维生素A对体外培养小鼠精原干细胞生长增殖的影响

背景:维生素A在体内对精原干细胞生长具有重要作用,目前还没有发现在体外培养过程中能够很好促进精原干细胞生长与分化的诱导物质。目的:探讨维生素A对体外培养小鼠精原干细胞生长增殖的影响。方法:无菌收集5～7d龄昆明雄性小鼠双侧睾丸,采用差速贴壁联合非连续性Percoll密度梯度离心法分离纯化精原干细胞无菌取出12～15d龄昆明雄性小鼠双侧睾丸,酶消化法分离纯化Sertoli细胞,贴壁并极化后作为饲养层,将精原干细胞接种在单层Sertoli细胞上。设立2组,实验组向DMEM/F12培养液中加入1g/L维生素A,对照组不添加维生素A。采用酶联仪测定精原干细胞生长增殖情况,流式细胞仪检测精原干细胞生长周期。结果与结论:共培养6,9,12,15d时,实验组精原干细胞吸光度值明显高于对照组(P0.05或0.01)。随共培养时间的延长,实验组精原干细胞S期染色体含量逐渐增多,然后又逐渐下降,开始另一个分裂周期;与实验组比较,对照组精原干细胞S期染色体含量增长缓慢(P0.05)。小鼠精原干细胞在体外培养过程中,维生素A可促进其增殖分化。     

胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β体外诱导中脑神经干细胞的分化

背景:在神经干细胞移植治疗帕金森病中,移植细胞的数量及多巴胺能神经元的分化比率是必须解决的问题,而有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的大量定向诱导分化是解决问题的关键所在。目的:探讨胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β体外诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化。方法:分离妊娠12d小鼠胚胎腹侧中脑,经胰酶消化和机械吹打制成单细胞悬液,离心过滤后机械方法传代培养5~7d的神经球,分组进行诱导分化10~12d,待80%细胞从神经球迁移出来,分化为单细胞时,进行免疫细胞化学鉴定及流式细胞术检测酪氨酸羟化酶阳性细胞率。结果与结论:神经球细胞表达巢蛋白抗原,能分化为神经元特异性烯醇化酶和胶原纤维酸性蛋白阳性细胞。胶质源性神经营养因子与白细胞介素1β在体外能明显提高中脑神经干细胞分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元的比例,胶质源性神经营养因子诱导组、白细胞介素1β诱导组和两者联合应用均较空白对照组比例高,尤其是两者联合应用作用更显著,说明胶质源性神经营养因子、白细胞介素1β可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元。     

Accutase酶在精原干细胞原代分离中的应用

背景：有研究报道胰酶消化在一定程度上会破坏精原干细胞表面抗原并影响细胞活性,对后续的细胞分选及下游实验有一定影响。Accutae酶具有蛋白酶和胶原酶的双重活性,在消化结束时无需终止和清洗,有保护细胞表面抗原的特殊作用,因而被应用于多种干细胞的培养及消化传代中。 目的：比较Accutase酶和胰酶在原代消化分离睾丸组织获取精原干细胞中的作用。 方法：新生5-7 d昆明雄鼠45只,取双侧睾丸胶原酶初步消化,混悬液定容后分为Accutase酶组、胰酶组、混合酶组(透明质酸酶+胰酶组),不同组别小鼠睾丸组织分别于酶消化1,3,5 min后显微镜下观察并拍照,比较各组不同时间点的消化状态及形成单细胞所需的时间;获取单细胞悬液后分别计算单位体积内所得细胞总数及死亡率;通过差速贴壁方法去除间质细胞及支持细胞,经包被有干细胞标志分子CD90.2的免疫磁珠进行分选,将所得CD90+及CD90-细胞用精原干细胞表面标志分子——胶质细胞源性神经营养因子受体α1标记,流式细胞仪检测不同组别CD90+及CD90-细胞群中胶质细胞源性神经营养因子受体α1精原干细胞的阳性率。 结果与结论：不同类别的消化酶对小鼠睾丸的消化作用有明显差异,其中 Accutase酶能更快获取单细胞悬液,其细胞团及破膜细胞明显少于胰酶组和混合酶组,其所得细胞总数高于其余2组,而细胞死亡率则低于其余2组。差速贴壁后细胞免疫磁珠分选结果显示Accutase酶组CD90+精原干细胞得率高,流式分选结果显示胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90+细胞为72.24%,高于胰酶组及混合酶组(51.16%,71.27%);而胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90-细胞比率(15.03%)则低于胰酶组及混合酶组(18.8%,24.23%)。结果表明Accutase酶在分离和获取精原干细胞实验中效果优于胰酶。     

胶质源性神经营养因子基因修饰骨髓间充质干细胞与缺氧复氧神经细胞的共培养

背景：课题组前期研究表明,胶质源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞能稳定地表达胶质源性神经营养因子 mRNA,但骨髓间充质干细胞/胶质源性神经营养因子分泌的胶质源性神经营养因子蛋白对缺氧复氧损伤的神经细胞是否有积极影响,尚不清楚。 目的：观察胶质源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞对缺氧复氧神经细胞的保护作用。 方法：胶质源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞经诱导后与缺氧复氧神经细胞共培养,采用Hoechst33258和细胞免疫荧光染色分别检测神经细胞凋亡及生长相关蛋白43在共培养细胞中的表达。 结果与结论：骨髓间充质干细胞/胶质源性神经营养因子组的神经细胞凋亡率显著低于骨髓间充质干细胞组和缺氧组(P < 0.05),骨髓间充质干细胞/胶质源性神经营养因子组表达生长相关蛋白43的吸光度值明显高于骨髓间充质干细胞组(P < 0.05)。提示骨髓间充质干细胞/胶质源性神经营养因子通过抑制缺氧复氧神经细胞凋亡和促进共培养细胞生长相关蛋白43表达发挥神经保护作用。     

低氧环境下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑神经干细胞的分化

背景：有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的定向诱导分化是神经干细胞移植治疗帕金森病的关键所在。 目的：观察低氧条件下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑源性神经干细胞向多巴胺能神经元的分化。 方法：体外分离培养孕12 d胚鼠腹侧中脑组织,制成单细胞悬液,在含碱性成纤维细胞生长因子和B27的无血清培养基中培养并传代,分别置于常氧(体积分数21%O₂)或低氧(体积分数3%O₂)环境下增殖5~7 d后,接种于含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,或含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12+1 µg/L胶质源性神经营养因子。 结果与结论：低氧环境下分化10~12 d,中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化均高于常氧组,在胶质源性神经营养因子诱导下向多巴胺能神经元分化比例更高,表型更成熟。说明低氧环境下胶质源性神经营养因子可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元。     

脑外源性神经因子基因修饰神经干细胞对脑卒中的神经保护机制

背景：脑外源性神经因子-胶质源性神经营养因子对大脑神经元具有特异性的营养作用,是脑卒中治疗中重要的神经营养因子。 目的：探讨胶质源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用机制。 方法：构建大鼠胶质源性神经营养因子基因pAdEasy-l-pAdTrackCMV重组体,并对新生大鼠皮质神经干细胞进行分离、培养。利用胶质源性神经营养因子基因重组腺病毒对神经干细胞进行转染,再将细胞悬液注射至暂时性(2 h)大脑中动脉缺血模型大鼠右侧脑室中,同时设单纯神经干细胞组和对照组进行对比。 结果与结论：与神经干细胞移植组比较,联合移植组再灌注2,3周的神经功能缺损评分,再灌注7 d脑缺血损伤面积均显著减小(P < 0.05);不同再灌注时间点缺血区域的神经干细胞数量神经干细胞移植组均显著少于联合移植组(P < 0.05)。再灌注7,14 d,两组Syn,PSD-95蛋白表达均高于对照组(P < 0.05),联合移植组升高较为明显。结果表明,利用经胶质源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞治疗大鼠脑卒中可以发挥出较好的神经保护作用,效果略优于单纯神经干细胞治疗。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

胶质细胞源性神经营养因子对猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响

背景：鉴于骨髓间充质干细胞体外分化为神经样细胞的最终研究目的,是将诱导后的细胞移植入体内参与损伤神经系统的修复过程,因此,保证移植细胞的活性显得十分重要。 目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子对隐丹参酮体外诱导猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的保护作用。 方法：以隐丹参酮为诱导剂诱导第8代猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,应用流式细胞仪检测不同时段诱导细胞的凋亡百分比(每间隔0.5 h为1组,共12组)。选择细胞凋亡百分比较高的一个时段,观察添加不同质量浓度胶质细胞源性神经营养因子(0-100 μg/L,共11组)对诱导细胞凋亡的影响。 结果与结论：诱导后细胞凋亡百分比逐渐升高,约4 h时达到峰值,维持约1 h后下降(P < 0.05)。 随着胶质细胞源性神经营养因子质量浓度由0 μg/L提高到30 μg/L,细胞凋亡百分比逐渐下降(P < 0.05),当胶质细胞源性神经营养因子质量浓度超过30 μg/L后,细胞凋亡水平受胶质细胞源性神经营养因子质量浓度影响不再显著。结果可见胶质细胞源性神经营养因子在隐丹参酮体外诱导猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞过程中具有保护作用。     

以GDNF为核心的哺乳动物精原干细胞调控网络

睾丸中的胶质细胞源神经营养因子由支持细胞、管周细胞、精母细胞和球形精子合成和分泌,是调节精原干细胞自我更新和分化的关键因子;GDNF通过与SSCs膜上受体GFRα1结合形成GDNF-GFRα1复合物,再结合并活化RET,最后激活MAPK、SFK和PI3K-AKT信号通路并达到调控SSCs自我更新和分化的目的。     

控释神经营养因子与细胞移植减少损伤脊髓的胶质瘢痕

背景：前期研究发现控释胶质细胞源性神经营养因子与骨髓间充质干细胞源神经元样细胞联合移植可有效促进猕猴脊髓损伤后运动功能和感觉功能的恢复。 目的：观察控释胶质细胞源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植抑制猴脊髓损伤后胶质瘢痕形成的作用是否优于单纯细胞移植。 方法：取12只恒河猴,采用改良Allen氏法制作急性重度脊髓损伤模型,随机数字表法分为3组,实验组以控释胶质细胞源性神经营养因子联合自体骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植修复,对照组以自体骨髓间充质干细胞源神经元样细胞移植修复,空白对照组以磷酸盐缓冲液修复。修复后5个月,取出脊髓组织制成石蜡标本,应用免疫组织化学染色显示胶质瘢痕的形态特征、构成特点及瘢痕中神经纤维的再生情况,检测胶质瘢痕面积及胶质纤维酸性蛋白染色的平均吸光度值。 结果与结论：脊髓损伤部位胶质瘢痕由混合性增生的星形胶质细胞和组织细胞构成。空白对照组脊髓胶质瘢痕累及范围广,星形胶质细胞增生显著,神经丝蛋白免疫组织化学染色阴性,胶质瘢痕面积、胶质纤维酸性蛋白染色平均吸光度值高于实验组与对照组(P < 0.05);实验组、对照组脊髓胶质瘢痕累及范围较局限,神经丝蛋白免疫组织化学染色显示有少量神经纤维通过瘢痕区,并且实验组胶质瘢痕面积、胶质纤维酸性蛋白染色平均吸光度值低于对照组(P < 0.05)。结果表明,控释胶质细胞源性神经营养因子联合骨髓间充质干细胞源性神经元样细胞移植可更强抑制脊髓损伤后胶质瘢痕的形成。     

骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元的诱导分化

背景:近年来研究发现,神经营养因子在骨髓间充质干细胞的分化中发挥重要作用。目前脑组织中具有再生能力的神经干细胞在体外是否具有直接诱导骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元的作用还未见报道。目的:观察大鼠间充质干细胞在胶质细胞源性神经营养因子与神经干细胞共培养两种诱导条件下体外分化成多巴胺能神经元的能力。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分2组培养,一组细胞应用胶质细胞源性神经营养因子单独诱导,另一组细胞与已培养成球的神经干细胞共培养进行诱导,共培养之前行Brdu标记。诱导3d后以免疫组织化学法检测各组贴壁细胞神经元特异性标志物神经原纤维和多巴胺能神经元特异性标志物酪氨酸羟化酶的表达,观察间充质干细胞的分化情况。结果与结论:胶质细胞源性神经营养因子单独诱导组间充质干细胞在诱导24h后胞体回缩呈锥形,突起延长且数量增多,有神经元样形态,且细胞间相互连接成网络状,3d后部分细胞表达神经原纤维,其中少部分同时表达酪氨酸羟化酶。与神经干细胞共培养组神经干细胞球很快解离,迅速贴壁,共培养的贴壁细胞大量增殖且多呈神经元样,胞体细长多突起,相互间连接成网,多数贴壁细胞分别单独表达神经原纤维和酪氨酸羟化酶,少数细胞可见Brdu/神经原纤维,Brdu/胶质纤维酸性蛋白,Brdu/酪氨酸羟化酶双标阳性。提示间充质干细胞在胶质细胞源性神经营养因子、神经干细胞存在的情况下可定向转化为神经元,并有向多巴胺能神经元分化的可能。在该实验条件下胶质细胞源性神经营养因子效果好于神经干细胞。     

Spermatogonial stem cells: characteristics and experimental possibilities

The continuation of the spermatogenic process throughout life relies on a proper regulation of self-renewal and differentiation of the spermatogonial stem cells. These are single cells situated on the basal membrane of the seminiferous epithelium. Only 0.03% of all germ cells are spermatogonial stem cells. They are the only cell type that can repopulate and restore fertility to congenitally infertile recipient mice following transplantation. Although numerous expression markers have been helpful in isolating and enriching spermatogonial stem cells, such as expression of THY-1 and GFRalpha-1 and absence of c-kit, no specific marker for this cell type has yet been identified. Much effort has been put into developing a protocol for the maintenance of spermatogonial cells in vitro. Recently, coculture systems of testicular cells on various feeder cells have made it possible to culture spermatogonial stem cells for a long period of time, as was demonstrated by the transplantation assay. Even expansion of testicular cells, including the spermatogonial stem cells, has been achieved. In these culture systems, hormones and growth factors are investigated for their role in the process of proliferation of spermatogonial stem cells. At the moment the best culture system known still consists of a mixture of testicular cells with about 1.33% spermatogonial stem cells. Recently pure SV40 large T immortalized spermatogonial stem cell lines have been established. These c-kit-negative cell lines did not show any differentiation in vitro or in vivo. A telomerase immortalized c-kit-positive spermatogonial cell line has been established that was able to differentiate in vitro. Spermatocytes and even spermatids were formed. However, spermatogonial stem cell activity by means of the transplantation assay was not tested for this cell line. Both the primary long-term cultures and immortalized cell lines have represented a major step forward in investigating the regulation of spermatogonial self-renewal and differentiation, and will be useful for identifying specific molecular markers.     

神经干细胞培养及其影响因素

背景：神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点。如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提。 目的：探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参考。 方法：①神经干细胞分离和培养：分离出生24 h内SD大鼠的大脑,剪碎离心后以1×10⁸ L^-1的浓度接种,经含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基预培养4 h后改用无血清条件培养基(DMEM/F12,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27)培养,2 d或3 d换液1次,6 d时传代。②神经干细胞鉴定：倒置显微镜下观察细胞形态及生物学特性;免疫组化检测第3代细胞神经巢蛋白表达和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶和神经胶质酸性蛋白的表达。 结果与结论：出生24 h的新生大鼠可获得足量的神经干细胞;血清预培养可提高神经干细胞的增殖和存活率;免疫组化结合血清诱导分化可对培养的神经干细胞进行定性鉴定。取材时间、细胞接种密度、传代时间、细胞因子、血清等多种因素都将影响神经干细胞的培养质量。     

不同培养基培养人脐血间充质干细胞的差异

背景：脐血间充质干细胞为干细胞领域的研究热点,但目前传代及扩增此类细胞尚无简单、有效、完美培养方法。 目的：采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质干细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质干细胞的方法。 方法：无菌条件下取正常足月剖宫产新生儿的脐血,随机分为5组：低糖DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)组、高糖DMEM组、α-DMEM组、低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM +骨髓间充质干细胞培养上清组。用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞。将脐血单个核细胞接种于含体积分数为10%胎牛血清的上述培养基中,放置于37 ℃、体积分数为5%的CO2培养箱内培养,倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化并用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。 结果与结论：①各组间充质干细胞培养48 h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较：低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM +骨髓间充质干细胞培养上清组的贴壁细胞数明显多于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P < 0.05),细胞存活率亦明显高于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P < 0.05)。②各组间充质干细胞在不同培养时间下生长状态的比较：培养第3,6,9,12,15,18,21天低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组细胞增殖的速度均快于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P < 0.05)。低糖DMEM+干细胞因子组与低糖DMEM +骨髓间充质干细胞培养上清组比较差异无显著性意义。结果可见人脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞培养上清或干细胞因子共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。     

Mechanisms of muscle stem cell expansion with cytokines.

Stem cell expansion and proliferation are important for cell transplantation and stem cell-mediated applications. While we have demonstrated that muscle stem cells can be obtained from adult skeletal muscle tissue, these cells represent only a small percentage of the muscle-derived cells and require in vitro expansion for successful stem cell-mediated therapies. In this study, we have examined the potential of several cytokines to stimulate stem cell growth by combining a non-exponential mathematical model with a unique cell culture system. The growth kinetics of two populations of muscle stem cells were characterized in culture medium supplemented with epidermal growth factor (EGF), fibroblast growth factor-2 (FGF-2), insulin-like growth factor-1 (IGF-1), FLT-3 ligand, hepatocyte growth factor, or stem cell factor (SCF). The division time (DT) and fraction of mitotically active cells were investigated as key parameters to further understand the mechanism of the expansion of the stem cell populations. Our results show that expansion of the freshly isolated, muscle-derived stem cells (MDSC) occurred by recruiting cells into the cell cycle in the presence of EGF, IGF-1, and SCF. However, expansion of the cultured stem cell clone, MC13, is attributed to a reduction of the length of the cell cycle in the presence of FGF-2, EGF, IGF-1, and SCF. Both MDSC and MC13 growth were inhibited in the presence of FLT-3 ligand by increasing the length of the cell cycle. Our results suggest that EGF, IGF-1, FGF-2, and SCF are important cytokines for stimulating the proliferation of MDSC. In addition, this study illustrates that expansion of stem cells occurs through different mechanisms, which consequently demonstrates the importance of monitoring several parameters of cell growth, such as DT and dividing fraction, following stimulation with growth factors.     

心脏干细胞分离培养及其增殖与迁移的机制

文章快速阅读：文题释义： 干细胞niche：在心脏干细胞的自我更新、生长增殖、多向分化和持续存活等方面需要依赖特定的微环境,即干细胞niche。干细胞niche对干细胞的作用是通过多种因素起作用的,例如干细胞间的相互作用、干细胞与邻近分化细胞的相互作用、干细胞与细胞因子、生长因子及黏附因子的相互作用等,干细胞niche调控干细胞自我更新、多向分化是一个复杂的网络。 心肌重构：是由一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功能和表型的变化,这些变化包括心肌细胞肥大、细胞凋亡、胚胎基因和蛋白质的再表达、心肌细胞外基质量和组成的变化。 摘要 背景：体外环境下进行心脏干细胞培养的过程中,生长微环境可能会对细胞的的增殖等产生一定的影响。 目的：在体外环境下培养大鼠心脏干细胞,探讨心脏干细胞增殖、迁移的可能机制。 方法：纳入SD大鼠10只,获得心肌组织块进行原代和传代培养。收集第3代心脏干细胞进行免疫荧光染色,进行干细胞鉴定,检测干细胞生长因子受体(c-kit)和CD45、CD90的表达。收集培养后的组织块,随机分为2 份,一份用多聚甲醛进行固定,常规石蜡包埋后切片,进行苏木精-伊红染色、Masson染色以及细胞凋亡检测;另一份在培养基中添加EdU标记增殖细胞,采用免疫荧光染色检测c-kit阳性细胞以及基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1等表达。 结果与结论：①细胞鉴定结果：心肌组织培养7-10 d后有明亮的圆形细胞长出,细胞贴壁后呈梭状,生长、增殖能力旺盛。免疫荧光染色可观察到大量细胞呈c-kit、CD45阳性表达,CD90阴性表达;②细胞凋亡情况：培养的组织块切片后染色见大量新生细胞生长的同时伴随心肌细胞的凋亡;③免疫荧光染色结果：经EdU标记后阳性细胞分布于心肌间隙,基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1少量表达,但周围心肌组织上述3因子表达明显增多。④结果表明,心肌组织体外培养可获取心脏干细胞,伴随细胞增殖和迁移,其机制与基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1的表达有关。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程 ORCID: 0000-0002-7743-0450(侯波)     

前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子干预人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的变化

文题释义：前列腺素E1：是一种生物活性物质,广泛存在于体内各组织细胞,由BERGSRTOEM等于1960年首先分离获得,并详细研究了其分子结构,具有舒张血管、稳定细胞膜降低血小板黏附率、改善血液黏度及抗炎等作用,可促进骨髓间充质干细胞和神经干细胞的增殖、迁移,并促进细胞分泌血管内皮生长因子,进而促进血管生成。碱性成纤维细胞生长因子：是一种肝素黏合多肽,也是一种重要的潜在有丝分裂原,属于成纤维细胞生长因子家族,对细胞有丝分裂及分化具有很强的调节作用,特别是对中胚层和神经外胚层来源的细胞作用更强,可促进细胞生长,研究发现牙髓中的成纤维细胞可表达碱性成纤维细胞生长因子,在体外能明显促进人牙髓干细胞增殖。  摘要背景：前列腺素E1及碱性成纤维细胞生长因子可促使人牙髓干细胞增殖,但两者联合应用对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响还未见研究。目的：探究前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞增殖和血管生成能力的影响。方法：①体外分离培养人牙髓干细胞,经表面标志物检测鉴定后,分别以5,10,20,50,100 μg/L前列腺素E1及5,10,20,50,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子单独作用于体外培养的人牙髓干细胞,以未加药物处理的细胞作为空白对照组,采用CCK-8法分别在1,2,3 d检测人牙髓干细胞增殖情况,筛选最佳药物作用质量浓度和时间。②将体外培养的人牙髓干细胞分为4组：空白对照组、前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组、前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组,采用CCK-8法检测人牙髓干细胞增殖情况,然后提取人牙髓干细胞条件培养基,以ELISA测定条件培养基中血管内皮生长因子、内皮抑素水平,以小管形成实验检测人牙髓干细胞条件培养基干预后人脐静脉血管内皮细胞的体外小管形成能力。结果与结论：①前列腺素E1、碱性成纤维细胞生长因子的最佳作用质量浓度均为20 μg/L,最佳作用时间为2 d;②与空白对照组相比,前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组、前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组人牙髓干细胞相对增殖率、血管内皮生长因子水平、人脐静脉血管内皮细胞体外血管生成能力均显著升高(P < 0.05),内皮抑素水平显著降低(P < 0.05);前列腺素E1+碱性成纤维细胞生长因子组上述各指标均优于前列腺素E1组、碱性成纤维细胞生长因子组(P < 0.05);③结果表明,前列腺素E1联合碱性成纤维细胞生长因子可促进人牙髓干细胞增殖,增强人脐静脉血管内皮细胞体外小管形成能力。 ORCID: 0000-0002-7727-1883(项海东) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人胎盘间充质干细胞生物学特性和抗凋亡细胞因子的分泌

背景：由于骨髓源性间充质干细胞的提取造成患者的二次损伤,也存在病毒、细菌污染的可能,扩增、分化能力不高,为此,实验从胎盘中提取间充质干细胞进行研究,了解其分泌抗凋亡细胞因子的情况,探讨其代替骨髓间充质干细胞的可能性。 目的：体外分离培养、扩增人胎盘源性间充质干细胞,研究其基本生物学特性和抗凋亡细胞因子的分泌水平。 方法：提取人胎盘间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态;采用流式细胞仪测定细胞周期、凋亡情况及表面标记的表达,研究其增殖和生长特性。ELISA检测血管内皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、肝细胞生长因子的分泌水平。 结果与结论：在体外培养条件下,人胎盘间充质干细胞为贴壁生长,为成纤维细胞样,核浆比大,细胞增殖活跃,凋亡率低,可分泌能抑制细胞凋亡的细胞因子如血管内皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、肝细胞生长因子。     

不同年龄段大鼠脊髓源性神经干细胞的体外培养及鉴定

背景：不同年龄段神经干细胞的增殖及分化特性目前未见报道。 目的：观察不同年龄段大鼠脊髓源性神经干细胞的体外分离、培养及鉴定。 方法：取不同年龄大鼠的脊髓,制成单细胞悬液,用含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和B27的DMEM/F12培养基,以细胞浓度5.0×105 L-1进行原代培养,每隔3 d传代1次。 结果与结论：不同年龄段大鼠的脊髓中均可培养出细胞,其形态为结构紧密、大小不等的悬浮细胞球,称之为“神经干细胞球”;经过传代后单细胞又迅速增殖成球且数目明显增多。提示不同年龄段大鼠脊髓中均能够在体外培养出神经细胞球。     

碱性成纤维细胞生长因子及胰岛素样生长因子1对精原干细胞增殖凋亡影响的机制

文题释义：碱性成纤维细胞生长因子：是细胞生长和分化的重要调节因子,具有促血管生成、细胞增殖、细胞趋化、细胞迁移等活性,在细胞分化和机体发育过程中发挥重要作用。碱性成纤维细胞生长因子通过与细胞膜表面的特异性配体结合,进而引发细胞内的一系列级联反应,从而产生各种生物学效应。 胰岛素样生长因子1：是多功能细胞增殖调控因子,主要分布在肝脏中,其与胰岛素样生长因子2、胰岛素及其受体一起构成了胰岛素样生长因子家族,其对细胞生长和代谢具有多效作用。 背景：生长因子作为体外细胞培养和体内细胞生长及增殖必需的调节因子,一直被广泛的关注。 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与胰岛素样生长因子1(insulin-like growth facter,IGF-1)联合作用对小鼠精原干细胞增殖、凋亡的影响。 方法：从6-8 d龄昆明雄性小鼠睾丸内分离培养精原干细胞并进行鉴定。将精原干细胞接种于经丝裂霉素C处理过的胚胎成纤维细胞饲养层上,分组干预：对照组加入正常DMEM培养基进行培养;bFGF、IGF-1组分别加入含20 μg/L bFGF、20 μg/L IGF-1的DMEM培养基进行培养;bFGF+IGF-1组同时加入含20 μg/L bFGF及20 μg/L IGF-1的DMEM培养基进行培养。采用CCK-8、EDU染色法分别检测精原干细胞增殖活性,流式细胞仪检测精原干细胞生长周期和细胞凋亡情况,Western blot检测增殖和凋亡相关蛋白PCNA、Bax、Bcl-2的表达。 结果与结论：①与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组吸光度值显著升高,与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组吸光度值进一步升高(P < 0.05),EDU染色得到与CCK-8实验一致的结论;②bFGF+IGF-1组S+G₂/M期细胞比例明显高于其他3组(P < 0.05),IGF-1组、bFGF组S+G₂/M期细胞比例高于对照组(P < 0.05);③与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组凋亡细胞降低;与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组凋亡细胞进一步降低;④与对照组比较,bFGF组、IGF-1组、bFGF+IGF-1组细胞中Bax蛋白相对表达水平显著下降(P < 0.01),Bcl-2和PCNA蛋白相对表达水平均显著升高(P < 0.05)。与bFGF组、IGF-1组比较,bFGF+IGF-1组细胞中Bax蛋白相对表达水平进一步下降(P < 0.01),Bcl-2和PCNA蛋白相对表达水平进一步升高(P < 0.05);⑤结果表明,bFGF、IGF-1通过上调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,二者联合作用效果最佳。 ORCID: 0000-0001-5693-3713(李宏) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程