重组人肝细胞生长因子α高效表达工程菌筛选及发酵工艺研究

将人肝细胞生长因子α重组质粒转化至不同E.coli菌株，在相同培养条件下比较其表达量，筛选高表达工程菌株；在15L的发酵罐内，采用分批补料培养的方法，研究表达菌株的发酵培养条件，检测改变发酵培养基成分、种子液接种量、诱导时间等参数对菌液密度以及蛋白表达的影响，同时检测质粒传代的稳定性。实验结果表明筛选出的高表达工程菌在优化的发酵培养条件下，菌体收获量可达52g/L，目的蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的25％，且质粒和蛋白表达均具有良好的稳定性。高效表达工程菌和优化发酵工艺可以较好地提高菌体收率，为规模化生产奠定了基础。     

重组人Cu·Zn-SOD工程菌发酵工艺的研究

人Cu.Zn-SOD是一种重要的氧自由基清除剂,传统工艺是从动物血中提取得到,受原料来源的限制.从人胎肝中提取了hCu.Zn-SODcDNA构建了基因工程菌,同时对其表达产物的条件进行研究,着重探索了接种量、接种时机、pH、溶氧等因素,并优化了发酵条件.通过在5L全自动发酵罐上研究重组菌BL21的培养条件,确定了最适条件为:接种量2%,溶氧水平≥40%,初始pH6.5,培养过程中用3mol/LHCl调节pH在7.5.在此条件下,发酵最高水平达到酶活950U/ml,比活1400U/mg.     

重组人SOD工程菌发酵表达条件的优化

采用正交试验优化重组人超氧化物歧化酶工程菌的LB培养基,得到培养基最佳配比(g/L):蛋白胨12,酵母膏5,葡萄糖1和氯化钠10.以此为基础优化基因工程菌发酵条件,确定培养基初始pH 6.5～7.5,装液量20％,菌体密度(D600) 0.55～1.4,42℃诱导表达2～3h,目的蛋白相对表达量由优化前的25％提高至4...     

新型重组人肿瘤坏死因子工程菌的发酵工艺研究

目的研究并建立新型重组人肿瘤坏死因子 (nrhTNF)的发酵工艺。方法通过探讨nrhTNF工程菌在试管和锥形摇瓶中的生长和表达规律 ,筛选并确定其最适宿主菌、最佳培养基及最佳诱导表达条件 ,然后在 5L自控发酵罐中进行分批补料培养。结果nrhTNF工程菌在 5L发酵罐中培养至终密度A60 0nm30左右时 ,目的蛋白的表达最高 ,保持在菌体总蛋白的 5 0 %附近 ,发酵时间为 12～ 13h。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺 ,为nrhTNF的工业化生产奠定了基础。     

重组人肝增强因子工程菌JM109的发酵工艺研究

目的：研究表达重组人肝增强团子（hALR）工程菌JM109的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵,优化工程菌发酵的培养基配方、pH值、诱导表达时间、补料方式等。结果：在pH6．9条件下,培养6h后诱导表达5h,同时补科,5L罐发酵工程菌,菌体收得量可达湿重33．0g／L。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的31．3％。结论：此发酵工艺可以较好地提高ALR工程菌菌体得率和目标蛋白表达量。     

基因重组hEGF融合蛋白的发酵条件优化

对hEGF融合蛋白基因工程菌的发酵条件进行优化。结果表明，当起始pH为6．6～7．0，以100ml／500ml的装液量，6％接种量，37℃培养2h，加入0．1mmol／L的IPTG诱导4h后，收获菌体可得到较高的生物量和hEGF融合蛋白表达量。其中IPTG诱导开始时间和菌体收获时间对蛋白表达有显著影响。     

重组胰岛素样生长因子—I基因工程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF-Ⅰ表达的影响.方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究.结果在摇床转速为150、200、250 r/min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x/△ s分别为0.203、0.27、0.33干细胞产量分别为0.54、0.765、1.0g/L.平均生长速率分别为0.034、0.048、0.066 g/(L.h).细胞对数生长期分别为6、7 5、10h发酵罐上生物量由分批发酵的18(A600nm)提高到补料分批发酵的35(A600nm),表达量占细胞可溶性总蛋白质的10%.结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF-Ⅰ表达     

重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ工程菌高密度发酵工艺优化

目的优化表达重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)工程菌的高密度发酵条件。方法考察培养基以及诱导时机、诱导剂量和诱导时间对蛋白表达的影响;用自控发酵罐进行分批补料培养实验,确定优化工艺条件。结果以2×YT+0.5%葡萄糖为发酵培养基,经0.8 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导5 h,通过pH-stat反馈补料方式实现工程菌高密度发酵与目的蛋白高效表达,每1 L发酵液收获干菌体50.1 g,IGF-Ⅰ含量达5.25 g/L。结论建立了IGF-Ⅰ工程菌优化的高密度发酵工艺,为IGF-Ⅰ的下游纯化和工业化生产奠定了基础。     

重组胰岛素样生长因子-Ⅰ基因工程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF Ⅰ表达的影响。方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究。结果在摇床转速为 15 0、2 0 0、2 5 0r min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x △s分别为 0 .2 0 3、0 .2 7、0 .33。干细胞产量分别为 0 .5 4、0 .76 5、1.0 5 4g L。平均生长速率分别为 0 .0 34、0 .0 4 8、0 .0 6 6g (L·h)。细胞对数生长期分别为 6、7.5、10h。发酵罐上生物量由分批发酵的 18(A6 0 0nm)提高到补料分批发酵的 35 (A6 0 0nm) ,表达量占细胞可溶性总蛋白质的10 %。结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期 ,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF Ⅰ表达     

人肠生长激素工程菌高效表达培养工艺的研究

为了优化含有人肠生长激素(rh[Gly^2]GLP-2)基因的融合表达工程菌pED-h[Gly^2]GLP-2高效表达的最适培养工艺条件，文章通过摇瓶培养研究了包括培养基组成、初始pH值、接种量、诱导剂：诱导剂浓度、诱导时机及诱导后培养时间等因素对蛋白表达量的影响，确定了该工程菌表达目的蛋白的最佳条件，目的蛋白表达量可达40％以上，为基因工程产品的大规模工业化生产提供了一些有价值的数据。     

人内皮抑素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :克隆人内皮抑素 (hES)全长cDNA ,并进行其在大肠杆菌表达的研究。方法 :用RT PCR从胎肝RNA中扩增hEScDNA片段 ,构建重组其克隆和融合蛋白表达载体 ,并进行克隆基因的DNA序列分析。结果 :克隆了hEScDNA ,其序列和国外报道一致 ;构建了重组hES融合蛋白表达菌株 ,表达目的蛋白达菌体总蛋白的5 0 %以上。结论 :通过hES基因克隆和表达的研究 ,获得了hES的基因克隆和高效表达菌株     

HPV6bL1-TpN15嵌合基因原核表达系统的构建

目的 分别从梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)临床菌株和尖锐湿疣(cA)组织中扩增人乳头瘤病毒(HPV)6b型L1和TpN15基因,构建HPV6b L1-TpN15嵌合基因及其原核表达系统.方法 采用PCR分别从CA组织及Tp临床菌株中扩增HPV6b L1和TpN15基因片段,构建HPV6b L1-TpN15嵌合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a(+)/HPV6b L1-TpN15,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21 (DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达的融合蛋白用十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、蛋白质印迹法分析鉴定.结果 HPV6b L1-TpN15融合蛋白在原核表达系统中得到了较高表达.结论 原核表达的HPV6bL1-TpN15融合蛋白具较强的抗原性.     

重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定

目的 表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性.方法 从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实.将目的 序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实.将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的 蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的 蛋白经组氨酸镍螫和树脂亲和纯化.以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性.结果 小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被C置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代.序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达.表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43 000,Trx Mr为19 000.在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖.结论 小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同.成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性.     

发酵工程技术在中国药用真菌培养上的应用

将现代发酵工程技术应用于中国药用真菌培养,可提高其发酵水平。文章综述了发酵方式、发酵工程菌和发酵培养基等对中国药用真菌发酵水平高低的影响,展望了中国药用真菌的发展趋势。     

利福霉素B的选育及其发酵的研究

目的：寻找新的菌种提高利福霉素B的发酵水平。方法：对菌株AmediterraneiXCl—02进行筛选、诱变,获得新的菌株。结果：获得高产菌株AmediterraneiXC9—25,生产能力较原始出发菌株AmediterraneiXCl—02提高1．385倍,效价达到10000u／ml。结论：通过工业方法产生菌株,并对其进行筛选变种是提高利福霉素B生产能力的有效途径。     

发酵法生产玻璃酸研究概况

玻璃酸由于其流变学特性以及具有较强的保水性和润滑性，已广泛应用于医药、保健食品和化妆品等领域，本文综述了微生物发酵法生产玻璃酸的研究概况，主要是玻璃酸分子生物学、发酵和分离方面的研究。     

重组长效人胰高血糖素样肽1类似物研究进展

人胰高血糖素样肽1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）是治疗2型糖尿病的主要药物,其长效性是一个重要指标。GLP-1化学合成工艺复杂、成本较高,因此通过基因工程获得重组长效GLP-1类似物成为目前的研究方向。此文对近年来通过基因工程获得重组长效GLP-1类似物的研究进行综述。     

竹黄多糖发酵工艺的优化研究

目的:优化竹黄多糖的发酵工艺。方法:培养竹黄菌菌丝体液,以菌丝干重和多糖得率为指标,分析竹黄多糖发酵过程中碳源、氮源、pH值对多糖积累的影响。结果:蔗糖、玉米粉、酵母膏均有利于菌丝的生长和多糖的形成。通过正交试验确定了竹黄多糖最佳发酵培养基:蔗糖3%、玉米粉3%、酵母膏0.5%、麸皮2%、(NH4)2SO40.2%、MgSO4.7H2O0.05%、KH2PO40.1%;在10L发酵罐上竹黄多糖含量最高达10g.L-1。结论:该工艺稳定,可为工业生产提供理论依据。