稳定转染增强型绿色荧光蛋白大鼠骨髓间充质干细胞系的建立

背景：利用间充质干细胞或含有治疗因子的干细胞进行有选择性的杀伤肿瘤细胞是一种有前途的治疗方法。 目的：建立含稳定转染增强型绿色荧光蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞系。 方法：通过脂质体介导慢病毒质粒pVector-EGFP、pHelper、Envelope 共转染293T细胞完成载体病毒构建,以实时荧光定量PCR检测慢病毒滴度;取对数生长期的SD大鼠骨髓间充质干细胞,以复感染指数MOI值0,5,10,15,20加入携带报告基因增强型绿色荧光蛋白的慢病毒载体稀释液,72 h后观察各组增强型绿色荧光蛋白的表达效率及阳性转染率。 结果与结论：携带增强型绿色荧光蛋白的慢病毒载体系统转染293T细胞能够正确表达,滴度为1×10⁸ TU/mL。包装好的病毒颗粒转染大鼠骨髓间充质干细胞二三天后,各孔均有增强型绿色荧光蛋白的表达。MOI值从0增至10,细胞的阳性表达率逐渐提高(P < 0.05),MOI值为10的组能获得>70%的转染率,但MOI值从10增至20,转染率变化不明显。说明以MOI值为10的滴度将慢病毒载体可将外源基因高效转入大鼠骨髓间充质干细胞内,建立含稳定转染增强型绿色荧光蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞系。     

Sofast介导增强性绿色荧光蛋白基因转染骨髓间充质干细胞

目的:研究新型阳离子聚合物Sofast基因转染试剂(Sofast)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行基因修饰的可行性.方法:在体外分离和扩增MSCs,在Sofast介导下行pEGFP-N1转染BMSCs,倒置荧光显微镜下观察转染效率及瞬时表达情况,MTT试验检测转染细胞的存活率.结果:增强性绿色荧光蛋白(EGFP)在基因转染24 h后开始表达,48～72 h最高.1周后表达逐渐减弱;质粒与Sofast体积比例为3:1时,pEGFP-N1转染BMSCs的效率为85%,细胞存活率为94.2%.结论:Sofast介导EGFP转染BMSCs是一种较好的转染标记方法.     

慢病毒介导绿色荧光蛋白转染人胚胎干细胞及其培养

目的 稳定培养人胚胎干细胞,并通过慢病毒载体对其进行绿色荧光蛋白标记.方法 利用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层或Matrigel作为基质培养人胚胎干细胞,包装带有GFP序列的慢病毒转染人胚胎干细胞.对转染前后的人胚胎干细胞进行了碱性磷酸酶和SSEA-3免疫组化鉴定.结果 在MEF饲养层和Matrigel上均可培养出呈克隆样生长,表达标志抗原的人胚胎干细胞,经慢病毒转染及抗生素筛选后仍可稳定表达GFP.结论 成功地培养了人胚胎干细胞系,并进行了GFP标记.     

基因重组腺病毒载体与慢病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的对比北大核心

背景:腺病毒载体和慢病毒载体均是较好的组织工程基因载体,两者在介导骨形态发生蛋白2转染兔骨髓间充质干细胞中的差异尚待探究。目的:比较腺病毒和慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2转染体外培养兔骨髓间充质干细胞的转导效率、持续时间及外源基因表达差异。方法:将第5代兔骨髓间充质干细胞分3组培养,A组以腺病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Ad-EGFP/BMP-2)转染细胞,B组以慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Lenti-EGFP/BMP-2)转染细胞,C组为未进行转染。转染24 h、48 h、72 h、1周、3周,检测EGFP基因表达;转染72 h后,免疫组织化学观察细胞骨形态发生蛋白2的表达;转染后72 h、1周、3周,Western blot检测骨形态发生蛋白2蛋白表达。结果与结论:(1)转染24 h后,A、B组可见EGFP表达,A组明显强于B组;转染48 h后,A、B组荧光进一步增强;转染72 h后,A组荧光强度近高峰,B组荧光持续增强。转染1周后,A组荧光强度开始下降,B组荧光强度仍然增强。转染3周后,A组荧光强度明显下降甚至消失,B组荧光强度有所下降,但仍然保持一定的表达。C组在各时间点均无EGFP表达;(2)A、B组胞浆均呈骨形态发生蛋白2阳性表达,C组呈阴性表达;(3)转染72 h后,A组骨形态发生蛋白2蛋白表达量强于B组;转染1周后,A组表达下降,B组表达增强并强于A组;转染3周后,A组表达微弱,B组持续表达且明显强于A组;(4)结果表明,相对腺病毒载体,慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2基因转染兔骨髓间充质干细胞在表达持续时间上具有一定的优势。     

增强型绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞与表面置换珊瑚人工骨的培养

目的通过增强型绿色荧光蛋白（eGFP）标记的人骨髓间充质干细胞（MSC）与表面置换珊瑚羟基磷灰石（SCHA）培养．研究SCHA与细胞黏附、增殖的情况。方法将海南天然滨珊瑚在特定温度和压力下部分水热反应,制成SCHA。将SCHA薄片（SCHA组）和盖玻片（玻片组）分别与eGFP标记的人骨髓MSC体外培养,分别于4、8、12、16d进行死活细胞染色和Alamar Blue实验,用荧光显微镜观察细胞活性,荧光分光光度计测量细胞增殖。结果人骨髓MSC在SCHA的表面和孔道内生长良好,第8天、第16天与玻片组达同样水平,之后超过玻片组并保持稳定状态。结论SCHA无细胞毒性,具有较好的细胞相容性,是一种良好的骨组织工程支架材料。     

绿色荧光蛋白标记人脐带间充质干细胞兔耳移植的实验观察

目的：观察人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）移植于兔耳后不同时间存活的情况,为hUC-MSCs 参与动物实验提供实验依据。方法以腺病毒介导绿色荧光蛋白（GFP）基因体外转染hUC-MSCs 48h,于兔耳皮下注射移植,于注射移植后即刻及移植后3、7、14、21d 取材并在荧光显微镜下观察 hUC-MSCs 的存活情况。注射移植后3d 取材石蜡切片行苏木精-伊红（HE）染色观察移植细胞部位组织病理图像。结果 hUC-MSCs 注射移植后3d、7d 时 GFP 荧光表达较强,细胞轮廓清晰,与注射后即刻平均吸光度值比较,移植后3、7d 检测荧光吸光度值差异均无统计学意义（P〉0.05）;移植后14d、21d 时GFP荧光表达较弱,吸光度值差异有统计学意义（ P〈0.05）。术后3 d hUC-MSCs 移植区域兔耳组织切片光镜下移植 hUC-MSCs 细胞清晰可见,无急性排斥反应特征出现。结论hUC-MSCs至少能够在1周时间内较好存活于兔耳皮下,其与异种个体组织相容性较好。     

慢病毒载体Pax6-EGFP构建及转染人骨髓间充质干细胞

BACKGROUND:Pax6 gene plays an important role in eye development and differentiation, and to study how it regulates the differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), gaining the BMSCs stably over-expressing Pax6 is crucial, which is also the basis of stem cell replacement therapy. OBJECTIVE:To construct a lentivirus vector containing Pax6 and detect the expression of Pax6 in transfected human BMSCs. METHODS:Pax6 gene was extracted using PCR. After its connection with lentivirus vector pHIV-EGFP, it was then packaged by 293T cells. The human BMSCs were transfected with recombinant lentivirus Pax6-EGFP as well as lentivirus vector pHIV-EGFP, which was considered negative control group. The cellular morphology was observed by a fluorescence microscope, and the mRNA expression of Pax6 was detected by real-time PCR. RESULTS AND CONCLUSION:The recombinant lentivirus Pax6-EGFP was constructed successfully with a titer of 3×109 pfu/L. After the transfection, both the green fluorescent protein and Pax6 gene were expressed detected using fluorescence microscope and real-time PCR, showing that the method of lentiviral transfection is a safe and effective way to modify BMSCs.     

慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞

背景：原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。 目的：验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。 方法：将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况。将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况。 结果与结论：基因转染48 h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减。转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上。提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究。     

不同密度骨髓间充质干细胞移植对家兔股骨头缺血性坏死的治疗作用

目的比较不同密度的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植,对实验性家兔股骨头缺血性坏死(ANFH)的治疗作用,探索合适的BMSCs移植密度。方法选取成年健康新西兰大耳白兔40只,根据BMSCs移植密度随机分为1×104(A),1×105(B),1×106(C),1×107(D),1×108(E)/ml BMSCs5组。对术后2、4、6、8周的股骨头标本,进行X-射线检查、组织学观察和图象分析。结果X-射线观察显示:随着时间的进展,各组钻孔区密度逐渐增加,A组密度增加不均,8周时,B、C、D、E组钻孔区呈现正常的骨小梁结构,A组部分钻孔区域呈现低密度腔隙。组织学观察表明:术后2周时,各组钻孔区内出现大量的成骨细胞,A组钻孔区中心为炎性细胞;8周时B、C、D、E组钻孔区内,骨小梁趋于成熟。A组钻孔区内分布有不均匀的骨小梁和骨髓组织。图像分析表明:在B、C、D、E组钻孔区内骨小梁的面积百分比值明显高于A组。结论体外培养的BMSCs移植修复ANFH时,不宜选择104以下的密度级别,应该尽可能提高移植细胞的密度。     

脐血间充质干细胞移植与免疫调节

背景：近年研究显示,脐血间充质干细胞的自我更新和多向分化潜能为细胞移植治疗提供了基础条件,而其免疫调节功能也极大地拓展了细胞治疗的方向和范围。 目的：就近期脐血间充质干细胞的免疫调节和细胞移植研究进行回顾分析。 方法：应用计算机以“umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells”为关键词检索Pubmed数据库,以“脐血间充质干细胞”为关键词检索知网数据库,时间限定为2008-01/2011-06,语言种类为“English”和汉语。通过阅读标题和摘要进行初筛,排除研究内容与此文无关的文献、重复性研究及Meta分析,选择近期发表或发表在权威杂志的30篇文献进行综述。 结果与结论：脐血间充质干细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的自我更新和多向分化潜能。通过细胞移植技术,脐血间充质干细胞在糖尿病、神经退化性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病等以及神经损伤后的修复治疗方面显示出很强的潜力。同时,脐血间充质干细胞又具有免疫调节作用,其可通过下调T细胞的增殖,降低免疫反应。利用该特点,脐血间充质干细胞在一些免疫性疾病,如移植物抗宿主病和狼疮性肾炎等疾病的细胞治疗方面也取得了积极的进展。     

人工骨联合骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死

背景：骨髓间充质干细胞具有自我增殖能力和分化多潜能性,β-磷酸三钙陶瓷人工骨具有良好的细胞亲和力及良好的生物相容性,是治疗股骨头坏死的热点。 目的：观察骨髓间充质干细胞联合β-磷酸三钙对兔股骨头坏死的修复作用。 方法：抽取兔自体骨髓并分离和培养骨髓间充质干细胞,扩增至3代后与β-磷酸三钙复合;24只兔建立双侧股骨头坏死动物模型,48侧股骨头随机分为3组,空白组制作缺损而不填充任何材料;β-磷酸三钙组单纯填充β-磷酸三钙;复合组填充β-磷酸三钙和骨髓间充质干细胞的复合材料。 结果与结论：修复后8周复合组成骨细胞较多,新生骨小梁相互连接成片;β-磷酸三钙组骨量少,部分纤维组织填充;空白组缺损区靠近宿主骨区域可见少许软骨细胞及软骨组织,纤维组织较多。修复后4,8周复合组骨缺损平均阻射密度较β-磷酸三钙组、空白组增高(P < 0.05);β-磷酸三钙组与空白组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。采用Lane-Sandhu法评分标准,4,8周复合组骨小梁面积均高于β-磷酸三钙组及空白组(P < 0.05)。提示骨髓间充质干细胞有较强的成骨作用,有助于股骨头坏死缺损的修复。     

脐带间充质干细胞促血管新生在治疗下肢缺血中的研究与应用

背景：干细胞在一定诱导条件下可分化成为血管性内皮细胞,促进缺血下肢血管新生和有效循环的建立,改善糖尿病远端缺血肢体供血。目的：概述脐带间充质干细胞生物学特性、促血管新生的机制,探讨脐带间充质干细胞修复神经病变及慢性创面等基础研究和临床研究现状。方法：检索2000至2015 年PubMed 数据库、维普中文科技数据库及万方数据相关文献。英文检索词为“stem cells transplantation,umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell,diabetic angiopathies”;中文检索词为“干细胞移植,脐带间充质干细胞,糖尿病血管病变”。结果与结论：与目前外周血干细胞及骨髓间充质干细胞移植相比,脐带间充质干细胞来源更广泛,采集方便,扩增能力强,无免疫原性,不存在伦理学争议,成为促血管新生和基因治疗缺血性疾病的理想靶细胞和种子细胞。脐带间充质干细胞能够分化为血管内皮细胞和成纤维细胞参与创面愈合,也可促进神经营养因子表达,促进缺血组织神经再生,并通过旁分泌与自分泌细胞因子、抗炎及免疫调节等参与受损组织的组织修复,加快溃疡面愈合,对于改善糖尿病下肢缺血、修复糖尿病周围神经病变和促进慢性溃疡创面愈合等治疗中具有广阔的应用前景。与单纯的干细胞移植比较,脐带间充质干细胞联合细胞因子基因治疗可进一步提高干细胞存活率及促进血管新生。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

Foxc2基因修饰骨髓间充质干细胞修复实验性兔股骨头坏死

BACKGROUND: Core decompression can delay early osteonecrosis of the femoral head, but cannot completely repair the necrotic femoral head. Eventually, femoral head collapse, even bone necrosis, will occur. OBJECTIVE: To explore the curative effect of implantation of gelatin sponge carrying Foxc2-transfected bone marrow mesenchymal stem cells on the repair of experimental femoral head necrosis in rabbits. METHODS: Forty New Zealand white rabbits were selected, and femoral head necrosis models were prepared successfully in 24 of 40 rabbits. Then, model rabbits were randomized into four groups: blank control group (n=4) with no treatment, core decompression group (n=4), GFP group (n=8) subjected to core decompression and implantation of gelatin sponge carrying GFP-transfected bone marrow mesenchymal stem cells, and Foxc2 group (n=8) subjected to core decompression and implantation of gelatin sponge carrying Foxc2-transfected bone marrow mesenchymal stem cells. At 1, 2, 4 weeks after implantation, ELISA was used to detect Foxc2 protein levels in the transplanted region. At 4, 8, 12 weeks after implantation, MRI scan of the hip was performed, and femoral head tissues were taken and sliced into sections for hematoxylin-eosin staining to observe bone growth. At 12 weeks after implantation, histomorphometry measurement and transmission electron microscope observation were carried out. RESULTS AND CONCLUSION: At 1, 2, 4 weeks after implantation, Foxc2 was highly expressed in the femoral head in the Foxc2 group, which was significantly higher than that in the GFP group. At 4, 8, 12 weeks, only a few of new bone formed in the core decompression group and GFP group; at 12 weeks, fibrous tissues formed in the decompression channel. New bone formation was evident in the Foxc2 group, and at 12 weeks, the necrotic region was repaired completely. MRI findings showed normal femoral head morphology and signals in the Foxc2 group at 12 weeks, but there were decreased signals of the femoral head in the core decompression group and GFP group. These findings indicate that Foxc2-transfected bone marrow mesenchymal stem cell transplantation via core decompression has good curative effects on experimental femoral head necrosis in animals.       

Umbilical cord blood stem cells: induction of differentiation into mesenchymal lineages by cell-cell contacts with various mesenchymal cells

CD133(+) cells isolated from bone marrow, peripheral blood, or umbilical cord blood (UCB) represent an established source of transplantable hematopoietic progenitors. Further, there is increasing evidence that such CD133(+) cell isolates comprise subpopulations capable of differentiating into several mesenchymal lineages. In this study, we investigated conditions under which mesenchymal differentiation can be induced, particularly the role of cell-cell contacts with mesenchymal cells. A purified, nearly homogeneous CD133(+) population of human UCB cells was expanded by stimulation with platelet-derived growth factor and epidermal growth factor, labeled with the fluorescent marker DiI and cocultivated with rat osteoblasts, C2C12 myoblasts, or rat cardiomyocytes, respectively. In control experiments, the two cell types were separated by microporous membranes to avoid cell-cell contacts. Direct coculture of DiI-labeled UCB cells with the different mesenchymal cell populations resulted in both significant morphological changes and upregulation of lineage-specific markers. Expression of osteocalcin, myosin heavy chain, or alpha-actinin confirmed differentiation of the UCB cells into an osteoblastic, myoblastic, or cardiomyocytic phenotype, respectively. In contrast, coculture of UCB cells with the respective inducer cells under conditions preventing cell-cell contacts yielded minor, if any, evidence for such differentiation. Our data, thus, indicate that UCB cell expansion in vitro and subsequent direct cell-cell contacts with mesenchymal cells can induce their differentiation into mesenchymal lineages specific to the cell type they are in contact with. This finding has important implications for understanding the homing of adult stem cells and the promise of UCB as a cell source for tissue engineering and regenerative medicine.     

骨髓间充质干细胞移植联合氯化锂治疗兔股骨头缺血坏死疗效

BACKGROUND: Lithium chloride can promote the proliferation and osteogenic capacity of bone marrow mesenchymal stem cells in the necrotic region after avascular necrosis of the femoral head, which has become an issue of concern. OBJECTIVE: To compare the advantages and disadvantages of bone marrow stem cell transplantation combined with lithium chloride in the treatment of rabbit femoral head necrosis. METHODS: Passage 2 bone marrow mesenchymal stem cells from 1-week-old New Zealand rabbits were cultured in 0, 5, 10, 20, 40 mmol/L lithium chloride. Forty-eight healthy adult New Zealand rabbits were selected to make femoral head necrosis models in the right femoral head using liquid nitrogen freezing method and then randomized into four groups: model group with no implantation; lithium chloride group given lithium chloride treatment at 3 days after modeling; cell transplantation group given gelatin sponge implantation and bone marrow mesenchymal stem cell suspension injection into the femoral head after modeling; combined group given bone marrow mesenchymal stem cell suspension injection and lithium chloride treatment. Intraperitoneal injection of lithium chloride (45.2 mg/kg) was given daily beginning at the postoperative 3rd day, and the treatment duration was 4 weeks. RESULTS AND CONCLUSION: Lithium chloride at 10 mmol/L had the maximum effect on the proliferation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells, and if the concentration of lithium chloride was > 10 mmol/L, the promotion role of lithium chloride began to decline. After combined treatment, the morphology of the femoral head was restored a little, with increased bone density and thickened trabecular bone; the level of β-catenin in the femoral head was significantly increased in the combined group compared with the cell transplantation group or the lithium chloride group. These findings show that bone marrow stem cell transplantation combined with lithium chloride treatment can promote the recovery from femoral head necrosis by increasing bone mass of the trabecular bone and bone density of the femoral head in the necrotic region.      

携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞及其成脂分化

背景：胰岛素是成脂诱导剂的重要组成成分。然而胰岛素存在半衰期,会随着体内代谢不断灭活及降解,植入体内的细胞或材料无法像体外那样以更换培养液来达到目的。实验拟通过转染胰岛素基因,使转染后的干细胞稳定分泌胰岛素,促进其成脂分化。 目的：探讨携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞后对其成脂分化能力的影响。 方法：取第3代人脐带间充质干细胞,以感染复数为20转染腺病毒载体。实验分为4组：对照组为第4代人脐带间充质干细胞;实验组1为腺病毒转染的第4代人脐带间充质干细胞;实验组2为第4代人脐带间充质干细胞+成脂诱导液;实验组3为腺病毒转染的第4代人脐带间充质干细胞+成脂诱导液。 结果与结论：转染48 h后实验组1和实验组3的人脐带间充质干细胞在荧光显微镜下显现弱荧光,72 h后荧光较强。经脂肪诱导培养液培养14 d后,实验组1,2,3油红O染色后显微镜下呈红色,对照组未见脂滴形成,实验组1可见一些细小脂滴形成;实验组3与实验组2相比,脂滴大且多,定量分析显示,实验组3油红O染色阳性的面积和吸光度大于实验组2(P < 0.05)。由此说明携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞后可促进其成脂能力。     

脐带间充质干细胞移植治疗大鼠脑缺血损伤

背景：对于缺血性脑卒中至今尚无确实有效的药物治疗,干细胞因其具有高度自我更新能力和多向分化潜能,使其重建中枢神经系统结构与功能成为可能。 目的：观察脐带间充质干细胞移植治疗缺血性脑卒中模型鼠的效果及安全性,并探讨其可能机制。 方法：体外分离人脐带间充质干细胞,移植前以BrdU标记。将SD雄性大鼠制作大脑中动脉闭塞模型后随机分为3组：移植组于造模后第7天,移植脐带间充质干细胞到损伤侧纹状体,PBS组给予等量PBS,模型组大鼠不做处理。 结果与结论：①人脐带间充质干细胞移植组大鼠mNSS评分恢复优于模型组(P < 0.05);模型组mNSS评分在损伤后35 d内恢复速度慢于模型组(P < 0.05),至第56天与模型组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。②移植组大鼠损伤中心及周围均可见Brdu染色阳性细胞及与 Nestin、微管缔合蛋白2、胶原纤维酸性蛋白、Ⅷ因子、血管内皮生长因子免疫组织化学双染阳性细胞。表明脐带间充质干细胞可以在体外分离培养,移植后能在鼠宿主脑内存活、分化,促进大脑中动脉闭塞模型鼠神经功能的恢复。推测其机制可能与移植后细胞分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞,并分泌或促进宿主分泌神经营养因子、促进新生血管形成有关。关键词：大脑中动脉闭塞;人脐带间充质干细胞;大鼠;胶原纤维酸性蛋白;血管内皮生长因子;神经功能 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.011     

骨髓间充质干细胞联合茶黄素修复激素性股骨头坏死

背景：临床上对于股骨头坏死病理机制尚不完全知晓,大剂量使用糖皮质激素容易引起股骨头坏死。 目的：观察骨髓间充质干细胞联合茶黄素在大鼠激素性股骨头坏死中的临床治疗效果。 方法：体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,将其复合在明胶海绵上。实验分4组,骨髓间充质干细胞联合茶黄素组采用液氮冷冻法建立激素性股骨头坏死鼠模型,并移植复合了骨髓间充质干细胞的明胶海绵,每天进行250 mg茶黄素灌服,设模型对照组,单纯减压组和细胞移植组作对照。 结果与结论：造模后4周,4组大鼠股骨头标本外形表现为圆形,关节软骨呈现为苍白色,关节软骨开始出现剥脱现象。造模后4周,模型对照组关节软骨剥脱加重,部分股骨头标本出现塌陷;骨髓间充质干细胞联合茶黄素组股骨头标本呈现出圆形,且为苍白色。造模后8周,模型对照组坏死区增加;单纯减压组出现成骨细胞,且存在纤维性骨痂形成;细胞移植组能够见到少量空骨陷窝,髓腔形态不规则;骨髓间充质干细胞联合茶黄素组出现大量新生骨形成,且髓内脂肪细胞规则。骨髓间充质干细胞联合茶黄素组造模后4,8周空骨陷窝阳性数显著少于其他3组(P < 0.05)。结果证实,激素性股骨头坏死采用骨髓间充质干细胞基础上联合茶黄素治疗效果理想。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞治疗家兔股骨头缺血坏死的研究

目的 评价比较富血小板血浆（PRP）联合骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植修复家兔激素性股骨头缺血坏死与单纯BMSCs移植效果.方法 选取2只家兔自股骨骨髓离心提取BMSCs.选取40只家兔制作股骨头缺血坏死模型后,根据股骨头坏死临床诊断标准选取处于股骨头坏死Ⅰ、Ⅱ期阶段的30只家兔随机分为3组,每组10只.第一组10只患肢行钻孔减压后接受PRP联合BMSCs治疗（PRP联合BMSCs治疗组）;第二组10只患肢行钻孔减压后只接受单纯BMSCs治疗（单纯BMSCs治疗组）;第三组10只作为空白对照组,患肢行钻孔减压后接受注射用0.9％氯化钠溶液治疗.实验结果观察包括：治疗1周后利用聚合酶链反应检测各组转录生长因子（TGF-β）以及血管内皮生长因子（VEGF）含量;治疗5周后行切片分析以及BMSCs生长周期测定.结果 聚合酶链反应结果显示,PRP联合BMSCs治疗组分别与单纯BMSCs治疗组以及空白对照组比较,TGF-β的表达量存在差异,并具有统计学意义（3组间TGF-β含量分别为：1.5±0.46、1.2±0.36、0.4±0.12,P＜0.01）,VEGF的表达量存在差异,并具有统计学意义（3组间VEGF含量分别为：1.5 ±0.72、1.1±0.43、0.8±0.21,P＜0.01）;细胞周期测定显示PRP联合BMSCs治疗组与单纯BMSCs治疗组以及空白对照组相比,处于G1期数目较少,具有统计学意义（3组经治疗后处于G1期BMSCs的比例分别为：40％、60％、70％,P＜0.05）.结论 实验证明,PRP可以促进TGF-β以及VEGF的分泌,并且可以通过促进TGF-β以及VEGF的分泌对BMSCs的增殖有促进作用.与单纯BMSCs治疗相比,PRP联合BMSCs治疗股骨头缺血坏死可能是一种更有效的治疗方法.