大肠原发癌和转移癌组织中肿瘤干细胞的检测与分选

目的：对10例大肠癌新鲜标本的原发癌组织和转移癌组织中肿瘤干细胞( cancer stem cell, CSC)的含量进行检测并分选,为进一步探讨转移肿瘤干细胞( migrating cancer stem cell, MCSC)的生物功能和机制奠定基础。方法应用流式抗体CD133-PE和CD44-FITC分别标记大肠癌原发癌组织和转移癌组织细胞悬液,应用流式细胞仪检测CD133-PE和CD44-FITC阳性细胞的含量并对其进行分选。结果在大肠癌原发癌组织和转移癌组织中均存在一定比例的CD133和CD44阳性细胞,转移癌组织中CSC比例高于原发癌组织(P<0.05)。结论大肠癌原发癌组织和转移癌组织中均存在CSC,转移癌组织中CSC比例明显高于原发癌组织,提示CSC参与大肠癌的转移过程并发挥作用。     

干细胞相关因子在大肠癌组织及SW620细胞株的表达

背景：肿瘤细胞有多种干细胞标记的表达,深入研究其表达规律有助于揭示肿瘤发病机制、完善肿瘤干细胞理论。 目的：检测大肠癌实体组织中干细胞相关分子标记CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1与癌旁组织的表达差异,以及CD133免疫磁珠分选阳性与阴性SW620细胞中上述基因的表达差异。 方法：选临床病理诊断清楚的29例大肠癌组织标本提取RNA,RT-PCR检测CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1在大肠癌组织与癌旁对照组织中的表达。CD133免疫磁珠分选SW620,提取CD133细胞与CD133阴性细胞RNA,RT-PCR检测分选后上述基因的表达差异。 结果与结论：29例标本均诊断为低、中分化腺癌或黏液腺癌,干细胞相关分子标记癌组织与癌旁组织表达灰度相对值癌组织表达均高于癌旁组织(P < 0.05)。RT-PCR检测分选后CD133⁺细胞CD133,CD166,Oct4,Sox2,C-myc,Klf4,Bmi-1表达,结果均高于CD133^-细胞。提示,CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1相关干细胞标记可作为大肠癌肿瘤干细胞标记并有望用于诊断检测。     

非小细胞肺癌肿瘤组织干细胞标志物CD133的表达

背景：非小细胞肺癌肿瘤组织中干细胞标志物CD133表达会呈现出一定的变化,并与疾病的发生和发展存在一定的联系。目的：探讨非小细胞肺癌肿瘤组织干细胞标志物CD133的表达情况,分析其与临床病理因素以及预后之间的关系。方法：收集135例非小细胞肺癌组织标本和60例正常肺组织标本。采用免疫组织化学染色法检测两组标本CD133的表达,并分析非小细胞肺癌肿瘤组织中CD133蛋白的表达与临床病理因素之间的关系。结果与结论：①非小细胞肺癌组CD133蛋白阳性表达率显著高于正常对照组(P < 0.05)。②CD133蛋白阳性表达与非小细胞肺癌患者年龄、性别以及肿瘤大小、肿瘤位置、组织学类型无关(P > 0.05);随着非小细胞肺癌肿瘤组织分化越差,CD133蛋白阳性表达呈现出不断上升趋势(P < 0.05);CD133蛋白阳性表达率在不同临床分期以及淋巴结有无转移之间差异也有显著性意义(P < 0.05)。③CD133以及TNM分期是非小细胞肺癌患者预后独立影响因素(P < 0.05),CD133蛋白表达阳性组中位生存时间显著短于阴性组(P < 0.05)。以上结果表明CD133参与非小细胞肺癌的发生和发展以及浸润和转移,对疾病的进展以及预后判断有重要的临床意义。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

大肠癌及癌旁肠黏膜组织中人子宫颈癌癌基因mRNA及蛋白的表达

目的探讨HCCR-1 mRNA及HCCR-1蛋白在人大肠癌、癌旁组织及远端正常肠黏膜组织中的表达,及其临床病理学意义。方法应用RT-PCR方法检测84例大肠癌、癌旁组织及15例远端正常肠黏膜组织中HCCR-1 mRNA水平,应用Westernblot技术检测84例大肠癌、癌旁组织及15例远端正常肠黏膜组织中HCCR-1蛋白的表达水平,应用免疫组化SP法检测84例大肠癌、癌旁组织及15例远端正常肠黏膜组织、30例管状及绒毛管状腺瘤组织中HCCR-1蛋白的表达,分析HCCR-1表达水平与大肠癌临床病理特征的相关性。结果 HCCR-1 mRNA在人大肠癌及癌旁肠黏膜组织中均有表达。HCCR-1蛋白在癌旁肠黏膜组织和管状及绒毛管状腺瘤组织的阳性率分别为38%(32/84)、30%(9/30),两者差异无统计学意义(P>0.05),在大肠癌中的阳性率为81%(68/84),明显高于癌旁肠黏膜组织和管状及绒毛管状腺瘤的阳性率(P<0.05)。大肠癌HCCR-1蛋白的高表达与肿瘤浸润深度呈明显正相关(P=0.007),与肿瘤是否转移无关(P>0.05)。结论人大肠癌存在HCCR-1蛋白的高表达,其与大肠癌的恶变演进有关。HCCR-1 mRNA的表达可能影响大肠癌的发生、发展。     

大肠癌组织中Annexin Ⅰ蛋白的表达及意义

目的探讨AnnexinⅠ(AnxⅠ)蛋白在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌发生、发展和转移的关系。方法应用SP免疫组化法检测95例大肠癌及35例正常大肠黏膜组织中AnxⅠ蛋白的表达情况。结果正常组AnxⅠ蛋白不表达,大肠癌无淋巴结转移组和淋巴结转移组AnxⅠ蛋白表达率分别为28·6%(10/35)和53·3%(32/60),三组间表达差异具有显著性(P<0·01);其中,转移组表达率高于无转移组(P<0·05),无转移组表达率高于正常组(P<0·01)。其表达与淋巴结转移呈正相关(P<0·05),但与组织学分型及病理分级无关(P>0·05)。大肠癌转移组淋巴结转移癌AnxⅠ蛋白表达率(42·9%,15/35)较原发癌(51·4%,18/35)低,但二者差异无显著性(P>0·05)。结论AnxⅠ蛋白表达上调与大肠癌发生发展和转移密切相关,可作为反映大肠癌生物学行为和判断预后的重要指征。     

HCCR-1 mRNA and protein expression in human colorectal carcinoma and adjacent mucosa

目的 探讨HCCR-1 mRNA及HCCR-1蛋白在人大肠癌、癌旁组织及远端正常肠黏膜组织中的表达,及其临床病理学意义.方法 应用RT-PCR方法检测84例大肠癌、癌旁组织及15例远端正常肠黏膜组织中HCCR-1 mRNA水平,应用Western blot技术检测84例大肠癌、癌旁组织及15例远端正常肠黏膜组织中HCCR-1蛋白的表达水平,应用免疫组化SP法检测84例大肠癌、癌旁组织及15例远端正常肠黏膜组织、30例管状及绒毛管状腺瘤组织中HCCR-1蛋白的表达,分析HCCR-1表达水平与大肠癌临床病理特征的相关性.结果 HCCR-1 mRNA在人大肠癌及癌旁肠黏膜组织中均有表达.HCCR-1蛋白在癌旁肠黏膜组织和管状及绒毛管状腺瘤组织的阳性率分别为38%(32/84)、30%(9/30),两者差异无统计学意义(P>0.05),在大肠癌中的阳性率为81%(68/84),明显高于癌旁肠黏膜组织和管状及绒毛管状腺瘤的阳性率(P<0.05).大肠癌HCCR-1蛋白的高表达与肿瘤浸润深度呈明显正相关(P=0.007),与肿瘤是否转移无关(P>0.05).结论 人大肠癌存在HCCR-1蛋白的高表达,其与大肠癌的恶变演进有关.HCCR-1 mRNA的表达可能影响大肠癌的发生、发展.     

外周血CK-20基因表达与大肠癌微转移关系的研究

目的:探讨靶基因CK-20在直肠癌患者外周血中的表达及与肿瘤微转移的关系。方法:应用套式RT-PCR方法检测10例健康成人,17例非恶性消化系统疾病患者,32例大肠癌患者外周血中的肿瘤细胞。结果:①正常对照组及非大肠癌对照组均未检出CK-20mRNA阳性细胞;②大肠癌组中,2例A期患者CK-20mRNA均呈阴性,15例B期患者中阳性4例;10例C期患者中阳性6例;5例D期患者中阳性4例;③在32例大肠癌患者中CK-20mRNA阳性总检出率为43.8%;A、B期阳性率为23.5%;C、D期阳性率为66.7%。结论:应用RT-PCR法检测外周血瘤细胞的CK-20靶基因对大肠癌具有特异、敏感、无损伤等特点,它可能有助于肿瘤经血液微转移的早期诊断以及指导化疗。     

Sonic hedgehog mRNA及其蛋白在大肠癌的表达及其临床意义

目的 探讨大肠癌中Hedgehog信号通路相关基因Sonic hedgehog(SHH)的表达及其临床意义.方法 应用RT-PCR及免疫组织化学法(Envison二步法)检测本院2008年12月至2009年4月收集的43例大肠癌组织和距离癌10 cm以上的癌旁组织的SHHmRNA及蛋白的表达情况,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对照,分析其与大肠癌患者临床和病理各变量的相关性.结果 凝胶成像分析显示阳性表达的样本SHH mRNA片段大小为280 bp,与理论值相符,未表达的样本则未见相应条带.大肠癌组织SHHmRNA表达阳性率为27.9%(12/43),与癌旁组织的18.6%(8/43)差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于正常大肠黏膜的0%(0/20)(均P＜0.05).SHH mRNA在大肠癌组织的表达强度显著高于癌旁组织(P＜0.05),在正常大肠黏膜则未见其表达.免疫组织化学显示SHH蛋白在大肠癌组织和癌旁组织均有阳性表达,细胞膜及胞质内出现棕黄褐色颗粒,背景不着色;正常大肠黏膜阴性表达.SHH蛋白在大肠癌组织的表达阳性率显著高于正常大肠黏膜[25.6%(11/43)比0%(0/20),P＜0.05],在大肠癌组织与癌旁组织、癌旁组织与正常大肠黏膜的表达阳性率差异则无统计学意义(均P＞0.05).SHH蛋白的表达强度大肠癌组织＞癌旁组织＞正常大肠黏膜(均P＜0.05).大肠癌组织中的SHH mRNA和蛋白表达强度与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、病理分型等变量均无明显关系(均P＞0.05).结论 SHH mRNA和蛋白在大肠癌组织中表达显著增强,但与临床和病理各变量无关联.     

肿瘤干细胞标志物CD166在大肠癌的表达及其临床意义

目的 检测肿瘤干细胞标志CD166在大肠癌中的表达,以了解其在大肠癌发病中的意义.方法 用RT-PCR检测23例大肠癌患者的癌组织和癌外正常大肠组织中的CD166 mRNA的阳性率和表达水平,并分析其与临床和病理各变量的相关性.结果 大肠癌组织CD166 mRNA表达的阳性率为95.7%.表达水平为0.309±0.145,均显著高于正常大肠组织的39.1%和0.109±0.255(P<0.01),其表达率与表达强度与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤大小、病理分型等均无显著关系(P>0.05).结论 肿瘤干细胞标志物CD166在大肠癌中高表达,其表达与临床和病理的特征无显著关系.     

HMGB1在类风湿关节炎疾病活动中的作用及其与EMMPRIN/CD147表达的相关性研究

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1在类风湿关节炎(RA)病情活动中的作用机制.方法:选取RA患者74例(活动期38例、非活动期36例)及健康对照者26例.采用RT-PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中HMGB1 mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血清中HMGB1蛋白的表达.采用流式细胞术分析CD14+单核细胞表面Toll样受体(TLR)4和EMMPRIN/CD147的表达.结果:活动期RA组HMGB1 mRNA相对表达量和蛋白水平均高于健康对照者和非活动期RA患者[分别为2.63 vs 0.71,0.93和 (10.20±1.24 vs 7.48±1.75,8.31±1.85)ng/ml)](P＜0.01).活动期RA患者CD14+单核细胞上TLR4和CD147的表达量均显著高于非活动期和健康对照组(P＜0.01),非活动期患者显著高于健康对照组(P＜0.01).TLR4和CD147双阳性细胞数量和蛋白的相对表达量在活动期RA患者中均最高.血清中HMGB1蛋白水平与ESR、CRP、RF、及关节X线分期均呈正相关,亦与TLR4和CD147的表达呈正相关(P＜0.05或P＜0.01).结论:RA患者PBMC具有合成和分泌HMGB1蛋白的功能.HMGB1可能通过与TLR4结合激活CD14+单核细胞并表达CD147,促进其向滑膜组织迁移而加速骨质破坏.     

肿瘤干细胞表面标志物CD133表达水平对Ⅱ期结直肠癌肝转移发生风险的预测价值分析

目的 分析CD133表达水平对Ⅱ期结直肠癌患者肝转移发生风险的预测价值.方法 本研究选取2012年至2016年间本院就诊的确诊Ⅱ期CRC患者98例进行研究,随访收集肝转移发生情况信息并讨论CD133表达水平对Ⅱ期CRC肝转移发生风险的预测价值.采用SPSS17.0软件分析数据.结果 基线CD133的表达阳性特征分析结果提示肿瘤组织和癌旁组织中CD133的表达阳性率未见性别差异.随访1年期间4例患者死亡,此4例患者均为基线测量中CD133阳性表达组患者,其中2例并见癌旁组织CD133表达阳性.其余94例患者中肝转移者检出率为22.34％.基线肿瘤组织CD133表达阳性的75例患者中随访检出肝转移患者发生率为26.67％,显著高于基线肿瘤组织CD133阴性者中的发生水平,P ＜0.05;此外基线癌旁组织CD133表达阳性者中随访肝转移的发生率为87.50％,高于阴性表达组水平,P＜0.05.结论 肿瘤组织中CD133表达增加会提高Ⅱ期结直肠癌肝转移的潜在风险,且癌旁组织中CD133表达增高也对肿瘤肝转移具有一定的预测功能.     

癌胚抗原信使核糖核酸诊断大肠癌血液转移的价值

为了解检测外周血液癌胚抗原信使核糖核酸（CEA mRNA）在诊断大肠癌血液转移方面的应用价值,应用逆转录-套式-聚合酶链反应技术（RT-NP-PCR）检测血液标本CEA mRNA。结果显示,大肠癌组CEA mRNA的阳性率（68.6%）显著高于对照组（2.2%）（P〈0.01）。检测CEA mRNA诊断大肠癌血液转移的特异性为97.8%,灵敏度为68.6%,准确度为83.4%。检测血液中CEA mRNA有助于诊断大肠癌血液转移。     

Leptin receptor (Ob-R) mRNA expression and serum leptin concentration in patients with colorectal and metastatic colorectal cancer

The objective of the present study was to investigate the effect of leptin on the progression of colorectal carcinoma to metastatic disease by analyzing the serum leptin concentration and Ob-R gene expression in colon cancer tissues. Tissue samples were obtained from 31 patients who underwent surgical resection for colon (18 cases) and metastatic colon (13 cases) cancer. Serum leptin concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Ob-R mRNA expression by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) for both groups. ELISA data were analyzed by the Student t-test and RT-PCR data were analyzed by the Mann-Whitney U-test. RT-PCR results demonstrated that mRNA expression of Ob-R in human metastatic colorectal cancer was higher than in local colorectal cancer tissues. On the other hand, mean serum leptin concentration was significantly higher in local colorectal cancer patients compared to patients with metastatic colorectal cancer. The results of the present study suggest a role for leptin in the progression of colon cancer to metastatic disease without weight loss. In other words, significantly increased Ob-R mRNA expression and decreased serum leptin concentration in patients with metastatic colon cancer indicate that sensitization to leptin activity may be a major indicator of metastasis to the colon tissue and the determination of leptin concentration and leptin gene expression may be used to aid the diagnosis.     

结直肠癌患者化疗后miRNA-21、Ataxin-3、CD133表达情况及其与预后的关系分析

目的 探讨结直肠癌患者化疗后微小核糖核酸21(miRNA-21)、多聚谷氨酰胺蛋白3(Ataxin-3)、白细胞分化抗原133(CD133)表达情况及其与预后的关系.方法 收集2012年2月至2014年3月医院收治的93例结直肠癌患者的临床资料,按是否接受术前新辅助化疗(NC)分为NC组(n=43)与非NC组(n=50),所有患者均留取病理标本,有完整miRNA-21、Ataxin-3、CD133测定结果,分析化疗后结直肠癌患者癌组织上述因子表达情况及其与患者预后的关系.结果 NC组Ataxin-3阳性表达率、miRNA-21表达水平低于非NC组,CD133阳性表达率高于非NC组(P＜0.05);随化疗反应程度的降低,Ataxin-3阳性率降低,CD133阳性率上升,miRNA-21表达增加(P＜0.05);不同T分期、N分期、TNM分期及不同Ataxin-3、CD133、miRNA-21表达水平结直肠癌患者3年生存率比较有统计学意义(P ＜0.05);Ataxin-3表达水平与结直肠癌3年生存率呈正相关(P＜0.05),CD133、miRNA-21与结直肠癌3年生存率呈负相关(P＜0.05).结论 结直肠癌患者化疗后miRNA-21表达降低,Ataxin-3阳性率降低,CD133阳性率上升,且上述因子表达均与患者化疗反应性及预后有关.     

MLH1基因415G/C多态与结肠癌遗传易感性的关联研究

目的 探讨MLH1基因415G/C多态与我国汉族人群结肠癌发生的关系.方法 收集97例散发结肠癌患者,138名正常对照,以及5个结肠癌家系的6例结肠癌患者,19名直系亲属.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法检测外周血MLH1基因415位点多态性.采用逆转录-聚合酶链反应检测各基因型结肠癌患者正常结肠黏膜的MLH1 mRNA表达.结果 散发结肠癌患者MLH1基因415位点CC基因型频率明显高于正常对照(P=0.035,OR=5.29,95%CI:1.07～26.04).结肠癌家系中患者和直系亲属的C等位基因的频率明显高于散发患者和正常对照(P=0.003和P=0.006).各基因型结肠癌患者正常结肠黏膜的MLH1 mRNA表达差异无统计学意义.结论 MLH1基因415G/C多态可能是我国散发结肠癌的遗传易感因素,但不是通过下调MLH1 mRNA表达而致病的.结肠癌家系中C等位基因携带者患结肠癌可能性更大.     

MLH1基因415G/C多态与结肠癌遗传易感性的关联研究

目的 探讨MLH1基因415G/C多态与我国汉族人群结肠癌发生的关系.方法 收集97例散发结肠癌患者,138名正常对照,以及5个结肠癌家系的6例结肠癌患者,19名直系亲属.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法检测外周血MLH1基因415位点多态性.采用逆转录-聚合酶链反应检测各基因型结肠癌患者正常结肠黏膜的MLH1 mRNA表达.结果 散发结肠癌患者MLH1基因415位点CC基因型频率明显高于正常对照(P=0.035,OR=5.29,95%CI:1.07～26.04).结肠癌家系中患者和直系亲属的C等位基因的频率明显高于散发患者和正常对照(P=0.003和P=0.006).各基因型结肠癌患者正常结肠黏膜的MLH1 mRNA表达差异无统计学意义.结论 MLH1基因415G/C多态可能是我国散发结肠癌的遗传易感因素,但不是通过下调MLH1 mRNA表达而致病的.结肠癌家系中C等位基因携带者患结肠癌可能性更大.