大鼠视网膜缺血再灌注损伤中视网膜电图的变化

目的：研究视网膜电图（ERG）在视网膜缺血再灌注损伤过程中的变化,探讨其临床应用价值。方法：24只一侧眼视网膜缺血SD大鼠随机分成损伤组、预处理组及丹参组每组8只。损伤组：大鼠视网膜在缺血60min后,分别经再灌注30min、24～72h后测量ERG。预处理组：大鼠视网膜在缺血后60min前24h行5min短暂缺血,再经上述再灌注时程后测量ERG。丹参组：大鼠缺血60min前30min球后注射复方丹参注射液0．05ml,再经上述再灌注时程后测量ERG。结果：损伤组各时程b波下降明显（P〈0．001）,预处理组及丹参组再灌注72h后b波恢复（P〉0．05）。结论：视网膜缺血再灌注损伤引起ERG的b波明显下降,ERG的b波是客观反映其损伤及功能恢复的敏感性指标。     

急性眼高压大鼠视网膜谷氨酸/天冬氨酸转运体和谷氨酰胺合成酶的表达

目的：通过检测急性眼高压后大鼠视网膜谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)和谷氨酰胺合成酶(GS)的表达变化,探讨急性青光眼视网膜节细胞(RGCs)损伤的可能机制。方法：成年大鼠,根据不同存活时间分组。左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血60min。实验动物分别存活1、3、7、14d后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GLAST和GS的表达变化。结果：GLAST和GS在存活1d和3d时表达上调然后下调,GS还存在重新分布。结论：GLAST和GS的表达与存活时间密切相关,两者表达的相似变化是急性青光眼RGCs损伤的重要原因。     

胎大鼠顶盖提取液保存视网膜节细胞的形态学

目的：通过胎大鼠顶盖提取液保存视网膜神经层，观察其对视网膜节细胞(RGCs)的形态结构影响，了解其对RGCs的保护作用。方法：用胎大鼠顶盖提取液、端脑提取液，成年大鼠端脑提取液及RPMI-l640培养液分别保存视网膜神经层组织块4小时。对标本作神经元特异性烯酵酶(NSE)抗体免疫染色，光镜、电镜下观察RGCs形态结构变化，测量RGCs核体积密度。结果：顶盖提取液组保存的RGCs形态结构基本正常，RGCs核体积密度与正常RGCs核体积密度相比无显著差异(P＞0．05)，其余各组保存的RGCs出现不同程度的细胞形态学改变。结论：胎大鼠顶盖提取液可能含有维持RGCs存活的营养因子。     

大鼠视网膜缺血再灌注模型的建立与观察

目的观察视网膜缺血再灌注后视网膜的病理变化过程,探讨建立视网膜缺血再灌注动物模型的理想方法。方法成年Wistar大鼠30只,其中5只作为对照组外,余25只作为实验组。实验组再分为缺血6h、24h、48h、72h、7d组,每组5只。用自制升眼压装置,提高眼内压至125mmHg,持续60min造成视网膜缺血,之后解除压力。高眼压下观察眼结膜和眼底变化。缺血再灌注6h、24h、48h、72h、7d后摘除眼球,取视网膜进行组织学观察。结果高眼压下大鼠球结膜变苍白,视网膜苍白、水肿;解除高眼压后,可见球结膜充血,视网膜恢复血供。视网膜缺血再灌注后,视细胞外节肿胀、疏松、空泡化,内外核层细胞部分缺失,RGCs数目明显减少。结论高眼压法制造的视网膜缺血再灌注模型接近视网膜缺血临床病理过程,模型稳定、可靠。     

硫化氢通过激活ATP敏感性钾通道保护小鼠在体缺血损伤视网膜和原代缺氧视网膜神经节细胞

目的：研究硫化氢(H₂S)是否能够通过激活ATP敏感性钾通道(K_ATP通道)减轻小鼠原代缺氧视网膜神经节细胞及在体缺血视网膜损伤。方法：(1)培养分离纯化的小鼠原代视网膜神经节细胞(RGCs)，给予缺氧处理或缺氧+硫氢化钠(NaHS)处理，利用Hoechst 33258染色和ELISA测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度观察细胞死亡率变化；给予K_ATP通道激动剂或阻断剂，利用膜片钳、Western blot和钙成像技术观察硫化氢是否通过K_ATP通道减轻缺氧导致的细胞损伤；(2)在体建立小鼠视网膜缺血模型，模型动物分为5组(每组8只小鼠)，分别为溶剂对照组、NaHS组、NaHS+K_ATP通道阻断剂组、K_ATP通道激动剂组和K_ATP通道激动剂+K_ATP通道断剂组，组织学切片观察视网膜各层厚度及RGCs层细胞密度变化。结果：(1)与氧糖剥夺(OGD)组相比，100μmol/L和300μmol/L NaHS可以显著减轻缺...     

脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的：检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预急性高眼压后大鼠视网膜 Müller 细胞谷氨酰胺合成酶(GS) 和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达的变化,探讨 BDNF 保护节细胞(RGCs)的可能机制。方法：成年大鼠分为3个 BDNF 干预组和3个溶媒对照组并进行玻璃体内注射。2 d 后将预处理动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图 b 波消失的临界眼压且维持缺血60 min。实验动物分别存活1、3或7 d 后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜 GS 和 GLAST 的表达变化。结果：与正常对照组比较,溶媒对照组 GS 和 GLAST 在存活1 d 和3 d 时表达上调,7d 时下降;BDNF 干预组未出现表达明显变化。结论：BDNF 可能不是通过 Müller 细胞上调 GS 和 GLAST,降低胞外 Glu 来保护 RGCs。     

脑源性神经营养因子对急性高眼压后大鼠视网膜Mueller细胞的影响

目的：检测脑源性神经营养因子（BDNF）干预急性高眼压后大鼠视网膜Mueller细胞谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸／天冬氨酸转运体（GLAST）表达的变化，探讨BDNF保护节细胞（RGCs）的可能机制。方法：成年大鼠分为3个BDNF干预组和3个溶媒对照组并进行玻璃体内注射。2d后将预处理动物左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压且维持缺血60min。实验动物分别存活1、3或7d后通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GS和GLAST的表达变化。结果：与正常对照组比较，溶媒对照组GS和GLAST在存活1d和3d时表达上调，7d时下降；BDNF干预组未出现表达明显变化。结论：BDNF可能不是通过Mueller细胞上调GS和GLAST，降低胞外Glu来保护RGCs。     

脑源性神经营养因子对高眼压后视网膜节细胞的保护作用

目的　观察大鼠眼高压所致视网膜损伤及脑源性神经营养因子 (BDNF)对节细胞的保护作用。方法　以生理盐水加压注入Wistar大鼠眼前房至动物视网膜电图 (ERG)b波消失的临界压并维持 90min ,制成大鼠急性高眼压模型。实验组加压前 2d玻璃体内注射BDNF(3μg/kg ,0 1μg/ μl) ,实验对照组注射等量小牛白蛋白 ,加压后存活 3d复查ERG后处死 ,美蓝染色后光镜下观察节细胞的形态改变并作细胞计数分析 ,测量视网膜内核层 (INL)及内网层外缘至内界膜 (IPL ILM)的厚度。ABC免疫组化法检测谷氨酸的表达变化。结果　视网膜高眼压后IPL -ILM厚度小于正常对照组 ;节细胞数目减少 ,部分节细胞呈现坏死特征。BDNF处理后视网膜病理改变有明显改善 ,与实验对照组比较节细胞存活数增加 ,IPL ILM厚度大于实验对照组。高眼压后视网膜内可见谷氨酸免疫反应阳性双极细胞 ,BDNF处理后其免疫反应性类似于正常对照组。 3d后视网膜电图b波在BDNF处理组为正常的 75 3% ,而实验对照组仅为正常的 11 4 % (P <0 0 5 )。结论　大鼠眼高压可导致视网膜节细胞死亡 ,BDNF对高压后节细胞具有明显的保护作用。兴奋性氨基酸对高眼压后节细胞的损害可被BDNF改善     

脑源性神经营养因子预处理后急性高眼压下大鼠视网膜TrkB的表达变化

目的：检测脑源性神经营养因子(BDNF)干预后大鼠视网膜TrkB的表达变化。为受损后视网膜节细胞的保护及外源性BDNF的应用提供一定的理论基础。方法：大鼠左眼分为急性眼高压及BDNF预处理组。使左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压并维持60 min,分别存活1～14 d后处死,冰冻切片行尼氏染色及TrkB的免疫组织化学。结果：急性高眼压组各时间点节细胞层细胞数目均显著少于BDNF预处理组;1、3 d时TrkB的表达明显增加,7、14 d时则明显减少;BDNF预处理组在存活1、3 d时TrkB的表达明显增加,7 d时则下降至正常对照组水平,14 d时再次明显增加。结论：急性高眼压后大鼠视网膜内TrkB的表达存在时空变化,TrkB表达的上调提示视网膜对BDNF的需求增加。     

不同MNU剂量诱导大鼠视网膜光感受器细胞损伤的视网膜电图和病理形态改变

目的： 探讨不同剂量N-甲基-N-亚硝脲（MNU）诱导的大鼠视网膜光感受器细胞损伤动物模型的眼电图和病理形态改变，寻找最适的MNU剂量。方法: 50 d龄雌性SD大鼠150只，随机分6组(每组25只大鼠)，即30 mg/kg、35 mg/kg、40 mg/kg、45 mg/kg和50 mg/kg MNU造模组和正常对照组，在造模后12 h、1 d、3 d、7 d和10 d测定大鼠的眼电生理，并取眼球进行病理检查。结果: 大鼠眼电生理结果显示，与正常组比较，30 mg/kg和35 mg/kg MNU组在各个时点对a波潜伏期和b波潜伏期的影响变化不大（P＞0.05）；a波振幅和b波振幅在第1、3 d下降较为明显(P＜0.05或 P＜0.01）。30 mg/kg和35 mg/kg MNU组在不同的时点:a波潜伏期、b波潜伏期、a波振幅和b波振幅明显高于40 mg/kg、45 mg/kg和50 mg/kg MNU组(P＜0.05或 P＜0.01）。45 mg/kg和50 mg/kg MNU组在不同的时点绝大多数呈现熄灭型电生理的表现。病理结果显示，在不同的时点，30 mg/kg和35 mg/kg MNU对大鼠视网膜光感受器细胞的损伤程度较轻，明显低于40 mg/kg、45 mg/kg和50 mg/kg MNU对大鼠视网膜外核层的损伤(P＜0.05或 P＜0.01）。损害程度为50 mg/kg＞45 mg/kg＞40 mg/kg。结论: 对大鼠视网膜光感受器细胞的病理和功能损害， 30 mg/kg和35 mg/kg MNU组损害较轻，40 mg/kg、45 mg/kg和50 mg/kg MNU组损害较重，40 mg/kg MNU是引起大鼠视网膜光感受器细胞最大损害的最低剂量。     

缺血预处理对大鼠视网膜保护作用的研究

目的：观察缺血预处理对大鼠后续持续性缺血视网膜是否具有保护作用。 方法： 阻断双侧颈总动脉血流（2VO），造成SD大鼠视网膜不完全性缺血，其中单纯缺血组直接结扎双侧颈总动脉，预处理组在结扎血管之前，采取重复两次2 min缺血-3 min再灌注的处理，实验对照组的大鼠术中暴露而不结扎双侧颈总动脉，正常对照组未经任何处理。术后1、3、7 d，分别灌注取材。用体视学方法测量视网膜形态学改变，用末端脱氧核苷酸缺口标记和免疫组化方法观察视网膜细胞凋亡及bcl-2的表达情况，比较观察缺血预处理对视网膜后续持续性缺血的影响。 结果： 预处理缺血组大鼠视网膜各层厚度均薄于一般缺血组；缺血所致的凋亡细胞数目较少，仅见于内核层，术后1-7 d节细胞层内未见有凋亡细胞，节细胞数密度无明显变化；bcl-2的表达弱于同一时间的单纯缺血组。 结论： 缺血预处理对缺血视网膜具有保护作用。     

肠缺血后处理抑制大鼠肠缺血再灌注所致的急性肺损伤

目的： 研究肠缺血后处理对大鼠肠缺血再灌注（I/R）所致急性肺损伤的影响及机制。 方法： 40只SD大鼠随机分为5组（n=8）：假手术组（对照组）,仅分离而不阻断肠系膜上动脉（SMA）;肠I/R损伤组,阻断SMA 1 h后再灌注1 h;缺血预处理（IPC）组,在长时间阻断SMA前预先阻断SMA 10 min然后开放 10 min;缺血后处理（IPo）组,在阻断SMA 1 h后连续进行3个循环的开放 SMA 30 s /阻断SMA 30 s (总时间为3 min),然后开放1 h;延迟后处理（delay）组,在再灌注3 min （IPo的总时间）后行3个循环的 30 s 缺血/ 30 s再灌注的缺血后处理,余同IPo组。监测平均动脉压（MAP）,于再灌注1 h 后取肺组织光镜下观察肺形态学的变化,检测血清及支气管肺泡灌洗液蛋白含量并计算肺通透性指数,称肺湿重及干重并计算肺含水率,检测肺组织丙二醛（MDA）的含量,超氧化物歧化酶（SOD）及髓过氧化物酶（MPO）的活性,检测血清TNF-α及IL-6的浓度。结果： 缺血后处理与预处理都能显著改善肺损伤,显著降低肺通透性指数及肺含水率,同时降低血浆TNF-α与IL-6的浓度、肺组织MDA含量及MPO活性,升高SOD活性。后处理被延迟3min后,其肺保护作用消失,且不能显著改变上述指标。 结论： 缺血后处理与预处理都具有抗肠I/R后肺损伤的作用,可能与其清除氧自由基、抑制中性粒细胞的肺内聚集及炎症细胞因子的释放有关;而且,再灌注早期后处理对肺的保护作用最关键。     

丹参对心肌缺血和再灌注损伤的保护作用

采用在家兔全麻、开胸、自主呼吸和自主心律的条件下,结扎冠脉左室支造成急性心肌缺血模型,进而松开结扎结形成再灌注损伤模型。对心肌缺血和再灌注损伤的组织脂质过氧化物含量和局部血流量变化进行测定,同时辅以心电图监护;以丹参注射液为保护剂观察其作用效果。结果表明,随着缺血时间的延续,心肌脂质过氧化物含量逐渐增加;当缺血60分钟后再灌注30分钟,脂质过氧化物含量仍继续上升,明显高于缺血60分钟组,但与缺血90分钟组比较则无显著差异;其缺血区局部组织血流量再灌注后仅恢复53.2%。给予丹参保护的再灌注组,其缺血区组织脂质过氧化物含量较再灌注损伤组下降56.0%(P<0.005),而局部组织血流量恢复则提高32.0%(P<0.001)。     

Fasudil, a Rho-associated protein kinase inhibitor, attenuates retinal ischemia and reperfusion injury in rats

Abnormal activation of Rho kinase (ROCK) plays a vital role in the pathogenesis of ischemia/reperfusion (I/R)-induced retinal injury. The aim of this study was to investigate whether fasudil, a potent inhibitor of ROCK, has a protective effect on retinal I/R injury in rats and to explore the possible underlying mechanisms. Forty adult Sprague-Dawley rats were randomly assigned into sham, I/R injury model (I/R), model plus normal saline (control), and model plus fasudil (fasudil) groups. Rats in the control and fasudil groups were intravitreously injected with normal saline and fasudil, respectively, 5 min prior to the induction of ischemia. Retinal ischemia was induced by increasing the intraocular pressure to 100 mmHg for 60 min. Overall retinal thickness and retinal cell apoptosis was evaluated by histological analysis and the TUNEL assay, respectively. The protein expression of caspase-3 and the Bax/Bcl-2 mRNA ratio were also examined. Moreover, the retinal expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) was determined by immunohistochemical staining, quantitative real-time RT-PCR and Western blot analysis. Fasudil attenuated the I/R-induced apoptosis of retinal cells in the inner nuclear and ganglion cells of the rat retina. Fasudil significantly decreased the Bax/Bcl-2 mRNA ratio and the expression of caspase-3 and iNOS compared to the control group (P<0.05). Seven days after I/R, the overall retinal thickness in the fasudil group was significantly greater compared to that in the control group (P<0.05). In conclusion, fasudil can protect the rat retina from I/R injury by inhibiting apoptosis and iNOS expression, suggesting that fasudil may have a therapeutic potential for the prevention of retinal diseases associated with I/R.     

Nerve growth factor protects retinal ganglion cells against injury induced by retinal ischemia–reperfusion in rats

Abstract

In this study, we investigated the protective effect of mouse nerve growth factor (NGF) on retinal ganglion cell (RGC) injury induced by retinal ischemia–reperfusion (RIR) in rats and explored its possible mechanisms of action. RIR caused a significant injury to RGCs and an obvious impairment of the inner retina functions, which could be seen from flash electroretinogram and flash visual evoked potential recordings. RIR also increased the expression of the apoptotic protein Bax while decreasing the expression of Bcl-2 and the phosphorylation of protein kinase B (Akt) in RGCs. Preinjection (i.m.) of NGF for 22 d reversed the injury induced by RIR and ameliorated the inner retina functions. NGF also reduced the expression of Bax and reversed the reduction of Bcl-2 and the phosphorylated Akt induced by RIR. These results indicate that NGF produces a neuroprotective effect on RGCs against RIR injury and the protective effect of NGF is mainly mediated by the PI-3K/Akt signaling pathway.     

复脉饮对缺血大鼠视网膜形态学及血清超氧化物歧化酶活性和一氧化氮水平的影响

目的：研究复脉饮(FMD)对实验性缺血大鼠视网膜的形态结构及其血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(NO)水平的影响。方法：用高眼压法制作Wistar大鼠视网膜缺血模型。分别以FMD、复明片(FMT)和生理盐水(SAL)于建模后喂饲3周。比色法测定各组大鼠SOD活性,硝酸还原酶法测定NO水平。光镜、电镜观察各组大鼠视网膜的结构。结果：经FMD治疗后,缺血大鼠血清SOD水平升高而NO水平降低,与SAL组有显著差异;其视网膜的分层、厚度、显微和亚微结构等明显优于SAL组,也优于FMT组。结论：FMD可能参与了抗氧化,参与了视神经细胞间信号转导通路的修复以及神经递质和调质的平衡,能有效治疗大鼠视网膜缺血性损害。