p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡信号通路在大鼠抗GBM肾炎中的作用

目的:探讨p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡信号通路在大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎中的作用。方法:1:复制大鼠抗GBM肾炎模型,于实验第2、7、14、21、28天取肾组织行免疫印迹法检测p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3的表达。2:应用p38MAPK阻断剂SB203580处理大鼠抗GBM肾炎模型,于实验第2、7、14天检测24小时尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;第14天取肾组织,经光镜观察肾组织病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡情况;免疫印迹和免疫组织化学法检测肾组织p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3表达情况。结果:在成功复制大鼠抗GBM肾炎模型基础上,免疫印迹结果显示肾炎模型组大鼠p-p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3蛋白表达各时间点均明显高于正常对照组,而p38MAPK表达与正常对照组相比无明显差异。在成功复制大鼠抗GBM肾炎模型基础上,阻断剂SB203580降低了大鼠抗GBM肾炎生化指标,减轻了肾炎病理反应,抑制了p-p38MAPK、FasL、Fas、Caspase-3的表达,降低了肾组织细胞凋亡数。结论:p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡信号通路在大鼠抗GBM肾炎发病机制中发挥重要作用,其阻断剂SB203580减轻了大鼠抗GBM肾炎的病理改变,为临床防治人类新月体性肾炎提供实验理论依据。     

p38MAPK与内皮细胞损伤的关系

p3 8MAPK通过磷酸化转录因子引起多种相关基因转录 ,调控活性物质的表达 ,参与血管内皮细胞氧化应激损伤甚至凋亡等过程。在信号通路水平阻断和调控p3 8MAPK的表达和活性 ,可以达到控制和减轻内皮细胞损伤或凋亡的目的。这为临床心血管疾病的防治提供了新的理论依据     

周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中p38MAPK信号通路的作用

背景：当牙齿受异常咬合力时会导致牙体吸收、牙周组织的大量破坏。 目的：研究牙周膜成纤维细胞在受到周期性张应力刺激后是否发生凋亡及p38MAPK信号通路是否参与该凋亡过程。 方法：取4~7代成纤维细胞,同步化后随机分为对照组、加力组和SB203580组。加力组和SB203580组细胞加载力值为12%表面应变率,加力频率为6个循环/min,即5 s拉伸,5 s松弛。SB203580组细胞在加力前1 h加入终浓度为20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。分别在加力6,12,24 h,取各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡基因bax mRNA的表达。 结果与结论：与对照组比较,加力后成纤维细胞凋亡率及bax mRNA表达增加 (P < 0.05),且随着加力时间的延长而增强,12 h达高峰,之后逐渐下降。与加力组比较,SB203580组对应时间点细胞凋亡减少 (P < 0.05),bax mRNA表达降低。说明细胞受到力学刺激会发生凋亡,而丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK信号通路参与了该凋亡过程。     

TPX2通过p38 MAPK信号通路诱导直肠癌HR-8348细胞凋亡

目的:研究下调非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)对直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:用TPX2小干扰RNA(si RNA)转染直肠癌HR-8348细胞,记为TPX2 si RNA组;以不做转染的细胞作为正常对照(control)组;以转染si RNA阴性对照(si RNA-NC)的细胞作为si RNA-NC组;用p38 MAPK抑制剂处理敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞记为TPX2 si RNA+SB203580组。RT-qPCR和Western blot测定TPX2的表达水平,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、cleaved caspase-3和Bcl-2的蛋白水平。结果:TPX2 si RNA转染后HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白表达水平显著下降(P 0. 05),而转染si RNA-NC对HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白水平没有影响。敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中的cleaved caspase-3、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显升高,Bcl-2水平水平降低,与control组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。与TPX2 si RNA组相比,TPX2 si RNA+SB203580组的HR-8348细胞凋亡率、cleaved caspase-3水平和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显降低,存活率明显升高(P 0. 05)。结论:TPX2表达下调可以通过激活p38 MAPK促进直肠癌HR-8348细胞凋亡。     

p38 MAPK信号通路参与受体介导的细胞内吞的调控

目的：观察p38 MAPK信号转导通路在受体介导的细胞内吞中的作用。方法：利用Alexa 594标记的转铁蛋白作为受体介导的内吞作用的观察指标，来研究p38特异性抑制剂SB203580或ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理以及p38基因敲除对该过程的影响。 结果：在受体介导的细胞内吞中，p38被磷酸化激活。SB203580的预处理或p38基因的敲除都能阻断受体介导的细胞内吞，而PD98059的预处理对该过程没有影响。 结论：p38 MAPK信号转导通路参与了受体介导的细胞内吞的调控。     

单侧输尿管梗阻大鼠模型中p38MAPK表达与细胞凋亡

目的： 探讨p38MAPK在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达及其在肾小管间质细胞凋亡和纤维化过程中可能发挥的作用。方法: 将25只Wistar大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外7只行假手术。分别于术后第3、7和14 d处死各组大鼠，行HE和Masson染色，观察肾脏病理变化；免疫组织化学方法测定增殖细胞核抗原（PCNA）表达；原位末端标记法（TUNEL）与DNA电泳观察肾小管间质细胞凋亡情况；Western blotting检测肾组织半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和p38丝裂素激活蛋白激酶（p38MAPK）及其磷酸化产物（p-p38MAPK）的表达。结果: 与假手术组比较，UUO模型组肾脏病理改变加重，TUNEL染色及DNA琼脂糖凝胶电泳可见大量的肾小管间质细胞凋亡，肾间质细胞PCNA表达明显增加，肾组织caspase-3的表达也显著增加（P<0.05）。p38MAPK蛋白水平在各组之间比较没有明显差别（P>0.05）。p-p38MAPK蛋白在正常肾脏有低水平表达，UUO模型组随着梗阻时间延长表达逐渐增多；第7 d达高峰，第14 d开始下降（P<0.05）。结论: p38MAPK信号通路可能参与了UUO致肾小管间质细胞凋亡和肾间质纤维化过程。     

Fractalkine通过激活p38MAPK信号通路调控狼疮性肾炎小鼠Treg细胞凋亡北大核心CSCD

目的:探讨趋化因子Fractalkine(FKN)对狼疮性肾炎(LN)小鼠Treg细胞凋亡的影响及机制。方法:构建LN小鼠模型,使用FKN中和抗体(Anti-FKN)、p38MAPK信号通路的抑制剂(SB203580)、p38MAPK信号通路的激活剂(U-46619)作用于正常小鼠及模型小鼠,采用免疫组化检测小鼠肾组织中FKN、磷酸化p38(p-p38)及Foxp3的蛋白表达;采用免疫磁珠法分选模型小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞,使用腺病毒转染细胞的方式敲低FKN的表达水平,同时使用p38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)及激活剂(U-46619)干预细胞。采用Western blot验证FKN敲低的成功转染、检测p38、p-p38、Foxp3、凋亡相关因子(Bax、Bcl-2及Cyt-c)的蛋白表达。结果:LN小鼠肾组织中的FKN及磷酸化p38MAPK的表达明显上调,低表达FKN可降低LN小鼠肾组织及Treg细胞中FKN和p-p38的表达,增加Foxp3的表达,同时增加细胞内抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,而减少促凋亡因子Bax及Cyt-c蛋白的表达。p38MAPK信号通路抑制剂对上述因子的作用与低表达FKN相似,其激活剂可以逆转这些因子在LN小鼠Treg细胞中的表达。结论:FKN可能通过激活p38MAPK信号通路参与调控LN小鼠Treg细胞凋亡,为阐明LN的发病机制提供了实验依据。     

p38 MAPK在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨p38 MAPK在顺铂诱导大鼠近端肾小管上皮细胞(RPTC)凋亡中的作用。方法:首先采用Western blot实验检测0、5、10和20μmol/L顺铂处理24 h对细胞凋亡的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20μmol/L顺铂联合50 mg/L p38 MAPK抑制剂SB203580刺激RPTC,实验分为对照组、顺铂组及顺铂+SB203580(加入SB203580处理RPTC 1 h后再给予顺铂处理24 h)。采用相差荧光显微镜观察和流式细胞术分析顺铂处理后RPTC的凋亡情况;采用Ac-DEVD-AFC试剂盒检测RPTC裂解液中的caspase活性;Western blot实验检测p38、磷酸化p38、cleaved PARP和cleaved caspase-3等的蛋白水平;pH计检测顺铂处理后RPTC外环境pH值改变。结果:20μmol/L顺铂处理RPTC 24 h,可以明显诱导细胞凋亡;顺铂处理15 min后RPTC中p38 MAPK开始磷酸化并达到高峰。顺铂处理后12.08%的RPTC呈凋亡形态,具有增强的caspase活性,并且cleaved PARP和cleaved caspase-3水平明显升高(P0.05);p38 MAPK抑制剂SB203580可抑制p38的磷酸化,降低RPTC的凋亡率和caspase活性,并减少cleaved PARP和cleaved caspase-3的蛋白水平。同时,SB203580可逆转顺铂诱导的RPTC培养基pH值的改变。结论:p38 MAPK的磷酸化在顺铂诱导的RPTC凋亡中发挥作用。顺铂诱导RPTC凋亡后,可改变细胞外酸性环境,并可被p38 MAPK抑制剂SB203580所抑制。     

p38MAPK信号通路在钙调磷酸酶促心肌凋亡中的作用

目的：探讨钙调磷酸酶（CaN）在缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌凋亡中的作用及p38 MAPK在CaN调节心肌凋亡中的作用。方法:采用体外培养新生Wistar大鼠心肌缺氧/复氧（H/R）模型，模拟在体缺血再灌注损伤，将心肌细胞随机分为3组：正常对照组（N组）、H/R+异丙基肾上腺素组（Ao组）、H/R+异丙基肾上腺素+环孢菌素A组（A1组）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-PCR 检测CaN mRNA的表达， Western 免疫印迹法检测CaN及p38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果:H/R和异丙基肾上腺素（Iso）共同作用心肌后，心肌细胞凋亡率明显增加，给予CaN抑制剂环孢菌素（CsA）后，细胞凋亡率显著少于干预前(P<0.05)。H/R和Iso共同作用下，心肌CaN mRNA及蛋白表达水平均明显上调，同时p38 MAPK的活化状态p-p38 MAPK蛋白表达也显著增加，CsA干预后，CaN表达并无明显变化，但p-p38 MAPK蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:CaN 促进缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌细胞凋亡，可通过活化p38 MAPK而发挥促凋亡的作用。     

姜黄素对糖尿病肾病p38MAPK信号通路的影响

目的观察姜黄素治疗糖尿病肾病的疗效,并探讨其对p38MAPK信号通路的影响。方法 12只db/db小鼠,分为模型组和姜黄素治疗组,6只db/m小鼠为对照组。小鼠系膜细胞(MES-13)分为低糖对照组,高糖模型组,高糖+姜黄素处理组。生化检测小鼠血糖、血尿素及血肌酐水平,ELISA法检测db/db小鼠24h尿微量白蛋白,PAS染色行肾小球硬化指数评分,Western blot检测致纤维化因子CTGF和38MAPK在db/db小鼠肾组织和系膜细胞中的表达。结果 db/db小鼠血糖、血尿素及血肌酐明显升高,伴有大量蛋白尿,肾小球硬化,db/db小鼠肾组织和经过高糖处理的系膜细胞中磷酸化的P38以及CTGF的表达均明显增加。姜黄素治疗后降低了血尿素及血肌酐的水平,减少db/db小鼠蛋白尿,减轻了肾小球硬化,抑制了db/db小鼠肾组织和高糖处理的系膜细胞中P38的磷酸化,降低了CTGF的表达。结论姜黄素对糖尿病肾病的治疗作用,与抑制38MAPK信号通路的磷酸化相关。     

p38MAPK信号通路在雨蛙素诱导的胰腺AR42J细胞炎症反应中的作用

目的: 探讨p38 MAPK信号通路在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法: AR42J细胞随机分为3组:正常对照组、雨蛙素组(10^-8mol/L雨蛙素)和SB203580组(10 μmol/L SB203580+10^-8mol/L雨蛙素)。于3 h收集细胞,检测淀粉酶分泌率;免疫荧光染色观察p-p38 MAPK核移位;Western blotting印迹检测p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达;EMSA检测NF-κB活性。结果: 与正常对照组比较,雨蛙素组淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白水平增高(P<0.01),p-p38 MAPK表达及NF-κB活性表达增加(P<0.01);免疫荧光示雨蛙素组p-p38 MAPK发生了核移位。而与雨蛙素组相比,SB203580组明显降低淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白表达(P<0.01),p-p38 MAPK和NF-κB的活性表达也下降(P<0.05);SB203580还抑制了p-p38 MAPK核移位。结论: p38 MAPK通路参与了胰腺细胞内的炎症反应,其机制可能涉及NF-κB通路的活化。     

神经病理性疼痛中星形胶质细胞被激活后的p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路

目的:探索神经性病理痛中星形胶质细胞被激活后的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路.方法:SD大鼠分为坐骨神经慢性结扎模型组(CCI组)和假手术组(Sham组),并于术前ld和术后1、3、7、14d取第4～5腰段脊髓做石蜡切片,免疫荧光组织化学标记p38MAPK的表达,免疫荧光双标技术检测其与脊髓神经细胞之间的关系.结果:CCI组术后术侧脊髓背角p38MAPK免疫阳性细胞数量增多;p38MAPK平均荧光强度明显增高并在术后第7天显示为最高.p38MAPK和小胶质细胞在CCI组脊髓背角术侧的分布有较好的一致性.结论:在神经病理性疼痛巾,p38MAPK信号转导通路被激活但未参与星形胶质细胞的痛觉信号转导.     

p38 MAPK信号途径参与大鼠系膜细胞MMP2表达

目的探讨系膜细胞中调节MMP2表达的信号通路。方法鼠系膜细胞培养,分别加入酪氨酸激酶抑制剂（Herbimycin A）,p38MAPK抑制剂（SB203580）,MEK抑制剂（U0126）,ERK抑制剂（PD098059）,P13K抑制剂（Y294002）,用酶谱法分析MMP2酶活性、用RT-PCR及Westem方法从基因及蛋白水平,观察阻断剂对MMP2表达的影响。结果酪氨酸激酶抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂及P13K抑制剂对MMP2酶活性、mRNA及蛋白水平无影响,在72hp38MAPK抑制剂SB203580抑制MMP2活性25％。在48h当SB203580浓度分别为10、20、30及40μmol／L时,系膜细胞中MMP2的抑制率分别为7．2％、13．5％、21．3％及28％。结论大鼠系膜细胞中p38MAPK信号传导途径参与了MMP2的表达,并且p38MAPK抑制剂SB203580对MMP2的抑制有剂量依赖性。     

p38 MAPK在周期性机械牵张诱导肺泡巨噬细胞表达HMGB1中的作用

目的： 研究p38 MAPK在周期性机械牵张诱导肺泡巨噬细胞(AM)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法：大鼠AM随机分为A、B、C 3组,A组为对照组;B组细胞施加20%牵张应变,牵张时间为4 h;C组细胞的牵张模式与B组相同,在牵张前用p38 MAPK特异性抑制剂SB203580(40 μmol/L)预处理2 h。利用RT-PCR法检测HMGB1 mRNA的表达,Western blotting检测HMGB1蛋白表达和p38 MAPK的活性。结果：与对照组相比,AM施加20%牵张应变可诱导HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加、p38 MAPK活性明显增高(均P<0.05),SB203580可显著抑制牵张应变的这种诱导作用(均P<0.05)。结论：周期性机械牵张可能通过p38 MAPK信号通路,调节肺泡巨噬细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达。     

Up-regulation of ERK and p38 MAPK signaling pathways by hepatitis C virus E2 envelope protein in human T lymphoma cell line

Hepatitis C virus (HCV) infection correlates with human immune disorders characterized by abnormal activation and proliferation of lymphocytes. Interaction of HCV major envelope protein E2 with susceptible cells occurs at an early stage of the viral infection. HCV tropism for susceptible cells may elicit cellular signaling events implicated in the viral pathogenicity, and E2 protein is known to be responsible for the tropism. We documented previously that HCV E2 protein was capable of activating extracellular signal-regulated kinase (ERK) in human hepatoma Huh-7 cells. Here, ERK and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways were investigated in human T lymphoma cell line Molt-4 in response to HCV E2 protein. Binding of HCV E2 protein to Molt-4 cells was detectable, and such interaction was a determinant for recognition and delivery of the E2 signal to intracellular pathways. Activation of ERK and p38 MAPK was specifically induced following the HCV E2-cell interaction. CD81 and low-density lipoprotein receptor (LDLR), proposed cellular receptors for HCV, were expressed naturally on Molt-4 cells. CD81 and LDLR were shown to mediate HCV E2-induced activation of ERK and p38 MAPK. In CD81-deficient U937 cells, levels of ERK and p38 MAPK activation and cell proliferation induced by HCV E2 protein were lower than those in Molt-4 cells. Furthermore, cell proliferation and secretion of interferon-gamma and interleukin-10 by Molt-4 cells were promoted by HCV E2 protein. Therefore, ERK and p38 MAPK signaling pathways were up-regulated by HCV E2 protein without synergetic stimulation, which was accompanied by alterations of cell behavior.     

p38丝裂原活化蛋白激酶通路在非对称性二甲基精氨酸诱导内皮细胞通透性增高中的作用

目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对单层内皮细胞通透性的影响,以及氧化应激、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在此过程中的作用。方法利用Transwell小室建立单层内皮细胞屏障结构,设立实验组和对照组,实验组经浓度25、50、100、200μmol/L ADMA作用24 h和100μmol/L ADMA分别刺激细胞4、8、16、24 h,或分别经烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂、p38 MAPK抑制剂预处理细胞后再加入ADMA刺激。随后用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的右旋糖酐漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值,并用免疫荧光染色显示细胞骨架及细胞间连接的形态学改变。结果 ADMA呈剂量及时间依赖性的增加单层内皮细胞的通透性,同时促进内皮细胞中应力纤维的形成并破坏细胞间连接。NADPH氧化酶抑制剂和p38 MAPK抑制剂均可对抗ADMA的上述作用。结论 ADMA通过引起氧化应激,激活p38 MAPK通路,改变细胞骨架及细胞间连接的结构,使单层内皮细胞通透性增高。     

p38MAPK参与千金藤素诱导的心肌细胞凋亡

目的: 探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法: 应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测 CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38 MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果: (1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论: p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。     

2-D08 treatment regulates C2C12 myoblast proliferation and differentiation via the Erk1/2 and proteasome signaling pathways

Journal of Muscle Research and Cell Motility - SUMOylation is one of the post-translational modifications that involves the covalent attachment of the small ubiquitin-like modifier (SUMO) to the...