抗SEA鸡卵黄抗体ELISA用于大山区血吸虫病诊断的研究

目的评价抗SEA鸡卵黄抗体(anti-SEAIgY)ELISA用于大山区血吸虫病诊断的效果。方法对大山区血吸虫病流行区506位居民进行粪检,同时用anti-SEAIgY-ELISA(以IgY作为捕捉抗体,以酶标NP28-5B为检测抗体)和血吸虫抗体ELISA检测试剂盒(SEA-ELISA)对其血清进行检测,评价anti-SEAIgY-ELISA的敏感性。实验设非流行区200份血清作对照以确定方法的特异性。结果 anti-SEAIgY-ELISA和SEA-ELISA与粪检的阳性符合率分别为92.68%(152/164)和89.02%(146/164),特异性分别为99.00%(198/200)和95.00%(190/200),差异均无统计学意义(P均0.05);在粪虫卵孵化阴性人群,anti-SEAIgY-ELISA和SEA-ELISA阳性率分别为31.00%(106/342)和83.63%(286/342),差异有统计学意义(P0.05)。结论 anti-SEAIgY ELISA可用于大山区血吸虫病诊断。     

成虫切片间接免疫酶染法诊断隐性血吸虫病的探讨

用血吸虫成虫冰冻切片间接免疫酶染法(IIP-AWA)检测血清抗血吸虫成虫抗体(AWAb)。5年前已消灭血吸虫病的上海县COPT阳性血清229份和有治疗史COPT阴性血清135份的阳性率各为96.9％和5.2％;122份粪检阳性患者血清均为强阳性;80份健康人血清均阴性。阳性血清滴度≥1:16时,成虫切片多数呈全虫弥漫型显色。149例血清阳性者经吡喹酮治疗后的阴转率,1年内IIP-AWA为80％,明显高于COPT(60.1％);2.5年两者无差别(85.5％与83.6％)。未转阴者滴度明显下降,染色多呈局限型(肠管显色)。表明血清AWAb阳性者,体内可能仍有成虫残存。本法对清查隐性血吸虫病患者(轻度感染,无临床表现者)有实用价值。     

血吸虫循环抗原检测在血吸虫病普查中的应用

目的了解血吸虫循环抗原（ScAg）检测在普查中的应用效果，发挥ScAg检测在血吸虫病传播阻断中的作用。方法在现场单盲试验普查条件下测试血吸虫病血清库质控血清，应用ScAg在不同程度感染的血吸虫病流行区批量检测。对ScAg阳性者作9送9检粪孵追踪观察。结果ScAg检测EPG≤8的血吸虫病患者血清阳性率为95．45％，EPG≥16的血吸虫病患者血清阳性为100．00％，对正常人和华支睾吸虫病患者血清的特异性为100．00％。对高、中、低流行区普查ScAg的阳性率分别为7．27％、3．06％、2．70％。对ScAg阳性的病例粪孵9送9检累计阳性率为34．29％，粪检累计总阳性数中，第1次只检出16．67％，连续第3次的累计阳性率仅为50．00％。连续化疗地区ScAg检测阳性的粪孵阳性率为12．50％，间歇性选择化疗地区ScAg阳性者的粪孵阳性率占75．00％以上。结论9送9检粪孵累计阳性结果显示，检出率随粪检次数增加而升高，粪检漏检多、工作量大、不能正确反映当地疫情。ScAg检测是一种敏感性高，特异性好的简便快速方法，普查结果能反映不同感染度流行地区的实际状况，有利于制定防治策略，了解防治后成效。     

血吸虫肝卵免疫酶试验切片载体的改进

应用PVC薄膜代替载玻片作肝卵组织切片载体,进行免疫酶染色试验(简称PVC-IEST)。与玻片法免疫酶染色试验(IEST)比较,两法同时检测78份血吸虫病患者血清,结果PVC-IEST和IEST阳性率分别为96.2％和97.4％。此外,用PVC-IEST检测粪便孵化阳性的血吸虫病患者血清164份和粪便孵化阴性而COPT阳性的血清15份,其PVC-IEST阳性率为97.2％(174/179)。检测6份并殖吸虫病患者血清及并殖吸虫病犬血清6份,均为阴性。健康人血清63份,62份阴性,仅1例假阳性。     

PVF抗原片环卵沉淀试验诊断日本血吸虫病敏感性和特异性的进一步观察

据80份粪检阳性的血吸虫病人血清,95份经吡喹酮治疗后3～8年的血吸虫病患者血清和90份非流行区健康人血清,按单盲法混合编号的考核实验结果:PVF—COPT使用江苏省寄研所提供的冷冻干卵抗原和热处理超声干卵抗原,对血吸虫病人血清的阳性率均为83.8％;在有血吸虫病治疗史者血清的阳性率分别为22.1％和15.8％;对正常人血清的假阳性率分别为8.9％和6.7％.此外,对肺吸虫、华枝睾吸虫病和姜片虫病人血清采用冷冻干卵抗原的交叉反应阳性率分别为8％、12％和4％。与常规法COPT的平行对比实验结果均无显著的差异.但标准化的PVF—COPT能预制定量的干卵抗原片,有利于提高COPT的稳定性.操作上较常规法COPT简便.     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅰ

将血吸虫肠相关趋阴极抗原的单克隆抗体用于Dot—ELISA,共检测2175份血清,其中急性血吸虫病血清210份,阳性率为91.9％;慢性血吸虫病血清798份,阳性率为86.7％;正常人血清752份,假阳性率为1.1％;除肺吸虫病外,对其他寄生虫病或非寄生虫感染疾病血清无明显交叉反应。用单盲法Dot—ELISA检测3批血清,结果敏感性为86.5％～95.1％;特异性为96.9％～100.0％。检测流行区居民547份血清,Dot—ELISA阳性反应130份;粪检阳性72例。两者均为阳性者55例,相符率为76.4％。上述结果表明,Dot—ELISA检测循环抗原确实具有较好的敏感性与特异性,适于大规模应用及流行病学调查。     

金黄色葡萄球菌A蛋白协同凝集试验检测慢性血吸虫病患者循环抗原的研究

目的：探讨金黄色葡萄球菌Ａ蛋白协同凝集试验的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法：检测用吡喹酮治疗前后７２例慢性血吸虫病患者和对照组的血清。结果：慢性血吸虫病患者血清阳性率９３．１％（６７／７２），血清循环抗原水平与每克粪便内虫卵数（ＥＰＧ）无明显相关，正常人血清假阳性率３．２％（３／９５），１０例华支睾吸虫病患者血清中有１例阳性，其他病患者１１例血清均阴性。血吸虫病患者治疗后３个月，粪检阴转者中８０．７％（４６／５７）血清抗原亦转为阴性，粪检阳性者血清抗原检测仍为阳性，所有阳性血清抗原滴度均较治疗前明显下降。结论：金黄色葡萄球菌Ａ蛋白协同凝集试验能用于血吸虫病诊断和疗效考核，并有简易、快速和费用低廉的优点。     

华支睾吸虫成虫抗原免疫酶染色试验和间接免疫荧光抗体试验效果的比较

应用成虫冰冻切片抗原作免疫酶染色试验(IEST)及间接免疫荧光抗体试验(IFAT),对比检测了 51份华支睾吸虫病患者和 50份健康人血清,两法的阳性率分别为 92％和 88％;假阳性率分别为 2％和4％,应用 IEST和IFAT对比检查 22份急性血吸虫病患者血清、20份慢性血吸虫病患者血清及 15份并殖吸虫病患者血清。IEST 出现的交叉反应率分别为 14％、5％和0;IFAT出现的交叉反应率分别为 14％、10％和0。表明两法诊断华支睾吸虫病均有较高的敏感性和特异性,并且抗原定位好。而 IEST不需要特殊仪器,更适合于现场应用。     

单克隆抗体JPG3双抗体夹心酶联免疫吸附试验用于血吸虫病疗效考核的探讨

以单克隆抗体(MAb)为探针，用ELISA检测血吸虫病人血清中的肠相关趋阴极抗原(CCA)，阳性率可达84．6％。有一定的疗效考核价值。傅奇等采用Sandwich-ELISA方法，检测日本血吸虫病患者血清中Sj70抗原，阳性率可达90％，吡喹酮治疗后6-12个月，94％病例转阴。1996年由卫生部地病司和血吸虫病专家咨询委员会主持的CAg检     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。     

Diagnosis of human schistosomiasis by detection of circulating cathodic antigen with a monoclonal antibody.

Monoclonal antibody (MAb) 5H11 reacted with repeating epitopes on Schistosoma mansoni circulating cathodic antigen (CCA) and detected CCA in sera of Egyptian S. mansoni-infected patients. MAb 5H11 was both capture and biotinylated detection antibody in a sandwich ELISA of trichloroacetic acid-pretreated serum samples. Sera of patients with 7-500 eggs/g of stool were positive by MAb 5H11-CCA sandwich ELISA. Stool egg counts and CCA serum levels correlated (r = .52), and CCA levels decreased by 4 weeks after praziquantel treatment in patients with pretreatment egg counts of greater than or equal to 50/g of stool (P less than .05). Sera of Schistosoma haematobium-infected patients, uninfected individuals, and most patients with other helminths were negative in this assay. The MAb 5H11-CCA sandwich ELISA appears sensitive and specific for immunodetection of active schistosomiasis mansoni and useful for monitoring its chemotherapy.     

日本血吸虫循环抗原动态消长的实验研究

目的：了解日本血吸虫三类循环抗原（CAg）在感染家兔的动态变化及治疗后的消长情况。方法：制备日本血吸虫的三株单抗，以辣根过氧化物酶标记，分别建立检测日本血吸虫肠相关抗原（GAA）、膜相关抗原（MAA）和可溶性虫卵抗原（SEA）的斑点酶联免疫吸附试验（dot－ELISA），观察感染日本血吸虫家兔血中三类抗原的动态变化情况。结果：家兔感染后第4wk，有39％家兔血中GAA呈阳性反应，而仅8．6％家兔MAA、SEA呈阳性反应，第8wk三类CAg均呈阳性反应，并于第10wk左右达高峰。未治疗组家兔直至感染后第27wk，血中三类CAg一直维持较高水平。感染后第9wk家兔接受吡喹酮治疗，治疗后第4wk，CAg水平开始下降，治疗后第6wk有10％家兔SEA阴转，治疗后第8wk，GAA阴转率为20％，SEA为70％，MAA为80％，治疗后第14wk除1例外，三类CAg全部阴转。结论：GAA早期诊断效果较好，而MAA和SEA在治疗后较GAA消失快，三类CAg的诊断和疗效考核价值不相同     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 ,具有诊断潜能     

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。     

抗独特型抗体作为日本血吸虫病诊断抗原的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０作为抗原，进行ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫血清抗体，与用肠相关抗原ＧＡＡ和可溶性虫卵抗原ＳＥＡ对照，检测１００份急性病人血清，ＮＰ３０检出率为９５％；ＧＡＡ为９２％；ＳＥＡ为９７％，三埂无显著差别，５２例慢性病人中ＮＰ３０与ＧＡＡ检出率均为７３．１％，但与ＳＥＡ９４．２％有显著差别，在４０例已治愈病人中，ＮＰ３０转阴率为４２．５％与ＧＡＡ的４５％无差别。但ＳＥＡ仅为１     

单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体NP30与日本血吸虫肠相关抗原(GAA)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测了702份不同病期及正常人群中的血清抗体,结果显示,在急性感染时,NP30抗体的检出率为98％,与GAA(94％)和SEA(98％)的无差别。在慢性感染时NP30抗体的检出率为87％,与GAA(86％)的无差别,但低于SEA(98％)的。在正常人群中,上述3种的抗体假阳性率均为3％左右,无差别。NP30的抗体滴度几何均数在急性血吸虫感染时高于GAA的,低于SEA的,在慢性感染时低于后两者,提示NP30的抗体在血吸虫感染期间出现比较早,消退较快。上述结果提示,NP30可以替代虫源性抗原,用于日本血吸虫病诊断。