艾拉莫德对干燥综合征小鼠颌下腺炎症及NF-κB信号通路的影响

目的:探讨艾拉莫德对干燥综合征小鼠颌下腺炎症及NF-κB信号通路的影响,阐明艾拉莫德对干燥综合征小鼠的可能作用机制.方法:将36只NOD小鼠根据随机数字法分为模型组(M组)、艾拉莫德1组(I1组)、艾拉莫德2组(I2组),12只/组,12只C57BL/6小鼠作为对照组(C组).I1组小鼠每天给予羧甲基纤维素+10 mg...     

罗哌卡因通过 HMGB1 / NF-κB 通路减轻 LPS 诱导的小鼠急性 肺损伤

目的 探讨罗哌卡因 ( ropivacaine, Rop) 对脂多糖 ( lipopolysaccharide, LPS) 诱导的小鼠急性 肺损伤 (acute lung injury, ALI) 的作用及其机制。 方法 气管内滴注 LPS 诱导肺损伤小鼠模型, 并将小鼠 随机分为 6 组: 对照组、 LPS 组、 罗哌卡因 0. 25、 0. 5、 1 μmol / L 组和右美托咪定 (dexmedetomidine, Dex) 100 μg / kg 组。 Hematoxylin-eosin (H&E) 染色评估肺组织的组织病理学变化; ELISA 法测定肺组织中髓过 氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO)、 丙二醛 ( malondialdehyde, MDA)、 超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶 ( glutathione peroxidase, GSH-Px) 的活性; 检测血清中 IL-6、 IL-1β 和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 的表达; Western 印迹检测 HMGB1 / NF-κB 通路相关蛋 白的表达。 结果 与对照组比较, LPS 诱导肺泡外膜增厚、 出血和肺水肿; 肺损伤评分和肺含水量增加; MPO 和 MDA 活性增加, SOD 和 GSH-Px 水平降低; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平升高; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平升高, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 与 LPS 组比较, 罗哌卡因 0. 5、 1 μmol / L 组小鼠肺损伤 程度明显减轻; MPO 和 MDA 活性降低, SOD 和 GSH-Px 水平升高; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平降低; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平降低, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 罗哌卡因通过抑制 HMGB1 / NF-κB 通路, 有效减弱了 LPS 引起的肺组织损伤。     

LPS触发的TLR4对NF-κB和IRF3信号通路的调控差异

目的探讨脂多糖(LPS)触发的Toll样受体4(TLR4)对NF-κB和干扰素调节因子3(IRF3)信号通路的调控差异。方法 LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞,用免疫荧光法检测TLR4及两种转录因子p65及IRF3的定位,用Western blot方法检测转录因子p65和IFR3的磷酸化水平。结果巨噬细胞经LPS刺激30 min内,细胞膜上的TLR4荧光强度增加(P0.01),胞质中TLR4荧光强度显著增加(P0.01),且与早期内体抗原1(early endosome antigen 1,EEA1)共定位;当LPS刺激90和180 min时,胞膜和胞质内的TLR4信号均显著下降(P0.01),与EEA1共定位的信号也明显减少(P0.01)。静息状态下,TLR4的下游信号通路分子p65和IRF3的荧光信号均出现在胞质中;LPS刺激后,两者的荧光信号在细胞核中逐渐增加(P0.05),但p65荧光信号比IRF3增强得更早,且更持久。p65磷酸化的修饰也明显早于IRF3,且持续时间更长。结论 TLR4活化后的定位变化导致其下游IRF3信号通路的传递时间明显延后,且比NF-κB信号通路短暂。     

cAMP-PKA信号通路在CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活化中的作用

目的：探讨cAMP-PKA信号通路对八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapetide，CCK-8）抑制IPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞（pulmonary interstitial macrophages，PIMs）核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）活性的影响。方法：采用SD大鼠，分离培养PIMs。实验分为7组：正常对照组：RPMI-1640培养基中加入与实验组等体积的生理盐水；LPs组：培养基中加入LPS 10mg／L；CCK组：培养基中加入CCK-8S 10^-6mol／L；LPS＋CCK组：培养摹中同时加入LPS 10mg／L和CCK-8S 10^-6moL／L；Fsk组：培养基中加入5μmol／L Fsk；LPS＋Fsk组：培养基中加入LPS 10mg/L和Fsk 5μmoL／L；LPS＋CCK＋H-89组：培养基中加入LPS 10mg／L、CCK-8S10^-6mol／L和H-89 100mmol／L。用EMSA法检测大鼠PIMs中NF-κB活性，Westem blot分析IκB-α和p-IκB-α蛋白水平。     

探讨抑制NF-κB信号通路对TREM2表达的影响

目的通过抑制NF-κB信号通路,探讨其对原代培养小胶质细胞TREM2表达的影响。方法取新生C57BL/6小鼠大脑皮质和海马,进行原代培养,将培养至10 d的混合胶质细胞分离,纯化出小胶质细胞,将其分为空白组和1、2、4、6、8、10μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)组。继续培养24 h后,CCK8法检测小胶质细胞存活率筛选适宜PDTC浓度,Western blotting法检测小胶质细胞TREM2的表达。结果与空白组相比,给予NF-κB抑制剂后,原代培养的小胶质细胞表达TREM2的量显著增加(P0.01)。结论抑制NF-κB信号通路增加小胶质细胞TREM2的表达,进而可能有助于中枢神经系统中炎症的调控。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3对NF-κB信号通路的抑制作用

研究肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(A20)在病毒诱导的NF-κB信号通路中的调控功能.用TNF-α刺激RAW264.7细胞,获得其细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增鼠A20基因,经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后插入pcDNA3.1-myc-His(-).经鉴定,将真核表达质粒pcDNA3.1-A20转染293T细胞....     

NF-κB信号通路在子宫内膜异位症疼痛中作用的研究进展

子宫内膜异位症是育龄期妇女的良性疾病,主要表现为慢性疼痛。子宫内膜异位症的发生与建立阶段可见核转录因子-κB(NF-κB)的活化。体内与体外的研究表明,NF-κB介导的基因转录能促进免疫和炎性反应,调节异位子宫内膜细胞的增殖、凋亡、黏附、侵袭和血管生成,改变外周神经与外周腹腔环境,从而影响疼痛,提示其可能是治疗子宫内膜异位症疼痛的新靶点。     

肌肽对糖尿病肾病大鼠氧化应激及NF-κB信号通路的影响

目的　探讨肌肽对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织的保护作用及其对氧化应激、NF-κB信号通路的影响。 方法　60只SPF级8周龄雄性SD大鼠，随机选取12只为对照组，其余予以高糖高脂饮食+链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型。注射链脲佐菌素3 d后，将符合糖尿病标准大鼠随机分为模型组、肌肽（100、300、900 mg/kg）组。肌肽各组分别灌胃100、300、900 mg/kg肌肽，每日1次。8周后，检测空腹血糖（FBG）、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h尿微量白蛋白（mAlb）。PAS染色法观察大鼠肾形态学变化；试剂盒检测肾组织的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量；免疫组织化学及Western blot检测肾组织P-NF-κB P65蛋白的表达。 结果　 DN大鼠建模成功。与模型组相比，肌肽组肾组织病理损伤明显减轻。肌肽各组大鼠mAlb、FBG、BUN水平下降，呈量-效依赖性关系（P<0.05），而SOD、GSH、GSH-Px的含量逐级升高，同时MDA和P-NF-κB P65含量减少。 结论　肌肽对DN模型大鼠肾组织具有保护作用，其机制可能与抑制氧化应激和NF-κB信号通路异常激活有关。     

NF-κB“decoy”寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞IL-10表达的影响

目的：探讨NF-κB “decoy”寡核苷酸（ODNs）对脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞株J774.1表达IL-10的影响。方法： 通过体外细胞培养技术，观察转染NF-κB“decoy”ODNs对LPS刺激巨噬细胞产生IL-10及其表达的影响。结果： 在LPS刺激的巨噬细胞中转染NF-κB“decoy”ODNs对抗炎介质IL-10的合成表达无影响。结论： NF-κB“decoy”ODNs不抑制抗炎介质IL-10的表达，可能由于NF-κB在IL-10转录机制中不占主导地位。     

槐定碱抑制LPS诱导巨噬细胞株NF-κB表达

 摘 要：目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63mg/L,作用5、30、60、120min,分别获取细胞与培养液。RT - PCR与Western Blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P < 0.01);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P < 0.01)。结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF – α分泌是其抗内毒素作用机制之一。     

TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化的探讨

目的研究TNF-α对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞NF-κB信号转导通路活化的影响。方法原代培养类风湿性关节炎滑膜细胞;应用Western blot检测滑膜细胞p65-NF-κB和ΙκBα蛋白的表达变化;应用免疫荧光技术分析NF-κB核移位的变化。结果 TNF-α刺激不同时间后p65-NF-κB蛋白在滑膜细胞核内表达增加,而在胞浆表达减少,30 min时最明显;同时,免疫荧光显示TNF-α可促使NF-κB向滑膜细胞核内移位;TNF-α刺激20 min后ΙκBα蛋白降解明显增加。结论TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜细胞NF-κB信号通路活化,可能与类风湿关节炎炎症进程有关。     

TRIM蛋白家族调节NF-κB信号通路的研究进展

正核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)作为重要的核转录因子参与调节机体的免疫应答,一旦其调节发生异常将会导致免疫疾病、神经退行性病变、新陈代谢疾病、肿瘤等。磷酸化、泛素化等转录后修饰可调节NF-κB信号通路。E3泛素连接酶在泛素化的过程中起重要作用~([1])。TRIM(Tripartite motif)蛋白是E3泛素连接酶中RING家族成员,由     

NF-κB信号通路基本元件调节机制的研究进展

核因子-kappaB（NF-κB）信号通路广泛参与调节免疫反应、炎症反应、细胞分化与凋亡、肿瘤形成等多种生物学功能。在非激活细胞中,NF-κB转录因子通常与其抑制物结合形成复合物,并在胞浆与胞核间达到平衡,但这种复合物主要存在于胞浆中。当受到胞外信号刺激后,复合物可以在NF—κB信号通路的多个信号转导途径中发生降解,使得抑制物从复合物中解离,释放出的大量活性NF—κB迅速转移入核,从而调控相应靶基因的表达。目前发现的和NF—κB的调节紊乱有关的疾病谱在不断扩大,这也使得对于NF—κB信号通路功能和调节的研究得到了深入发展,对通路中一些基本元件的调节也有了较为充分的了解。     

肺炎支原体感染对BALB/c小鼠TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨肺炎支原体(MP)感染对BALB/c小鼠TLR4/NF-κB信号通路表达的影响。方法BALB/c小鼠80只,随机分成肺炎支原体感染组和对照组,每组40只,分别于接种后3d、7d、14d、21d,,用ELISA试剂盒检测肺泡灌流液(BALF)IL-4和IL-6含量;HE染色观察肺脏病理组织学变化;用Western blot实验检测肺组织TLR4、Myd88与NF-κB表达变化。结果肺泡灌流液中IL-4和IL-6含量于感染后7 d时达到高峰,而后呈下降趋势;感染MP 3d后,BALB/c小鼠肺组织即出现间质性炎症改变,7d时炎症最明显,14d时炎症逐渐减轻;感染MP后,BALB/c小鼠肺组织TLR4、Myd88与NF-κB表达水平显著升高。结论肺炎支原体感染激活TLR4/NF-κB信号通路。     

PRDM1调控NF-κB信号通路对巨噬细胞极化和功能的影响

目的:本文旨在探讨正性调节区锌指蛋白1(PRDM1)对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)极化和功能的影响及其分子机制.方法:体外提取BMDMs作为研究对象,并进行极化诱导,采用荧光定量PCR和Western blot法检测不同极化状态的巨噬细胞PRDM1的表达水平;设计构建PRDM1过表达腺病毒载体,瞬时感染BMDMs...     

NF-κB "decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞产生NO及活性氧的影响

目的 :探讨NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对脂多糖 (LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774 1产生一氧化氮 (NO)及活性氧的影响。方法 :通过体外细胞培养技术 ,观察转染NF -κB“decoy”ODNs对LPS刺激巨噬细胞产生NO和活性氧 (ROS)的影响 ,以及诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)活力的变化。结果 :在LPS刺激的巨噬细胞中转染NF -κB“decoy”ODNs减少NO和ROS的产生 ,降低iNOS的活力。结论 :NF -κB“decoy”ODNs可以对抗LPS诱导巨噬细胞产生的ROS和NO ,可能与其特异性竞争抑制活化NF -κB结合位点有关。     

鼻咽癌中NF-κB对Hedgehog通路基因表达的影响

目的 Hedgehog通路与NF-κB均被发现与多种癌症相关,本研究初步探讨在鼻咽癌中两者之间的相关性,从而为靶点治疗等临床应用提供可靠的实验依据。方法提取12例鼻咽癌、鼻咽炎患者病例样本总RNA反转录得m RNA的c DNA进行荧光定量PCR,通过统计相关系数得出Hedgehog通路与NF-κB相关性;利用不同浓度NF-κB抑制剂PDTC(50~400μmol/L)作用24 h鼻咽癌细胞株CNE1,以CCK8法检测PDTC对CNE1增殖的影响;并对受不同浓度PDTC影响下CNE1的Hedgehog通路与NF-κB基因表达进行荧光定量PCR测定。结果鼻咽癌、鼻咽炎病例样本中Hedgehog通路基因Gli、PTCH、SMO与NF-κB相关系数大于0.8,呈现较强的相关性;PDTC对CNE1有显著的增殖抑制,而且显著抑制NF-κB及Hedgehog通路各基因的表达。结论鼻咽癌中NF-κB与Hedgehog有较强的相关性,NF-κB抑制剂PDTC能显著抑制鼻咽癌细胞株CNE1增殖以及NF-κB、Hedgehog信号通路基因表达。     

NF-κB信号通路介导AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞表达MMP-9

目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人单核/巨噬细胞（THP-1细胞）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的机制。方法: 用0.1 μmol/L佛波酯（PMA）作用48 h,诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞后,随机分为4组：（1）PMA组,即对照组;（2）PMA+AngⅡ组（10-7mol/L,1 h）;（3）PMA+AngⅡ+2-硫代氨基甲酸吡咯烷组［PDTC（10 μmol/L,30 min）］;（4）PDTC组。用Western blotting蛋白印记技术分别检测总蛋白MMP-9及磷酸化核转录因子-κB p65（NF-κB p65）的变化,用RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达的变化。结果: 与对照组相比,AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞磷酸化NF-κB p65增加（1.02±0.10,P<0.05）,MMP-9蛋白量也增加（1.06 ±0.11,P<0.05）,MMP-9 mRNA表达上调（1.22±0.08,P<0.05）,而使用NF-κB的抑制剂PDTC后磷酸化NF-κB p65（0.99±0.12,P<0.01）减少,MMP-9表达明显受到抑制（1.04±0.14, P<0.01）,MMP-9 mRNA表达下调（0.90±0.06, P<0.01）。结论: NF-κB信号转导途径是AngⅡ诱导THP-1巨噬细胞表达MMP-9的重要途径之一。     

肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子-2通过NF-κB信号通路影响LPS诱导的支气管上皮细胞分泌炎症因子

目的:探讨肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子-2(TIPE2)对脂多糖(LPS)诱导的支气管上皮细胞分泌炎症因子的影响和机制.方法:以人支气管上皮细胞作为探讨对象,用RT-PCR和Western blot方法检测LPS处理对支气管上皮细胞中TIPE2表达影响.在人支气管上皮细胞中转染TIPE2过表达载体,给予LPS处理,...