实时荧光PCR在检测MRSA引起血流感染中的研究

目的建立检测引起血流感染中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）mecA基因的实时荧光PCR法。方法设计mecA引物,优化荧光实时PCR实验条件,并用该法检测临床分离的78株金黄色葡萄球菌引起血流感染标本,其结果与头孢西丁纸片扩散法的结果进行比较。结果 78株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性38株、阴性40株;头孢西丁纸片扩散法检测出MRSA 27株、MSSA 51株,经配对卡方检验,荧光实时PCR法检出率显著高于头孢西丁纸片扩散法（P〈0.01）。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA引起的血流感染,比一般MRSA表型检测更加简便、快速。     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的评价与应用

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的临床应用价值。方法经培养鉴定的70例已知细菌中22例为MRSA,48例为非MRSA,对已知细菌用实时荧光定量PCR进行检测,了解该方法的特异性和敏感性。对临床88例医护人员和患者的鼻拭子进行实时荧光定量PCR检测,了解医院内MRSA的携带情况。结果培养为MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为MRSA,敏感性为100%;培养为非MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为非MRSA,特异性为100%。实时荧光定量PCR检测MRSA的敏感性可确定为1×103cfu/mL。48例患者的鼻拭子mecA耐药基因阳性26例,金黄色葡萄球菌阳性28例,两者同时阳性(即为MRSA)20例,MRSA阳性检出率为41.6%;40例医护人员鼻拭子mecA耐药基因阳性12例,金黄色葡萄球菌阳性13例,两者同时阳性(即为MRSA)9例,MRSA阳性检出率为22.5%。结论实时荧光定量PCR可用于临床对MRSA的快速检测。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成能力及其耐甲氧西林相关性

目的研究金黄色葡萄球菌临床分离菌株耐药性及其生物膜形成能力。方法采用药敏试验和人工生物膜培养方法,观察金黄色葡萄球菌耐药性及其生物膜形成能力。结果共检测201株临床分离的金黄色葡萄球菌,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为138株,占68.66%;甲氧西林敏感型金葡菌(MSSA)为52株,占25.87%。临床分离的金黄色葡萄球菌培养48 h后生物膜经结晶紫染色后的吸光度值MRSA与MSSA在生物膜形成能力方面无统计学差异。结论该医院临床分离的金黄色葡萄球菌中MRSA比例较高;可用结晶紫染色检测吸光度值的方法来测定生物膜形成能力。需进一步通过生物膜筛选法研究耐药性与生物膜形成能力之间的关系。     

实时荧光定量聚合酶链反应快速检测MRSA的应用研究

目的研究实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法收集2017年1月至2018年12月重庆市南川区人民医院患者体液标本分离培养的446例金黄色葡萄球菌,采用实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌nuc基因和mecA基因。结果 446例金黄色葡萄球菌均检出nuc基因,符合率为100.00%。经全自动细菌培养鉴定出的96例MRSA中均检出mecA基因,检出符合率为100.00%。在全自动细菌培养鉴定及药敏分析仪上检出的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌中有2例检测到mecA基因,其检测正确率为97.96%(96/98)。结论实时荧光定量PCR检测MRSA耗时短,正确率高,用于临床快速鉴定MRSA有明显优势。     

全自动微生物分析仪检测细菌耐药表型性能评价

目的 探讨VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统检测细菌耐药表型的准确性和可靠性.方法 选取经法国生物梅里埃ATB Expression细菌鉴定/药敏系统验证的菌株,且头孢西丁筛选、诱导克林霉素耐药(D-试验)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)K-B纸片法检测均为阳性,耐药基因经PCR检测确认,其中携带mecA基因甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)30株,D-试验阳性、携带erm基因金黄色葡萄球菌31株[甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)23株],以携带TEM或CTX-M型基因的ESBLs阳性大肠埃希菌30株作为对照菌株,采用VITEK 2 Compact AST-GP67(革兰阳性菌)、AST-GN13(革兰阴性菌)药敏卡进行药敏测定和耐药表型确定,对比分析测定结果和验证试验结果.结果 30株头孢西丁筛选阳性金黄色葡萄球菌、31株诱导克林霉素耐药菌株和30株ESBLs阳性大肠埃希菌VITEK 2 Compact检测均为阳性,符合率为100%,耐药表型在12 h内完成检测.结论 VITEK 2 Compact筛选MRSA及检测诱导克林霉素耐药和ESBLs的灵敏度、特异度较高,能对致病菌的耐药表型进行快速、准确测定,是临床微生物检测的有利工具.     

乳胶结合试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试验方法。方法：收集81株金黄色葡萄球菌临床分离株，通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和对甲氧西林敏感的金葡菌（MSSA），应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和mecA基因。结果：33株mecA基因扩增阳性菌株中的28株PBP2a检测呈阳性，5株为阴性，46株MSSA中，meca基因扩增及PBP2a检测全部为阴性。与聚合酶链反应检测mecA基因相比，乳胶结合试验检测MRSA的特异性和敏感性分别为100％和91．3％（74／81）。结论：乳胶结合试验是一种简便、快速、准确地检测MRSA的方法，适于在普通临床微生物实验室开展。     

356株金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的分析临床分离金黄色葡萄球菌菌株的耐药性。方法采用纸片扩散法对分离自临床标本中的金黄色葡萄球菌进行药敏试验检测。结果分离获得356株金黄色葡萄球菌,57.87%为MRSA;MRSA与MSSA对不同抗菌剂具有不同的耐药性。结论以药敏试验结果为依据优化选择抗菌剂十分重要。     

金黄色葡萄球菌对临床常用抗菌药物的敏感性及毒力基因检测分析

目的分析金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)对临床常用抗菌药物的敏感性及毒力基因检测结果。方法分离金葡菌129株行药敏试验,金葡菌分离自胸腹水、脑脊液及血液等无菌体液标本中,万古霉素等常用抗菌药物对金葡菌的最低抑菌浓度(MIC)采用琼脂稀释法检测,耐甲氧西林金葡菌(MRSA)内耐药基因mec C、mec A和毒力基因sas X与杀白细胞毒素(PVL)基因采用聚合酶链反应(PCR)检测。结果苯唑西林琼脂稀释结果显示,70株为MRSA,其余59株为甲氧西林敏感金葡菌(MSSA);对临床分离所得的45株MRSA分别采用mec A、mec C基因的PCR引物进行PCR扩增,mec A阳性检出率为100.00%,sas X基因阳性检出率为46.67%(21/45),sas X基因阴性检出率为53.33%(24/45),mec C、PVL均未检出; MRSA对β内酰胺类药物的耐药率高于MSSA,且对左氧氟沙星、阿米卡星、庆大霉素等非β内酰胺类药物也有耐药性,但75.00%以上MRSA对甲氧苄啶与利福平比较敏感。MSSA对β内酰胺类药物和非β内酰胺类药物均比较敏感,耐药率均低于11.00%;sas X阴性或sas X阳性的MRSA对左氧氟沙星、磷霉素和β内酰胺类抗生素均比较耐药,但sas X阴性基因与sas X阳性基因对甲氧苄啶、利福平、阿米卡星及庆大霉素的耐药率不完全一致。结论 MRSA对临床大多数抗菌药物均有耐药性,临床需对MRSA加强监测。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因(mecA基因法)为标准，评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度和特异性。方法PCR扩增葡萄球菌的特异性mecA基因片段，头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准K—B(Kirby-Bauer)法进行。结果在190株临床分离的葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(金葡菌)138株，表皮葡萄球菌30株，溶血葡萄球菌22株，经。PCR法检测mecA基因，金葡菌中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为81.2％(112／138)、96．1％(50／52)。头孢西丁纸片扩散法检测金葡菌中MRSA和CNS中MRCNS的发生率分别为81.2％(112／138)、94．2％(49／52)，与mecA基因法结果相比较，头孢西丁纸片扩散法检测葡萄球菌中MRS的灵敏度和特异度分别为99．4％(161／162)、100．0％(28／28)，两者符合率为99．5％(189／190)。2种方法所获得的结果经统计学处理，两者差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度和特异度，适合在临床微生物实验室中进行推广。     

量子点标记荧光原位杂交法在快速检测金黄色葡萄球菌中的应用

目的:应用量子点标记的荧光原位杂交方法以快速检测金黄色葡萄球菌。方法:采用两种量子点-亲和素-生物素-DNA探针,即A型肠毒素(SEA)基因与FemB基因探针与金黄色葡萄球菌临床分离株或感染金黄色葡萄球菌的粪便标本进行荧光原位杂交,同时与SEA基因聚合酶链反应(PCR)的检测结果比较。结果:10株临床金黄色葡萄球菌分离株中,2株SEA基因探针杂交和SEA基因PCR检测结果均为阳性,其余8株SEA基因探针杂交和SEA基因PCR检测结果均为阴性,10株FemB基因探针杂交结果均为阳性。3例分离培养为金黄色葡萄球菌的临床粪便标本直接进行荧光原位杂交,FemB及SEA基因探针杂交结果均为阳性,SEA基因PCR检测结果均为阳性。SEA、FemB基因探针与其他相关菌种未见非特异性反应。结论:量子点标记荧光原位杂交法检测金黄色葡萄球菌具有快速、简便、特异的特点,且可用于临床粪便标本的直接检测。     

重庆地区金黄色葡萄球菌临床株的分子型别与耐药性检测

目的了解重庆地区金黄色葡萄球菌临床菌株的分子型别及其对常用抗菌药物的耐药情况,为防控该地区金葡菌感染提供理论依据。方法收集2013年6月至2014年12月期间重庆地区西南医院临床分离的110株金黄色葡萄球菌,利用特征性基因扩增区分甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),再采用多位点序列分型(MLST)、spa分型、SCCmec分型、agr分型等方法检测金葡菌的型别,采用PCR检测pvl毒力基因,药敏试验分析菌株对苯唑西林、万古霉素、四环素等13种临床常用抗菌药物的耐药性,分析菌株的耐药谱。结果 110株金葡菌中有59株为MRSA,51株为MSSA,MRSA阳性率为53.6%。59株MRSA分为11种spa型和8种ST型,优势流行克隆为ST239-MRSA-Ⅲ(57.6%,34/59),pvl毒力基因检出率为23.7%(14/59)。51株MSSA分为27种spa型和18种ST型,agrI型占68.6%(35/51),pvl检出率为7.8%(4/51)。药敏结果显示59株MRSA均为多重耐药(MDR)菌株,51株MSSA中有24株为MDR菌株。结论重庆地区流行的MRSA以ST239-MRSA-Ⅲ为主,而MSSA表现出较高遗传多样性,发现ST121等高毒力、高耐药性菌株,值得高度重视。     

血液和无菌体液分离金黄色葡萄球菌对抗菌药物的敏感性及毒力基因检测

目的了解1999-2014年复旦大学附属华山医院血液和脑脊液等无菌体液中分离的金黄色葡萄球菌(金葡菌)对临床常用抗菌药物的敏感性及其毒力基因检测。方法采用琼脂稀释法测定万古霉素等抗菌药物对临床分离金葡菌的最低抑菌浓度(MIC);采用聚合酶链反应(PCR)法检测MRSA的耐药基因mecA、mecC及其毒力基因PVL和sasX。结果258株金葡菌中MRSA菌株占54.3%(140/258),MSSA占45.7%(118/258),血液、脑脊液和胸腹水等无菌体液中MRSA的检出率由1999-2002年的71.9%逐年下降至2011-2014年的43.7%。药敏试验结果显示:MRSA对多数受试抗菌药物的耐药率均高于MSSA。MSSA对受试抗菌药仍然十分敏感,细菌耐药率除青霉素外,均≤11%。β内酰胺类(除青霉素外)对MSSA的MIC90值均≤1 mg/L。未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株。90株临床分离的MRSA mecA基因阳性检出率为100%,未检测到mecC基因;sasX基因的阳性检出率为46.7%,未检测到PVL基因。sasX阳性的MRSA和sasX阴性的MRSA菌株对β内酰胺类抗生素、磷霉素和左氧氟沙星均高度耐药,但sasX阳性MRSA菌株对阿米卡星和甲氧苄啶-磺胺甲唑的耐药率均高于sasX阴性的MRSA菌株。结论 MRSA对临床多数抗菌药物耐药,为临床合理应用抗菌药物,应重视和加强对金葡菌中MRSA的监测。     

医院感染MRSA的mecA基因和耐消毒剂基因qacA的流行病学研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因和耐消毒剂基因qacA携带情况。方法采用全自动微生物分析系统VITEK2-COMPACT及配套鉴定卡、药敏卡对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行鉴定和药敏试验．并用WHONET5．6软件进行数据统计分析;用PCR扩增mecA基因和qacA基因,并对阳性基因进行测序分析。结果2009年1月至12月共分离金黄色葡萄球菌260株,其中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）140株f53．8％1．对其中50株进行mecA基因和qacA基因检测,发现mecA基因阳性50株,阳性率为100％。未检出qacA基因。结论50株MRSA菌株均携带meCA基因,均未检测到耐消毒剂基风ⅡacA。     

Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI检测MRSA的性能评价

目的评价Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI两台全自动微生物鉴定仪检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的性能。方法将临床分离的124株金黄色葡萄球菌随机分成39株和85株,分别用Vitek 2 COMPACT和MicroScan WalkAway 40 SI全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏分析,确认表型是否为MRSA;同时用PCR方法检测mecA及mecC基因以确定为MRSA;以PCR检测结果为金标准评价两台细菌分析仪检测MRSA的灵敏度、特异度和符合率。结果 Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI检测MRSA的检出率分别为56.41%（22/39）,51.76%（44/85）;PCR方法检出mecA阳性菌株分别为22株、44株,均未检出mecC阳性菌株,即PCR法检测MRSA的检出率为分别为56.41%（22/39）,51.76%（44/85）;以PCR方法为金标准,则Vitek 2 Compact检测MRSA的灵敏度为95.45%,特异性为94.12%,符合率为94.87%;MicroScan WalkAway 40 SI检测MRSA的敏感度为93.18%,特异度为92.68%,符合率为92.94%。结论 Vitek 2COMPACT全自动微生物鉴定仪对MRSA的检出率、灵敏度、特异度和符合率均优于MicroScan WalkAway 40 SI,二者的差异无统计学意义（P〉0.05）,均可用于MRSA的检测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）产色筛选平板法和聚合酶链反应（PCR）检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA的流行病学研究

目的 了解重庆医科大学附一院近年临床分离的金葡菌中,耐消毒剂基因qacA的流行情况,从而指导临床抗菌药物、消毒剂的合理使用.方法 选取有代表性的1价和2价化合物,检测126株金葡菌的MIC,阳性株用PCR法检测qacA基因型,采用CLSI推荐的30 μg头孢西丁纸片法进行MRSA鉴定.结果 临床分离的126株金葡菌中,12株qacA基因型呈阳性(阳性率为9.5%),52株为MRSA(其中qacA基因阳性率为17.3%).结论 临床分离的金葡菌中,qacA基因携带率较高.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

一起诺如病毒感染混合金黄色葡萄球菌肠毒素中毒相关急性胃肠炎暴发事件的实验室检测分析

目的对一起诺如病毒感染混合金黄色葡萄球菌肠毒素中毒相关急性胃肠炎暴发事件的实验室检测结果进行分析。方法采用实时荧光PCR方法检测6份病例呕吐物中的诺如病毒和8种常见致病菌。从呕吐物样本增菌液中分离培养金黄色葡萄球菌,采用PCR方法检测增菌液的金黄色葡萄球菌肠毒素基因。利用酶联免疫吸附试验检测5株金黄色葡萄球菌分离株的肠毒素、利用PCR方法检测其肠毒素基因并进行spa分型分析。结果共采集到6份呕吐物标本,其中5份诺如病毒阳性,2份金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因nuc阳性。其中5份呕吐物增菌液nuc基因阳性,4份seb基因阳性,1份sea基因阳性。共分离到5株金黄色葡萄球菌,分为3种spa型(t701、t437和t4209)。金黄色葡萄球菌肠毒素的基因PCR检测结果和酶联免疫吸附试验结果存在差别。结论本次急性胃肠炎暴发事件可能由诺如病毒感染混合金黄色葡萄球菌肠毒素中毒共同导致。     

qPCR快速检测痰标本中MRSA的临床应用

目的探讨实时荧光定量PCR(qPCR)法快速检测痰液标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法痰标本经裂解获取DNA,应用qPCR法检测mecA和Sa442基因,同时对痰标本进行常规培养鉴定。结果以痰培养鉴定结果为金标准,在887份合格痰标本中,PCR检测MRSA的灵敏度为95.7%,特异度为91.2%,阳性预测值为37.8%,阴性预测值为99.7%。结论 qPCR法可用于快速检测痰标本MRSA,排除MRSA的定植和感染。