间充质干细胞迁移中的信号通路

间充质干细胞因具有多向分化,来源广泛、取材容易和便于自体移植等特点,是一种理想的组织工程干细胞.国内外有关其用于治疗的研究已取得了一定的进展,但是其具体的作用机制仍不是很清楚.近来有关其信号通路的研究较多,本文就其中有关间充质干细胞迁移的相关通路,如PI-3K/AKT信号通路、MAPK/ERK1/2信号通路、Wnt3a信号通路、Jak/STAT信号通路、RhoA-Rho kinase信号通路、SMAD信号通路,进行综述,以便更全面的理解间充质干细胞迁移的机制.     

人羊膜间充质干细胞无血清培养方法的建立

目的 建立一种人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的无血清培养方法.方法 用胰蛋白酶-胶原蛋白酶两步消化法分离人羊膜间充质干细胞,用含1×ITS、0.5％人血清白蛋白、10 ng/mL bFGF、100μg/mL L-ascorbic acid、100 U/mL青链霉素及2.5μg/mL两性霉素B的DMEM/F12无血清...     

A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移

目的:探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖和运动的影响.方法:以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基,培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组;2组均添50 nmol/L趋化因子-8(CXCL-8),分别为A549 C组和BEAS-2B C组,若同...     

表皮生长因子对骨髓间充质干细胞体外趋化的影响

目的观察表皮生长因子(EGF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外趋化的影响,探讨EGF对BMSCs迁移影响的可能机制。方法密度梯度离心法分离BMSCs,体外培养、传代纯化。利用Transwell小室建立体外趋化迁移模型。分别观察0,25,50,75,150ng/ml浓度的EGF对BMSCs的体外趋化作用,以及加入EGF中和抗体后对BMSCs趋化作用的影响;应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠BMSCs有无表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果细胞迁移实验结果:EGF以浓度梯度(0,25,50,75,150ng/ml)依赖方式促进大鼠BMSCs的定向迁移,作用显著(P<0.05)。抗体中和后的迁移实验:75ng/ml的EGF对BMSCs的趋化作用可被EGF中和抗体明显减弱(P<0.01)。RT-PCR证实BMSCs表达EGFR。结论在体外,EGF以浓度依赖方式引起BMSCs的定向迁移,BMSCs表达EGF的受体EGFR。     

低氧预处理人羊膜间充质干细胞的生物学特征

背景:干细胞移植治疗为许多疑难疾病带来了希望,但移植细胞存活数量少及分泌功能差,很难发挥治疗效用,致使该技术在临床应用受阻.低氧预处理可有效改善植入细胞的增殖活性、抗凋亡能力、分泌功能等生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞有望在组织损伤修复中发挥更好的治疗作用.目的:探讨低氧预处理对人羊膜间充质干细胞生物学...     

人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定

目的分离提纯的人羊膜间充质干细胞的生物学特性鉴定。方法剥去38～40周孕妇剖腹产术后羊膜,用消化酶消化后制备人羊膜间充质细胞（hAMCs）悬浮液。利用流式细胞分选技术从hAMCs中分离提纯干细胞（hAMC-SP细胞）,并对于细胞抗原进行鉴定。结果从hAMCs中分离的hAMC-SP细胞,约占AMCs总数的0．3％。传代培养4～10代后的hAMC-SP细胞表达Nestin、Vimentin、整合素家属成员（CD49b、CD49c、CD49d、CD49e）、CD9、CD13、CD19、CD29、CD44、CD46、CD51、CD59、CD166及干细胞相关的Oct-3／4抗原。HLA-ABC、TRA-1-81及SSEA-4为弱表达;相反CD34、CD45、CD117、CD56、CD90、CD105、CD106、CD133、Fit-1、Musashi 1及HLA-DR无阳性结果,同样TRA-1-60及SSEA-3也表达阴性。体外转化实验表示hAMC-SP细胞在琼脂糖培养基上不形成细胞集落,但阳性对照组的HepG2形成多数细胞集落。结论hAMC-SP细胞表面标记符合骨髓及脂肪间充质等来源的干细胞特点;hAMC-SP细胞迅速而稳定扩增,无致瘤性。由于来源充足,hAMC-SP细胞在消除HLA-ABC阳性细胞亚群下,同种异体移植在内的广泛的再生医学领域中能成为理想的细胞来源。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人羊膜间充质干细胞（HAMSCs）增殖的影响,以探索体外培养HAMSCs的最适条件。方法分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测。实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基。各组孵育48h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度（OD）,重复3次实验。结果 0.5、1、5、10、20、40、80ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;10ng/ml组与0.5、1、5ng/ml组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）;10ng/ml组与40、80ng/ml组相比,差异无统计学意义（P=0.067）,表明bFGF促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用最强的最小浓度为10ng/ml。     

浓缩生长因子干预大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、成骨分化及迁移

背景:在研究骨髓间充质干细胞的增殖、成骨分化基础上,揭示其迁移机制是再生医学研究的热门课题之一.目的:探究浓缩生长因子对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化及迁移能力的影响.方法:大鼠心脏静脉取血,变速离心提取浓缩生长因子.体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为实验组和对照组,实验组分别用含体积分数5％,10％,20％浓缩生...     

血小板裂解液快速扩增人羊膜来源间充质干细胞

目的:研究人血小板裂解液(HPL)扩增的羊膜来源间充质干细胞(AMMSCs)的细胞生物学特征。方法:分别以含7%HPL和10%胎牛血清(FBS)的LG-DMEM培养介质扩增人AMMSCs,比较含HPL和FBS介质培养扩增的AMMSCs的形态、扩增效率、免疫表型和多向分化潜能。结果:含HPL和FBS培养介质扩增的AMMSCs形态和免疫表型类似。含HPL培养介质能显著加速间充质干细胞(MSCs)的扩增,扩增的AMMSCs能向成骨、软骨和脂肪细胞分化。结论:含HPL培养介质可促进AMMSCs扩增,可为相关临床治疗提供更多人源化、无伦理争议、临床应用障碍少的MSCs。     

不同体积分数氧气预处理人羊膜间充质干细胞的生物学特性

背景：近年来,干细胞在组织损伤修复中发挥着重要作用,其中间充质干细胞移植应用最为广泛,间充质干细胞可以通过旁分泌细胞因子促进损伤组织的修复,低氧预处理可以改善间充质干细胞的生物学特性,因而,低氧预处理的人羊膜间充质干细胞可能在组织损伤修复中起到更好的治疗作用。目的：探讨不同体积分数氧气预处理对人羊膜间充质干细胞增殖、抗凋亡能力、旁分泌作用的影响。方法：利用酶消化法获得原代人羊膜间充质干细胞,将第3代人羊膜间充质干细胞通过不同体积分数氧气进行预处理48 h,随机分为1%,3%,5%,10%低氧预处理组和常氧对照组（体积分数21%氧气,倒置显微镜下观察人羊膜间充质干细胞的形态,CCK-8检测人羊膜间充质干细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测人羊膜间充质干细胞的凋亡情况,实时定量PCR法检测人羊膜间充质干细胞凋亡基因和缺氧诱导因子的表达,酶联免疫吸附法检测人羊膜间充质干细胞分泌的细胞因子水平。结果与结论：显微镜下观察不同体积分数氧气预处理组人羊膜间充质干细胞的形态无明显差异,低氧预处理能提高人羊膜间充质干细胞的增殖、抗凋亡和旁分泌细胞因子的能力,且体积分数1%氧气预处...     

Basic fibroblast growth factor controls migration in human mesenchymal stem cells

Little is known about the migration of mesenchymal stem cells (MSCs). Some therapeutic approaches had demonstrated that MSCs were able to regenerate injured tissues when applied from different sites of application. This implies that MSCs are not only able to migrate but also that the direction of migration is controlled. Factors that are involved in the control of the migration of MSCs are widely unknown. The migratory ability of isolated MSCs was tested in different conditions. The migratory capability was examined using Boyden chamber assay in the presence or absence of basic fibroblast growth factor (bFGF), erythropoietin, interleukin-6, stromal cell-derived factor-beta, and vascular endothelial growth factor. bFGF in particular was able to increase the migratory activity of MSCs through activation of the Akt/protein kinase B (PKB) pathway. The results were supported by analyzing the orientation of the cytoskeleton. In the presence of a bFGF gradient, the actin filaments developed a parallelized pattern that was strongly related to the gradient. Surprisingly, the influence of bFGF was not only an attraction but also routing of MSCs. The bFGF gradient experiment showed that low concentrations of bFGF lead to an attraction of the cells, whereas higher concentrations resulted in repulsion. This ambivalent effect of bFGF provides the possibility to a purposeful routing of MSCs.     

Hepatocyte growth factor effects on mesenchymal stem cells: proliferation, migration, and differentiation

Hepatocyte growth factor (HGF), a pleiotropic cytokine of mesenchymal origin promoting migration, proliferation, and survival in a wide spectrum of cells, can also modulate different biological responses in stem cells, but the mechanisms involved are not completely understood so far. In this context, we show that short-term exposure of mesenchymal stem cells (MSCs) to HGF can induce the activation of its cognate Met receptor and the downstream effectors ERK1/2, p38MAPK, and PI3K/Akt, while long-term exposure to HGF resulted in cytoskeletal rearrangement, cell migration, and marked inhibition of proliferation through the arrest in the G1-S checkpoint. When added to MSCs, the K252A tyrosine kinase inhibitor prevented HGF-induced responses. HGF's effect on MSC proliferation was reversed by p38 inhibitor SB203580, while the effects on cell migration were abrogated by PI3K inhibitor Wortmannin, suggesting that HGF acts through different pathways to determine its complex effects on MSCs. Prolonged treatment with HGF induced the expression of cardiac-specific markers (GATA-4, MEF2C, TEF1, desmin, alpha-MHC, beta-MHC, and nestin) with the concomitant loss of the stem cell markers nucleostemin, c-kit, and CD105.     

血管内皮生长因子165基因促进人脂肪间充质干细胞的增殖

背景：目前自体脂肪移植已广泛运用于美容整形和修复创伤导致的软组织缺损的修复,有研究表明,移植后1年移植脂肪存活率为20%-80%,因此,在移植后的早期及时、充分的血供建立,对于移植脂肪的存活是非常重要的。目的：观察血管内皮生长因子165转染人脂肪间充质干细胞的增殖情况。方法：体外传代培养人脂肪间充质干细胞,将重组血管内皮生长因子165基因入腺病毒液和空病毒液转染至脂肪间充质干细胞内,分别设为实验组和对照组,另设正常培养的细胞为空白组。结果与结论：RT-PCR,Western blot,MTT检测显示,与对照组和空白组相比,实验组血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白的表达及细胞增殖均增高(P < 0.05)。结果证实,腺病毒承载的血管内皮生长因子165基因转染脂肪间充质干细胞后不仅可以持续的表达目的蛋白,同时也能显著促进脂肪间充质干细胞的增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

Tethered epidermal growth factor provides a survival advantage to mesenchymal stem cells

MSC can act as a pluripotent source of reparative cells during injury and therefore have great potential in regenerative medicine and tissue engineering. However, the response of MSC to many growth factors and cytokines is unknown. Many envisioned applications of MSC, such as treating large defects in bone, involve in vivo implantation of MSC attached to a scaffold, a process that creates an acute inflammatory environment that may be hostile to MSC survival. Here, we investigated cellular responses of MSC on a biomaterial surface covalently modified with epidermal growth factor (EGF). We found that surface-tethered EGF promotes both cell spreading and survival more strongly than saturating concentrations of soluble EGF. By sustaining mitogen-activated protein kinase kinase-extracellular-regulated kinase signaling, tethered EGF increases the contact of MSC with an otherwise moderately adhesive synthetic polymer and confers resistance to cell death induced by the proinflammatory cytokine, Fas ligand. We concluded that tethered EGF may offer a protective advantage to MSC in vivo during acute inflammatory reactions to tissue engineering scaffolds. The tethered EGF-modified polymers described here could be used together with structural materials to construct MSC scaffolds for the treatment of hard-tissue lesions, such as large bony defects. Disclosure of potential conflicts of interest is found at the end of this article.     

bFGF对人脐带间充质干细胞增殖及胶原产生的影响

 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）增殖及I、III型胶原产生的影响。方法：贴壁培养hUCMSCs, 流式细胞术分析其表面标记(CD45、CD34、CD105、CD29和HLA-DR),成脂及成骨诱导其分化,以鉴定其为间充质干细胞,确定bFGF促增殖最适浓度为20 μg/L。分为实验组和对照组,实验组添加 bFGF (20  μg/L) 于DMED/F12培养液中,对照组使用DMED/F12常规培养液。MTT法测定hUCMSCs 存活和增殖能力, 分析bFGF 对hUCMSCs 增殖的影响,RT-PCR测定其I、III型胶原 mRNA的变化;Western blotting测定其I、III型胶原蛋白的含量。结果：MTT生长曲线提示bFGF促进hUCMSCs的增殖。用含与不含bFGF培养基培养的hUCMSCs 均表达 CD29,不表达 CD34、CD45和 HLA-DR,油红O染色和茜素红染色阳性。RT-PCR结果显示了实验组 I、III型胶原mRNA表达较对照组减少(P<0.05)。Western blotting检测结果显示了实验组I、III型胶原蛋白的表达较对照组减少(P<0.05)。结论：bFGF可显著促进hUCMSCs增殖,且不改变细胞的表面标志物表达。bFGF对hUCMSCsⅠ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白的表达呈抑制效应,提示其在促进创面愈合的同时可能不会引起Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白沉积,从而减少瘢痕增生。     

小鼠睾丸支持细胞对人脐带间充质干细胞增殖能力的影响

目的 探讨睾丸支持细胞（SCs）对体外培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs）增殖能力的影响。方法 体外分离培养并鉴定hUCMSCs和SCs;
Transwell-insert系统共培养SCs 和hUCMSCs（共培养组）;普通DMEM-F12培养基培养的hUCMSCs作为对照（对照组）;添加细胞因子
(白细胞介素-3,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子) 的DMEM-F-12培养基培养的hUCMSCs作为阳性对照 (细胞因子组）。用流式细胞术、免疫细胞
化学等方法检测SCs对hUCMSCs增殖、细胞周期、表面标记分子表达的影响,透射电镜观察细胞超微结构。结果 与对照组相比,共培养组和细胞
因子组hUCMSCs增殖明显加快,以共培养组尤为显著（P<0.05）;共培养组和细胞因子组hUCMSCs 表面分子CD29和CD105阳性率均增高;细胞周
期分析显示,共培养组G₀/G₁期细胞数与对照组相比无明显改变,而细胞因子组略有减少。透射电镜观察对照组与共培养组细胞均呈现原始细胞
的超微结构特点。结论 SCs共培养可促进hUCMSCs增殖,且共培养后仍保持其干细胞特性。     

尿酸对人胎盘间充质干细胞增殖的影响

背景：尿酸对不同细胞具有不同的作用,那么,尿酸对人胎盘源间充质样干细胞是促进还是抑制呢？ 目的：观察尿酸对人胎盘间充质干细胞增殖的影响及对胎盘间充质干细胞作用的时间-效应及剂量-效应关系。 方法：以体外培养人胎盘间充质干细胞为研究对象,分为6组,不加尿酸的对照组,和加入不同浓度的尿酸0.1,0.2,0.4,0.6,0.8 mmol/L组。 结果与结论：同一时间内,随着尿酸浓度增加,细胞数目逐渐增加,尤其是0.8 mmol/L尿酸组;同一浓度尿酸,随着培养时间的延长(时间< 5 d),细胞数目也逐渐增加,第5天的时候细胞数目达到高峰。提示尿酸具有呈时间及浓度依赖性的促进胎盘间充质干细胞增殖的作用,尤其是0.8 mmol/L尿酸在培养第5天的时候促进作用最明显。 关键词：尿酸;浓度;人胎盘间充质干细胞;增殖;细胞数目 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.019     

表皮生长因子对胶质瘤干细胞增殖与侵袭的影响

目的研究表皮生长因子(EGF)对胶质瘤干细胞生物学行为影响。方法胰蛋白酶消化法进行胶质瘤细胞原代培养,然后将培养基更换为含有EGF、bFGF、B27的DEME/F12培养基,培养后获得悬浮生长的肿瘤球细胞。悬浮生长的肿瘤球进行免疫荧光及分化实验。CCK-8方法检测EGF对胶质瘤干细胞增殖能力影响。Transwell方法检测EGF对胶质瘤干细胞侵袭能力影响。Western blotting实验研究EGF对胶质瘤干细胞中金属基质蛋白酶(MMP)-2表达影响。结果悬浮生长肿瘤球为胶质瘤干细胞。EGF促进胶质瘤干细胞增殖和侵袭,同时提高胶质瘤干细胞MMP-2表达。结论 EGF促进胶质瘤干细胞的增殖和侵袭与调控MMP-2信号通路相关。     

血管内皮生长因子165转染可促进脂肪间充质干细胞增殖

背景：血管内皮生长因子是目前最重要的促血管新生因子之一,在脂肪移植中可促进移植物的血运重建,提高成活率。 目的：探讨血管内皮生长因子165基因转染促进脂肪间充质干细胞增殖的作用。 方法：利用目的片段重组血管内皮生长因子165基因入腺病毒pAdEasy-1系统,包装病毒并测定滴度,同理包装空病毒。将包装成功的两种病毒液分别以100的最佳感染复数转染入脂肪间充质干细胞内,以未转染细胞为空白组。采用RT-PCR和Western blot法检测各组转染细胞中血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞的增殖情况。 结果与结论：实验组血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白表达量高于对照组和空白组(P < 0.05);实验组转染脂肪间充质干细胞后分裂增殖程度显著增加,与对照组和空白组比较差异有显著性意义(P < 0.05),结果表明腺病毒介导的血管内皮生长因子165基因转染脂肪间充质干细胞后可以持续表达目的蛋白,同时也能促进脂肪间充质干细胞的显著增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程