灯盏花素对创伤性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的　观察灯盏花素对体外培养的人类创伤性瘢痕成纤维细胞生长、凋亡的影响,寻找新的治疗瘢痕的有效药物。 方法　以四甲基偶氮唑(MTT)法和流式细胞仪Annexin V/PI双染色法检测各浓度组灯盏花素对成纤维细胞增殖及凋亡的影响。 结果　各浓度组灯盏花素对体外培养的瘢痕成纤维细胞生长增殖具有明显的抑制作用(F=3.309,P<0.01)。与对照组相比,80、100、150 μmol/ml浓度组对瘢痕成纤维细胞增殖抑制具有显著差异性（P=0.015、0.006、0.000<0.05）,并且呈剂量依赖性。IC50处,瘢痕成纤维细胞凋亡率与未加药组瘢痕成纤维细胞相比,差异具有显著性（P<0.05）。 结论　灯盏花素对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,并且能够诱导其发生凋亡,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物 提供了新的思路。     

藏红花素调节Hippo信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:初步探讨藏红花素(Crocin)调节Hippo信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外分离培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF),免疫荧光鉴定成纤维细胞;MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Crocin最佳干预浓度,将HKF细胞分为control组和Crocin低、中、高剂量组(Crocin浓度分别为20、50、100μmol/L);细胞转染实验中将HKF细胞分为control组、Crocin组(100μmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1+Crocin组(转染pcDNA3.1+100μmol/L Crocin干预)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、pcDNA3.1-YAP/TAZ+Crocin组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ+100μmol/L Crocin干预)。qRT-PCR法检测YAPmRNA、TAZ mRNA表达;EdU染色、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B...     

丝裂霉素C影响增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景：丝裂霉素C已逐渐开始应用于治疗增生性瘢痕领域中,但针对丝裂霉素C通过细胞凋亡作用于增生性瘢痕分子机制报道很少。 目的：探讨丝裂霉素C对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。 方法：应用2.5,12.5,50,100和200 mg/L 丝裂霉素C作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期分布和凋亡情况;通过Western blot法检测细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平。 结果与讨论：丝裂霉素C可使增生性瘢痕成纤维细胞的生长阻滞于G0/G1期,并且能够诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生凋亡,有着明显的浓度依赖性。经2.5~200 mg/L丝裂霉素C作用24 h后,增生性瘢痕成纤维细胞中Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.05)。说明丝裂霉素C可能通过增加增生性瘢痕成纤维细胞Bax表达,降低Bcl-2表达,促进成纤维细胞凋亡的增加。     

饥饿诱导增生性瘢痕成纤维细胞自噬发生

 ［摘要］目的:探讨饥饿诱导的增生性瘢痕成纤维细胞自噬的发生。方法:原代培养增生性瘢痕成纤维细胞至对数生长期,用EBSS（Earle’s balanced salt solution）代替培养液,分别饥饿0 h、1 h、2 h、3 h,应用Western blotting和定量PCR(qRT-PCR)方法分别检测成纤维细胞微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC-3）和自噬相关蛋白Beclin-1的蛋白和mRNA表达,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色和透射电镜观察自噬体。结果:Western blotting和qRT-PCR 检测LC3和Beclin-1 蛋白和mRNA表达在饥饿1 h开始增加,2 h达到高峰,3 h逐渐下降,均明显大于对照组（P<0.05）。荧光显微镜和电镜下观察到饥饿2 h诱导的成纤维细胞出现自噬囊泡。结论: 饥饿可诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生自噬,可能与增生性瘢痕的形成有关。     

Notch1表达下调抑制病理性瘢痕成纤维细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨慢病毒介导的Notch1表达下调对病理瘢痕成纤维细胞(PSF)中caspase-9活化水平及线粒体膜电位的影响。方法分离培养增生性PSFs,感染Notch1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒。分别采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中Notch1mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;PI单染法检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、活化的caspase-3(c-caspase-3)和caspase-9(c-caspase-9)蛋白及胞质和线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白;JC-1法检测细胞线粒体膜电位。结果Notch1 siRNA慢病毒感染后的PSFs中Notch1表达水平明显低于阴性对照慢病毒和未感染的PSFs的表达水平(P<0.05)。下调Notch1后的PSFs增殖能力降低(P<0.05);细胞G0/G1期比例升高(P<0.05);细胞凋亡率升高(P<0.05);c-caspase-3和c-caspase-9蛋白表达升高(P<0.05);细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.05);细胞中cyclin D1和CDK4蛋白水平降低(P<0.05);胞质内的cytochrome C蛋白含量升高(P<0.05)及线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05)。结论Notch1表达下调抑制PSFs增殖并诱导凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响。方法采用细胞培养、MTT、ELISA法、氯胺T和RT—PCR法检测bFGF在不同作用剂量下对瘢痕来源的成纤维细胞生长增殖和细胞外基质（ECM）合成的影响。结果（1）MTT检测bFGF对瘢痕成纤维细胞有明确的促增殖作用，并具有剂量相关性；（2）氯胺T法显示实验组和对照组HPr含量无显著性差异，RT—PCR法显示各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达水平无明显变化；说明bFGF对瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成无促进作用；（3）ELISA法表明随着bFGF作用浓度的升高，FN的表达表现为增高趋势，且以100ng／ml浓度下作用最显著。结论bFGF可以促进创面愈合，但不引起瘢痕的过度形成。     

H_2O_2和NO对滑膜成纤维细胞增殖反应的影响

采用~3H-TdR掺入法和MTT比色法研究过氧化氢(H_2O_2)和一氧化氮(NO)对兔滑膜成纤维细胞(SF)增殖反应的影响。结果表明,在使用亚适SF浓度(5×10~7细胞/L)时,~3H-TdR掺入法和MTT比色法检测结果一致。H_2O_22和亚硝基铁氰化钠(NO供体)在低浓度时促进SF增殖反应,而在高浓度时抑制其增殖反应,提示H_2O_2和NO对SF增殖反应具有双向调节作用。     

构建肿瘤坏死因子α刺激基因6慢病毒表达及干扰载体及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响

BACKGROUND: Current research has shown that tumor necrosis factor α stimulated gene 6 (TSG-6) has anti-inflammatory effect, and the scar formation can be inhibited by local injection of TSG-6 protein at the early stage of trauma. However, the mechanism of this effect is still unclear. OBJECTIVE:To construct the lentiviral expression vector and shRNA vector for human TSG-6, with stable overexpression, transfection and interference, and to explore the effect of TSG-6 on proliferation and apoptosis of keloid fibroblast cell lines.  METHODS:Human keloid fibroblast cells were isolated from the keloid’s tissue by enzyme digestion and identified by immunocytochemistry assay. Lentiviral vectors pLVX-puro-TSG-6 and pLVX-shRNA1-TSG-6 were constructed and transfected into human keloid fibroblast, exclusively. Expression levels of TSG-6 mRNA and protein were detected by RT-PCR and western blot assay. MTT assay and flow cytometry were used to estimate the cell proliferation and apoptosis in each group after transfection. In addition, expression of Bcl-2, p53 and active-caspase-3 were detected by western blot assay in each group. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Human keloid fibroblasts were separated successfully. Under the light microscope, cells were spindle. Immunohistochemical staining for vimentin was performed in the fifth passage of cells, with the positive rate of 100%. Cells were negative for cytokeratin. (2) Recombinant lentiviral vectors and stably transfected cell lines were successfully established. TSG-6 gene expression was altered apparently. Compared with the control group, cell proliferation was delayed and apoptotic rate was noticeably increased in TSG-6 gene overexpression group. Cell proliferation increased and apoptotic rate decreased in the TSG-6 gene intervention group (P < 0.05). (3) Western blot assay results demonstrated that Bcl-2 expression reduced, P53 and Active-caspase-3 expression significantly increased in the TSG-6 gene overexpression group (P < 0.05). (4) These finding showed that TSG-6 could inhibit proliferation and induce apoptosis in keloid fibroblasts. Its mechanism may be associated with the down-regulation of Bcl-2 protein expression, up-regulation of P53 protein expression and increased Caspase-3 activity. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

背景：间充质干细胞移植可通过多种调节机制促进皮肤创伤修复,抑制瘢痕形成,目前多数学者认为间充质干细胞分泌的生物活性因子起主要作用。 目的：观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响。 方法：分离培养人骨髓间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,制备骨髓间充质干细胞条件培养液。将12,24,48 h收集的条件培养液孵育体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24 h,并与空白对照组比较,采用CCK-8实验检测增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,Real-time PCR检测增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。 结果与结论：与空白对照组相比较,在24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用(P < 0.01),对其胶原的合成也具有显著的抑制作用(P < 0. 01)。结果表明骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生,为细胞疗法策略减轻瘢痕提供了新的理论支持。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

A型肉毒毒素可抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原蛋白的合成

背景：A型肉毒毒素伤口周围局部注射可以减少瘢痕的形成,而且对瘢痕的增生挛缩有抑制作用,可以促进瘢痕的萎缩变平。 目的：观察A型肉毒毒素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成的影响。 方法：体外分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取对数生长期的细胞接种培养,使用稀释浓度为0.1 U/L A型肉毒素DMEM细胞培养基对细胞的生长过程进行干扰,对照组以含胎牛血清的DMEM培养基培养。 结果与结论：细胞接种第1~15天,对照组可见梭形的增生性瘢痕成纤维细胞分裂增殖,局部融合成细胞单层,细胞生长旺盛,细胞排列呈现高度一致性。A型肉毒毒素组细胞增殖速度慢,细胞数量少,细胞排列方向散乱,A型肉毒毒素组细胞数为对照组细胞数的79.3%,A型肉毒毒素实验组胶原蛋白合成量为正常对照组的48.4%,差异有显著性意义(P < 0.05)。提示A型肉毒毒素可以抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖以及胶原蛋白的合成。      

细胞因子抑制剂吡非尼酮对体外培养人瘢痕成纤维细胞增殖的影响

背景：有研究表明细胞因子抑制剂吡非尼酮通过调控多种细胞因子,抑制成纤维细胞的生物学活性,其在内脏器官的抗纤维化作用的研究和应用取得了良好的进展,但对于皮肤增生性瘢痕及成纤维细胞是否有影响及其机制尚不清楚。 目的：观察细胞因子抑制剂吡非尼酮对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。 方法：采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,实验取第3-6代生长状态良好的对数生长期细胞。根据吡非尼酮不同质量浓度分为对照组(吡非尼酮0 g/L),吡非尼酮0.15,0.3,1 g/L组,共干预12,36,48 h。 结果与结论：MTT,反转录-聚合酶链式反应和酶链免疫吸附实验结果显示,与对照组相比,吡非尼酮0.15,0.3,1 g/L组细胞增殖情况、转化生长因子β1 mRNA的表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量均降低(P < 0.05),其中吡非尼酮1 g/L组降低最明显(P < 0.05)。干预24,48,72 h后,吡非尼酮0.15,0.3,1 g/L组间细胞增殖抑制率、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量均差异有显著性意义(P < 0.05)。结果证实,细胞因子抑制剂吡非尼酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的分泌、转化生长因子β1的表达及细胞增殖活性有明显的抑制作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞的生物学行为

背景：增生性瘢痕组织的形成是创面愈合过程中不可避免的,但是增生性瘢痕组织的形成产生很多不良的影响。 目的：建立可靠的人增生性瘢痕成纤维细胞的原代培养方法。 方法：采用组织贴壁法和消化法分别进行人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞的原代培养,使用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基,37 ℃,体积分数5%CO2,饱和湿度下培养,分别描述其生长曲线、形态及波形蛋白的表达。 结果与结论：组织贴壁法人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞培养成功,20-40 d可传第1代,以后每7-10 d可传1代,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性;消化法培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞成功,15-20 d细胞可融合成片,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性。进一步证实两种方法进行人增生性瘢痕成纤维细胞的原代培养均培养成功。     

A型肉毒毒素引起人增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡A型肉毒毒素引起人增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景：A型肉毒毒素临床上可以治疗增生性瘢痕,体外细胞培养研究发现可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。 目的：观察A型肉毒毒素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,以及对人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。 方法：通过消化法分离培养出人增生性瘢痕成纤维细胞,分别用不同浓度的A型肉毒毒素对细胞的生长增殖过程进行干预,通过MTT染色,于酶联免疫检测仪570 nm测定吸光度来研究细胞生长增殖情况,计算抑制率。通过Hoechst33342及PI染色检测人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡情况,并计算凋亡率。 结果与结论：人增生性瘢痕成纤维细胞生长过程中呈梭形,细胞生长旺盛,细胞融合成单层,细胞排列成高度一致性。经A型肉毒毒素处理后,细胞增殖速度明显减慢,细胞数量减少,细胞排列方向散乱。MTT染色后吸光度减弱,随A型肉毒毒素浓度增加,吸光度明显减弱,与对照细胞比较,差异有显著性意义(P < 0.05),半数抑制率出现在0.4 IU/L。在荧光显微镜下,人增生性瘢痕成纤维细胞经Hoechst33342和PI染色后细胞核呈现蓝色,细胞核为光滑的圆形或椭圆形外观。A型肉毒毒素干预后细胞核致密浓缩,染色不均匀,折光性增强,核膜皱缩,部分细胞核碎裂,出现碎块,有凋亡小体出现。随着A型肉毒毒素浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高,与对照细胞比较差异有显著性意义(P < 0.05),半数凋亡率在0.4 IU/L。说明A型肉毒毒素可以抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,其主要通过引起细胞凋亡的途径来抑制成纤维细胞的增殖。     

高迁移率族蛋白-1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控作用

目的 探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFbs）的调控作用.方法 增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养HSFbs.通过细胞增殖、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、迁移和胶原网收缩实验检测不同浓度（0～200 ng/mL） HMGB1对HSFbs的影响.结果 1.56、3.13、6.25、12.50、25.00 ng/mL HMGB1呈剂量依赖方式刺激HSFbs的增殖,HMGB1对HSFbs Toll样受体4（TLR4）、α-滑肌肌动蛋白（α-SMA）、非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NMMⅡ）mRNA的表达有促进作用而对基质金属蛋白酶1-α （MMP1-α）无,HMGB1对HSFbs迁移及收缩有促进作用但可被TLR4阻断剂抑制.结论 HMGB1可能通过TLR4调控HSFbs而在增生性瘢痕的形成过程中起作用.     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景：蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。 目的：体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。 方法：体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。 结果与结论：蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为(15.2±2.0) μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达(P < 0.05)。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

间充质干细胞条件培养液对正常成纤维细胞及瘢痕成纤维细胞转化生长因子β产生和信号通路的影响

BACKGROUND: Numerous studies have shown that mesenchymal stem cells (MSCs) can effectively attenuate the fibrosis of damaged heart, lung and kidney by secreting various bioactive factors. OBJECTIVE:To evaluate the anti-fibrotic therapeutic potential of bone marrow MSCs conditioned media in vitro. METHODS: Normal fibroblasts and hypertrophic scar fibroblasts were treated with bone marrow MSCs conditioned media, then transforming growth factor-β and collagen production were analyzed by ELISA, and mRNA expression level of Smad7 and hydroxyproline content were detected by RT-PCR and colorimetry, respectively. RESULTS AND CONCLUSION: Bone marrow MSCs conditioned media significantly inhibited the production of both transforming growth factor-β and collagen in hypertrophic scar fibroblasts (P < 0. 01), and up-regulated the mRNA expression level of Smad7 (P < 0. 01), a major inhibitory regulator in the SMAD family. However, the normal fibroblasts were scarcely influenced by bone marrow MSCs conditioned media. These findings indicate that bone marrow MSCs conditioned media is considered a promising candidate for the treatment of hypertrophic scars, which may provide new theoretical supports to reduce cutaneous scarring. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程