VP7、VP4与轮状病毒装配及分子流行病学

A组轮状病毒是全球婴幼儿腹泻的主要病原,其外壳蛋白VP7和VP4在病毒黏附、穿入细胞、血凝及诱导产生中和抗体中具有重要的作用,它们还分别决定血清型G型和P型,VP4又以基因序列不同而分型,称为P[]基因型,而且由其决定的分子病学流行特点不断发生变化。文中对A组轮状病毒VP7和VP4以上几方面的研究加以综述。     

重庆地区婴幼儿轮状病毒腹泻VP7型别分析

目的：研究重庆地区1998－2000年度秋冬季婴幼儿轮状病毒腹泻分子流行病学,方法：采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）扩增婴幼儿腹泻便样中的编码轮状病毒VP7蛋白的全基因片段（1062bp),再用巢式－聚合酶链反应（net-PCR)对扩增得到的VP7基因进行分型,同时利用核苷酸序列分析方法进行分型。结果：在1998－1999年度130例婴幼儿腹泻便样中VP7基因阳性者50例（38．46％）,其中G1型占88％（44／50）,G3型占8％（4／50）,混合型占4％（2／50）,均为G1＋G3型,而1999－2000年度轮状病毒流行季节采集的112 标本中VP7基因扩增阳性者38例（33．93％）,其中G3型占78．95％（30／38）,G1型占13．16％（5／38）,混合型占7．89％（3／38）,均为G1＋G3型,苷酸序列分型结果与PCR分型结果一致。结论：重庆地区 1998－1999年度轮状病毒流行季节中流行的轮状病毒以G1型为主,而1999－2000年度轮状病毒流行季节中G3型为主,在连续两年的监测中出现轮状病毒血清型的转变。     

河南省轮状病毒VP7基因型的分布

1990-1996年间由河南五市县5岁以下急性胃肠炎患儿获得的188份轮状病毒RNA电泳阳性粪便标本,经G血清型(VP7)特异1、2、3和4型寡核苷酸探针枪查,132份(70%)与1、2或3型探针杂交,其中60%为G血清1型,27%为G血清2型,11%为G血清3型,有3份标本为G_1+G_3混合型(2%),未检测到G血清4型。同时发现2株电泳短型,1株电泳长型,分别与G1型和G2型探针杂交。     

昆明地区22株人轮状病毒VP7及NSP4基因分析

目的研究昆明地区轮状病毒（RV）不同VP7血清型及NSP4基因变异与腹泻的流行及症状严重程度的关系。方法对2002年和2003年分离于昆明地区的RV，用PCR分型法对四种主要的VP7血清型进行分型，并对从150份RV腹泻标本VP7血清型为G1、G3、（34型RV株中挑出的14份一般腹泻株和8份重症腹泻株的NSP4基因序列进行了分析，与来自GenBank Database的4株人RV（Wa、KUN、AU-1、Hochi）和3株动物RV（EW、OSU、SA11）以及中国不同地区流行株NSP4的基因变异情况进行了比较。结果2002年昆明地区RV流行株以G1型为主，2003年RV腹泻株以G3型为主；昆明地区RV流行株间的氨基酸同源性高达98．9％～99．4％，22株流行株全都属于Wa组；NSP4变异与地域及VP7血清型无关；NSP4基因变异与RV腹泻临床症状严重程度不相关（P〉0．05）。结论不同年份相同季节不同地域流行的RVVP7血清型变异较大，而NSP4基因的相对保守性及其免疫原性使其有可能成为发展疫苗的候选基因。     

人轮状病毒外衣壳糖蛋白VP7基因毕赤酵母重组表达系统的构建

[目的]构建人轮状病毒糖蛋白VP7基因毕赤酵母表达系统.[方法]构建好的毕赤酵母重组表达质粒VP7-pPICZαA经Sac Ⅰ线性化后应用电转化法转化毕赤酵母菌株GS115感受态中,Zeocin平板筛选,PCR鉴定转化子,MDH和MMH平板鉴定Mut表型.[结果]线性化的重组质粒VP7-pPICZα成功转化进入毕赤酵母感受态中,PCR鉴定结果与预期相符,表型确定为Mut+.[结论]成功构建人轮状病毒耱蛋白VP7基因的毕赤酵母表达系统     

人轮状病毒结构蛋白VP7基因毕赤酵母表达质粒的构建

[目的]构建人轮状病毒结构蛋白VP7基因重组酵母表达质粒VP7-pPICZαA. [方法]从VP7-pET32a质粒中PCR扩增轮状病毒VP7基因,EcoR I、Xba,I双酶切VP7基因产物和酵母表达载体pPICZαA,T4 DNA连接酶连接目的基因片段和pPICZαA,转化到大肠杆菌Top10中,Zeocin筛选转化子并进行PCR、酶切和测序鉴定. [结果]阳性克隆菌经酶切和PCR和测序鉴定,结果与预期相符,目的基因正确插入pPICZαA中. [结论]成功构建轮状病毒结构蛋白VP7基因重组酵母表达质粒VP7-pPICZαA,为轮状病毒结构蛋白VP7基因的酵母表达奠定了重要的实验基础.     

青海省67份轮状病毒结构蛋白VP7基因分型和分布情况

目的 研究2016-2017年青海地区腹泻患者轮状病毒基因分型及流行病学分布。方法 收集门诊及住院部腹泻的粪便标本238份,采用实时荧光PCR法对轮状病毒A组进行检测,阳性标本进行VP7基因扩增和测序。结果 238份粪便标本中,通过实时荧光PCR 检测到轮状病毒A组阳性67份,阳性率为28.15%（67/238）;对67份轮状病毒A阳性标本进行VP7蛋白检测和测序,测序后得到29份核苷酸序列,用Clustral X Bootstap NJ Tree软件构件进化树,分析发现2016年3月-2017年12月青海轮状病毒以G9P8型为主,共26株,占89.66% (26/29),G2P4型2株(2/28),G3P8型1株(1/28), 轮状病毒腹泻发病高发季节为9-12月,其中以12月份检出最高,占总数的61.19%（41/67）。病人以成人为主,成人和5岁以下儿童比例为1.73[DK]∶1。结论 2016-2017年青海地区轮状病毒以流行病毒株G9P8型为主。     

昆明地区A组轮状病毒感染状况调查与VP7血清型分析

A组轮状病毒(HRV)是世界范围内小儿急性胃肠炎的主要病原。我们采用ELISA和PAGE方法对昆明地区HRV的分子流行特征进行了VP7血清型别研究。 1.材料与方法:100例(男68例,女32例)婴幼儿腹泻粪便标本来源于2002年9～12月昆明医学院第一附属医院儿科门诊和住院部急性腹泻患儿,标本贮于-70℃冻存以备用。用ELISA法检测RV-Ag,严格按试剂盒说明操作。RV-     

福州地区2009-2014年腹泻儿童轮状病毒特征

目的 了解轮状病毒在福州地区腹泻儿童中的流行情况.方法 收集2009-2014年5岁以下腹泻住院儿童粪便标本,用ELISA法检测轮状病毒抗原,RT-PCR法确定基因型别.对G9轮状病毒阳性标本的VP7基因全长测序及进化分析.结果 福州地区腹泻儿童轮状病毒高峰期在10～12月,呈单峰流行态势.G9轮状病毒在2011年后成为福州地区优势流行型别,毒株VP7基因核苷酸序列相似性92.5％～100％,毒株间有较高的同源性,进化分析都属于G9第3亚型.结论 G9轮状病毒在福州地区流行强度逐渐加强,目前已成为优势流行型别.毒株同源性高,属G9型3亚型.     

一株野生型婴幼儿轮状病毒的分离鉴定与毒力测定

目的 从妇幼保健院腹泻患儿临床样本中分离鉴定一野生型人A组轮状病毒株,并对其毒力进行测试。 方法 采集水样粪便样品,应用A组轮状病毒特异性抗体采用点杂交(Dot blot)方法检测,感染vero细胞并用TRIzol法提取病毒RNA,SDS-PAGE电泳分析病毒RNA迁移型式,以轮状病毒VP7通用引物扩增特异性鉴定,体内毒力分析。 结果 Dot blot显示粪便中轮状病毒阳性,用通用引物PCR能扩增出轮状病毒特异条带,RNA电泳迁移型式为4:2:3:2。感染病毒株的vero细胞病变显著,实验鼠水样性腹泻严重,生长缓慢。 结论 分离获得的病毒株属野生型人A组轮状病毒,具有较强的感染性和致病性。     

山东省1990 ～ 1998 年肾综合征出血热流行特征及其变化趋势

山东省是我国肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)流行最严重的疫区 ,其发病人数占全国发病总数的 1/3左右[1] 。笔者分析了山东省ＨＦＲＳ流行特征及其变化 ,旨对ＨＦＲＳ综合防制工作有一定的指导作用1 .流行概况 :在 1995～ 1998年ＨＦＲＳ发病率为 19.19/10万 ,病死率为 0 .42 % ,分别比 1990～ 1994年发病率 10 .15 /10万和病死率 0 .90 %上升和下降 (χ2 =12 784.47,Ｐ <0 .0 0 0 1;χ2 =10 5 .12 ,Ｐ <0 .0 0 0 1)。ＨＦＲＳ发病高峰在 1995年 ,发病率为 2 6 .0 8/10万 ,病死率为 0 .48%。山东省共有141个县 (区 ) ,1990～ 1998年ＨＦＲＳ发病…     

武汉市儿童医院婴幼儿腹泻轮状病毒的VP4型别分析

目的研究武汉市儿童医院腹泻门诊A组轮状病毒VP4基因的分子流行病学特征. 方法利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,将检测出的A组轮状病毒阳性样利用多重RT-PCR技术对VP4基因进行分型研究. 结果武汉地区793份腹泻患儿粪便样本经检测轮状病毒阳性257例,阳性率为32.4%.其中P [8]型232例(90.3%),P [4]型3例(1.2%),P [8]与P [4]混合感染15例(5.8%),尚有7例(2.7%)未能分出型别.对检测结果按采样时间、年龄和性别分布分别进行了分析. 结论武汉地区A组轮状病毒以P[8]型为主要流行基因型,患儿以6月至1岁为主,男女性别差异不大,武汉地区婴幼儿腹泻A组轮状病毒VP4基因分型研究将为轮状病毒疫苗的研制提供基础.     

长沙市2010年手足口病EV71型VP1区基因序列分析

目的了解2010年长沙市手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）重症和普通病例肠道病毒71型（human Enterovirus 71,EV71）VP1区基因特征。方法收集12例HFMD重症和普通病例的咽拭子或肛拭子标本进行VP1区基因RT-PCR扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用sequin软件提交至GenBank,Lasergene和Mega5软件对测序结果进行氨基酸比对分析和构建进化树。结果 12株EV71 VP1区基因序列在进化树上与C基因型中的C4a亚型代表株属同一分支,在核苷酸同源性分析中,12株EV71与C4a亚型代表株（3254-TAI-98）的同源性达到92.6%-93.3%,高于与A、B、C1、C2、C3、CVA16型或亚型代表株的同源性（分别为79.9%-80.7%、83.1%-84.0%、87.9%-88.7%、89.1%-89.8%8、7.8%-88.2%和57.3%-58.4%）;12株EV71病毒VP1之间的核苷酸有高度的同源性：同源性为98.1%-100.0%,高于与C4亚型代表株的同源性（92.6%-93.3%和91.8%-92.7%）。2010年分离自长沙的重症和普通病例与2008年分离自北京、深圳和阜阳的EV71病毒VP1基因序列之间的氨基酸变异位点少。结论 2010年长沙市流行的EV71型病毒属于C基因型中的C4亚型;12例HFMD重症和普通病例的EV71 VP1区基因序列差异较小;不同时间、不同地区和不同病例来源的EV71 VP1区氨基酸变异位点无关联。     

2013年杭州地区肠道病毒71型分离株VP1基因特征分析

目的 了解2013年杭州地区重症手足口病患儿感染的肠道病毒71型(EV71)分离株VP1区的基因特征.方法 采集2013年杭州市儿童医院收治的重症手足口病确诊病例粪便样本,用EV71特异性引物进行RT-PCR鉴定,选取EV71检测阳性的15例样本进行病毒分离并进行VP1基因的特异性扩增并测序,结合EV71各基因型及亚型的代表株构建系统进化树,并对VP1蛋白的氨基酸序列进行分析.结果 2013年该院分离的15株EV71分离株与A、B基因型参考株的核苷酸同源性分别为77.5％～79.8％、77.7％～83.1％,氨基酸同源性分别为92.8％～96.6％、92.8％～97.9％,与C基因型的核苷酸同源性为83.4％～97.3％,氨基酸同源性为93.4％～99.7％,其中与2008年安徽省阜阳市的EV71流行株[C4a (Fuyang-0508)]的核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为95.0％～97.3％及96.2％～99.7％.系统进化树显示所有分离株与C4a亚型的代表株处于同一分支.15株EV71分离株与不同基因型代表株进行比对发现,在297个氨基酸位点中主要突变位点有11个.结论 2013年杭州地区重症手足口病患儿中流行的EV71均为C4a基因型,其VP1基因保守性好.     

2007～2009年日照市5岁以下腹泻就诊患儿轮状病毒感染状况分析

[目的]研究日照市儿童腹泻的流行规律,探讨腹泻与轮状病毒感染的关系。[方法]对2007～2009年在日照市县级以上医院就诊的997例5岁以下感染性腹泻患儿病原学检测资料进行分析。[结果]检测997例患儿粪便,轮状病毒抗原阳性的353例,阳性率为35.41%。轮状病毒抗原阳性率,男性为35.27%,女性为35.61%（P〉0.05）;〈6个月的为20.69%,6个月至2岁的为48.11%,〉2岁的为10.16%（P〈0.01）;2007年为36.71%,2008年为34.31%,2009年为35.05%（P〉0.05）;流行高峰期为53.10%,散发期为13.81%（P〈0.01）;1年内有轮状病毒口服液免疫史者为8.89%,无免疫史者为28.98%（P〈0.01）;脱水者为35.76%,未脱水者为33.87%（P〉0.05）;水样大便为71.74%,蛋花样大便为76.24%,稀糊状大便为49.24%,带少许黏液大便为14.81%（P〈0.01）;发热的为37.85%,体温正常者为30.00%（P〈0.01）。[结论]轮状病毒是日照市5岁以下儿童腹泻的重要病原。