干扰核糖核酸抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长

目的构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法将前期细胞实验验证有效的siRNA序列构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型。以lentivirus-shRNA-Nanog感染的裸鼠作为实验组(目的组),以无关序列慢病毒感染的裸鼠(空载体组)及未感染的裸鼠(未感染组)作为对照组,测量肿瘤瘤体体积及质量的变化;活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况,Western blot法检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况;TUNEL法观察其对皮下移植瘤细胞凋亡的影响。结果经基因测序鉴定,Nanog基因shRNA重组慢病毒表达载体构建成功。活体荧光成像显示感染27 d后,目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未感染组,裸鼠移植瘤瘤体积及瘤质量小于未感染组及空载体组;Western blot法显示目的组Nanog蛋白表达较对照组明显降低;TUNEL结果显示目的组凋亡指数较对照组明显增大,而空载体组与未感染组比较,差异无统计学意义。结论成功构建了Nanog基因shRNA表达载体并包装成慢病毒颗粒,在体内感染能明显抑制肿瘤生长。     

携带IL-7的新城疫病毒修饰的自体肿瘤疫苗对肝癌的免疫治疗效应

目的 研究携带IL-7的新城疫病毒修饰的自体肿瘤疫苗的抗肝癌作用。方法 鸡胚扩增新城疫病毒LX/(IL-7),体外感染Hepa1-6细胞,显微镜下观察LX/(IL-7)的裂解性特征,并采用ELISA的方法检测感染Hepa1-6细胞后IL-7的表达水平;将C57BL/6小鼠分为2组,每组5只,通过皮下接种5×106个Hepa1-6细胞建立小鼠肝癌模型。成瘤1周后,200μg/ml丝裂霉素C处理的2×107/ml Hepa1-6细胞感染LX/(IL-7)病毒制成肿瘤疫苗。对照组小鼠皮下接种丝裂霉素C处理的Hepa1-6细胞,每只接种1×106个细胞,实验组接种瘤苗,每只接种1×106个细胞,每周2次。测量肿瘤体积,通过流式检测小鼠脾脏细胞免疫反应。结果 LX/(IL-7)病毒具有非裂解性特征,可以高效地感染肝癌细胞并分泌IL-7。肝癌皮下模型的结果表明LX/(IL-7)修饰的Hepa1-6瘤苗具有较好的肿瘤免疫治疗效果,流式结果显示其可增强效应T细胞的比例,促进T细胞的免疫应答。结论携带IL-7的新城疫病毒修饰的自体肿瘤疫苗具有显著抗肝癌作用。     

H-22小鼠移植瘤模型检出超顺磁性氧化铁巨噬细胞及其临床意义

目的：通过建立小鼠移植瘤模型初步探讨影响肝癌SPIO增强MRI信号变化的病理学基础及免疫学机理。 方法： 给小白鼠注射H-22肝癌细胞建立皮下异位及肝脏原位移植瘤模型各40只；所有的瘤鼠做HE及普鲁氏兰铁染色并进行相关病理学分析。 结果： Prussian blue染色皮下移植瘤组有2只瘤鼠的瘤灶内见较为聚集的单核/巨噬细胞，肝脏移植瘤组中3只瘤鼠的瘤灶内见枯否细胞；肝脏移植瘤组见7个瘤灶与正常肝组织呈明显的浸润性生长。 结论： 注射H-22肝癌细胞的方法建立小白鼠移植瘤模型，适合进行SPIO增强MRI信号变化的实验研究；移植瘤的生长方式及少数纯瘤株移植瘤结节内见巨噬细胞构成SPIO增强后信号变化的病理学基础；少数纯瘤株移植瘤结节内见巨噬细胞是肿瘤免疫应答的结果，SPIO增强MRI信号变化可作为评价肿瘤免疫的方法。     

琼玉膏抑制肝癌细胞HBxAg表达及对原发性肝癌的防治作用

目的：观察琼玉膏对人肝癌细胞移植裸鼠HBxAg表达的影响,分析其通过影响HBxAg表达防治原发性肝癌的机制。方法：建立人肝癌细胞移植裸鼠模型,观察琼玉膏预防及治疗对小鼠体质量、癌组织质量的影响,同时采用免疫组化法测定癌组织及肝脏中HBxAg的表达。结果：与模型组相比,琼玉膏预防及治疗后,裸鼠的体质量增长迅速,癌组织质量偏低,癌组织及肝脏HBxAg低表达。琼玉膏预防与环磷酰胺治疗的效果相近。结论：琼玉膏能减缓肿瘤的生长,并抑制HBxAg的表达,后者可能是其防治原发性肝癌的主要机制之一。     

TRIML1 对肝癌细胞恶性生长的影响

目的:探讨TRIML1对肝癌细胞恶性生长的影响。方法:在HepG2肝癌细胞中筛选鉴定过表达TRIML1稳定株。利用CCK8法检测过表达TRIML1稳定株的生长增殖活性;软琼脂克隆形成实验分析过表达TRIML1稳定株的克隆形成能力。裸鼠成瘤实验分析过表达TRIML1稳定株的动物体内成瘤能力。使用炎症细胞因子TNF-α刺激过表达TRIML1稳定株和阴性对照8 h,收取细胞上清,ELISA检测IL-6分泌情况。在Huh7肝癌细胞中用小干扰RNA(siRNA)敲低TRIML1,spheres形成实验检测敲低TRIML1对Huh7生长状况的影响,并且收取上清检测IL-6的分泌。结果:成功筛选出过表达TRIML1的稳定株;过表达TRIML1稳定株细胞增殖活性明显高于对照组(P0.01);过表达TRIML1稳定株的软琼脂集落数明显高于对照组(P0.01);过表达TRIML1稳定株组的裸鼠瘤体体积和重量明显高于对照组(P0.01);过表达TRIML1稳定株的IL-6本底水平的分泌和TNF-α诱导的分泌均高于对照组(P0.01)。TRIML1敲低后,Huh7细胞spheres形成能力显著下降,IL-6的分泌量也降低,反向验证上述效应。结论:TRIML1能明显促进肝癌细胞体内和体外的恶性增长,效应可能与IL-6的表达上升有关。     

人绒毛膜癌裸鼠原位移植模型的建立

目的建立人绒毛膜癌裸鼠原位移植瘤模型。方法培养人绒毛膜癌细胞系JAR,制备JAR单细胞悬液,给5只8周龄BALB/c裸鼠经皮下注射建立皮下移植瘤模型。待裸鼠皮下成瘤后,无菌条件下取瘤组织并切成1 mm^3组织块,通过手术方式植入10只10周龄BALB/c裸鼠子宫腔内,裸鼠濒死状时4%水合氯醛(10 g/kg)腹腔注射麻醉处死,观察子宫成瘤及腹腔转移情况。解剖取子宫原位移植瘤、腹腔内转移瘤、腹腔淋巴结及其他脏器组织标本,通过组织病理学检查进行鉴定。结果10只BALB/c裸鼠中共有7只裸鼠子宫内可见移植瘤肿块形成,其中2只可同时观察到子宫移植瘤和腹膜转移瘤。在病理学形态和结构上,皮下移植瘤模型、原位移植模型和腹膜转移瘤的瘤细胞与人绒毛膜癌细胞系JAR一致。结论成功建立人绒毛膜癌JAR细胞的BALB/c裸鼠原位移植瘤模型。     

RNA干扰FABP5基因对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究脂肪酸结合蛋白5(FABP5)基因沉默的慢病毒载体对人肝癌Hep G2细胞成瘤效应的影响。方法:采用RNA干扰技术构建重组逆转录慢病毒载体。Hep G2细胞分为3组:实验组以FABP5基因沉默慢病毒颗粒(LV-shRNA-FABP5)感染Hep G2细胞;阴性对照组以空载体慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染Hep G2细胞;空白对照组不做任何处理。将裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况。4周后测量肿瘤的体积和重量,绘制移植瘤生长曲线。Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤中FABP5的表达。结果:LV-shRNA-FABP5可以降低Hep G2细胞FABP5的表达。3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,且体积及重量明显减小(P0.05);实验组裸鼠肝癌移植瘤组织的FABP5 mRNA和蛋白表达水平相比空白对照组和阴性对照组表达明显下降(P0.05)。结论:沉默FABP5基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。FABP5可能成为肝癌基因治疗的一个有效靶点。     

标记抗人肝癌单克隆抗体SPIO对荷瘤裸鼠的定位诊断作用

目的：探讨标记抗人肝癌单克隆抗体超顺磁性氧化铁粒子（ＭｃＡｂ－ＳＰＩＯ）对荷瘤裸鼠模型的诊断作用。材料和方法：用过碘酸盐法将Ｈａｂ－１８ 抗人肝癌单抗标记到ＳＰＩＯ粒子;建立裸鼠载瘤模型（ｎ＝１２ 只）。结果：实验组（ｎ＝ ８）从尾静脉注入０．３ ｍ ｇ Ｆｅ／２０ｇ 的ＭｃＡｂ－ＳＰＩＯ,给药后２４ 小时成像观察到裸鼠瘤结均有选择性信号下降,对照组（ｎ＝ ４）在注射ＬｇＧ－ＳＰＩＯ后未见明显信号改变。结论：ＭｃＡｂ－ＳＰＩＯ磁共振免疫成像对肝癌的早期定性诊断有较高价值。     

白藜芦醇诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究

目的：探讨白藜芦醇诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。 方法： 建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型，采用瘤旁注射的方法，用不同剂量的白藜芦醇进行治疗，并设对照，用透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组织化学法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用； 透射电镜和TUNEL法发现白藜芦醇导致移植瘤内大量细胞发生凋亡；免疫组织化学法发现白藜芦醇注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率（3.92％±0.85％、5.70％±0.84％和11.86％±0.97％）明显低于两个对照组（P<0.05），两个对照组（27.56％±1.40％和29.48％±0.51％）之间无显著差异；Bax蛋白阳性细胞率（52.30％±1.54％、45.72％±0.88％和40.02％±1.20％）明显高于两个对照组（P<0.05），两个对照组（20.88％±0.91％和19.34％±0.35％）之间无显著差异； RT-PCR法发现白藜芦醇注射组的bcl-2 mRNA条带强度随剂量的增大而递减，并明显低于两个对照组（P<0.05），两个对照组之间无显著差异（P>0.05）；bax mRNA条带强度递增，并明显高于两个对照组（P<0.05），两个对照组之间无显著差异（P>0.05）。 结论： 白藜芦醇对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，通过下调bcl-2 的表达和上调bax 的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡，是其抗胃癌作用的机制之一。     

反义VEGF165基因转染抑制裸鼠体内人神经母细胞瘤的生长

目的研究反义VEGF165cDNA转染对裸鼠移植性人神经母细胞瘤血管生成及超微结构的影响。方法将稳定转染正义VEGF165cDNA、反义VEGF165cDNA及空载体的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理变化;透射电镜观察肿瘤组织超微结构;免疫组化染色比较裸鼠移植瘤微血管密度(MVD)。结果与空载体组相比,反义组裸鼠肿瘤瘤块体积小(P<0.05),MVD显著减少(P<0.01),肿瘤组织内血管稀疏,核分裂相少见,内皮细胞变性、肿胀,血液淤滞,凋亡细胞多见。结论反义VEGF165cDNA转染能抑制裸鼠人神经母细胞瘤的生长,降低瘤块内微血管生成,促使肿瘤细胞凋亡。     

大豆异黄酮诱导裸鼠人胃癌移植瘤凋亡（英文）

目的：探讨大豆异黄酮诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。方法： 建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型并测定移植瘤的生长曲线；25只BALB/C裸鼠接种胃癌原代细胞悬液生成移植瘤后，不同剂量的大豆异黄酮进行瘤旁注射，透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组化法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。结果： 大豆异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，在剂量为0.5 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg时，其抑制率分别为10.6%、29.7%和39.1%；透射电镜发现大豆异黄酮导致移植瘤内大量细胞发生调亡；TUNEL染色法发现大豆异黄酮注射组瘤细胞的凋亡指数是随剂量递增（28.7%±1.1%、33.4%±1.4%和37.1%±1.0%）。免疫组织化学法发现大豆异黄酮注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率随剂量递减（11.8%±0.9%、5.7%±0.8%和4.0%±0.8%），而Bax蛋白阳性细胞率随剂量递增（20.0％±±1.2%、24.7％±0.9%和29.3%±1.6%）；RT-PCR法发现,大豆异黄酮注射组的〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗 mRNA条带强度随剂量的增大而递减，并明显低于对照组P<0.05）；而bax mRNA条带强度递增，并明显低于对照组（P<0.05），而2对照组bcl-2，bax之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 大豆异黄酮对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡，是其抗胃癌作用的机制之一。     

结直肠癌转移动物模型血清中几种蛋白变化的观察

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用pEGFP—N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体荧光成像系统观察结直肠癌原位成瘤及发生转移的情况。同时采集裸鼠原位成瘤后不同转移阶段的血清,进行双向电泳联合时间飞行质谱分析差异蛋白质,观察结直肠癌转移模型裸鼠癌转移前后血清蛋白的变化。结果获得稳定表达绿色荧光蛋白的SW480-EGFP细胞株,裸鼠皮下接种成瘤率为100％,原位种植成瘤率为10／10,区域淋巴结转移为10／10,肝转移率为4／10,肺转移率为3／10。通过血清蛋白质组学技术成功鉴定了5个在癌转移发生后血清内显著升高的血清蛋白：结合珠蛋白α链,载脂蛋白A4,载脂蛋白E,免疫球蛋白κ型V区L链和转铁蛋白。结论成功建立结直肠癌可视化转移模型,利用不同转移阶段鼠血清进行双向电泳图谱差异分析筛选出5个在癌转移发生后血清中显著升高的蛋白可能是与结直肠癌转移相关的蛋白。     

Wnt5a involved in regulation of the biological behavior of hepatocellular carcinoma

Objective: Wnt5a has been shown to be involved in cancer progression in a variety of tumor types. Previous experimental studies have indicated that it has been shown to be down-regulated in hepatocellular carcinoma (HCC). The goal of this study was to explore the effect of Wnt5a overexpression in an HCC cell line. Methods: We transfected the human HCC cell line Huh7 with a pcDNA3.1-Wnt5a overexpression vector or an empty vector control. The integration of the plasmid DNA and the expression of Wnt5a in Huh7 cells were confirmed by real-time RT-PCR and Western blot. A plate colony formation test was used to calculate the clone formation rate and the cell cycle was analyzed by flow cytometry. The effect of Wnt5a overexpression on cell migration was studied in vitro using a scratch assay and in vivo by xenograft studies in nude mice. Results: Our results showed that in Huh7 cells with overexpression of Wnt5a, the fraction of cells in the G1 and S phases of the cell cycle was significantly increased compared with untransfected cells. In agreement with this finding, overexpression of Wnt5a was associated with a lower colony formation rate compared with control cells. In our xenograft studies, nude mice injected with Huh7 cells with overexpression of Wnt5a had decreased tumor volumes compared with controls. The vitro scratch assay revealed that Wnt5a overexpression cells had a diminished capacity for cell migration. Furthermore, we studied the expression of important proteins associated with Wnt5a signaling pathway, and it was found that Ror2 and E-cadherin were both increased in Huh7 cells with overexpression of Wnt5a, whereas p53 expression was unaffected. Conclusion: Overexpression of Wnt5a in Huh7 cells was associated with decrease of cell proliferation and migration. Wnt5a may act as a tumor-suppressor gene in HCC, which works through the non-canonical Wnt signaling pathway by binding to the Ror2 and E-cadherin receptor.     

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的：研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）对人肝癌耐药细胞株移植裸鼠皮下后，移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM裸鼠移植瘤模型，随机分为：空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组、200 μg/L ASODN组、400 μg/L ASODN组和600 μg/L ASODN组，观察裸鼠移植瘤体积，计算抑瘤率。免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:A组、B组和C组移植瘤随时间增长而增大，但3组间无显著差异（P>0.05）。D组、E组和F组注射ASODN后，裸小鼠移植瘤的体积随着注射ASODN时间的延长和ASODN浓度的增加，移植瘤生长越来越小，并呈时间-剂量-效应依赖性。实险第20 d D组、E组和F组的肿瘤抑制明显大于A组、B组和C组（P<0.05）。HE染色见对照组移植瘤细胞密集成群，核大深染，而ASODN组见肿瘤细胞少，癌细胞皱缩变圆，胞核固缩深染。免疫组化见对照组肝癌细胞浆Survivin蛋白表达较强，而ASODN组Survivin蛋白表达较弱。结论:Survivin反义寡核苷酸能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。