shRNA沉默 ROCK1和ROCK2 表达对缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的: 探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK1)和ROCK2在缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法: 原代培养大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。将ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA瞬时转染细胞,48 h后给予缺氧6 h处理。实验分为5组:(1)空白对照组;(2)缺氧组;(3)缺氧+阴性对照shRNA组;(4)缺氧+ROCK1-shRNA组;(5)缺氧+ROCK2-shRNA组。用倒置显微镜观察心肌细胞搏动频率与节律;用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量;用MTT检测细胞存活率;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用Western blotting检测ROCK1和ROCK2的表达,并检测caspase-3和p-PI3K的表达情况。结果: 鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。缺氧损伤后心肌细胞搏动频率较对照组明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。全自动生化分析仪检测发现,缺氧能导致细胞培养液LDH含量升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.01)。MTT检测发现,缺氧能导致心肌细胞存活率降低(P<0.05),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,缺氧能导致心肌细胞凋亡率升高(P<0.01),而ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测发现,ROCK1-shRNA的转染能降低ROCK1的表达(P<0.05), ROCK2-shRNA的转染能降低ROCK2的表达(P<0.01);缺氧能导致caspase-3表达升高(P<0.05)、p-PI3K表达降低(P<0.01),ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染能抑制缺氧导致的这一作用(P<0.05或P<0.01)。结论: ROCK1和ROCK2表达下调能抑制缺氧损伤导致的大鼠心肌细胞凋亡,其机制与抑制caspase-3活化和增强p-PI3K的表达有关。     

整合素连接激酶高表达对新生大鼠心肌细胞增殖的影响

背景：整合素连接激酶在调节细胞生存、抗凋亡以及促进细胞迁移、增殖、分化等方面发挥重要作用。 目的：观察整合素连接激酶在新生大鼠心肌细胞内高表达后对心肌细胞增殖能力的影响。 方法：取新生3 d内SD大鼠心脏,体外分离、培养心肌细胞72 h后,分别转染重组腺病毒载体或重组腺病毒载体+整合素连接激酶基因。 结果与结论：转染48 h,与转染重组腺病毒载体比较,转染重组腺病毒载体+整合素连接激酶基因的新生大鼠心肌细胞内DNA合成增加(P < 0.05),有丝分裂增多(P < 0.05),心肌细胞数量增多(P < 0.05)。在整合素连接激酶的作用下,新生大鼠心肌细胞的增殖能力明显提高。     

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选

背景：有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的 LRIG1 mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证。 目的：构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响。 方法：根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western blot检测LRIG1蛋白的表达。 结果与结论：构建的重组pGenesil2-LRIG1- shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确。转染pGenesil2- LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2- LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negative shRNA分别下降47.9%(P < 0.01)和32.8% (P > 0.05)。结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达。     

抑制程序性坏死对缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤的影响

本研究目的是观察程序性坏死中关键激酶基因ripk1和ripk3的表达被对应的shRNA质粒沉默后,对缺氧/复氧(H/R)导致的心肌细胞损伤的保护作用。研究采用DNA重组技术,将设计合成的shRNA序列插入pSUPER质粒中,构建出RIPK1-shRNA及RIPK3-shRNA表达质粒。用上述质粒转染H9c2心肌细胞,然后进行H/R处理,再用RT-PCR和Western blot方法研究相应基因的表达情况,检测程序性坏死及心肌损伤的相关指标。实验结果表明,基因ripk1和ripk3的表达被特异的shRNA抑制后,对H/R诱导的H9c2心肌细胞有明显的保护作用。     

AMPKα2基因shRNA重组质粒的构建以及在氯离子介导的大鼠心肌缺氧/复氧损伤中的作用

 目的：构建AMP活化的蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)基因shRNA重组表达质粒,转染H9c2心肌细胞,探讨其在氯离子(Cl^-)介导的心肌细胞缺氧/复氧（A/R）损伤中的作用。方法：构建靶向AMPKα2基因的shRNA重组质粒pSuper-AMPKα2 shRNA,转染H9c2细胞;Western blotting法测定AMPKα2的蛋白表达情况。实验分5组,每组重复6次：(1) Control组;(2) A/R组;(3) Cl^--free A/R组;(4) pSuper+Cl^--free A/R组;(5) pSuper-AMPKα2 shRNA+ Cl^--free A/R组。处理结束后,生化自动分析仪测定LDH活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（ROS）水平,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果：重组表达质粒pSuper-AMPKα2 shRNA经测序证明构建正确;转染心肌细胞后,AMPKα2蛋白表达明显下降;Cl^--free A/R组较之A/R组细胞存活率升高,LDH含量下降,细胞凋亡减少,ROS生成减少,SOD和GSH-Px活性增加;转染pSuper-AMPKα2 shRNA质粒后,阻断了Cl--free液的保护作用,且ROS生成增加,SOD和GSH-Px活性也下降。结论：成功构建pSuper-AMPKα2 shRNA重组质粒。AMPKα2基因沉默阻断了Cl^--free液对心肌细胞A/R损伤的保护作用。     

内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用

 目的：探讨内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法：在体外原代培养出生1~3 d大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA。实验分组：（1）空白对照组;（2）缺氧组;（3）缺氧+脂质体组;(4)缺氧+阴性对照siRNA组;(5)缺氧+Bim-siRNA组。MTT法观察细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况;Western blotting检测内质网应激标志分子caspase-12和三磷酸肌醇（IP3）的表达情况。结果：免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。在荧光显微镜下,转染了阴性对照siRNA组的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;Western blotting 结果显示,Bim-siRNA转染均能有效降低Bim蛋白的表达,其中第2对沉默效率最高,达到86.73%。缺氧损伤导致心肌细胞活性明显下降（P<005）,转染Bim-siRNA后细胞活性较阴性对照组升高。缺氧细胞凋亡率较对照组明显增加（P<0.01）,细胞内钙离子浓度明显增高,而沉默bim的表达能降低细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度。缺氧导致内质网应激标志分子caspase-12和IP3表达较空白对照组明显上调（均P<005）,而抑制Bim表达后caspase-12和IP3表达明显降低。结论：沉默bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用,内质网应激标志分子caspase-12和IP3可能参与了Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡的过程。这有望为临床心肌缺血缺氧损伤的治疗提供新思路。     

miR-2135对P19细胞增殖及向心肌细胞分化的作用

文章快速阅读：文题释义： P19细胞：是从小鼠畸胎瘤中分离得到的多功能干细胞,目前已被广泛用于心脏发育的分子机制研究中。P19细胞具有自我复制能力和分化潜能,在体外不同培养条件下,它可分化成多种类型的细胞,例如低浓度二甲亚砜可诱导其分化成心肌细胞。 MicroRNA：是内源性的非编码的单链小RNA,它通过与靶基因mRNA 3’UTR区域结合,诱导mRNA的降解或阻止其翻译调控基因的表达。一个miRNA可以调控众多基因的表达,几个miRNA也可以组合来精细调控某个基因的表达。据推测,miRNA调控人类一半以上的基因。miRNA高度保守性与其功能重要性有着密切关系。 摘要 背景：既往研究发现,向心肌分化P19细胞中的miR-2135表达水平显著高于未分化P19细胞,但miR-2135对P19细胞增殖、向心肌细胞分化和心脏发育的影响尚不明确。 目的：探索miR-2135对P19细胞增殖及向心肌细胞分化的影响。 方法：分别以miR-2135沉默及空载质粒转染P19细胞,培养0-4 d,MTT法检测细胞增殖;培养0,24,48 h,流式细胞仪检测细胞周期。诱导两组转染的P19细胞向心肌细胞分化,诱导第0,10天,采用qRT-PCR检测P19细胞中miR-2135的表达;诱导第10天,采用蛋白免疫印迹检测心肌分化相关标志物心肌肌钙蛋白T、心房钠尿肽和心肌转录因子的表达。 结果与结论：①转染结果：转染miR-2135沉默质粒的P19细胞低表达miR-2135;②细胞增殖与周期：miR-2135沉默质粒转染P19细胞的增殖速度快于空载质粒转染P19细胞(P < 0.05),培养24,48 h的S期细胞比例明显高于空载质粒转染P19细胞(P < 0.05);③qRT-PCR检测结果：miR-2135沉默质粒转染P19细胞诱导10 d的miR-2135表达明显高于诱导0 d水平(P < 0.01);④蛋白免疫印迹检测结果：诱导  10 d,miR-2135沉默质粒转染P19细胞心肌肌钙蛋白T、心房钠尿肽和心肌转录因子的表达明显低于空载质粒转染P19细胞;⑤结果表明：miR-2135抑制P19细胞的增殖,可促进其向心肌细胞分化。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程 ORCID: 0000-0002-8966-879X(李辉)     

Mcl-1短发夹RNA在Raw264.7细胞内特异性的筛选

目的:将Mcl-1shRNA转染到Raw264.7细胞内,针对shRNA对小鼠Raw264.7巨噬细胞系中Mcl-1表达的影响,筛选出沉默Mcl-1基因效果最明显的特异性shRNA真核表达质粒。方法:将特异性shRNA经脂质体介导转染小鼠巨噬细胞系Raw264.7;半定量RT-PCR和Western blot分别检测转染24、48 h后Mcl-1 mRNA水平变化和Mcl-1蛋白表达情况,分析对应不同位点的三对特异性shRNA片段对Mcl-1的沉默效果。结果:特异性shRNA片段在24、48 h均能有效降低Mcl-1 mRNA和蛋白水平,沉默效率高于正常组、脂质体组和阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05);对应不同位点的三对shRNA真核表达质粒,其中Mcl-1 shRNA3对Mcl-1 mRNA和蛋白的抑制作用均最强。结论:RNA干扰技术可有效下调小鼠Raw264.7巨噬细胞系中Mcl-1 mRNA水平,明显下调Mcl-1蛋白表达。成功筛选出了沉默Mcl-1基因效果最明显的特异性shRNA真核表达质粒。     

靶向PERK基因的shRNA真核表达载体的构建及对内质网应激状态下L02肝细胞凋亡的影响

目的: 构建靶向RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对内质网应激(ERS)状态下人正常肝细胞株L02凋亡的影响。方法: 根据PERK基因核苷酸序列,按照小干扰RNA(siRNA)靶序列的设计原则,设计并构建靶向PERK基因mRNA的3个特异性shRNA表达载体(PERK1-shRNA、PERK2-shRNA、PERK3-shRNA)和1个无同源性的阴性对照载体(HK-shRNA),经酶切和测序鉴定确认shRNA载体构建成功后,转染L02肝细胞,RT-PCR和Western blotting方法检测PERK基因的表达,筛选出抑制效果最佳的表达载体。分别应用MTT法和流式细胞术检测ERS状态下沉默了PERK基因的L02肝细胞活力和凋亡的变化。结果: 经酶切和测序鉴定证实,4个shRNA表达载体均构建成功。RT-PCR和Western blotting结果显示,与空白对照组相比,PERK1-shRNA、PERK2-shRNA、PERK3-shRNA组L02细胞中PERK基因在mRNA及蛋白水平上的表达均明显降低(P<0.05),其中PERK1-shRNA干扰效果最强。MTT法和流式细胞术结果表明,沉默PERK基因能明显增加ERS状态下肝细胞活力、抑制其凋亡(P<0.05)。结论: 成功构建靶向PERK基因的shRNA真核表达载体,PERK基因缺失对ERS状态下L02肝细胞凋亡有抑制作用。     

脂肪分化相关蛋白对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9 c2心肌细胞凋亡有何影响。方法:(1)采用PCR的方法,以成年SD大鼠心肌cDNA为模板扩增编码ADRP全长的DNA序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒,进行酶切和测序鉴定;(2)采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒转染H9 c2心肌细胞株,经G418筛选获得抗性细胞克隆后扩大培养;荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白报告基因表达情况;RT-qPCR和Western blot检测转染细胞与正常细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平;(3)采用流式细胞术检测不同浓度软脂酸对上述细胞细胞凋亡率的影响。结果:(1)酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入表达质粒pEGFP-C1;(2)荧光显微镜观察细胞内有绿色荧光蛋白表达且传20代以上无消失;RT-qPCR和Western blot证明重组质粒转染H9 c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01);(3)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9 ...     

RNA干扰MAD2基因对细胞增殖的影响

目的:探讨MAD2对HepG2细胞周期的影响。方法:构建针对MAD2基因的shRNA表达载体,MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒pmad2-EGFP共转染HepG2细胞株,用Western印迹法检测shRNA的抑制效应;用MTT法测定细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期。结果:shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制MAD2绿色荧光融合蛋白的表达。HepG2细胞转染有效干扰质粒48h后,细胞增殖抑制率达65%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论:在细胞水平,可通过RNA干扰特异性抑制MAD2基因来抑制细胞的增殖,为研究MAD2基因在细胞增殖中的作用机制奠定基础。     

新型化学转染试剂对人脐带间充质干细胞的转染优化

背景：人脐带间充质干细胞的基因修饰技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。 目的：对比3种新型化学转染试剂在人脐带间充质干细胞中的瞬时转染效率。 方法：采用Fugene HD、Lipofectamine LTX及Attractene分别转染人脐带间充质干细胞,荧光显微镜下观察阳性细胞,流式细胞术分析不同转染试剂的转染效率,锥虫蓝染色观察转染后人脐带间充质干细胞的生存率。 结果与结论：Lipofectamine LTX转染效率最高,显著高于Fugene HD和Attractene[(32.50±2.12)%,(4.30±0.64)%,(1.70±0.08)%,P < 0.05]。Lipofectamine LTX转染后的细胞生存率略低于Fugene HD及Attractene,但差异无显著性意义[(69.8±6.3)%,(92.4±4.2)%,(106.6±3.9)%,P > 0.05]。提示Lipofectamine LTX是人脐带间充质干细胞较为理想的化学转染试剂。     

靶向大鼠TGF-β1基因shRN A真核表达载体的构建及鉴定

构建并鉴定靶向大鼠TGF-β1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）真核表达载体,为探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。根据大鼠TGF-β1基因的mRNA序列设计并合成2条编码shR-NA的特异性寡核苷酸片段,另选通用阴性对照序列HK,将上述片段退火后分别克隆入线性化质粒载体PGenesil-1．1中,构建出含靶基因片段的shRNA真核表达载体PGenesil-TGF-β1-A、PGenesil-TGF-β1-B及PGenesil-HK,行酶切鉴定及测序分析,并采用脂质体介导法体外转染Hela细胞,荧光显微镜观察转染结果。经酶切和测序鉴定证实,构建的shRNA成功插入到载体,重组质粒的插入序列与设计的靶基因片段完全一致,3种重组质粒均能转染入Hela细胞表达绿色荧光。成功构建出靶向大鼠TGF-β1基因的shRNA真核表达载体,为后续研究抗肝纤维化的基因药物奠定了实验基础。     

慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响

目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca~(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca~(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca~(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca~(2+)浓度和Ca M表达。     

特异性shRNA抑制小鼠L929成纤维细胞Smad3基因表达

目的设计特异性shRNA并检测其对小鼠L929成纤维细胞Smad3基因的抑制作用。方法根据小鼠Smad3 mRNA,编码3种不同序列shRNA。shRNA1起始位置为第495位核苷酸,GC含量为42.1%;shRNA2起始位置第562位核苷酸,GC含量为52.6%;shRNA3起始位置第1473位核苷酸,GC含量为52.6%。3种shRNA被合成进质粒pGenesil1.1。合成后的质粒pGenesil1.1Smad3-1,pGenesil1.1Smad3-2和pGenesil1.1Smad3-3分别转染体外培养的小鼠L929成纤维细胞,同时设立空白对照组和负对照组。48和72h后通过RealtimePCR和Westernblot检测其对Smad3基因表达的影响。结果 3种shRNA对Smad3基因在小鼠L929成纤维细胞表达在48和72h均有不同程度的抑制作用。其中,以shRNA2和shRNA3抑制效果最为明显。结论合成特异性的shRNA可以有效抑制Smad3基因在小鼠L929成纤维细胞的表达。     

靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表达质粒的构建与筛选

目的 构建靶向β-连环蛋白(β-catenin)基因的shRNA的真核表达质粒,并筛选出沉默β-catenin基因效果最明显的shRNA表达质粒.方法 设计3对针对β-catenin 基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达质粒(shRNA1～3)并行测序分析,电穿孔转染神经干细胞(neural stem cells NSCs),测定转染率,并分别采用RT-PCR及Western 印迹检测β-catenin mRNA和蛋白表达情况,免疫组化方法检测shRNA对神经干细胞分化的影响.结果 构建靶向β-catenin基因的shRNA真核表达重组质粒shRNA1,2,3.经筛选,NSCs转染shRNA3后,β-catenin RNA水平和蛋白水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(0.08±0.00 vs 0.75±0.01,0.74±0.02;0.12±0.10,vs 0.56±0.02,0.65±0.01,P均＜0.01;与空白组和阴性对照组相比,shRNA3组NSCs分化为GFAP阳性细胞的百分率明显增加,分化为NSE阳性细胞的百分率明显减少(P＜0.05).结论 β-catenin RNA3对神经干细胞的β-catenin表达具有明显抑制作用,可影响细胞的分化.为研究wnt/β-catenin信号途径在NSCs生长分化中的作用奠定基础.     

FABP-5基因沉默对人胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及肿瘤干细胞标志物CD44+CD133+表达的影响

文章快速阅读：文题释义： 表皮型脂肪酸结合蛋白5：是在表皮细胞中发现的脂肪酸结合蛋白,其分子质量为15 ku,在肿瘤发生及发展中发挥关键的作用。肿瘤相关的上皮细胞黏附分子可以使FABP-5基因表达上调,高表达FABP-5基因的肿瘤细胞通过脂肪酸代谢产物影响细胞的信号转导功能。 肿瘤干细胞：肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞。传统观念认为,肿瘤是由体细胞突变而成,每个肿瘤细胞都可以无限制地生长,但这无法解释肿瘤细胞似乎具有无限的生命力以及并非所有肿瘤细胞都能无限制生长的现象。肿瘤细胞生长、转移和复发的特点与干细胞的基本特性十分相似,因此,有学者提出肿瘤干细胞的理论,这一理论为重新认识肿瘤的起源和本质提供了新的方向和视觉角度。 摘要 背景：已有研究表明,FABPs在多种恶性肿瘤,包括乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、膀胱上皮癌都有不同程度的表达,与恶性肿瘤的发生、转移、侵袭和抗药性关系密切。 目的：探讨沉默FABP-5基因表达对人胶质瘤细胞U251增殖、侵袭、凋亡的影响。 方法：以人胶质瘤细胞U251细胞为研究对象,根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染U251细胞。将人胶质瘤细胞U251分为3组：FABP-5-shRNA组加入Lv-shRNA-FABP-5,阴性对照组加入LV-shRNA-NC,空白对照组仅行常规培养。RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测FABP-5的表达,CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及肿瘤干细胞标志物CD44⁺CD133⁺的表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。 结果与结论：①与阴性对照组和空白对照组比较,FABP-5-shRNA组的FABP-5 mRNA和蛋白表达明显下降;②与阴性对照组和空白对照组比较,FABP-5-shRNA组细胞生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G₀/G₁期,S期细胞数减少;肿瘤干细胞标志物CD44⁺CD133⁺的表达比例亦显著降低(P < 0.05);③与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5-shRNA组细胞凋亡率明显升高(P < 0.01),增殖、侵袭力显著下降(P < 0.05);④结果表明,FABP-5基因可能直接或间接地参与到胶质瘤细胞周期的调控和凋亡过程,其基因的表达水平改变与肿瘤细胞侵袭力关系密切。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程 ORCID: 0000-0002-2849-8117(刘海鹏)