犬切牙压低移动过程中牙周组织骨保护素/核因子κB受体活化因子配体的表达

背景：骨保护素及核因子κB受体活化因子配体是调控破骨细胞生成和活化的关键因子,机械力可影响牙周膜细胞和成骨细胞骨保护素及核因子κB受体活化因子配体的表达。 目的：观察犬切牙压低移动过程中牙周组织中骨保护素/核因子κB受体活化因子配体的表达。 方法：采用微型种植体作为支抗,将犬切牙分别施加牵引力1,2,4,12周,并设置对照组进行比较。牵引后切取犬切牙连同牙龈及牙槽骨组织块,制作组织切片进行骨保护素及核因子κB受体活化因子配体免疫组织化学染色,用Image-Proplus软件半定量分析图像平均吸光度值。 结果与结论：与对照组相比,核因子κB受体活化因子配体和骨保护素分别在在施加牵引力1和2周表达最显著,其平均吸光度值在施加牵引力1和2周时可达到峰值(P < 0.05),随后逐渐下降,施加牵引力12周恢复至对照组水平。结果证实,正畸牙压低移动过程中核因子κB受体活化因子配体及骨保护素的表达变化规律与骨改建过程一致,骨保护素/核因子κB受体活化因子配体系统是牙周组织改建的重要调节因素。     

金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素/核因子κB受体活化因子配体分泌的影响

背景：金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的作用机制尚不清楚。 目的：观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。 方法：切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24 h内的SD大鼠成骨细胞,正常血清组、去卵巢血清组、去卵巢含药血清组分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72 h。采用酶联免疫吸附法检测成骨细胞骨保护素和RANKL的分泌水平。 结果与结论：与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞骨保护素的表达明显降低(P < 0.01),而RANKL的表达明显升高(P < 0.05);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组成骨细胞骨保护素的表达明显升高(P  < 0.05),RANKL 的表达明显降低(P  < 0.05)。说明金乌骨通胶囊可通过增加成骨细胞骨保护素的表达,抑制RANKL的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。     

小分子肽对成骨前体细胞MC3T3-E1骨保护素和核转录因子κB受体活化因子配体表达的影响

背景：体内实验显示,小分子肽能明显增加去卵巢大鼠的骨钙含量,使其骨密度增加,能很好地预防骨质疏松。同时体外实验显示,小分子肽能促进小鼠成骨细胞和成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化,并且可能是通过抑制核转录因子 p50和p65的表达来起作用。而小分子肽对骨保护素/核转录因子κB受体活化因子配体的影响尚不明确。 目的：观察小分子肽对MC3T3-E1在增殖、分化、矿化过程中骨保护素和RANKL表达的影响。 方法：以体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液为空白对照组,50,100 mg/L质量浓度小分子肽作用小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1,分别于作用3,6,12,18,24,30 d后,收集细胞提取蛋白,Western Blot检测骨保护素和核转录因子κB受体活化因子配体蛋白的表达。 结果与结论：50,100 mg/L小分子肽作用MC3T3-E1后能明显促进作用骨保护素的表达(P < 0.01),而对核转录因子κB受体活化因子配体无明显影响。小分子肽作用后MC3T3-E1中骨保护素/核转录因子κB受体活化因子配体的比值要明显高于空白对照组(P < 0.01)。因此,认为小分子肽可以通过增加骨保护素的表达来影响骨保护素/核转录因子κB受体活化因子配体系统,间接地抑制破骨细胞的数量和功能。     

骨代谢中甲状旁腺激素对相关蛋白和核因子κB受体活化因子的调节

背景：甲状旁腺激素是影响骨代谢功能轴最主要的因素。同时也是调控骨保护素和核因子κB受体活化因子配基表达的重要激素。 目的：通过查阅甲状旁腺激素对骨保护素、核因子κB受体活化因子配基调控作用的相关文章,并对其进行综述。 方法：以“甲状旁腺激素,骨保护蛋白,核因子κB受体活化因子”或“Parathyroid hormone, osteoprotegerin, receptor activator of nuclear factor κB ligand”为检索词,由第一作者通过计算机检索 CNKI、HighWire数据库中关于“甲状旁腺激素与骨保护素/核因子κB受体活化因子配基/核因子κB受体活化剂”的相关的论文报告。选择的文章内容与甲状旁腺激素对信号通路的影响有关、近期发表的文献,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入31篇文章。 结果与结论：甲状旁腺激素是调节骨代谢最主要的因素,通过增强破骨细胞活动增强而实现的。核因子κB受体活化因子配基是调节骨吸收的关键因子,它通过与核因子κB受体活化剂结合发挥功能。核因子κB受体活化因子配基与核因子κB受体活化剂结合后,启动核因子κB受体活化因子配基信号转导,骨保护素则与核因子κB受体活化因子配基竞争性结合核因子κB受体活化剂,核因子κB受体活化因子配基/骨保护素比值决定破骨细胞分化、成熟及功能。长时间、大强度的运动条件下,机体内甲状旁腺激素的变化是否对于骨保护素、核因子κB受体活化因子配基有影响,进而调节骨代谢的吸收与合成？还有待进一步的研究。     

低频脉冲电磁场干预绝经后骨质疏松患者血清护骨素及核因子κB受体 活化子配体的变化

背景：脉冲电磁场能克服传统治疗方法的缺陷,对骨质疏松引起的疼痛、骨量减少、骨密度降低具有肯定的治疗作用。 目的：探讨低频脉冲电磁场治疗绝经后骨质疏松的作用机制。 方法：应用双能X 射线骨密度仪测量150 例绝经后妇女腰椎骨密度,按WHO标准诊断,无骨质疏松患者50例、骨质疏松患者100例。将骨质疏松患者随机分为骨质疏松组和低频脉冲电磁场治疗组,分别给予钙剂口服或钙剂口服+连续14 d的低频脉冲电磁场治疗。 结果与结论：各组患者基线资料具有可比性。与无骨质疏松患者比较,骨质疏松患者腰椎骨密度明显降低(P < 0.01),经低频脉冲电磁场治疗后无明显改变(P > 0.05),但患者血清β-1型胶原C-末端肽明显降低(P < 0.05)、骨钙素明显升高(P < 0.01)。与骨质疏松组比较,其他两组患者血清护骨素明显升高(P < 0.05);低频脉冲电磁场治疗组患者血清核因子κB受体活化子配体明显降低(P < 0.05)。说明低频脉冲电磁场干预14 d对骨质疏松有良好的防治作用。     

核因子κB受体活化因子配体诱导形成的成熟破骨细胞

背景：破骨细胞作为一种终末细胞,获取困难,而且没有成熟破骨细胞株等因素限制了其应用。先前国内外对破骨细胞的获取一般采用基质细胞诱导培养或共培养,或运用核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子共同作用诱导形成成熟的破骨细胞。 目的：观察小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的一般生物学特征,分析其在核因子κB受体活化因子配体诱导下形成成熟破骨细胞的可行性。 方法：培养RAW264.7后,用核因子κB受体活化因子配体诱导RAW264.7细胞7 d后观察抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果,以抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性,细胞核≥3个为破骨细胞。以鬼笔环肽荧光染色观察纤维性肌动蛋白环,甲苯胺蓝染色观察牛骨片表面的吸收陷窝情况。 结果与结论：核因子κB受体活化因子配体可诱导RAW264.7细胞形成抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的多核细胞,形成纤维性肌动蛋白环,电镜下可见骨片上圆形或椭圆形的吸收陷窝。提示RAW264.7是一种较好的破骨前体细胞模型,可用于破骨细胞分化研究。单用核因子κB受体活化因子配体诱导RAW264.7细胞分化成熟,减少了巨噬细胞集落刺激因子的应用,使培养体系更加简单,易于操作,诱导出的细胞纯度高,适合于破骨细胞的生物学和生化研究。     

EZH2对胃癌细胞核因子κB靶基因的调节作用

 目的: 探讨zeste同源物增强子2 (EZH2) 蛋白的表达对胃癌细胞的影响以及可能的作用机制。方法: 用real-time PCR 和Western blot实验检测正常胃黏膜上皮细胞和不同胃癌细胞系中EZH2的mRNA和蛋白表达;采用细胞生长、细胞迁移以及软琼脂增殖实验测定EZH2对胃癌细胞系致癌能力的影响;利用萤光素酶报告基因和real-time PCR检测EZH2对核因子κB靶基因的调节作用;用免疫共沉淀法检测EZH2和p65的相互作用。结果: 与正常胃上皮细胞相比,胃癌细胞系中的EZH2过量表达(P<0.05)。EZH2特异性抑制剂腺苷类似物DZNep处理或shEZH2抑制了AGS和SNU-16细胞系的细胞活力。此外,DZNep和shEZH2 抑制了AGS细胞迁移及软琼脂细胞形成的克隆数目(P<0.05)。shEZH2 下调了核因子κB报告基因或白细胞介素8报告基因的活性以及核因子κB靶基因白细胞介素8、趋化因子配体5及趋化因子配体20的表达(P<0.05)。此外,EZH2可以特异性与p65蛋白相互作用。结论: EZH2 通过调节核因子κB靶基因介导胃癌细胞的生长。     

腰突颗粒对人髓核细胞核因子κB信号通路的影响

BACKGROUND: Nuclear factor-κB (NF-κB) is highly expressed in the degenerated intervertebral disc. The Herbal Compound formula Yaotu Granules for lumbar disc herniation has achieved good clinical results; however, the underlying mechanisms remain poorly understood. OBJECTIVE: To explore mechanisms underlying the effects of the drug serum of Yaotu Granules on NF-κB signaling pathway. METHODS: Eight New Zealand white rabbits were randomly divided into normal saline group, low-, middle-, and high-dose drug groups. Normal saline, 10, 20, and 40 mL of water decoction of Yaotu Granules were administered intragastrically in the normal saline, low-, middle-, and high-dose drug groups for 7 days, respectively. The drug serum of Yaotu Granules was prepared using serum samples obtained from the common carotid artery at 2 hours after the last administration. Human nucleus pulposus cells were maintained in DMEM containing 10% (v/v) drug serum for 24 hours. RESULTS AND CONCLUSION: The expression levels of interleukin (IL)-8, tumor necrosis factor (TNF)-α, p-P65, P50, IκB-α (the NF-κB inhibitor), and IκB kinase β (IKK-β) mRNA in human nucleus pulposus cells in three drug serum groups were significantly decreased compared with the normal saline group; in addition, a similar change in the expression levels of p-P65, P50, IκB-α, and IKK-β protein between groups were detected. Noticeably, the expression levels of IL-8, TNF-α, p-P65, P50, IκB-α, and IKK-β mRNA, as well as the expression levels of p-P65, P50, IκB-α, and IKK-β protein were gradually decreased with the increased drug dose. All these results suggest that the drug serum of Yaotu Granules can protect nucleus pulposus cells and delay their degeneration through blocking NF-κB signaling pathway. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

运动状态下白细胞介素6介导骨保护素相关因子信号通路对骨代谢的调节

背景：骨保护素-核因子κB受体活化因子配体-核因子κB受体活化因子信号通路是调节骨代谢的经典通路,白细胞介素6和该信号通路存在相关性,运动对骨代谢的影响机制与二者的调节作用密切相关。 目的：研究运动状态下白细胞介素6介导骨保护素-核因子κB受体活化因子配体-核因子κB受体活化因子信号通路对骨代谢活动的调节,揭示运动状态下此信号通路的内在联系。 方法：检索CNKI、EBSCO和Elsevier数据库中有关运动应激、白细胞介素6、骨保护素-核因子κB受体活化因子配体-核因子κB受体活化因子信号通路的论文,选取其中39篇具有代表性和最新研究进展的论文为参考文献进行分析整合,揭示运动、白细胞介素6及信号通路之间的关系。 结果与结论：目前研究表明白细胞介素6和骨保护素-核因子κB受体活化因子配体-核因子κB受体活化因子信号通路在骨代谢过程中密切相关,在不同运动负荷和强度状态下白细胞介素6和该信号通路的表达,呈现出特异性的运动应激的反应与适应。研究结果不仅有助于揭示运动健骨机制,而且可应用于骨关节病的预防与治疗领域。     

白细胞介素6受体抗体对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核因子-κB受体激活因子配体表达影响的实验研究

目的 探讨白细胞介素6受体抗体(IL-6R-Ab)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖与核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)表达的影响.方法 从膝关节镜术中获取RA患者滑膜组织,培养成纤维细胞.实验分为4组:甲氨蝶呤(MTX)组、IL-6R-Ab组、IL-6R-Ab联合MTX组、空白对照组.分别采用CCK-8检测IL-6R-Ab、MTX对RA滑膜成纤维细胞增殖活力影响;荧光定量(FQ)-PCR检测各组培养体系中的滑膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达.结果 CCK-8检测结果显示:与空白对照组比较,MTX组、IL-6R-Ab组及联合组成纤维细胞的生长受到抑制(F=54.64,P＜0.05);IL-6R-Ab联合MTX组RA滑膜成纤维细胞的生长显著受到抑制(P＜0.01);但MTX组与IL-6R-Ab组未见统计学差异.ELISA检测结果提示:与MTX组相比,IL-6R-Ab组的RANKL表达量降低(P＜0.05),IL-6R-Ab联合MTX组的RANKL表达量明显降低(P＜0.01).FQ-PCR检测显示,MTX组、IL-6R-Ab组、联合组均能抑制RANKL mRNA的表达(F =32.17,P＜0.05);与MTX组或IL-6R-Ab组相比,IL-6R-Ab联合MTX组RANKL mRNA的表达也受到抑制(P＜0.05).结论 IL-6R-Ab单独或联合MTX使用均能抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖活力,显著抑制RANKL的表达.本研究为IL-6R-Ab防治RA滑膜成纤维细胞所造成的关节破坏提供细胞与分子生物学方面的理论依据.     

假体磨损颗粒钴铬离子影响成骨细胞增殖及RANKL、骨保护素的表达

背景：金属-金属假体置入体内后可以发生腐蚀或磨损,释放镍、钴、铬、钛等金属离子,诱导局部炎性因子的释放。 目的：观察Co²⁺、Cr³⁺对小鼠成骨细胞增殖的影响,以及成骨细胞暴露在Co²⁺ 、Cr³⁺条件下RANKL、骨保护素基因的表达。 方法：体外培养成骨细胞,实验分两组,对照组给予生理盐水,离子组给予钴、铬离子干预。 结果与结论：显微镜直接计数法显示干预后1~6 d对照组随时间推移细胞数目显著增加,离子组则增加不明显。共培养24,48 h后,RT-PCR结果显示离子组RANKL、骨保护素基因表达较对照组均增加,以RANKL增加更显著(P < 0.05),RANKL/OPG mRNA的比率也明显增加。提示金属离子对成骨细胞的增殖有显著抑制作用,且可刺激成骨细胞RANKL、骨保护素mRNA的表达。     

黄芪三仙汤干预成骨细胞护骨素及护骨素配体的表达

背景：长期临床研究表明黄芪三仙汤对骨质疏松症有一定的治疗作用,基础实验研究也表明黄芪三仙汤能改善实验动物的生物力学指标。在此基础上实验拟从细胞分子水平上探讨黄芪三仙汤对成骨细胞的相关作用。 目的：观察黄芪三仙汤对体外培养成骨细胞护骨素、护骨素配体基因调节的作用,探讨黄芪三仙汤治疗骨质疏松的作用机制。 方法：制备黄芪三仙汤和仙灵骨葆胶囊含药血清及空白血清,对体外培养新生SD大鼠成骨细胞进行干预,应用细胞形态观察、MTT、Western blot分析法及蛋白浓度测定法,观察各含药血清对体外培养成骨细胞的增殖及成骨细胞护骨素、护骨素配体表达的影响。 结果与结论：经药物干预后成骨细胞变为长梭形、条索状,融合成片,分界较为模糊,细胞生长较密集。黄芪三仙汤可明显促进成骨细胞护骨素蛋白浓度的提高(P < 0.01),同时也提高了护骨素配体蛋白浓度(P < 0.01),而护骨素/护骨素配体浓度比例水平明显升高(P < 0.01)。结果可见黄芪三仙汤可能是通过调节成骨细胞分化调控因子护骨素、护骨素配体的表达来调节成骨细胞的增长,从而实现其对骨质疏松症的治疗作用。     

应力刺激与骨保护蛋白、核因子κB受体活化因子及其配体骨代谢信号通路**

背景：骨保护蛋白、核因子κB受体活化因子及其配体(osteoprote-gerin/ ligand of receptor activator of NF-κB/receptor activator of NF-κB,OPG/RANKL/RANK)骨代谢信号通路是对应力敏感的通路之一。不同性质的运动会产生不同的机械应力刺激,影响骨代谢信号通路。 目的：观察不同性质的运动对OPG/RANKL/RANK信号通路的影响。 方法：由第一作者于2000/2011通过计算机检索 CNKI,HighWire和Elsevier数据库中关于“应力刺激与OPG/RANKL/RANK”的相关的论文报告。以“应力刺激,OPG/RANKL/RANK”或“应力刺激,骨代谢”为检索词进行检索。选择的文章内容与应力刺激对信号通路的影响有关,选择相关近期发表的文献或者是发表在权威期刊的文献。共检索到215篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入31篇文章。 结果与结论：运动对骨骼不断产生机械应力刺激,这种机械应力刺激可以通过影响成骨细胞和破骨细胞的OPG/RNAKL/RANK信号调节系统而调节骨组织代谢。但是相关文献中的研究结果不一致,有待进一步的研究。      

低频振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损核因子受体激活剂/核因子受体激活剂配体/骨保护素通路变化的体内实验*

背景：关于低频振动对体内骨髓基质干细胞成骨分化的实验缺乏报道。 目的：通过体内实验研究不同频率振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损过程中核因子受体激活剂/核因子受体激活剂配体/骨保护素调节通路的变化,并初步探讨其机制。 方法：取新西兰兔骨髓基质干细胞和脱钙骨基质制备复合物,80只新西兰兔制作骨缺损模型,骨缺损区植入复合物后随机数字表法均分组对照组、12.5,25,50,100 Hz振动组,振动组于第7天开始接受不同频率振动干预5周,振动结束后分别对骨保护素mRNA、核激活因子受体配体mRNA进行检测。 结果与结论：与对照组比较,各振动组骨髓基质干细胞骨保护素、核激活因子受体配体基因表达明显上调(P < 0.05),以25,50 Hz显著(P < 0.01);但100 Hz振动时表达则下调(P < 0.05)。说明给予一定频率振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损,可能与其促进骨保护素基因表达上调有关,理想的振动频率为25,50 Hz。     

Influence of receptor activator of nuclear factor kappa B on human aortic valve myofibroblasts

Calcific aortic valve stenosis, the main heart valve disease in the elderly, is based on progressive calcification and fibrous thickening of the valve. Several reports addressed the pathogenesis of tissue calcification in this disorder, but few data exist on the molecular mechanisms of the fibrosis and remodeling of the extracellular matrix. The cytokine "receptor activator of nuclear factor kappa B ligand" (RANKL), is expressed in stenotic aortic valves and involved in valvular calcification during calcific aortic valve stenosis. The present study aimed to assess the influence of RANKL on the molecular mechanisms of connective tissue remodeling. In an established cell culture model of primary human aortic valve myofibroblasts, stimulation with RANKL increased cell proliferation as compared to medium alone. Matrix metalloproteinase (MMP)-1 was detectable time-dependently in conditioned media from RANKL-stimulated cells, but absent in media from control cells. MMP-1 activity was increased by RANKL, as measured by collagenase activity assay. Zymography showed an increase in active MMP-2 in RANKL-stimulated cells. These results support the concept that MMPs are involved in the connective tissue remodeling during calcific aortic valve stenosis. RANKL might regulate this process by promoting cell proliferation and MMP expression and activation.     

核因子κB受体活化因子配基在兔下颌骨牵引成骨过程中表达水平的变化

目的:研究骨保护素配体即核因子kB受体活化因子配基(RANKL)在下颌骨牵引成骨过程中不同时期的表达水平变化,探讨其在成骨过程中的机制.方法:在成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,另一侧下颌骨行骨切开,作为对照组,分别于牵引完成后的第1、7、14、21、28天处死一组动物,取牵引区新生骨痂行RANKL免疫组织化学显色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨中RANKL表达情况,利用SPSS软件采用方差分析进行统计分析.结果:下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组织化学显色显示RANKL主要定位于骨髓基质细胞的胞质中,其中以稳定期的第1、14天的表达最强.在稳定期第1、14天,实验组较对照组RANKL表达的阳性细胞率及阳性面积百分比差异有统计学意义,以后逐渐下降,第28天仅有微弱表达.结论:RANKL可能在牵引成骨过程中特别是调控组织细胞应力信号传递的早期发挥破骨作用.     

RANK (receptor activator of nuclear factor kappa B) and RANK ligand are expressed in giant cell tumors of bone

In giant cell tumors of bone (GCTBs), the mesenchymal stromal cells are the neoplastic cells and induce recruitment and formation of osteoclasts (OCs). Studies on recently discovered members of the tumor necrosis factor receptor-ligand family have demonstrated a crucial role of RANKL (receptor activator of nuclear factor kappa B [RANK] ligand) expressed by osteoblast/stromal cells and of its receptor RANK expressed by OCs during OC differentiation and activation. OCs typically are present in large numbers in GCTBs, suggesting that these tumors may contain cells expressing factors that stimulate OC precursor recruitment and differentiation. We used immunohistochemical analysis to study RANKL and RANK expression in 5 GCTBs. Multinucleated cells and some mononuclear cells showed strong positive staining with anti-RANK antibodies; RANKL was present in a subset of mononuclear cells that did not express the hematopoietic lineage cell marker CD45, a feature that identified them as mesenchymal tumor cells. Our results suggest that RANKL expression may have a role in the pathogenesis of GCTBs and in the formation of the large OC population present in these tumors.