大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核内代谢型谷氨酸受体的分布及谷氨酸样阳性终末的来源

本文用抗磷酸激活的谷氨酰胺酶的单克隆抗体和抗代谢型谷氨酸受体五种亚型（1，1α，2／3，5）的4种抗体，研究了三叉神经脊束核尾侧亚核和三叉神经半月节内磷酸激活的谷氨酰胺酶样免疫反应阳性神经元和终末以及五种代谢型谷氨酸受体的分布，同时结合HRP逆标技术对三叉神经脊束核尾侧亚核内磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性终末的来源进行了观察．发现磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性胞体和终末主要集中在三叉尾侧亚核的Ⅰ、Ⅱ层；半月节内仅有它的阳性胞体。半月节内HRP逆标神经元中呈磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性者占71．4％，这些双重反应阳性神经元占半月节内磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性神经元的33．2％．五种代谢型谷氨酸受体亚型中，只有5型密集地分布于三叉尾侧亚核的Ⅰ、Ⅱ层。以上结果说明：（1）三叉尾侧亚核内的磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性终末主要位于其浅层，它们主要来源于三叉神经的初级传入；（2）三叉尾侧亚核的代谢型谷氨酸受体五种亚型中，只有5型可能参与西口部伤害性刺激信息的传递；（3）三叉尾侧亚核内磷酸激活的谷氨酰胺酶样阳性终末的分布与代谢型谷氨酸受体5型的分布互相匹配。     

大鼠三叉神经中脑核内GAD样阳性终末与PAG和GABAA受体α3亚单位阳性共存神经元的联系

目的：观察大鼠三叉神经中脑核（Vme)内谷氨酸脱羧酶（GAD）样阳性终末与磷酸激活的谷氨酰胺酶（PAG）、GABAA受体α3亚单位（GABAARα3）和小白蛋白（PV）样阳性神经元之间的联系。方法：免疫荧光组织化学三重染色技术，在激光共聚显微镜下进行观察。结果：在Vme内可观察到大量的GABAARα3样、PAG样和PV样免疫反应阳性神经元，吻尾方向几乎在其全长出现，多为大的假单极神经元（直径为25－50μm）。大约90％左右的PAG样阳性神经元同时呈GABAARα3样和PV样免疫阳性。在激光共聚焦显微镜下观察到，密集分布的GAD样阳性终扣聚集在PAG样和GABAARα3样双重标记的Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触。结论：GABA能神经元投射至Vme的神经终末可能通过位于Vme神经元胞体内的GABAARα3亚单位对谷氨酸介导的面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用。     

大鼠三叉神经中脑核内PPD、PPE样阳性终末与PAG和PV共存神经元的联系

目的：观察大鼠三叉神经中脑核（Vme)神经元内磷酸激活的谷氨酰胺酶（PAG）和小白蛋白（PV）的共存关系，以及前强啡肽原（PPD）样和前脑啡肽原（PPE）样阳性科末与PAG和PV共存神经元之间的联系。方法和PV样免疫反应神经元，吻尾方向上几乎在其全长出现，多为大的假单极神经元，许多PAG样阳性神经元同时呈PV燕免疫反应，双标细胞占全部标记细胞的95％以上，在激光共聚焦显微镜下观察到，少量PPD或PPE样阳性终末围绕在PAG样和PV样双重标记的Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触，结论：在面口部本体感觉住处由Vme向更高一级神经元的过程中，PV可能和谷氨酸一起发挥着重要的作用，与此同时Vme神经元还可能接受中枢内强啡肽样和脑啡肽样神经终末对它的调控。     

大鼠中脑中央灰质内谷氨酸脱羧酶和阿片μ受体共存神经元与脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽阳性终末的联系

本研究用免疫组织化学三重反应 ,在激光共聚焦扫描显微镜下观察了中脑中央灰质内的谷氨酸脱羧酶和阿片μ受体共存神经元与亮氨酸 -脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽阳性终末的联系。结果显示 ,谷氨酸脱羧酶阳性神经元主要散在分布于中央灰质的中、尾段内侧区和腹外侧区 ,多为小型神经元 ;谷氨酸脱羧酶阳性终末在中央灰质全长各区的密度均较高 ;阿片 μ受体阳性的中、小型神经元主要散在分布于中央灰质的中、尾段的腹外侧区 ,在其腹外侧区可见少量谷氨酸脱羧酶和阿片 μ受体共存的小型神经元。在中央灰质全长的内侧区和腹外侧区均能见到较密集的亮氨酸 -脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽阳性终末围绕在谷氨酸脱羧酶、阿片μ受体阳性神经元和两者共存神经元的胞体或树突周围并形成密切接触。本研究结果表明 ,中央灰质内含内源性阿片样物质的阳性终末与谷氨酸脱羧酶 /阿片 μ受体共存神经元之间存在密切接触 ,提示内源性阿片样物质对 GABA能神经元的活动可能具有直接的调控作用     

大鼠三叉神经本体觉中枢通路中VGluT1样阳性胞体和终末的生后发育、分布以及与PAG样阳性神经元的联系

本研究应用免疫组织化学和免疫荧光组织化学技术,在光镜和激光共聚焦显微镜下观察了大鼠脑干内三叉神经本体觉中枢通路中I型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性神经元胞体和纤维终末的生后发育、表达和分布以及与磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)样阳性神经元之间的联系。结果显示:(1)新生(P0)大鼠所有的三叉神经中脑核(Vme)神经元的胞体内均可观察到VGluT1的表达,3d(P3)时,VGluT1的表达最强,之后至P11,VGluT1的表达随着发育逐渐下降。P11后,在Vme神经元的胞体内未检测到VGluT1样免疫阳性产物,但在阴性胞体周围可观察到VGluT1样免疫阳性终末分布;(2)生后0d,三叉神经脊束核吻侧亚核背内侧部及其邻接的外侧网状结构(Vodm-LRF)、三叉神经感觉主核背内侧部(Vpdm)和三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)内已可观察到VGluT1样阳性纤维终末分布。生后7d,VGluT1样阳性纤维终末开始在三叉神经运动核腹侧区(AVM)、上橄榄核背侧区(ADO)出现;(3)激光共聚焦显微镜下,于生后12d在Vme、Vodm和Vpdm内和生后21d在Vsup-CL内分别观察到一些VGluT1样阳性终末与PAG样阳性神经元的胞体或树突形成密切接触。以上结果提示:VGluT1可能与生后发育过程中大鼠脑干内三叉神经本体感觉中枢通路的兴奋性联系的建立密切相关。     

大鼠囊泡膜谷氨酸转运体样和谷氨酸脱羧酶样阳性终末与表达GABAA受体α3亚单位的三叉神经中脑核神经元之间的联系

目的 观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1和DNPI)样和谷氨酸脱羧酶(GAD)样阳性终末与GABAA受体α3亚单位(GABAARα3)样阳性神经元之间的联系。方法 免疫荧光组织化学三重染色技术，在激光共聚焦显微镜下观察。结果 在Vme吻尾方向上，有大量的神经元胞体呈GABAARα3样免疫阳性，这些神经元多为大的假单极神经元(直径为25—50μm)。VGluT1样、DNPI样和GAD样免疫阳性终末密集分布于Vme内，一些VGluT1／DNPI样和GAD样阳性终末包绕在GABAARα3样阳性Vme神经元胞体周围，并与之形成密切接触。结论 Vme神经元在介导口面部本体感觉信息的传递过程中，可能同时接受中枢其他来源的谷氨酸能和GABA能终末的调控，其中GABA能终末的作用可能是通过GABAA受体实现的。     

大鼠囊泡膜谷氨酸转运体和5羟色胺阳性终末与三叉神经中脑核神经元的联系(英文)

本研究应用免疫荧光组织化学三重染色技术和免疫电镜双重标记技术,对大鼠囊泡膜谷氨酸转运体 (VGluT1和VGluT2)和 5 -羟色胺(5- HT)阳性终末与三叉神经中脑核(Vme)神经元之间的联系进行了观察。在激光共聚焦显微镜下,Vme内可观察到许多磷酸激活的谷氨酰胺酶(PAG)阳性神经元,其中绝大多数为大的假单极神经元。VGluT1和VGluT2免疫阳性的神经纤维和终末广泛分布于Vme内,其中VGluT2阳性纤维和终末的分布密度高于VGluT1。在Vme内还可观察到相当数量的 5- HT阳性终末,其中部分终末同时呈VGluT2免疫阳性。一些VGluT1、VGluT2、5- HT及VGluT2 /5- HT双重标记的阳性终末与PAG阳性的Vme神经元胞体形成密切接触。在电镜下,分别用银加强的金颗粒和DAB反应产物显示VGluT1 /VGluT2和 5- HT阳性终末。在Vme内只观察到部分终末呈VGluT2和 5- HT双重免疫阳性,并且这些终末主要形成非对称性突触。以上结果提示,在口面部本体感觉信息向更高一级中枢传递过程中,谷氨酸能和 5 HT能神经终末可能通过Vme神经元对该信息进行复杂的调控。     

大鼠囊泡膜谷氨酸转运体样和P物质样阳性终末与三叉神经中脑核神经元的联系

最近在哺乳类动物脑内克隆出两种囊泡膜谷氨酸转运体— VGlu T1和 VGlu T2 ,目前人们已将两者作为脑内谷氨酸能终末的特异性标记物。本研究应用免疫荧光组织化学三重染色技术 ,在激光共聚焦显微镜下对大鼠三叉神经中脑核 (Vme)内VGlu T1/VGlu T2样和 P物质 (SP)样阳性终末与磷酸激活的谷氨酰胺酶 (PAG)样阳性神经元之间的联系进行了观察。结果显示 :(1) Vme内有较多的 PAG样阳性神经元 ,在吻尾方向上亘其全长出现 ,这些神经元绝大多数为大的假单极神经元 ,直径为2 5～ 5 0 μm。(2 )大量的 VGlu T1样、VGlu T2样和 SP样免疫阳性的神经纤维和终末广泛分布于 Vme内 ,其中 VGlu T2样阳性纤维和终末的分布密度高于 VGlu T1;部分 SP样阳性纤维和终末同时呈 VGlu T1样或 VGlu T2样免疫阳性。 (3 )一些 VGlu T1/VGlu T2样、SP样或 VGlu T1/VGlu T2和 SP双重标记的免疫阳性终扣分别包绕在 PAG样阳性的 Vm e神经元胞体周围 ,并与之形成密切接触。以上结果提示 :Vme神经元在将口面部本体感觉信息向更高一级中枢传递过程中 ,可能接受中枢其它来源的谷氨酸能和 SP能终末的调控 ,其中谷氨酸能的投射末梢可能通过与突触后膜上的相应受体结合而发挥作用而 SP则可能在突触前发挥间接的调控作用     

大鼠三叉神经尾侧亚核内N-甲基-D-天冬氨酸型受体与磷酸激活的谷氨酰氨酶和谷氨酸的分布

方法:免疫细胞化学ABC法;目的:调查N-甲基-D-天冬氨酸型受体、磷酸激活的谷氨酰氨酶和谷氨酸在大鼠三叉神经尾侧亚核内的分布及其匹配关系.结果:N-甲基-D-天冬氨酸型受体1和2A/B亚单位免疫阳性胞体和纤维密集分布于大鼠三叉神经尾侧亚核的浅层(Ⅰ、Ⅱ层),磷酸激活的谷氨酰氨酶和谷氨酸免疫阳性胞体分布于三叉神经尾侧亚核各层,尤以浅层密集.磷酸激活的谷氨酸氨酶和谷氨酸阳性纤维及终未样结构主要分布于三叉神经尾侧亚核浅层.以上结果表明三叉神经尾侧亚核内磷酸激活的谷氨酰氨酶和谷氨酸免疫阳性纤维及终末样结构的分布与N-甲基-D-天冬氨酸型受体阳性胞体和纤维的分布在总体上是相互匹配的.结论:三叉神经尾侧亚核内的谷氨酸可能通过作用于N-甲基-D-天冬氨酸型受体的不同亚单位而发挥多种生理功能.     

包埋前免疫电镜双标技术在神经解剖学研究中的应用

目的　在超微结构水平观察两种神经递质在纤维终末内的共存或一种神经递质与其相应受体之间的关系。　方法　包埋前免疫电镜双重标记技术———酶标法和免疫金 银标记法相结合的方法。　结果　在免疫反应双重标记的纹状体切片上 ,电镜下观察到大量的SP样 (过氧化物酶免疫反应产物 )阳性终末和SP受体 (SPR ,免疫金 银标记颗粒 )样阳性神经元的胞体和树突 ,同时可见部分SP样阳性轴突终末分别与SPR样阳性神经元的胞体或树突形成对称性轴 体或轴 树突触联系。而在三叉神经脊束核尾侧亚核切片上 ,电镜下可观察到大量的两种囊泡膜谷氨酸转运体 ,即DNPI样 (过氧化物酶免疫反应产物 )和VGluT1样 (免疫金 银标记颗粒 )阳性轴突终末 ,同时还观察到DNPI样和VGluT1样双标的轴突终末与阴性树突形成非对称性突触。　结论　包埋前免疫电镜双重标记技术敏感性较高 ,组织的抗原性保存好 ,特别是在神经解剖学研究中 ,用于研究两种神经递质在同一个细胞或终末内的共存或分析神经递质与其相应受体之间的联系中有独到之处。     

GAD67-GFP基因敲入小鼠5-羟色胺样和P物质样阳性终末与三叉神经中脑核神经元的联系

本研究应用免疫荧光组织化学三重标记技术,在激光共聚焦显微镜下观察了GAD67-GFP基因敲入小鼠三叉神经中脑核(Vme)内5-HT样和P物质(substanceP,SP)样阳性终末分别与小白蛋白(parvalbumin,PV)样和GFP阳性神经元之间的联系。结果显示:(1)Vme内有较多的PV样阳性神经元,这些神经元绝大多数为大、中型的假单极神经元,直径约为18～40μm;也可观察到少量的GFP阳性神经元,多为小的多极神经元,直径约为8～15μm;(2)5-HT样阳性终末广泛分布于Vme内,其中有部分阳性终末分别聚集在PV样或GFP阳性的Vme神经元的胞体周围,计数结果表明:大约有77.7%和22.3%的5-HT样阳性终末分别与PV样或GFP阳性胞体相接触;(3)SP样阳性终末也广泛分布于Vme内,并分别与PV样或GFP阳性神经元的胞体形成密切接触,其中有78.2%和21.8%的阳性终末分别与PV样或GFP阳性胞体相接触。以上结果提示,在口面部本体感觉信息向更高一级中枢传递过程中,5-HT能和SP能神经终末不仅对初级传入发挥直接的调控作用,还可能通过影响Vme内的GABA能神经元的活动,从而间接对该信息的传递发挥调控作用。     

GAD67-GFP转基因小鼠三叉神经脊束核吻侧亚核和极间亚核内GABA和甘氨酸共存神经元的观察

本文以GAD67-GFP基因敲入小鼠为研究工具,利用免疫荧光组织化学双重染色技术观察了小鼠三叉神经脊束核(spi-nal trigeminalnucleus,V)的吻侧亚核(Vo)和极间亚核(Vi)神经元内谷氨酸脱羧酶67[GAD67,γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的标识物质]和甘氨酸(glycine,Gly)的定位分布和共存情况。结果显示,在Vo和Vi内均有比较密集分布的GAD67和Gly阳性神经元。此外,在Vo和Vi内也可见一些GAD67阳性神经元同时呈Gly阳性反应,即存在GAD67/Gly双标神经元。结果表明,Vo和Vi内有GABA和Gly共存神经元,它们可能在初级传入信息的传递和调制中发挥重要作用。     

大鼠杏仁体基底外侧核中含D2受体的γ氨基丁酸神经元受多巴胺能末梢支配(英文)

杏仁体中的多巴胺(DA)和γ -氨基丁酸(GABA)递质系统均参与精神分裂症的病理过程,临床上一般用多巴胺II型受体(D2)阻断剂予以治疗。然而,目前尚不清楚GABA与D2受体是否共存,也不清楚DA能神经末梢与GABA能神经元之间的联系方式。本实验用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)和免疫电镜(IEM)研究了杏仁体关键性核团基底外侧核中GABA与D2受体的共存关系以及DA神经能末梢与GABA能神经元之间的突触关系。CLSM显示由谷氨酸脱羧酶(GAD)标记的GABA能神经元全部对D2受体呈免疫阳性反应,表明GABA能神经元含有D2受体。IEM显示,在 980个DA能神经末梢形成的突触中,45%的突触是由DA免疫反应阳性神经末梢直接(36% )或间接(9% )与GAD免疫反应阳性神经元的树突形成,另 55%是由DA免疫反应阳性神经末梢与未标记的神经元成分形成。DA GABA的直接性突触进而可区分为单突触 (16% )、汇聚突触 (14% )及轴 轴突触(6% )。而DA- GABA的间接性突触是个突触复合体。在该复合体中,DA免疫反应阳性末梢在一个未标记的末梢上形成对称性突触,而该未标记末梢又与GAD免疫反应阳性树突形成非对称性突触。在DA与未标记神经元成分之间的突触中,AD免疫反应阳性末梢分别与未标记胞体(4% )、树突(42% )及轴突末梢(9% )形成突触。所有DA突触无一例外均为?     

GABA-immunoreactive neurons and terminals in the cat periaqueductal gray matter: a light and electron microscopic study

Immunocytochemical and electron microscopic methods were used to study the GABAergic innervation in adult cat periaqueductal gray matter (PAG). A mouse monoclonal antibody against γ -aminobutyric acid (GABA) was used to visualize the inhibitory neuronal system of PAG. At light microscopy, GABA-immunopositive (GABA_IP) neurons formed two longitudinally oriented columns in the dorsolateral and ventrolateral PAG that accounted for 36% of the neuronal population of both PAG columns; their perikaryal cross-sectional area was smaller than that of unlabeled (UNL) neurons found in the same PAG subdivisions. At electron microscopic level, patches of GABA immunoreactivity were readily detected in neuronal cell bodies, proximal and distal dendrites, axons and axon terminals. Approximately 35–36% of all terminals were GABA_IP; they established symmetric synapses with dendrites (84.72% of the sample in the dorsolateral PAG and 86.09% of the sample in the ventrolateral PAG) or with cell bodies (7–10% of the sample). Moreover, 49.15% of GABA_IP axon terminals in the dorsolateral and 52.16% in the ventrolateral PAG established symmetric synapses with GABA_IP dendrites. Immunopositive axon terminals and unlabeled terminals were also involved in the formation of a complex synaptic arrangment, i.e. clusters of synaptic terminals in close contact between them that were often observed in the PAG neuropil. Moreover, a fair number of axo-axonic synapses between GABA_IP and/or UNL axon terminals were present in both PAG subdivisions. Several dendro-dendritic synapses between labeled and unlabeled dendrites were also observed in both PAG subdivisions. These results suggest that in the cat PAG there exist at least two classes of GABArgic neurons. The first class could exert a tonic control on PAG projecting neurons, the second could act on those GABAergic neurons that in turn keep PAG projecting neurons under tonic inhibition. The functional implications of this type of GABAergic synapse organization are discussed in relation to the dishinibitory processes that take place in the PAG.     

Stereological estimates of the basal forebrain cell population in the rat, including neurons containing choline acetyltransferase, glutamic acid decarboxylase or phosphate-activated glutaminase and colocalizing vesicular glutamate transporters

The basal forebrain (BF) plays an important role in modulating cortical activity and influencing attention, learning and memory. These activities are fulfilled importantly yet not entirely by cholinergic neurons. Noncholinergic neurons also contribute and comprise GABAergic neurons and other possibly glutamatergic neurons. The aim of the present study was to estimate the total number of cells in the BF of the rat and the proportions of that total represented by cholinergic, GABAergic and glutamatergic neurons. For this purpose, cells were counted using unbiased stereological methods within the medial septum, diagonal band, magnocellular preoptic nucleus, substantia innominata and globus pallidus in sections stained for Nissl substance and/or the neurotransmitter enzymes, choline acetyltransferase (ChAT), glutamic acid decarboxylase (GAD) or phosphate-activated glutaminase (PAG). In Nissl-stained sections, the total number of neurons in the BF was estimated as approximately 355,000 and the numbers of ChAT-immuno-positive (+) as approximately 22,000, GAD+ approximately 119,000 and PAG+ approximately 316,000, corresponding to approximately 5%, approximately 35% and approximately 90% of the total. Thus, of the large population of BF neurons, only a small proportion has the capacity to synthesize acetylcholine (ACh), one third to synthesize GABA and the vast majority to synthesize glutamate (Glu). Moreover, through the presence of PAG, a proportion of ACh- and GABA-synthesizing neurons also has the capacity to synthesize Glu. In sections dual fluorescent immunostained for vesicular transporters, vesicular glutamate transporter (VGluT) 3 and not VGluT2 was present in the cell bodies of most PAG+ and ChAT+ and half the GAD+ cells. Given previous results showing that VGluT2 and not VGluT3 was present in BF axon terminals and not colocalized with VAChT or VGAT, we conclude that the BF cell population influences cortical and subcortical regions through neurons which release ACh, GABA or Glu from their terminals but which in part can also synthesize and release Glu from their soma or dendrites.