大鼠近交系间原位肝移植急性排斥模型的建立与评价

背景：目前国内常用的封闭群品系大鼠(SD与Wistar大鼠)所建立肝移植急性排斥模型并不理想,易产生肝移植耐受。 目的：通过二袖套法建立稳定的DA-Lewis大鼠原位肝移植急性排斥模型。 方法：实验分为两组：同基因组：Lewis-Lewis 24例;异基因组：DA-Lewis 24例。观察移植后一般情况及移植后存活时间,两组受体分别于移植后3,5,7,10 d随机取3只处死取标本,观察肝脏组织病理变化,测定天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平变化。 结果与结论：同基因组大鼠无急性排斥反应表现,中位生存时间超过100 d,肝脏组织发生轻度形态学改变。异基因组大鼠移植后黄疸明显,中位生存时间为11 d,移植后第7天肝脏组织病理表现典型急性排斥反应(Banff国际标准)。同期相比异基因组天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平均高于同基因组(P < 0.001)。提示,DA-Lewis是稳定的大鼠肝移植急性排斥模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型。     

输注同基因骨髓间充质干细胞联合脾组织移植诱导肝移植大鼠的免疫耐受

背景:有研究显示在免疫抑制剂的作用下,同种脾脏细胞移植可诱导免疫耐受,使移植物长期存活。另有研究还显示异种骨髓间充质干细胞移植可延长移植肝存活时间。目的:观察输注与受体同基因骨髓间充质干细胞联合脾组织移植对诱导大鼠肝移植后免疫耐受的作用。方法:将受体Lewis大鼠以数字表法随机分为4组:急性排斥组行DA-Lewis大鼠原位肝移植;环孢素A组行DA-Lewis大鼠原位肝移植后灌胃给予环孢素A;干细胞组行DA-Lewis大鼠原位肝移植,同期输注异体Lewis大鼠骨髓间充质干细胞;脾组织移植组在干细胞移植组的基础上同期移植DA大鼠脾组织。观察各组生存期,肝功能情况,血清细胞因子水平,嵌合体的形成情况及肝脏病理变化。结果与结论:与其他各组相比,脾组织移植组大鼠存活时间明显延长,术后血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、白细胞介素2、干扰素γ水平明显降低(P0.05),白细胞介素6、白细胞介素10明显升高(P0.05),30d后受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P0.05)。肝脏病理显示,环孢素A组和干细胞组移植肝仅呈急性轻度排斥反应,急性排斥组呈急性重度排斥反应,脾组织移植组未见明显排斥反应。说明大鼠肝脏、脾组织移植后输注同基因骨髓间充质干细胞可减轻移植肝的排斥作用,甚至诱导免疫耐受。     

骨髓间充质干细胞移植后的肝功能重建

背景：细胞移植是治疗肝功能衰竭的一种有效方法,而理想的细胞源和最佳的移植途径一直是各实验室不断研究的目标。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝功能重建的影响和最佳移植途径。 方法：以D-氨基半乳糖胺作为肝脏毒剂,构建雌性SD大鼠急性肝衰竭模型。以雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞为细胞源,通过腹股沟静脉和脾内移植两种途径植入肝衰竭大鼠,动态检测多项肝功能血生化指标。并以sry基因为分子标志,采用PCR技术检测骨髓间充质干细胞在肝脏内的存活状态。 结果与结论：骨髓间充质干细胞经腹股沟静脉和脾内移植均可降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平,提高白蛋白合成能力,改善肝功能,降低动物死亡率。经腹股沟静脉移植组死亡率低于经脾内移植组。移植后7~30 d在受体大鼠肝脏内均能检测到sry基因阳性细胞的存在,而相应对照组未能检测到sry基因阳性细胞。结果表明①骨髓间充质干细胞移植可改善急性肝衰竭大鼠的肝功能。②骨髓间充质干细胞可在受体肝脏内存活。③经腹股沟静脉移植操作简便易行,死亡率较低,是较好的细胞移植途径。     

供体骨髓输注减轻同种肝移植排斥反应

目的:研究非清髓性骨髓移植在同种肝移植免疫反应中的作用及其意义。 方法:动物实验为同种大鼠肝移植：Ⅰ组为Wistar→Wistar同基因对照组；Ⅱ组为SD→Wistar急性排斥组；Ⅲ组为SD→Wistar环孢素A（cyclosporine A,CsA）肌肉注射处理组；Ⅳ组为SD→Wistar术前1周大剂量供体骨髓细胞输注处理组。用术后一般状态、生存时间、病理学排斥分级、肝标本中IL-2、IFN-γ的表达以及胸腺内嵌合体的检测等手段，确定不同处理组移植后的排斥反应情况及机体的免疫状态。 结果:Ⅰ组大鼠术后无排斥反应发生；Ⅱ组大鼠术后9-13 d内全部死亡，中位存活时间（10.7±0.5）d，排斥反应明显；Ⅲ组大鼠仅见轻度排斥；Ⅳ组自然存活亚组6只大鼠4只长期存活 (>100 d)，排斥分级明显低于Ⅱ组（P<0.05）,与Ⅱ组相比，Ⅳ组IL-2、IFN-γ蛋白的表达均明显下调。在骨髓输注15 d后，用PCR法在雌性Wistar大鼠受体胸腺内可检测到雄性SD大鼠供体特异性的Y染色体（Y-chromosome-specific sequence，Sry）基因片段。 结论:供体骨髓输注可形成供受体细胞的嵌合状态，可降低同种异体肝移植的排斥反应，延长受体生存时间。     

青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用

背景：随着强效、特异免疫抑制剂的问世,小肠移植的成活率有了一定程度的提高。但这些免疫抑制剂的不良反应及昂贵的治疗费用,让很多患者难以承受。所以,选择有免疫抑制作用的中药在临床上应用是很有意义的。青蒿琥酯有免疫抑制作用,可以减轻小肠移植急性排斥反应,提高小肠移植的成功率。目的：观察青蒿琥酯在大鼠小肠移植急性排斥反应中的作用及其机制。方法：选用封闭群SD大鼠和Wistar大鼠建立同种异基因小肠移植模型,随机分为3组：①同基因移植组(SD→SD)。②异基因移植组(Wistar→SD)。③异基因移植+青蒿琥酯治疗组(Wistar→SD+青蒿琥酯60 mg/(kg•d),腹腔注射)。结果与结论：同基因移植组大鼠存活均超过10 d,并于第10天全部处死。异基因移植组大鼠平均存活(6.73±0.58) d,治疗组大鼠平均存活(8.50±0.74) d,两组间比较差异有显著性意义(P < 0.01)。病理组织学检查显示同基因移植组标本无明显排斥征象,异基因移植组标本在术后第3,5,7天分别符合轻、中、重度排斥反应,治疗组部分标本有轻度排斥表现,但出现较晚、程度较轻。ELISA法检测显示异基因移植组血清白细胞介素2、γ-干扰素表达水平在术后均显著高于其他2组(P < 0.01),治疗组血清白细胞介素2表达水平与同基因移植组比较亦有升高,但差异无显著性意义(P > 0.05),治疗组血清γ-干扰素表达水平高于同基因移植组(P < 0.05)。结果可见青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应有抑制作用,其作用机制可能与抑制白细胞介素2、γ-干扰素等细胞因子的分泌表达有关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

胸腺诱导对大鼠肝移植的免疫影响

背景:异体肝脏移植由主要组织相容性抗原可诱发免疫排斥反应,免疫抑制剂会对机体产生不良反应,目前通过移植前对供受体进行预处理等策略,可以诱导受体产生免疫耐受,在移植中具有广阔的应用前景。目的:用大鼠胸腺诱导的方法,对大鼠肝移植进行处理,从胸腺诱导方面,研究胸腺诱导与移植免疫排斥反应的关系。方法:供体为清洁级雄性SD大鼠40只,受体为清洁级雄性Wistar大鼠30只和清洁级雄性SD大鼠10只,分为同种基因移植组、同种异基因移植组、环孢素组、胸腺修饰诱导组,各10对。采用改良Kamada二袖套法并加以改进建立稳定的大鼠原位肝移植模型,造模后,环孢素组每天腹腔注射环孢素(50mg/kg),持续5d,胸腺修饰诱导组胸腺左右两叶各注射50μL主要组织相容性抗原,持续5d,其他组不给予任何干预措施,记录各组大鼠生存时间并分别于移植后3,7,14,21,28d进行病理学观察和混合淋巴细胞培养。结果与结论:经胸腺修饰诱导的肝移植大鼠生存时间则显著延长(60d),移植肝内组织损伤程度显著减轻,肝脏局部免疫排斥反应减少,淋巴细胞减少,肝移植效果与同种基因移植大鼠接近,且优于环孢素干预大鼠(P0.05)。提示胸腺诱导可减轻大鼠肝移植后产生的免疫排斥反应。     

胸腺接种肝特异性抗原减轻移植肝细胞凋亡的发生

目的：研究肝特异性抗原（LSA）胸腺接种对移植肝细胞凋亡的影响。 方法： 实验为同种肝移植：Ⅰ组为Wistar→Wistar同基因对照组；Ⅱ组为SD→Wistar急性排斥组；Ⅲ组为SD→Wistar术前1周供体肝特异性蛋白受体胸腺内注射处理组。观察手术后一般状态、生存时间、肝细胞凋亡及肝组织T细胞活化连接蛋白（LAT）的表达情况，确定移植后的受体的生存情况及机体的免疫状态。 结果： Ⅰ组大鼠术后一般状态好，均长期存活；Ⅱ组大鼠体重进行性减轻，术后9-13 d内全部死亡；Ⅲ组大鼠术后一般状态同Ⅰ组，明显好于Ⅱ组，存活率明显高于Ⅱ组；实验组各时段凋亡肝细胞数均与同时段对照组无显著差异，明显低于SD-Wistar急性排斥组；实验组与对照组移植肝中均未见LAT的表达。 结论： 移植前胸腺接种供体LSA对移植肝细胞具有明显的保护作用。     

青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应期间ICAM-1和IL-2的影响

目的：观察大鼠同种异位心脏移植排斥反应期间的病理特征，探讨青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应的影响及其发生机制。方法：SD健康大鼠为供体，Wistar大鼠为受体，建立大鼠异位心脏移植模型。实验分4组：A组为健康SD大鼠心脏作对照组，B组为SD大鼠到SD大鼠的同基因移植组，C组为SD大鼠到Wistar大鼠异基因移植组，D组为清藤碱治疗组。以ELISA、免疫组织化学检测移植心组织中IL-2和ICAM-1的表达。结果：A、B组未见排斥反应发生，心脏组织中的ICAM-1和IL-2表达水平很低；C组有明显的炎症反应并见大量淋巴细胞浸润，组织中ICAM-1和IL-2的表达水平明显升高（P〈0．05）；D组炎症反应有所减轻，同时少有淋巴细胞浸润；组织仅微弱表达ICAM-1和IL-2。结论：移植心脏ICAM-1和IL-2的表达水平与排斥反应的发生和发展有关，青藤碱能显著抑制移植心ICAM-1和IL-2的表达和淋巴细胞的浸润，减轻排斥反应，明显延长移植物的存活。     

恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κB p65的表达

背景：核因子κB作为一种重要的核内转录因子,是多种信号转导途径的汇聚点,参与机体免疫细胞的增殖、分化及细胞凋亡等多种反应物质基因的表达调控,在体液和细胞免疫中发挥重要作用。 目的：探讨恒河猴移植肝组织内核因子κB P65蛋白表达与急性排斥反应的关系。 方法：将恒河猴随机分为2组：急性排斥反应组肝移植后不给予抗排斥处理,对照组肝移植过程中及移植后均给予抗排斥处理。分别在移植后6,12,24和72 h 4个时间点收集血标本,全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶、总胆红素,取移植肝脏组织行苏木精-伊红染色观察组织形态结构和排斥反应,根据Banff评分系统判断排斥反应程度,采用Western blot法检测肝脏组织中核因子κB p65的表达。 结果与结论：肝移植急性排斥反应发生时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查。当急性排斥反应发生时,移植肝组织中核因子κB p65表达上调,急性排斥反应程度也随之加剧。并且在急性排斥反应早期,肝功能、病理学仅有轻微改变时,核因子κB p65表达显著升高。因此移植肝组织中核因子κB p65表达水平的检测对移植后急性排斥反应的早期诊断有重要意义,同时核因子κB可能成为控制移植急性排斥反应的新靶点。     

不同原位肝移植模型大鼠的CD4~+CD25~+调节性T细胞数量变化的研究

目的建立稳定的大鼠原位肝移植模型,并检测大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例的变化。方法采用近交系成年雄性BN、LEW大鼠,改良"二袖套"法建立肝移植模型31例。术前随机分为3组:排斥组(LEW→BN,n=9),耐受组(BN→LEW,n=11),同基因组(BN→BN,n=11)。存活的受体分别于术后5 d、10 d、30 d取外周血,分离外周血中的单个核细胞,由流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg比例。并于相应时间点每组随机各处死2只,取肝脏标本观察病理学变化。每组选取5例来观察生存期,存活>100 d时各处死2只,取肝脏标本。结果中位生存期:排斥组14 d,耐受组112 d,同基因组129 d。耐受组与同基因组术后未见明显排斥反应。术后7 d,排斥组肝脏病理Banff评分Ⅲ级。肝移植早期,排斥组和自发耐受组的外周血中CD4+CD25+Treg比例均增加,术后10 d耐受组CD4+CD25+Treg比例明显高于同基因组(P<0.01)。术后30 d,耐受组CD4+CD25+Treg比例仍维持在较高水平。结论 BN与LEW大鼠组合可建立稳定可靠的急性排斥模型与自发耐受模型。CD4+CD25+Treg可能参与自发免疫耐受的形成。     

DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立：技术改良分析

背景：国际上研究肝移植免疫耐受的基础动物模型是大鼠肝移植急性排斥反应模型,国际上公认的肝移植急性排斥反应模型鼠种配对方式为DA至Lewis大鼠、DA至BN大鼠及BN至Lewis大鼠,但由于鼠种缺乏和操作技术有待成熟的原因,国内较少引用以上鼠种配对方式进行该模型的建立。 目的：课题组在大量SD大鼠肝移植模型建立训练的基础上,采用DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,摸索DA至Lewis大鼠肝移植急排模型建立技巧和经验。 方法：通过改良二袖套法,以雄性DA大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,建立原位肝移植动物模型60只,受体大鼠术前1 d和术后1周内饲喂治疗剂量的他克莫司,1周后半量递减并停药,记录移植手术时间,观察受体大鼠的术后生存状况、手术成功率及生存期,分别于术后7,14,21,28 d处死受体大鼠,获取肝组织标本,苏木精-伊红染色,观察肝脏大体和镜下的病理学变化,进行急性排斥反应评分。 结果与结论：供肝冷缺血时间30~60 min,供体手术时间(18.5±4.0) min,供肝修整时间(7±3) min,受体手术时间(35.0±  7.3) min,无肝期为(13.0±3.0) min,手术成功率为98%,1周存活率为91.6%。术后2周随着他克莫司撤药,受体大鼠迅速发生急性排斥反应,于术后14~28 d死亡,平均生存时间为(20.85±0.71) d,中位生存时间为21 d。实验建立DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应动物模型需要以大量SD大鼠肝移植训练为基础进行,通过对二袖套法技术的改良和围手术期短期应用他克莫司有助于该模型的稳定建立。     

供肝NK细胞对肝移植免疫反应中NF-κB 活性和IL-15表达的影响

 目的：观察大鼠移植肝组织内和外周血白细胞介素15（IL-15）的表达水平及脾组织内核因子κB(NF-κB)的表达活性变化,探讨供肝NK细胞减轻肝移植术后急性排斥反应的机制。方法：Lewis大鼠为肝移植供体,BN大鼠为受体,改良“二袖套”法建立大鼠肝移植模型。应用［60Co］射线照射清除供体免疫细胞和经门静脉回输供肝NK细胞等技术,实验设立3组。A组: 急性排斥组;B组: 单纯［60Co］照射排斥组;C组: ［60Co］照射+供肝NK细胞门静脉回输排斥组。移植术后第1、3、7天收集受鼠外周血清,ELISA法检测IL-15分泌水平,同时切取移植肝行病理学检查,Western blotting法检测移植肝组织IL-15蛋白的表达,凝胶电泳迁移实验（EMSA）检测受鼠脾组织NF-κB表达活性。另外每组各设亚组观察移植后大鼠自然生存时间。结果：B组术后大鼠自然存活时间较A、C组明显缩短,术后发生急性排斥反应程度较A、C组严重;术后第3、7天,3组受鼠外周血IL-15水平均较第1天时显著升高;移植术后第3、7天,B组大鼠血清IL-15 浓度均显著高于A、C组;术后第3、7天,移植肝组织中B组IL-15表达也显著高于A、C组,受鼠脾组织中B组NF-κB表达活性亦显著高于A、C组。结论：IL-15可能作为肝移植急性排斥反应的监测指标,对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有临床指导意义;供肝NK细胞可能通过下调NF-κB的表达活性来调节IL-15的水平,进而减轻肝移植术后急性排斥反应。     

Mechanism of Immune Hyporesponsiveness Induced by Recipient-derived Immature Dendritic Cells in Rat Liver Transplantation

Objective: The use of donor-derived immature dendritic cells (imDC) has become a promising approach to induce immune tolerance or immune hyporesponsiveness. However, donor-derived imDC needs to be harvested for a few days and transfused into the recipient in 5-10 days before transplantation, which is practically impossible in a clinical setting where donor organs are mainly harvested from cadavers. Moreover, donor-derived imDC might be cleared by allogeneic reaction offsetting induced immune tolerance or immune hyporesponsiveness. In our study, we further explored the underlying mechanism of immune hyporesponsiveness induced by donor-antigen-unloaded recipient-derived imDC by transfusing these imDC into rats in 1 day before liver transplantation. This paper is to study the mechanism of immune hyporesponsiveness induced by donor-antigen-unloaded recipient-derived imDC and its protection of liver grafts in rats. Methods: 40 SD rats (donor) and 40 male Wistar rats (recipient) were randomly divided into 4 groups: control, cyclosporine A(CsA), mature DC (mDC), and imDC; with 10 SD rats and 10 Wistar rats for each group. Animal models of acute graft rejection were established with these rats. Corresponding treatments were given before or after transplantation. In the control group, Wistar rats received no treatment other than liver transplantation. In the CsA group, Wistar rats underwent liver transplantation plus CsA treatment (10 mg/kg·d) in the starting day 2 after transplantation. For the mDC group, recipient-derived mDC(1×106/rat) were infused intravenously via the dorsal vein of the penis to recipient rats. For the imDC group, imDC (1×106/rat) were injected into recipient rats via the dorsal vein of the penis. In each group, 5 recipients were executed at 10 days after transplantation; the remaining five recipients were kept for the observation of survival time. Blood samples were collected for the measurement of ALT and TBIL; IL-2, IFN-γ, IL-4 and IL-10 and levels were measured with double-antibody sandwich ELISA. Liver tissue was harvested for HE staining and the observation of histological features. Acute rejection was evaluated with Banff classification. Expression levels of Fas-L/Fas in the grafts were detected by immunohistochemical staining; and western blot was used to detect the expression level of Scurfin. Results: The median survival times (MST) of the liver allografts in the CsA and imDC group were significantly longer than those in the control or mDC group (P<0.05). The serum levels of ALT and TBIL in the control and mDC groups were significantly higher than those of the CsA or imDC group(P<0.05). Compared with the CsA and imDC group, the levels of IL-2 and IFN-γ were higher but the levels of IL-4 and IL-10 were lower than those of the control and mDC groups(P<0.01). Slight or no rejection reaction was found in the CsA and imDC groups (P<0.05). The expression level of Scurfin protein in CD4+ CD25+ T cells of the imDC group was significantly higher than that of three other groups(P<0.05). Conclusion: Donor-antigen-unloaded recipient-derived imDC is an effective treatment in inducing immune hyporesponsiveness by blocking indirect recognition in rat liver transplantation model. Survival span was significantly prolonged by its protective effect. The mechanism of immune hyporesponsiveness induced by imDC transfusion may involve the preprocesses of T cell apoptosis induction, immune tolerance or hyporesponsiveness in T cells, induction of the shift in THl/TH2 balance, selection activation of Th2 subset, or induction of regulatory T cell.     

供体特异性输血诱导CD8+CD28-调节性T细胞在肝移植急性排斥反应中的作用

目的 通过供体特异性输血(DST)诱导机体产生抗原特异性CD8+CD28-调节性T细胞(CD8+CD28-Tr),评价其对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用.方法 采用DST在正常BrownNorway(BN)大鼠体内诱导针对LEW抗原的CD8+CD28-Tr,体外验证其免疫抑制活性之后将其输注给LEW→BN肝移植急性排斥模型受体,观察输注后大鼠的生存时间和肝脏病理学表现.采用SPSS11.0软件进行Log-Rank检验,比较大鼠生存率的差异.结果 DST可在正常BN大鼠体内诱导大量CD8+CD28-Tr产生,其在体外具有免疫抑制活性,体内输注可缓解大鼠肝移植急性排斥反应(LEw→BN).结论 DST可以在正常大鼠体内诱导大量CD8+CD28-Tr产生,其体内输注可以抑制大鼠肝移植急性排斥反应,DST可能有望成为体内诱导特异性CD8+CD28-Tr的途径之一.     

IDO-Competent-DCs Induced by IFN-γ Attenuate Acute Rejection in rat Liver Transplantation

Purpose

We established a stable rat model of liver transplantation using Sprague-Dawley rats and Wistar rats in order to investigate the role of the IDO gene in acute rejection after rat liver transplantation.

Methods

IDO gene expression and IDO enzyme activity were quantified in liver syngeneic grafts and allografts using microdialysis-HPLC. Liver allografts were evaluated for IDO expression by histopathology. We measured liver function-related biomarkers in liver allografts which were re-infused with untreated or IFN-γ-treated dendritic cells (DCs).

Results

We found a significant increase in IDO gene expression and IDO enzyme activity in liver allografts compared the sham and syngeneic graft groups. There was a significant correlation between the number of IDO-positive cells and severity of acute rejection. IDO gene expression and enzyme activity was upregulated in the IFN-γ-treated DC group within 7 days after transplantation compared to the untreated DC group and survival rates were significantly improved.

Conclusions

Our results suggested that IDO gene expression correlates with the severity of acute rejection and that IFN-γ-induced IDO-positive DCs may attenuate acute rejection and catalyze local tryptophan metabolism via IDO enzyme expression, leading to immune tolerance after liver transplantation.     

预输注RelB shRNA慢病毒修饰树突细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受

背景：肝移植后的排斥反应是威胁患者和移植物长期存活的主要原因。诱导受者产生特异性免疫耐受是解决排斥反应的理想措施。 目的：探讨RNAi RelB树突状细胞预输注诱导大鼠肝移植特异性免疫耐受的可能性。 方法：将近交系雄性清洁级DA(RT1a)大鼠和近交系雄性SPF级Lewis(RT11)大鼠分别作为供、受体,行原位肝移植手术。术前随机配对分为4组：①对照组,受体鼠移植前不做预输注。②治疗组：受体鼠移植前7 d静脉输注供体大鼠RNAi RelB树突状细胞(5×106)。③未成熟树突状细胞组：受体鼠移植前7 d静脉输注供体大鼠未成熟树突状细胞(5×106)。④成熟树突状细胞组：受体鼠移植前7 d静脉输注供体大鼠成熟树突状细胞(5×106)。 结果与结论：与对照组、未成熟树突状细胞组以及成熟树突状细胞组相比,治疗组移植肝的平均生存时间显著延长。移植后第7天,治疗组天冬氨酸转氨酶,总胆红素水平低于对照组、成熟树突状细胞组、未成熟树突状细胞组(P < 0.01),移植后第14天治疗组、未成熟树突状细胞组天冬氨酸转氨酶,总胆红素均有轻微下降,两组比较差异仍有显著性意义(P < 0.01)。移植后第7天,与治疗组比较,对照组、成熟树突状细胞组、未成熟树突状细胞组γ-干扰素、白细胞介素2水平升高(P < 0.01),而白细胞介素4、白细胞介素10下降(P < 0.01);移植后第14天治疗组、未成熟树突状细胞组γ-干扰素、白细胞介素2水平均有下降,白细胞介素4、白细胞介素10水平均有升高,两组比较差异仍有显著性意义(P < 0.01)。对照组、成熟树突状细胞组、未成熟树突状细胞组移植后第7天排斥活动指数为8.0-9.0。未成熟树突状细胞组第14天肝细胞、内皮细胞坏死及汇管区炎性细胞浸润进一步增多。治疗组移植后第7天排斥活动指数为6.0-8.0,第14天时排斥活动指数为4.0-5.0。结果提示RNAi RelB树突状细胞预输注可以减轻移植肝排斥程度,延长移植肝生存时间,这是通过间接途径实现的,其机制可能与T细胞的调节和无能有关。     

口服供体脾细胞对大鼠移植肾的影响

背景：口服供体抗原诱导免疫耐受已被证实有显著效果,而脾脏为人体最大淋巴器官,富含T淋巴细胞,可提供丰富抗原。 目的：观察口服供体脾细胞对大鼠肾移植移植肾功能影响。 方法：肾移植前脾细胞组Lewis (RT11)大鼠采取口服灌胃5×105个BN (RT1n)大鼠供体脾细胞,1次/d,持续7 d;肾移植组Lewis (RT11)大鼠口服灌胃1 mL PBS为对照。 结果与结论：移植后第5天肾移植组出现移植肾排斥症状,脾细胞组平均存活时间长于肾移植组,移植后脾细胞组血肌酐、尿素氮水平升高明显慢于肾移植组;苏木精-伊红染色显示肾移植组移植肾发生急性排斥变化早于脾细胞组。说明口服供体脾细胞能诱导免疫耐受,延长移植肾存活时间。     

PDL_1Ig基因修饰的骨髓间充质干细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的:探讨程序性死亡因子配体1免疫球蛋白(PDL_1Ig)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)抑制大鼠原位肝移植免疫排斥反应的机制。方法:培养并鉴定大鼠的BMSCs,重组腺病毒p Ad Easy-1/PDL_1Ig感染BMSCs 72 h后,提取细胞总蛋白,采用Western blot法检测转染后BMSCs中PDL_1Ig的蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测未转染和转染后的BMSCs对外周血T淋巴细胞活力的抑制作用。以雄性Wistar大鼠为供体,以雄性SD大鼠为受体,采用改良的两袖套法进行原位肝移植,建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。随机分为对照组、BMSCs治疗组、空载体BMSCs治疗组(BMSCs/GFP)和转基因治疗组(BMSCs/PDL_1Ig),每组10对。每组随机取5只于术后第7天处死,检测外周血白细胞介素(IL)-2、IL-4和干扰素γ(IFN-γ)水平,检测肝功能情况,光学显微镜下观察移植肝的病理学变化,另外5只观察生存情况及时间。结果:重组p Ad Easy-1/PDL_1Ig感染BMSCs 72 h后,BMSCs中有PDL_1Ig的蛋白表达。BMSCs/PDL_1Ig抑制淋巴细胞活力的作用强于BMSCs/GFP。BMSCs/PDL_1Ig组的IL-4水平明显高于其它3组,IL-2和IFN-γ水平也明显降低(P0.05)。各实验组移植后7 d检测肝功能,发现BMSCs/PDL_1Ig组的肝功能改善最明显,ALT、AST和TBil基本达到正常水平,与对照组比较差异有统计学显著性,与BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组比较差异也有统计学显著性。肝组织病理检查结果显示对照组移植肝发生了重度排斥反应,BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组移植肝亦发生排斥反应,但与对照组比较程度较轻,BMSCs/PDL_1Ig组移植肝几乎没有排斥反应,受体存活时间大部分超过100 d,显著长于其它3组(P0.05)。结论:PDL_1Ig修饰的BMSCs可抑制大鼠肝移植排斥反应,诱导肝移植免疫耐受,其效果优于BMSCs单用。     

微囊小肝细胞样前体细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探索大鼠海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊小肝细胞样前体细胞(SHPC)移植治疗急性肝衰竭(AHF)大鼠模型的可行性和有效性。方法选择体质量150~180 g健康雄性Wistar大鼠10只。采用Retrosine(30 mg/kg)腹腔内注射联合2/3肝切除诱导雄性Wistar大鼠SHPC增殖模型,改进Seglen胶原酶灌注联合Percoll密度梯度离心分离SHPC,倒置显微镜、电子显微镜下观察,并进行免疫组织化学染色;静电液滴法APA微囊包埋。选择体质量180~220 g健康雌性Wistar大鼠20只,随机分为A组(微囊化SHPC腹腔内移植)、B组(空囊对照组);采用D-氨基半乳糖腹腔注射制备大鼠AHF模型;观察模型一般状况及生存时间,术后不同时间点检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)及血氨水平,检测肝脏病理改变。结果Retrosine腹腔内注射联合2/3肝切除成功建立SHPC增殖模型,分离获得细胞符合大鼠SHPC;APA微囊呈光滑规则球形,直径为(300±40)μm,强度、韧性良好,囊内细胞形态完整,存活率为(90.0±1.3)%。微囊SHPC移植后,A组较B组中位生存时间延长(119.00 h vs 70.33 h),差异有统计学意义(P<0.05);随时间延长,A组大鼠血清ALT、AST、TBiL及血氨水平明显下降,均低于移植前水平,各时间点A组明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理显示A组肝细胞损伤较B组明显改善;存活48 h大鼠腹腔内微囊保持完整光滑球形,囊内SHPC形态完整,1周微囊有散在破损皱缩,囊内细胞有增多聚集趋势,细胞存活率85%以上。结论APA微囊化大鼠SHPC腹腔内移植能改善大鼠AHF模型生存时间、生物化学指标(ALT、TBiL等)及病理损伤。