海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

两种低温保护剂对皮肤储存后α-辅肌动蛋白表达及活力的影响

目的比较两种不同低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白（α-actinin）低温保存后表达的影响,为寻求皮肤组织低温保护剂的最佳配方提供实验依据。方法新鲜成人皮肤组织分为3组,新鲜对照组和海藻糖-二甲基亚砜（T—D）组、二甲基亚砜-丙二醇（D-P）低温保护剂保存组,-196％液氮冻存7d、14d复温,免疫组织化学染色对各组间皮肤进行比较。同时对各组皮片进行氧耗量测定。结果0．5mol／L海藻糖-二甲基亚砜能够很好保护皮肤组织,α-actinin的表达量与新鲜皮肤组相似。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用对皮肤组织α-actinin的保护作用优于传统组。     

皮肤及皮肤相关组织细胞的深低温冻存研究进展

保持冷冻后皮肤较好的活力对皮肤移植十分重要,采用慢速或中速降温（-1℃／min）或（-60℃／min）可以获得较高的活性。冷冻保护剂被证实对保持低温冻存皮肤活力有益,目前发现的冷冻保护剂有丙二醇、丙三醇、二甲基亚枫、海藻糖。采用海藻糖联合二甲基亚砜最有利于复合皮肤组织在深低温储存和冻融后保留活性。D-阿洛糖作为冷冻保护剂的添加剂,对皮肤角化细胞和人真皮成纤维细胞生存能力有益。玻璃化冷冻技术则使冻存后皮肤及皮肤相关组织、细胞活性达到80％以上。     

不同抗冻剂预处理对直接快速液氮冻存人羊膜活性的影响

目的:筛选一种抗冻剂配方,为建立深低温高活性保存的羊膜库提供依据。方法:选取12只健康剖宫产产妇羊膜,根据预处理抗冻剂的不同随机分为4组:A组(空白对照组),B组(DMEM/甘油组),C组(DMEM/甘油/DMSO组),D组(DMEM/甘油/DMSO/海藻糖组)。冷冻保存后第1,3个月取羊膜行HE与台盼蓝染色,分别观察羊膜结构,计算羊膜上皮细胞死亡率,并与新鲜羊膜(E组)比较。结果:E组:上皮细胞呈柱状、排列整齐紧密,细胞膜清晰,细胞核圆润蓝染,基底膜连续,细胞死亡率为(6.95±1.95)%。A组:保存1,3个月羊膜上皮层结构完整性均破坏、核固缩呈深蓝染,基底膜渐变为模糊不清。细胞死亡率分别为(39.96±5.84)%,(81.50±4.50)%,两组比较差异有统计学意义(t=13.796,P<0.05)。B组:保存1,3个月细胞变形,核固缩加剧,基底膜渐变为不连续。细胞死亡率分别为(21.61±6.65)%,(36.76±10.72)%,两组比较差异有统计学意义(t=2.940,P<0.05)。C组:保存1个月后类似新鲜羊膜,保存3个月后羊膜上皮细胞扁平,细胞核深染固缩,基底膜较完整。细胞死亡率分别为(14.08±3.21)%,(29.68±8.19)%,两组比较差异无统计学意义(t=4.344,P>0.05)。D组保存1,3个月形态结构接近新鲜羊膜,死亡率分别为(8.51±1.75)%,(12.70±5.70)%,两组比较差异无统计学意义(t=1.722,P>0.05)。保存1个月的A、B、C组死亡率与D、E组比较均有统计学差异(P<0.05),D、E组间比较差异无统计学意义(P>0.05);保存3个月的A、B、C、D、E各组间比较均有统计学差异(P<0.05),但D组存活率仍然达到87.3%。结论:DMEM/甘油/DMSO/海藻糖可作为新型抗冻剂用于深低温高活性保存羊膜。     

低温下皮肤力学信号相关蛋白表达与活力关系研究

目的:探讨皮肤力学信号相关蛋白整合素(integrin)、踝蛋白(talin)在不同低温条件下的表达与皮肤活力改变的关系,进一步揭示皮肤低温损伤的机制。方法:从同一个体取标本后用5种不同的温度保存,分为新鲜组、4℃组、-20℃组、-80℃组和-196℃组,并在保存48 h后进行实验观察,用integrinβ1、talin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色,图像分析方法定量,同时采用氧耗量的方法对不同低温保存后皮肤活力进行检测。结果:新鲜组、-196℃组、-80℃组、-20℃组、4℃组活力依次下降,同时-80℃组、-20℃组、4℃组两种蛋白表达亦有明显下降。结论:低温保存后活力的改变与皮肤力学信号相关蛋白的表达下降关系密切。     

低温储存对皮肤组织E-钙黏素和β-连接素表达的影响

目的：观察黏附分子E-钙黏素(E-cadherin)、β-连接素(β-catenin)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用E-cadherin、β-catenin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃ H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，E-cadherin、β-catenin含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存冷冻损伤与黏附分子破坏有关。     

低温保存活性生物瓣膜和血管的酶组织化学检测

①目的对低温保存有活性生物瓣膜和血管的效果优劣进行了酶组织化学的检测，并观察消毒液对组织的损伤程度。②方法标本取自新鲜整体猪，分为新鲜对照、２４ｈ灭菌后不同保护剂冻贮、未经２４ｈ灭菌不同保护剂冻贮、经碘扑溶液消毒后的新鲜和冻贮组织等共计７组。均进行琥珀酸脱氢酶、核苷酸酶、磷酸化酶、葡萄糖－６－磷酸脱氢酶和乳酸脱氢酶的组织化学半定量检测。③结果标本在低温保存前先行２４ｈ灭菌对组织无明显不利的影响；实验组经低温保存后其５种酶活性与新鲜对照组相近，但低温保护剂为Ｍ１９９组稍好于ＨＳＡ组；将组织浸泡于１％碘扑溶液中２ｍｉｎ，对酶活性有轻度影响。④结论低温保存活性血管和瓣膜以Ｍ１９９＋ＤＭＳＯ组效果最佳；使用碘扑溶液行心内组织消毒时应尽量缩短其作用时间     

低温保存活性生物瓣膜和血管的酶组织化学检测

对低温保存有活性生物瓣膜和血管的效果优劣进行了酶组织化学检测，并观察消毒液对组织的损伤程度。标枉取自新鲜整体猪，分为新鲜对照，２４ｈ灭菌后不同保护剂冻贮，未经２４ｈ灭菌不同保护剂冻贮，经碘扑溶液消毒后的新冻贮组织等共计７组。均进行琥珀酸脱氢酶，核苷酸酶，磷酸化酶，葡萄糖－６－磷酸脱氢酶和乳酸脱氢酶的组织化学半定量检测。     

海藻糖对液氮保存同种带瓣大动脉组织结构的影响

目的观察3种不同保护剂对液氮冻存同种带瓣大动脉组织结构影响,寻求最佳冷冻保护剂。方法单独使用0．1mol／L二甲亚砜（对照组）及单独使用0．1mol／L海藻糖（实验组1）和0．1mol／L二甲亚砜＋0．1mol／L海藻糖（实验组2）作为冷冻保护剂,用光镜及电镜对新鲜组织及液氮保存6、9、12个月的带瓣大动脉进行形态学观察。结果随着保存时间的延长,3组结构破坏均逐渐加重。光镜下观察,保存超过6个月后,3组形态学与新鲜组织比较均有改变（d=17～30,P〈0．01）,3组之间比较差异有显著意义（d=6～13,P〈0．01、0．05）。电镜下观察,保存6、9、12个月时,对照组的同种带瓣大动脉组织的超微结构改变十分明显,实验组1改变较对照组轻,实验组2的结构改变最轻。结论海藻糖对液氮保存的带瓣大动脉有较好的保护作用;单独使用0．1mol／L海藻糖保护效果优于单独使用0．1mol／L二甲亚砜,二者联合应用保护效果明显好于单独使用。     

小红参醌对低温储存皮肤活力的影响

目的：探讨小红参醌作为抗冻剂添加剂，在皮肤的低温储存中对皮肤活力折影响。方法：皮肤的低温储存采用速冻玻璃化法和慢地，将小红参醌分别按照０．５μｇ／ｍｌ和１μｇ／ｍｌ的浓度加入抗冻液中，每种方法分为常规组、０．５μｇ／ｍｌ小红参醌组和１μｇ／ｍｌ小红参醌组。利用三个实验组分别对小块离体豚鼠皮和异体尸体皮进行处理，然后在液氮温度下进行深低温储存。对储存后皮肤分别进行氧耗量、琥珀酸脱氢酶活性的测定，并计算平均活力。结果：对于豚鼠皮和异体尸体皮，无论速冻法和慢冻法两种浓度的小红参醌对低温储存后皮片的活力均未发现有明显的提高。除大块异体皮慢冻组琥珀酸脱氢酶，小块异体皮慢冻组耗氧量之间尚有差异以外，其他组别氧耗量、琥珀酸脱氢酶活性测定值以及平均活力之间均无显著差异。结论：抗氧化剂小红参醌在皮肤的低温储存中对皮肤的活力没有影     

海藻糖对人血浆PT、KPTT与TT结果的影响

目的探讨在低温冻结贮存下,海藻糖对人血浆凝血酶原时间（PT）、白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）与凝血酶时间（TT）结果的影响。方法用同一新鲜混合血浆分装7小瓶,分别配制使海藻糖的浓度为0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mol/L,在-20℃下保存30、60、120、240、360 d后,检测PT、KPTT与TT结果,并新鲜混合血浆后即刻测定值比较。结果在-20℃下保存360 d时,无海藻糖保护组PT、KPTT与TT结果分别为21.2、70.5与22.5秒,有海藻糖保护的则均低于无海藻糖保护组。海藻糖浓度为0.15 mol/L对PT、KPTT与TT结果保护作用最为理想,分别为14.8、40.9与17.3 s。结论在低温冻结贮存下,海藻糖对PT、KPTT与TT结果有一定保护作用。     

细胞筛网作为载体运用于玻璃化法冻存人卵巢组织的效果分析

目的:研究细胞筛网作为载体运用于玻璃化冷冻人卵巢组织的效果,并寻找合适的冷冻剂浓度?方法:选择来自卵巢切除?子宫内膜异位?卵巢浆液性囊肿患者的卵巢组织共10例,以细胞筛网为载体,以二甲基亚砜?乙二醇和蔗糖为冷冻保护剂进行玻璃化冷冻?分别以二甲基亚砜和乙二醇等浓度混配(12%?15%?18%和20%)和0.5 mol/L的蔗糖配成4组不同的冷冻液,并以新鲜组织及常规程序化冷冻组织为对照,观察不同冷冻液组合对卵巢组织始基卵泡的形态学?凋亡以及体外培养后雌激素?孕酮和乳酸脱氢酶的影响,评价冷冻效果?结果:与新鲜组相比,细胞网筛玻璃化冷冻的卵巢组织冻融后,始基卵泡正常率虽有所降低,但优于常规程序冷冻组,其中18%组和15%组的正常率显著增高?组织细胞的凋亡率比新鲜组有所增加,但低于常规程序冷冻组,其中15%组和12%组明显降低?因此,15%组的冷冻效果最好?比较了该浓度组合对卵巢组织培养后的雌激素?孕酮?乳酸脱氢酶的影响,结果发现,与新鲜组和程序化冷冻组相比,培养液中雌激素水平无明显差异,孕酮水平略好于程序组,但乳酸脱氢酶与新鲜组的变化完全一样,都显著优于程序化组?结论:细胞筛网玻璃化冷冻法优于程序化冷冻法,可作为临床卵巢组织冷冻的一种方法,15%的二甲基亚砜和乙二醇等浓度组合效果最佳?     

胰岛素样生长因子-1对模拟失重下成骨细胞整合素亚单位表达的影响

目的探讨失重条件下胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对成骨细胞整合素亚单位基因表达的影响。方法以小鼠成骨样细胞株(MC3T3-E1)作对象,以回转器模拟微重力效应,实验共分为5组:正常重力组、模拟失重组、模拟失重+10 ng/mL IGF-1组、模拟失重+50 ng/mL IGF-1组、模拟失重+100 ng/mL IGF-1组。在实验的48 h提取细胞总RNA,进行反转录PCR,检测整合素α2α5β1亚单位mRNA的表达,同时以GAPDH基因作为内参照。扫描PCR产物电泳照片,计算integrinα2/GAPDH、integrinα5/GAPDH、integrinβ1/GAPDH的积分光密度比值,推算integrinα2、integrinα5、integrinβ1基因的相对表达水平。结果与正常重力组比较,模拟失重组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显下降(P<0.05);与模拟失重组比较,模拟失重+IGF-1组的integrinα2、integrinα5、integrinβ1的mRNA表达明显升高,且呈明显剂量依赖性(P<0.05)。结论在模拟失重环境下,IGF-1能增加成骨细胞整合素亚单位表达。     

两种不同皮肤保护剂在预防ICU失禁相关性皮炎中的应用

目的比较两种皮肤保护剂对预防ICU病人失禁相关性皮炎(IAD)的效果。方法将入住ICU的60例大小便失禁病人按随机数字表法分为护臀膏组和皮肤保护膜组各30例，2组病人均采用结构化护理，护臀膏组在常规皮肤保护的基础上涂抹婴儿护臀膏，皮肤保护膜组常规皮肤保护的基础上涂抹造口粉和皮肤保护膜，比较干预1周后2组IAD的发生率、发生时间、严重程度、耗材成本。结果护臀膏组IAD发生率为13.33%，严重程度评分(10.75±8.23)分，皮肤保护膜组分别为23.33%、(9.08±6.47)分，差异均无统计学意义(P>0.05)；护臀膏组IAD发生时间(3.50±1.12)d，迟于皮肤保护膜组的(2.86±1.25)d(P < 0.05)；护臀膏组使用耗材成本为(38.78±9.45)元，低于皮肤保护膜组的(52.25±27.52)元(P < 0.05)。结论ICU病人IAD结构化护理方案中, 使用婴儿护臀膏皮肤保护剂与使用造口粉联合皮肤保护膜在IAD发生率与IAD严重程度方面效果相似，但IAD发生时间与耗材成本上婴儿护臀膏皮肤保护剂优于造口粉联合皮肤保护膜。     

封闭负压引流对创面组织氧含量的影响

目的:探讨封闭负压引流(VSD)下创面的组织氧含量变化,为VSD在特殊创面中的应用提供一定的理论支持.方法:24例皮肤软组织缺损的患者:其中有12例采用VSD治疗(VSD组),其余12例采用常规换药治疗(对照组).治疗1周后,分别对这两组24例病例测定创面局部组织液氧分压(PiO2)、乳酸脱氢酶(LDH)及琥珀酸脱氢酶...     

硫酸软骨素对液氮深低温保存的同种异体主动脉瓣的保护作用

目的 探讨硫酸软骨素(CS)对液氮深低温冷冻保存的同种异体主动脉瓣的保护作用及机制.方法 将48只兔主动脉瓣随机分成6组,每组8只瓣膜.其中新鲜组为新鲜主动脉瓣;对照组抗冻剂为二甲基亚砜(DMSO),其体积百分比浓度为10%;实验Ⅰ～Ⅳ组内另含CS,其体积百分比浓度分别为2.5%、5%、7.5%、10%.采用阶段降温法进行深低温保存对照组和实验组主动脉瓣,复温后检测内皮细胞存活率,并行光镜及电镜检查.结果 抗冻剂中含7.5% CS时,保存的瓣膜内皮细胞存活率最高,光镜及电镜下细胞的结构改变最轻,最接近新鲜主动脉瓣.结论 CS能改善液氮深低温中保存的主动脉瓣内皮细胞活性,且这种保护作用与CS的体积百分比浓度有关,浓度为7.5%时效果最佳.     

哮喘模型小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9、TIMP-1与气道重塑相关性研究

目的研究哮喘模型小鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与哮喘气道重塑的相关性及其机制。方法 40只清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为激发前组、第2周组、第4周组和第8周组,各10只。卵蛋白超声雾化激发哮喘。观察四组小鼠气道形态学参数,Western blot检测小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9和TIMP-1分子的蛋白质水平,并探讨其相关性。结果哮喘小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9、TIMP-1激发前组分别为(174.17±46.44)pg/mL、(3128.64±126.73)pg/mL、(1428.45±354.39)pg/mL;第2周组分别为(229.00±53.09)pg/mL、(8868.47±3544.42)pg/mL、(4783.29±1058.25)pg/mL;第4周组分别为(318.26±84.53)pg/mL、(6328.68±2874.37)pg/mL、(5328.26±2054.37)pg/mL;第8周组分别为(419.37±107.53)pg/mL、(4383.37±2498.53)pg/mL、(6542.38±3024.53)pg/mL;不同激发时间小鼠肺组织TGF-β1及MMP-9、TIMP-1差异有统计学意义,激发第8周显著高于激发前组和激发后第2、4周组(F=124.42、253.34、174.83,P均0.01)。不同激发时间小鼠肺组织上皮黏膜层面积/支气管基底膜周径、平滑肌面积/支气管基底膜周径、气管内壁面积/支气管基底膜周径激发前组分别为(10.10±2.77)×10~(-3)μm、(7.30±1.89)×10~(-3)μm、(15.10±2.81)×10~(-3)μm;第2周组分别为(24.90±3.35)×10~(-3)μm、(17.00±2.58)×10~(-3)μm、(28.20±5.18)×10~(-3)μm;第4周组分别为(37.00±4.88)×10~(-3)μm、(31.60±4.20)×10~(-3)μm、(37.10±8.82)×10~(-3)μm;第8周组分别为(45.00±5.88)×10~(-3)μm、(48.60±5.20)×10~(-3)μm、(53.10±11.82)×10~(-3)μm;不同激发时间小鼠肺组织气道形态学参数比较,差异均有统计学意义,激发第8周显著高于激发前组和激发后第2、4周组(F=6.25、4.31、11.09,P均0.01)。哮喘小鼠气道形态学参数(上皮黏膜层面积/支气管基底膜周径、平滑肌面积/支气管基底膜周径、气管内壁面积/支气管基底膜周径)与肺组织TGF-β1与MMP-9、TIMP-1水平呈正相关(r=0.95、0.94、0.93;r=0.97、0.96、0.99;r=0.94、0.92、0.96,P均0.01)。结论哮喘小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9和TIMP-1可能参与了哮喘的病理生理过程,并参与了哮喘气道重塑。     

二甲基亚砜/羟乙基淀粉联合冷冻保护外周造血干细胞20例

目的探讨二甲基亚砜/羟乙基淀粉联合冷冻保护外周造血干细胞的效果。方法应用二甲基亚砜联合羟乙基淀粉作为冷冻保护剂,-80℃直接降温并贮存外周血干细胞,10~14d后解冻,并植入预处理后患者自体内。结果单个核细胞数回收率0.883±0.022。台盼蓝拒染率0.8985±0.0146。结论二甲基亚砜联合羟乙基淀粉作为冷冻保护剂,非程控方式-80℃直接降温并冻存外周血干细胞,有较高的干细胞回收率及存活率。     

低温保存皮肤组织中纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)在不同温度保存皮肤组织中的分布及表达，探讨其与皮肤冷冻保存的关系．方法：用FN，LN抗体对新鲜皮肤以及4℃，-20℃，-80℃或-196℃保存的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定并比较它们在表皮组织中的含量，并通过HE染色比较观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮肤组相比，-196℃，H抗冻液中皮肤组织结构保存较好，FN，LN含量变化不明显，而4℃，-20℃，-80℃保存皮肤的组织结构均有明显破坏，FN，LN含量亦明显下降。结论：皮肤低温冷冻保存时细胞外基质中FN，LN发生丢失。     

海藻糖在医学领域中的应用研究进展

海藻糖(Trehalose)是生物组织的非特异性天然保护剂,属于非渗透性低温保护剂,可使动植物和微生物等有机体在冷冻、高温、脱水、高渗透压及有毒试剂等环境中仍然能保持生命活力[1].