流式细胞术检测急性髓细胞白血病微小残留病的临床价值

目的探讨流式细胞术检测急性髓细胞白血病微小残留病的临床价值。方法采用FCM检测66例初治AML患者诱导化疗前后各亚型髓系抗原阳性表达情况。结果初诊时66例AML患者髓系抗原阳性总表达率为(19.98±11.98)%,M2亚型和髓系抗原MPO阳性表达率最高;诱导化疗结束时46例缓解、20例未缓解。髓系抗原缓解组阳性总表达率为(10.50±10.49)%,未缓解组阳性总表达率为(16.80±17.39)%,2组MPO阳性表达率最高。缓解组与未缓解组患者髓系抗原总阳性表达率均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);缓解组患者髓系抗原总阳性表达率显著低于未缓解组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论应用9种髓系抗体检测AML患者MRD临床效果满意,能够为指导化疗方案调整和疗效评价提供可靠依据。     

流式细胞术检测急性白血病中枢神经系统微量残留病变

中枢神经系统白血病(central nervous system leukemia,CNSL)是导致白血病复发的主要原因之一,传统的脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)涂片找原始细胞是确诊CNSL并及时选用相应治疗方案的最重要依据[1,2],但因受主观因素等影响,该方法存在一定局限性.本实验利用流式细胞术(flow cytometry,FCM)及单克隆抗体对急性白血病脑脊液微量残留细胞的检出和临床意义进行了研究.     

应用流式细胞术检测急性淋巴细胞白血病微小残留病的临床意义

目的探讨应用流式细胞术（FCM）检测急性淋巴细胞白血病（ALL）微小残留病（MRD）的临床意义。方法初发ALL患者48例按疾病危险度分为低危组、中危组及高危组。于诱导缓解第33天、3个月、6个月时检测骨髓MRD,进行长期随访。结果诱导缓解第33天和3个月时低危组、中危组及高危组患者的MRD阳性率差异有统计学意义（P=0．0199、P=0．0007）。MRD阴性患者第33天时的复发率为4．0％（1／25）,3个月时为11．4％（4／35）,两者差异有统计学意义（P=0．0023）。复发前每例患者均可观察到MRD水平呈逐渐升高的趋势。结论MRD水平与ALL的预后及复发关系密切,在治疗及随访过程中密切监测MRD水平可以为临床更加准确地评估早期治疗反应、调整危险度分组及预测复发提供依据。     

急性髓细胞性白血病患者微小残留病流式细胞术检测的临床意义

 目的　探讨流式细胞术检测急性髓细胞性白血病（AML）微小残留病（MRD）的临床意义。方法　对21例生存24～128个月成年人AML完全缓解（CR）患者,采用双色直接免疫荧光标记及多参数流式细胞术每隔3～12个月检测一次外周血中MRD,同时检测骨髓细胞形态的变化。结果　21例动态检测MRD水平>10-4患者复发率为80.0 %,MRD水平≤10-4患者复发率为18.1 %。21例随访24 ~ 128个月,复发10例,其中有3例先髓外复发,未复发有11例。10例MRD水平>10-4患者24个月EFS率为30.0 %;11例MRD水平≤10-4患者为90.9 %。MRD水平≤10-4患者中复发的2例,分别在MRD水平升为10-2后3个月、7个月时出现骨髓复发。结论　MRD水平为10-3或以上的患者预后较差,易复发。MRD水平长时间波动在10-3～10-4间,即使骨髓无复发,也要警惕髓外复发。MRD水平≤10-4者生存期长,预后较好。但在生存期超过5年停化疗后,仍应动态监测MRD水平,尤其当MRD水平升至10-2水平时应警防复发,甚至考虑采用干预治疗。     

急性白血病微小残留病检测的临床意义

 目的　探讨应用流式细胞术（FCM）检测急性白血病（AL）患者骨髓微小残留病（MRD）对预测复发及指导治疗的临床意义。方法　选择2005年7月至2008年6月于该院住院经MIC分型确诊的初治获完全缓解（CR）的43例AL患者,应用FCM和单克隆抗体直接荧光标记法检测骨髓MRD,并动态随访。结果　对初次受检MRD阳性患者动态观察骨髓形态学,平均1～3个月复查骨髓1次,所有复发患者均在MRD阳性后4～6个月出现形态学复发。MRD随访结果显示：43例AL患者CR时MRD阴性26例,6例复发,持续阴性20例。CR时MRD阳性17例,10例复发（58.82 %）。4例经加强化疗后MRD转阴达1年以上。43例患者CR时按MRD值水平分为三组,并观察1年复发率。＜1×10-4组和5×10-3～1×10-4组1年复发率差异无统计学意义（P＝0.37）,5×10-3～1×10-4组和＞5×10-3组1年复发率差异有统计学意义（P＝0.02）。结论　应用FCM动态检测MRD对及时预测复发、指导治疗有重要的临床意义。     

流式细胞术监测儿童急性B-淋巴细胞白血病微小残留病的临床价值

目的:探讨流式细胞术检测微小残留病(MRD)对判断儿童B淋巴细胞白血病(B-ALL)的预后价值.方法:回顾性分析2011年7月至2014年6月在我院初诊的196例B-ALL患儿,通过流式细胞术监测以上患儿诱导化疗第15天、第33天、第12周的骨髓MRD.结果:MRD阳性组中中危和高危分型的比例明显高于标危组,差异有统计学意义(P＜0.05);分析各时间点MRD,显示MRD水平越高,患儿的复发率越高,3年EFS越低.其中第15天MRD≥10-2组、第33天MRD≥10-4、第12周MRD≥10-3组的患儿预后不佳;经多因素分析显示,第12周MRD≥10-3为独立的预后不良因素.结论:流式细胞术检测MRD对儿童B-ALL具有重要的临床预后判断意义;需动态监测MRD,第15天MRD≥10-2、第33天MRD≥10-4、第12周MRD≥10-3的患儿预后不佳,需调整危险分层及化疗强度;第12周MRD≥10.为独立的预后不良因素.     

多参数流式细胞术对急性白血病治疗效果监测的前瞻性研究

 【摘要】　目的　探讨多参数流式细胞术（MPFC）在急性白血病患者治疗效果监测中的价值。方法　经诱导治疗达完全缓解的急性白血病住院患者,均于化疗前同时行骨髓细胞形态学检查和MPFC检查。对结果进行统计学分析,对MPFC检测阳性患者进行动态监测,观察其在随访期内是否形态学亦提示复发,及两者时间间隔。结果　共30例患者入组,提供122份标本,61份行骨髓细胞形态学检查,61份行MPFC检查。骨髓细胞形态学检查提示阳性的标本8份,阳性率13.11 %,MPFC检查提示阳性的标本18份,阳性率29.51 %。经配对χ2检验,两者差异有统计学意义（χ2＝4.33,P＜0.05）。MPFC检查提示阳性的18份标本来自10例患者,在随访期内（中位随访期6个月）,6例患者分别于1～4个月内骨髓细胞形态学检查亦提示复发。1例患者失访,2例病程小于6个月的患者复查后转为阴性,1例患者死亡。结论　MPFC检查较骨髓细胞形态学检查更具敏感性,能够更客观地评估急性白血病的治疗效果,尽早发现复发。     

流式细胞术检测急性淋巴细胞白血病B细胞系患儿骨髓微小残留病的临床意义

 【摘要】目的 探讨流式细胞术（FCM）检测儿童急性淋巴细胞白血病ALL-B细胞系患儿骨髓微小残留病（MRD）的临床意义。方法 以多种四色荧光标记抗原采用FCM检测ALL-B残留肿瘤细胞对52例ALL-B初诊患儿骨髓细胞进行有效免疫表型组合,并用这些免疫表型组合对ALL-B患儿不同治疗时期的骨髓标本进行MRD监测。结果 52例ALL-B患儿诱导化疗33天,3个月,6个月分别行BM 及MRD监测。并进行长期随访。按照疾病危险度分组,标危组(SR)21例,中危组(IR)23例,高危组(HR)8例,化疗6个月时,MRD阳性数：SR组：21例阳性数4例(19%),IR组：23例阳性数8例(34%),HR组：8例阳性数5例（62%),B-All 52例9例复发,其中SR 21例 2例复发,IR 23例 4例复发 HR 8例 3例复发。结论MRD水平与疾病复发之间存在一定的关系,是具有重要指导意义的疾病预后因素。应用FCM技术对儿童B-ALL进行动态定时监测MRD,对实现白血病治疗个体化早期预测复发,选择合适的治疗方法如不同强度的化疗及骨髓移植具有重要的临床意义。 【关键词】:急性; B-ALL, 流式细胞仪,肿瘤 残留; 复发; 儿童     

PML-RARα融合基因监测急性早幼粒细胞白血病微小残留病

 目的　观察PML-RARα融合基因在监测急性早幼粒细胞白血病（APL）微小残留病（MRD）中的临床意义。方法　诱导缓解及巩固维持治疗期间,采用筑巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测患者骨髓细胞中PML-RARα融合基因的动态变化、PML-RARα融合基因。结果　长期随访的18例完全缓解（CR）患者,2例出现分子学复发。其中1例发生于CR1后4个月,诱导缓解治疗后获得CR2,CR2后2个月再次出现分子学与血液学的复发,诱导治疗1个疗程获得CR3;1例发生于CR1后74个月,诱导缓解治疗后获得CR2,随访结束时生存期已达106个月。结论　在CR期定期监测PML-RARα融合基因,可早期发现分子学复发,及时干预治疗可避免血液学复发。     

流式细胞术免疫分型诊断急性早幼粒细胞白血病的临床意义

急性早幼粒细胞白血病（APL）是高死亡率、高风险的恶性血液肿瘤,尽管以联合使用全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（ATO）为主的治疗方法问世后,其生存率显著提高,但治疗中仍存在许多并发症,并发生早期死亡。所以尽早对APL进行诊断治疗并对预后作出判断尤为重要。随着流式技术的展开,流式免疫表型在APL诊断中已被广泛应用。本篇文章通过对既往文献研究分析,发现CD33+CD13+MPO+CD34-HLA-DR-CD11b-这种免疫表型模式对于诊断APL具有一定意义。CD34表达较少,但与白细胞增多症、bcr3同种型、M3v以及CD2的表达相关,可作为判断高风险APL的一个依据。CD2与CD34共表达的患者具有较高的早期死亡率以及较低的完全缓率,但对于CD2单独表达的相关研究较少,还不能定论。CD56与CD34、HLA-DR、CD15、CD117、T细胞相关抗原的表达以及bcr3-PML/RARα 具有相关性,存在较低的完全缓解率以及较高的中枢神经系统白血病复发率,并且在多变量分析中被认为是唯一与复发相关的预后因素,且与预后的关系独立于高白细胞计数。虽有文献报道CD123、CD117可作为预判APL预后的参考,但被认为证据上不充足,有待进一步考究。     

Multidimensional flow cytometry for detection of minimal residual disease in acute myeloid leukemia

The term minimal residual disease (MRD) describes the situation in which, after chemotherapy for acute leukemia (AL), a morphologically normal bone marrow (BM) can still harbor a relevant amount of residual malignant cells. Several techniques are now amenable to investigate MRD, and all together they have designated a new era in which a re-definition of the current criteria of complete remission (CR) is required. Depending upon the measured level of MRD we can distinguish a variety of clinical situations ranging from a potentially cured disease to short-term remission. In the context of this spectrum of conditions there would be room for different therapeutic strategies ranging from no further therapy to pre-emptive therapy to treat early relapses (immunologic and/or molecular relapses). This review will focus on the state of art of MRD detection in acute myeloid leukemia (AML) using multidimensional flow cytometry (MFC), and will cover the laboratory and clinical aspects of this approach.     

双表型急性白血病流式细胞术免疫分型检测结果

 目的　应用流式细胞术（FCM）检测双表型急性白血病（BAL）的免疫表型。方法　采用四色FCM检测23例BAL患者的免疫表型。结果　23例BAL患者中有10例（43.4 %）表达cCD3,16例（69.6 %）表达cCD79a,20例（87.0 %）表达cMPO,14例（60.9 %）表达TdT,19例（82.6 %）表达CD34,20例（87.0 %）表达CD117,同时表达髓系和B系抗原者13例（56.5 %）,均共同表达cCD79a和cMPO;同时表达髓系和T 系抗原者7 例（30.4 %）,均共同表达cCD3和cMPO;同时表达T系和B系抗原者3例（13.04 %）,均共同表达cCD3和cCD79a。结论　cCD3、cCD79a、cMPO为系列特异性抗原标志,对诊断及鉴别BAL具有重要意义,FCM是目前诊断BAL特异可靠的方法,在临床白血病治疗和预后方面有重要的指导意义。     

Use of five-color staining improves the sensitivity of multiparameter flow cytomeric assessment of minimal residual disease in patients with acute myeloid leukemia

Application of five-color staining may improve quantification of minimal residual disease by multiparameter flow cytometry in acute myeloid leukemia. We analysed bone marrow samples in 139 cases using a comprehensive antibody panel with five-color combinations. Sensitivity was estimated by quantification of leukemia-associated aberrant immunophenotype (LAIP)-positive cells for each LAIP in 18 normal bone marrow (BM) samples. The logarithmic difference (LD) in LAIP-positive cells between leukemic and normal BM amounted to a median of 3.32 (range 1.76 - 4.89). Skipping one color resulted in an increase of LAIP-positive normal bone marrow cells while percentages of LAIP-positive leukemic cells changed only marginally (median gain in LD = 0.54; maximum gain = 3.30). Because regenerating bone marrow has not been used as control data are most important to post-therapy checkpoints. In 32 patients with clinical follow-up, a LD higher than the median (3.25) at the follow-up checkpoint corresponded to a longer event-free survival. These data suggest that the application of five-color staining significantly improves the sensitivity and accuracy of the method.     

Prognostic value of multicenter flow cytometry harmonized assessment of minimal residual disease in acute myeloblastic leukemia

The assessment of minimal residual disease (MRD) in acute myeloblastic leukemia is of growing interest as a prognostic marker of patients' outcome. Multiparameter flow cytometry (MFC), tracking leukemia‐associated immunophenotypic patterns, has been shown in several studies to be a useful tool to investigate MRD. Here, we report a multicenter prospective study which allowed to define a harmonized analysis strategy, as well as the efficacy of MFC MRD to predict outcome. This study included 276 patients, in 10 different MFC centers, of whom 268 had at least 1 MRD check point. The combination of a CD45, CD34, and CD33 backbone, with the addition of CD117, CD13, CD7, and CD15 in 2 five‐color tubes allowed to define each patient's multiparameter immunophenotypic characteristics at diagnosis, according to a Boolean combination of gates. The same individual diagnosis gating strategy was then applied at each MRD time point for each patient. MRD levels were stratified according to log by log thresholds, from 5 × 10^?2 (the classical morphological threshold to define remission) down to <5 × 10^?5. MRD was found to be constantly negative (<5 × 10^?5) for 148 patients. Survival analyses significantly associated MRD negativity with a good prognosis and any positive value with poorer outcome. All P values were <0.0001 both for disease‐free and overall survival at the earliest time point (post‐induction, MRD1) as well as when considering all time points together. Finally, MRD levels were independent of cytogenetics and allowed in fact to further stratify all cytogenetics risk groups. In summary, this multicenter study demonstrates that a simple combination of immunophenotypic markers successfully allows for the detection of MRD in acute myeloblastic leukemia patients, with a strong correlation to outcome.     

急性B淋巴细胞白血病微小残留病的监测

  微小残留病（MRD）是白血病复发的根源,动态监测MRD是目前国内外的研究热点,也是难点。B淋巴细胞白血病MRD的监测有其自身的特点：正常增生骨髓中会出现数量较多的B系前体细胞,较容易误认为白血病细胞残留;也没有可以简便快捷检测的特异基因改变。现对流式细胞术的抗体组合及监测时机选择、聚合酶链反应检测的基因进行了归纳总结,作为B淋巴细胞白血病MRD监测的参考。     

低剂量氧化砷治疗早幼粒细胞白血病的实验研究

背景与目的：低剂量三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）是治疗急性早幼粒细胞性白血病（APL）的有效手段之一,它不仅对初发APL病人有效,而且对全反式维甲酸（ATRA）巳耐受的复发APL病人可获得完全缓解。然而,目前其诱导APL缓解的机制尚不清楚。为此,本研究试图探低剂量As2O3治疗APL的可能机制。方法：以APL细胞株NB4和来源于APL患者骨髓的原代细胞为模型。通过观察细胞形态、对四氮唑蓝的还原能力和细胞表面分化抗原的变化来鉴定细胞分化;并应用免疫荧光和Western blot分析细胞内PML-RARα融合蛋白的变化。结果：0.25μmol/L AS2O3联合环腺苷酸（cAMP）拟似物8-对氯苯硫基环腺苷酸（8-CPT-CAMP）可诱导NB4细胞和原代细胞分化,而且该效应能被蛋白激酶PKA的抑制剂H89抑制。进一步研究还显示8-CPT-CAMP可以促进AS2O3介导的PML-RARα融合蛋白降解。结论：cAMP可增强AS2O3对APL细胞的分化诱导效应。     

三氧化二砷治疗初治急性早幼粒细胞白血病疗效分析

 目的　分析以三氧化二砷（ATO）为基础的诱导和维持治疗方案治疗初发急性早幼粒细胞白血病（APL）的长期疗效。方法　回顾性分析62例初诊成年APL患者诱导缓解治疗和缓解后巩固维持治疗经过,并作5、7年随访分析。结果　诱导治疗阶段,ATO+全反式维甲酸（ATRA）双药联合化疗组与ATRA联合化疗组完全缓解（CR）率差异无统计学意义,但前者达到CR时间明显缩短。诱导治疗后PML-RARα融合基因转阴率两组分别为86.2 %、56.3 %,差异有统计学意义（P＜0.05）。巩固维持治疗阶段,ATO序贯维持组和化疗序贯维持组5年总生存（OS）率分别为（94.4±5.4）%和（45.5±10.2）%,7年OS率分别为（52.5±23.7）%和（27.3±9.3）%;两组5年无病生存（DFS）率分别为（94.7±5.5）%和（41.3±10.1）%,7年DFS率分别为（52.6±23.7）%和（27.5±9.4）%,两组差异有统计学意义（P＜0.05）。并且,ATO序贯维持组复发率（14.7 %）低于化疗序贯维持组（37.0 %）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　以ATO联合ATRA、化疗的诱导化疗方案可缩短诱导化疗时间,提高PML-RARα融合基因转阴率,而且,包含ATO的序贯维持治疗明显改善APL患者的长期生存,减少复发,安全性高,患者耐受性好。