建立定性免疫测定中假阳性监测的室内质控方法

目的 建立利用实验室日常检测数据进行定性免疫测定假阳性监测的室内质控方法。方法 测定数据为正态分布，采用半Levey—Jennings质控图法，即以实验室日常不少于20次检测的阳数率为基础，计算阳性率的均值（x^-）和标准差（s），绘制质控图，以1,2s为失控规则。如为非正态分布，则采用直接概率计算法。结果 半Levey—Jennings质控图法和直接概率计算法均适用于定性免疫测定假阳性统计室内质控。结论 为临床免疫常规检测提供了具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。     

核酸扩增技术检测血液病毒方法的建立及质量保证

目前 ,我国血站的血液病毒筛查都是使用免疫学方法 ,应用不同生产厂家的 ELISA试剂盒进行血液的初、复检 ,此筛查方法因检测试剂的敏感性、病毒基因的突变、病毒感染的窗口期等存在一定程度的漏检 ,对安全输血构成了极大危险。笔者采用核酸扩增技术 ( NAT)对无偿献血者血液进行了检测 ,旨在提高血液筛查的特异性和敏感性 ,通过扩增反应过程的质控 ,提高检测结果的准确性。材料与方法1　检测对象及标本处理　来自 2 0 0 0年 7～ 8月份无偿献者 ,血液经 HBs Ag、抗 - HCV、抗 - HIV、梅毒检测后阴性且 AL T≤ 2 5 U的血标本 75 0份 ,…     

核酸扩增检测技术的研究进展

核酸扩增技术在病原体诊断与分子生物学研究领域占有重要的地位，随着分子生物学的发展与生物物理学在该领域的广泛应用，新的核酸扩增技术不断涌现，本文就这些新技术的应用以及扩增产物的检测方法简要综述如下。     

酶联免疫吸附试验检测假阳性结果分析

ELISA法对IgG IgM都有很好的检测能力，因其灵敏度高、价格低廉、操作方便、结果客观，在国内广泛应用。但在工作中遇到的最大问题是出现假阳性的问题，而大多数是由弱阳性反应引起的，这给医疗工作带来麻烦，甚至引起医疗纠纷。为避免假阳性结果的出现现将产生假阳性的原因分析如下。     

孕妇性传播疾病检测结果假阳性原因探讨

目的:探讨孕妇在不同孕期丙肝抗体、乙肝表面抗原、梅毒螺旋体抗体、人类免疫缺陷病毒抗体试验假阳性原因,制定日常工作流程.方法:选取2020年9月～2021年11月山东大学齐鲁医院(青岛)查体的各期孕妇1712例(观察组),根据孕周划分为妊娠早期(妊娠12周前)、妊娠中期(妊娠13～27周末)、妊娠后期(妊娠28～41周末...     

恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

建立一种快速，简便的恒温核酸扩增方法。用ＡＭＶ ＲＴａｓｅ，ＲＮａｓｅ Ｈ，Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显在预期位置出现阳性杂交信号。     

核酸扩增检测技术的研究进展

核酸扩增技术在病原体诊断与分子生物学研究领域占有重要的地位。随着分子生物学的发展与生物物理学在该领域的广泛应用 ,新的核酸扩增技术不断涌现。本文就这些新技术的应用以及扩增产物的检测方法简要综述如下     

预防青霉素皮试假阳性结果的护理对策

青霉素问世以来,以其独特的疗效和低廉的价格获得医学界和广大病人的首肯,从而被广泛地应用在各种疾病的治疗上。但青霉素使用前必须先做皮试．皮试阴性者才可使用。它最主要的不良反应是过敏性休克,如抢救不及时,即可危及生命。在临床工作中,我们发现皮试阳性率增高趋势日益明显,使相当一部分病人失去了使用青霉素的机会,造成病人生理、经济上双重损害。本文重点探讨青霉素皮试假阳性结果的因素及采取的护理对策。     

四维杂交液检测HBVDNA结果中出现的假阳性信号

基层医院实验室通常是购买成品的PCR试剂盒来检测HBVDNA含量，成品的PCR试剂盒往往是按照纯净的单一序列DNA经优化实验得到的，其特异性是由两段引物和一个探针（Taqman定量）共三段特异核酸序列保证的，而临床样本中成分非常复杂，由其提取的总核酸包罗各种序列的DNA或RNA，很容易出现非特异性假阳性信号，     

血液感染性病毒核酸检测室内质量控制方法的研究

目的 探讨合适血液感染性病毒核酸检测（nucleic acid testing, NAT）的室内质量控制（internal quality control,IQC）方法。方法 使用北京康彻斯坦质控品（常规质控品）和澳大利亚国立血清学参比实验室（National SerologicalReference Laboratory, NRL）QConnect 质控品（评估质控品）进行血液感染性病毒核酸平行检测。收集2 种质控品的检测结果,在常规质控方法判断为在控的检测批次中,再分别采用Westgard 多规则质控方法和NRL 质控限质控方法进行判断,观察2 种质控方法假失控的次数和比例。结果 在常规质控方法判断在控的实验批次中,再次使用Westgard 多规则质控方法分析,HBV DNA,HCV RNA 和HIV RNA 三项仍各有0 ～ 2.46%（罗氏核酸混样检测）和0.73% ～ 2.55%（盖立复核酸单人份检测）比例的假失控。使用NRL QConnect 质控品在常规质控方法判断在控的盖立复检测批次中,使用NRL 质控限进行室内质控,未发现失控情况。使用NRL QConnect 质控品,在常规质控方法判断在控的罗氏检测批次中,使用NRL 质控限的计算方法,计算该实验室的质控限,发现在HBV DNA 和HIV RNA 检测中各有1 次失控（0.30%）。结论 Westgard 多规则质控方法不适合用于目前血站血液感染性病毒核酸检测的室内质控。该文浓度的NRL QConnect质控品和NRL 质控限适合用于国内盖立复核酸单人份检测方法的室内质控,但该浓度不适合用于国内罗氏核酸混样检测。该实验室在用的室内质控方法与NRL 质控限的室内质控方法,均适用于国内罗氏核酸混样检测和盖立复核酸单人份检测的室内质控。     

全自动血液核酸筛查及阳性献血员追踪的研究

目的 建立献血者全自动核酸检测方法，探讨在我国血液筛查中引进全自动核酸筛查方法的可行性。方法 在酶联免疫吸附实验（ELISA）筛查血液基础上，选用全自动汇集仪进行血样汇集（24人份），在全自动核酸提取仪上提取样本核酸，应用聚合酶链反应（PCR），在COBAS AMPLICOR进行扩增和检测结果，用国际标准核酸质控品考评检出限量，对阳性献血者追踪检测。结果经考评及常规应用表明，全自动汇集、全自动核酸提取及扩增和检测95％的检出限量HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA分别为38．9、17．4IU／ml和20．6拷贝／ml，95％的可信限分别为[21，323]、[10．5，342]和[12，300]。通过对16512个样本共688汇集池分析，HBVDNA阳性8例，阳性率为0．048％，其中7例为Anti-HBc阳性，其余1例亦转换为阳性。HCV RNA和HIV-1 RNA未检出阳性，6例HBV DNA阳性样本追踪发现，3例发生了血清转换现象。结论本实验结果认为全自动血样汇集，全自动核酸提取扩增和检测方法可应用于血液的筛查工作。     

Commercial nucleic acid amplification tests in tuberculous meningitis—a meta-analysis

Although nucleic acid amplification tests (NAATs) promise a rapid, definitive diagnosis of tuberculous meningitis, the performance of first-generation NAATs was suboptimal and variable. We conducted a meta-analysis of studies published between 2003 and 2013, using the Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies-2 (QUADAS-2) tool to evaluate methodological quality. The diagnostic accuracy of newer commercial NAATs was assessed. Pooled estimates of diagnostic accuracy for commercial NAATs measured against a cerebrospinal fluid Mycobacterium tuberculosis culture-positive gold standard were sensitivity 0.64, specificity 0.98, and diagnostic odds ratio 64.0. Heterogeneity was limited; P value = 0.147 and I² = 33.85%. The Xpert MTB/RIF® test was evaluated in 1 retrospective study and 4 prospective studies, with pooled sensitivity 0.70 and specificity 0.97. The QUADAS-2 tool revealed low risk of bias, as well as low concerns regarding applicability. Heterogeneity was pronounced among studies of in-house tests. Commercial NAATs proved to be highly specific with greatly reduced heterogeneity compared to in-house tests. Sub-optimal sensitivity remains a limitation.     

A study of quality assessment in SARS-CoV-2 pathogen nucleic acid amplification tests performance; from the results of external quality assessment survey of clinical laboratories in the Tokyo Metropolitan Government external quality assessment program in 2020

IntroductionThe Tokyo Metropolitan Government (TMG) conducted an external quality assessment (EQA) survey of pathogen nucleic acid amplification tests (NAATs) as a TMG EQA program for SARS-CoV-2 for clinical laboratories in Tokyo.MethodsWe diluted and prepared a standard product manufactured by Company A to about 2,500 copies/mL to make a positive control and distribute it with a negative control. The participants reported the use of the NAATs methods for SARS-CoV-2, the name of the real-time RT-PCR kit, the name of the detection device, the target gene(s), nucleic acid extraction kit, Threshold Cycle value in the case of RT-PCR and the Threshold time value and Differential calculation value in the case of Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) method.ResultsAs a result, 17 laboratories using fully automated equipment and 34 laboratories using the RT-PCR method reported generally appropriate results in this EQA survey. On the other hand, among the laboratories that adopted the LAMP method, there were a plurality of laboratories that judged positive samples to be negative.ConclusionThe false negative result is considered to be due to the fact that the amount of virus genome contained in the quality control reagent used this time was below the detection limit of the LAMP method combined with the rapid extraction reagent for influenza virus. On the other hand, false positive results are considered to be due to the non-specific reaction of the NAATs. The EQA program must be continued for the proper implementation of the pathogen NAATs.     

恒温扩增实时荧光检测技术在肺结核诊断中的临床价值

目的 评估RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT)在临床痰液标本结核分枝杆菌检测中的价值.方法 对2011年9至12月上海市肺科医院230例临床确诊肺结核患者和78例其他呼吸系统疾病患者的痰液分别用SAT法、BD960培养法、罗氏培养法和集菌涂片法同时进行检测.SAT法与BD960培养法结果不符标本,再用结核分枝杆菌核酸扩增荧光体外检测试剂盒(PCR-TB)进行检测,同时对BD960培养阳性菌株和SAT扩增产物进行扩增及测序,对菌种进行鉴定.采用x2检验比较SAT法与上述3种方法对结核病患者的阳性检出率.结果 以BD960培养法作为金标准(剔除BD960培养法中有7份污染菌),则SAT方法的敏感度为90.5％( 95/105),特异度为84.2％( 165/196),阳性预测值为75.4％ (95/126),阴性预测值为94.3％( 165/175).SAT法与BD960培养法结果符合率为86.4％( 260/301).223份临床确诊的肺结核患者痰标本SAT法、BD960培养法、罗氏培养法和涂片法的阳性检出率分别为56.5％( 126/223)、45.7％( 102/223)、41.7％( 93/223)和37.2％( 83/223),SAT法显著高于其他3种方法,差异有统计学意义(x2=4.087,P＜0.05).结论 SAT技术用于结核分枝杆菌实验室诊断具有特异度高、敏感度好,操作简便、快速,污染率低的特点,有望成为实验室诊断的新方法.     

Investigation of an algorithm for anti HCV EIA reactivity in blood donor screening in Turkey in the absence of nucleic acid amplification screening

Purpose

In this study we aimed to propose an algorithm for initial anti HCV EIA reactive blood donations in Turkey where nucleic acid amplification tests are not yet obligatory for donor screening.

人乳头瘤病毒16和18型核酸检测用质控品制备及其应用

目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均匀性和稳定性进行评价,然后将样本盘发送至参评实验室,对回报结果进行分析评价。结果均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好,稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高,低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目,26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目,不同检测方法的结果间没有显著差异,样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。结论制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好,可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好,个别实验室检测能力尚需提高。     

血站核酸检测实验室HBV DNA项目室内质量控制方法探讨

目的 探讨血站核酸检测实验室乙型肝炎病毒(HBV)DNA项目室内质量控制(IQC)方法.方法 以HBV DNA阳性质控品、试剂盒阳性对照为反应性,试剂盒阴性对照为阴性,且内标阳性为实验在控.根据3个月的检测数据,分别计算阳性质控品循环域值(Ct)、阳性对照Ct值、内标Ct均值、内标Ct值标准差的均值和标准差,绘制Lev...